5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
1/6
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis PenelitianJenis penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan
melakukan serangkaian penelitian untuk mengetahui efektivitas ekstrak etanol
daun kemangi terhadap pertumbuhan bakteriEscherichia coli penyebab diare
dengan konsentrasi tertentu.
B. Waktu dan TempatPenelitian ini akan dilakukan pada bulan . 2014, di Laboratorium
Mikrobiologi Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan
RI Makassar.
C. Prosedur kerja1. Penyiapan Sampel Uji
a. Pengambilan SampelBahan yang digunakan adalah daun kemangi yang diperoleh dari
Pasar Pabaeng-baeng Kota Makassar.
b. Pembuatan SimplisiaDaun kemangi yang telah diperoleh, dibersihkan dengan air.
Kemudian, diseleksi lalu di potong kecil-kecil dan di keringkan
dengan cara diangin-anginkan pada suhu ruang dan terhindar dari
sinar matahari langsung. Setelah kering, daun kemangi di pisahkan
dari zat asing yang masih tertinggal. Simplisia daun kemangi yang
5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
2/6
telah bersih di simpan pada tempat yang aman dan terhindar dari
matahari langsung,untuk menghindari kerusakan simplisia.
2. EkstraksiDaun kemangi yang telah dipotong kecil-kecil, di timbang
sebanyak 100 gr. Kemudian, dimasukkan ke dalam bejana
maserasi. Ditambahkan pelarut etanol hingga di atas bahan baku setinggi
2-3 cm, ditutup dan di biarkan selama 5 hari di tempat yang terlindung
dari cahaya sambil sesekali diaduk. Setelah 5 hari, ekstrak disaring ke
dalam wadah dan ampasnya di ekstraksi kembali dengan pelarut
etanol. Ekstrak etanol yang di peroleh kemudian dikumpulkan dan
dipekatkan dengan Rotavapor pada suhu 60o C hingga diperoleh ekstrak
kental. Kemudian, ekstrak Kental diuapkan kembali di atas waterbath,
sampai larutan etanol menguap dan yang tersisa sari daun kemangi.
Kemudian dibuat ekstrak etanol dengan beberapa konsentrasi.
3. Sterilisasi Alata. Sterilisasi dengan udara panas dan kering
Cara ini terutama dipakai untuk sterilisasi alat-alat gelas seperti
erlenmeyer, beker gelas, cawan petri, tabung reaksi, gelas ukur,
batang pengaduk. Sterilisasi ini dilakukan dengan oven. Tapi sebelum
alat-alat gelas tersebut dimasukkan dalam oven, semua alat-alat gelas
dicuci sampai bersih.Keringkan, dan disumbat/dibungkus,kemudian
siap untuk di sterilkan dengan oven pada suhu 160o-180o C selama 2
5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
3/6
jam. Setelah temperatur waktu tercapai,alat dimatikan agar suhu
temperatur turun.
4. Pembuatan mediaMedia yang digunakan adalah media padatNutrient Agar dan media cair
Peptone Water.
a. Media padatNutrient AgarMedia agar padat dibuat dengan cara 1 gr Nutrient Agar (NA)
dilarutkan dalam 50 ml aquadest,kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer
dan ditutup dengan kapas. Selanjutnya,dipanaskan sampai mendidih dan
dimasukkan dalam 5 tabung reaksi(masing-masing tabung reaksi
sebanyak 7 ml untuk media peremajaan biakan murni antibakteri) dan
ditutup dengan menggunakan kapas. Selanjutnya, media disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121o C selama 15 menit dan tekanan 2 atm.
Kemudian, media untuk peremajaan diletakkan dalam keadaan miring
pada suhu kamar sampai media memadat.
b. Media cairPeptone Water.Media cair dibuat dengan cara di timbang sebanyak 2 gr Pepton
Water. Kemudian dilarutkan dalam 100 ml aquadest. Di aduk hingga
homogen. Kemudian di tambahkan metilen blue sebanyak 1 pipet aduk sampai
homogen dan dimasukkan dalam erlenmeyer dan ditutup dengan kapas.
Selanjutnya, dipanaskan sampai mendidih, kemudian didinginkan dalam
suhu ruang. Selanjutnya, media cair dimasukkan ke dalam 10 tabung
5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
4/6
reaksi masing-masing 9 ml. Disterilkan dalam autoklaf selama 15 menit
pada suhu 121o C selama 15 menit dan tekanan 2 atm.
5. Peremajaan BakteriBiakan murni Escherichia coli diambil dari stok laboratorium
sebanyak 1 ose, kemudian dibiakkan di Media PW selama 1 x 24 jam.
Apabila media PW terjadi perubahan warna dari hijau menjadi kuning
berarti pembiakan bakteri berhasil. Kemudian, diambil 1 ose biakan
bakteri dari media PW dan digoreskan ke media miring NA tabung
ditutup dengan kapas dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam.
Dari media NA diambil lagi 1 ose biakan bakteri untuk dibuat suspensi
bakteri,dimana biakan tersebut di masukkan dalam tabung reaksi yang
berisi aquadest.dan di homogenkan. Biakan pun siap di gunakan untuk
pengujian.
6. Pengujian Antibakteri10 Tabung reaksi yang berisi media PW sebanyak 9 ml
ditambahkan masing-masing 1 ml ekstrak daun kemangi dengan
konsentrasi yang berbeda yaitu, 6%, 7%, 8% , 9%, 10%. 11%, 12%, 13%,
14% dan sebagai kontrol 0% . Setelah itu, dimasukkan suspensi bakteri
sebanyak 1 ose dengan cara terlebih dahulu ose harus dipijarkan. Lalu,
dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi biakan bakteri secara
aseptis. Ose tersebut dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi
media cair PW dan sampel daun kemangi dengan kosentrasi 6 % secara
aseptis pula. Homogenkan. Pijarkan ose kembali setelah digunakan. Hal
5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
5/6
ini dilakukan sampai konsentrasi akhir. Diinkubasi pada suhu 37oC
selama 1 x 24 jam,dan apabila terjadi perubahan warna dan kekeruhan
sehingga dapat ditentukan MIC (Minimum Inhibitory Concentration) dari
sampel ekstrak etanol daun kemangi terhadap bakteri Escherichia coli .
Kemudian diinkubasi kembali selama 1 x 24 jam untuk menentukan MBC
(Minimum Bacteridial Concentration) dari ekstrak etanol daun kemangi
terhadap bakteriEscherichia coli.
7. Analisis dataData yang diperoleh dianalisis secara deskriptif yaitu melihat
perubahan warna dan kekeruhan sehingga dapat ditentukan MIC
(Minimum Inhibitory Concentration) dari sampel ekstrak etanol daun
kemangi terhadap bakteriEscherichia coli setelah inkubasi selama 1 x 24
jam. Kemudian diinkubasi kembali selama 1 x 24 jam untuk menentukan
MBC (Minimum Bacteridial Concentration) dari ekstrak etanol daun
kemangi terhadap bakteriEscherichia coli.
8. KesimpulanKesimpulan dibuat berdasarkan hasil penentuan MIC (Minimum
Inhibitory Concentration) dan MBC (Minimum Bacteridial
Concentration).
5/25/2018 BAB III Metode Penelitian Daun Kemangi
6/6
Top Related