B.6 Prosiding Seminar Nasional 1.a.3).a) 3. Optimasi Media Dan Isolat Bakteri Lokal Dalam Produksi...

DAFTAR ISI

Halaman

RINGKASAN ....................................................................................... iv

I.PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

II.METODOLOLOGI PENELITIAN ............................................................... 7

III.HASIL DAN ANALISIS HASIL ............................................................... 11

IV.PEMBAHASAN DAN PENDAPAT ............................................................... 15

V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 25

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 26

I.PENDAHULUAN

Hasil penelitian tahun pertama, dilaporkan bahwa isolat bakteri rizosfer tanaman

kangkung dengan kode KNG.RT1 dapat menghasilkan IAA dengan konsentrasi 10.998 ppm,

dan isolat bakteri endofit akar mangga dengan kode MEIA3 dapat menghasilkan auksin

dengan konsentrasi 7.638 ppm dengan waktu inkubasi 5 hari. Sedangkan isolat bakteri

endofit akar jagung dengan kode JGEA7 merupakan bakteri penghasil sitokinin dengan

konsentrasi 3.894 ppm dan diduga ada potensi untuk menghasilkan fitohormon auksin.

Berdasarkan hasil penelitian tahun pertama maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut

mengenai produksi fitohormon IAA dari isolat bakteri dengan kode KNG.RT1, MEIA3 dan

JGEA7 untuk mengetahui aktivitasnya dalam menghasilkan fitohormon IAA dengan

komposisi medium produksi fitohormon yang berbeda. Diharapkan akan diperoleh komposisi

medium yang optimal untuk proses produksi fitohormon IAA yang paling optimal dari

isolat bakteri tersebut.

IAA termasuk fitohormon golongan auksin alami dan berperan sebagai zat pemacu

karena dapat meningkatkan sintesis DNA dan RNA, serta pemanjangan sel dengan

meningkatnya pertukaran proton (Aslamsyah, 2002). Biosintesis IAA oleh mikroba dapat

ditingkatkan dengan penambahan triptofan sebagai prekursor (Arshad et al., 2000 ; dalam

Arkhipchenko, 2004).

Keunggulan penggunaan bakteri penghasil auksin adalah secara alamiah bakteri

tersebut tidak hanya menghasilkan auksin semata tapi juga dapat menghasilkan fitohormon

yang lain. Auksin alami lebih efektif dalam merangsang pertumbuhan akar dibanding dengan

auksin sintetik. Bahkan beberapa isolat bakteri dapat bersifat multiguna, artinya selain

sebagai penghasil fitohormon juga sebagai pelarut fosfat, penambat nitrogen dan pelarut

kalium.

Penelitian lain menyebutkan bahwa bakteri epifitik (hidup pada permukaan tanamaN

tertentu) dapat memproduksi fitohormon IAA dalam jumlah besar. Beberapa strain bakteri

dari genus Azospirillum memiliki kemampuan phytostimulatory. Hal ini disebabkan bakteri

tersebut mampu memproduksi fitohormon, yaitu IAA. Strain bakteri Pseudomonas

fluorescens mampu merangsang pertumbuhan akar jagung pada kondisi hidroponik dengan

menghasilkan IAA. Spesies dari genus Pseudomonas lainnya yaitu Pseudomonas putida juga

dilaporkan mampu mempercepat pertumbuhan tanaman (Nyoman et al., 2004).

Di masa mendatang, industri-industri pertanian semakin dituntut untuk menggunakan

sistem organik (hayati) dalam setiap aktivitasnya, sehingga produk mikroba penghasil

hormon pertumbuhan tanaman yang ramah lingkungan memiliki peluang pasar yang

menjanjikan.

Identifikasi Masalah: Fitohormon auksin sangat dibutuhkan oleh petani untuk

pertumbuhan dan meningkatkan produktivitas tanaman; Saat ini banyak digunakan

fitohormon sintetik; Terdapat spesies bakteri rizosfer, bakteri endofit yang dapat

menghasilkan fitohormon auksin (IAA); Perlu teknologi untuk memproduksi fitohormon

IAA dari sel bakteri; Jenis isolat bakteri dan komposisi medium kultur produksi diduga

berpengaruh terhadap konsentrasi fitohormon IAA yang dihasilkan.

Kerangka Pemikiran: Indole-3-Acetic Acid (IAA) merupakan auksin alami yang

sangat dibutuhkan petani untuk meningkatkan produktivitas pertanian. Penggunaan auksin

alami diharapkan akan semakin meningkat untuk menggantikan penggunaan fitohormon

auksin sintetik yang kurang efisien karena tidak akan menyatu dengan tanaman dan akan

hanyut terbawa arus air jika musim hujan tiba. Auksin sintetik juga kurang efektif dalam

merangsang akar dibandingkan dengan auksin alami. Padahal, di alam banyak strain

penghasil fitohormon auksin yang dapat bersimbiosis dengan jaringan tanaman. Beberapa

isolat bakteri dapat menghasilkan auksin selama tanaman itu hidup sehingga tidak perlu

pemberian auksin secara berkala.

Bakteri penghasil fitohormon IAA dapat berasal dari isolat-isolat bakteri rizosfer dan

endofit. Oleh karena itu pada penelitian ini akan dilakukan kajian produksi fitohormon IAA

dengan menggunakan beberapa isolat bakteri dan komposisi medium yang berbeda-beda

serta melakukan uji aktivitas terhadap fitohormon IAA yang dihasilkan.

Medium yang digunakan untuk produksi fitohormon IAA adalah Minimal Medium,

Luria Bertani Glukosa triptofan dan Minimal Salt. Minimal Medium mengandung sumber

karbon yang rendah, triptofan dan sumber mineral yang berperan dalam produksi fitohormon

IAA (Ahmad et al, 2004). Luria Bertani Glukosa Triptofan mengandung sumber karbon

yang rendah, tetapi mengandung sumber nitrogen, triptofan dan sumber mineral yang

berfungsi menjaga kekuatan ion (Jinichiro et al, 1990). Minimal Salt mengandung sumber

karbon dan nitrogen yang rendah, triptofan dan mengandung sumber mineral yang berfungsi

sebagai larutan penyangga, pengatur pH dan sebagai koenzim (Husen, 2003).

Tahapan produksi fitohormon IAA dimulai dengan menginokulasikan bakteri ke

dalam Minimal Medium, Luria Bertani Glukosa Triptofan dan Minimal Salt yang

mengandung triptofan. Selanjutnya diinkubasi pada incubator shaker selama 48 jam pada

suhu 28 0C dalam kondisi gelap. Supernatan dipisahkan dari sel-sel bakteri dengan cara

sentrifugasi, kemudian diekstrak dengan etil asetat. Fraksi etil asetat dievaporasi hingga

kering dengan rotavapor dan ekstrak yang diperoleh dilarutkan dengan metanol. Ekstrak yang

sudah dilarutkan dengan metanol kemudian diuji aktivitasnya secara kualitatif dengan TLC

(Thin Layer Chromatography) dan secara kuantitatif dengan HPLC (High Performance

Liquid Chromatography) untuk mengetahui perlakuan jenis bakteri dan komposisi medium

yang paling baik dalam menghasilkan fitohormon IAA.

Maksud dan Tujuan Penelitia: Maksud dari penelitian ini adalah untuk mengkaji

teknologi produksi fitohormon IAA dengan menggunakan beberapa jenis isolat bakteri lokal

dan komposisi medium kultur yang berbeda. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk

mengetahui pengaruh jenis isolat bakteri dan komposisi medium kultur terhadap konsentrasi

fitohormon IAA yang dihasilkan, guna mendapatkan komposisi medium yang paling tepat

untuk produksi fitohormon IAA dari isolat bakteri lokal.

Hipotesis Penelitian: Hipotesis yang dapat dikemukakan adalah bahwa jenis isolat

bakteri dan komposisi medium kultur yang dicoba berpengaruh terhadap konsentrasi

fitohormon IAA yang dihasilkan.

II. METODOLOGI PENELITIAN.

Bahan dan Peralatan

Bahan-bahan Penelitian Isolat murni bakteri penghasil fitohormon IAA sebanyak tiga

isolat dengan kode KNG.RT1, MEIA3 dan JGEA7. Isolat bakteri tersebut diperoleh dari hasil

penelitian tahun pertama. Medium kultur produksi fitohormon IAA terdiri dari (a). Minimal

Medium dengan triptofan 1 g/liter, (b). Minimal Medium dengan triptofan 2 g/liter, (c) Luria

Bertani Glukosa Triptofan (LBGT) dan (d) Minimal Salt (MS) yang diperkaya dengan

triptofan 2 g/liter. Solvent untuk ekstraksi menggunakan etil asetat teknis. Sebelum di

ekstraksi pH supernatan diatur menggunakan NaOH dan HCl 1 N. Bahan-bahan untuk uji

TLC dan HPLC. Metanol glacial / metanol HPLC grade. Reagent Ehrlich yang terdiri dari

larutan 1 g -dimetil-amino-benzaldehid dan 20 ml HCl pekat dalam 95 ml etanol 96 %.

Auksin standar yang digunakan terdiri dari dua jenis, yaitu Indole-3-Acetik-Acid (IAA) dan

indole -3-Butryic Acid (IBA). Eluent yang digunakan untuk TLC adalah kloroform : etil

asetat :asam format (50 : 40 : 10, v/v). Eluent yang digunakan untuk HPLC adalah metanol :

waters (60 : 40, v/v).

Peralatan untuk pembuatan starter dan kultur produksi fitohormon IAA: Labu

Erlenmeyer, corong pisah dan gelas ukur.Autoclave. Hot plate dan magnetic

stirrer.Timbangan, spatula, dan piring kecil.incubator shaker.Centrifuge dan tabung

centrifuge.pH meter dan Rotavapor. Tabung reaksi. Laminar air flow. Jarum ose. Peralatan

untuk analisis kualitatif dengan menggunakan metode Thin Layer Chromatography (TLC):

Plat silica gel GF254. Pipa kapiler.Sprayer TLC. Sinar UV.Peralatan untuk analisis kuantitatif

dengan menggunakan metode High Performance Liquid Chromatography (HPLC):

Sonikator.Vacuum filter dan membrane filter dengan ukuran pori 0,22 m. Seperangkat alat

HPLC seperti injektor, kromatogram, kolom shimpak CLC-ODS C-18 dengan diameter 0,6

mm, pompa, dan reservoir.

Pembuatan Medium: Pembuatan Medium Nutrient Agar. Komposisi medium Nutrien

Agar dalam 1 liter akuades terdiri dari 3 g beef extract, 5 g peptone, dan 15 g agar yang

dilarutkan dalam 1 liter aquades, pH diatur 6,8-7. Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada

suhu 121 0C dengan tekanan 1 Atm selama 15 menit. Medium Nutrient Agar digunakan

untuk peremajaan isolat bakteri dan perhitungan sel bakteri.

Pembuatan Minimal Medium. Komposisi Minimal Medium dalam 1 liter akuades

terdiri dari 10 g glukosa, 3 g K2HPO4, 0,3 g MgSO4.7H2O, 0,5 g sodium sitrat dengan

penambahan 1 g triptofan, yang dilarutkan dalam 1 liter aquades, pH diatur 6,8 - 7. Kemudian

dimasukkan yang masing-masing diisi 20 ml ke dalam 3 labu Erlenmeyer ukuran 100 ml dan

masing-masing diisi 50 ml sebagian larutan medium dimasukkan ke dalam 9 labu Erlenmeyer

ukuran 250 ml. Larutan medium selanjutnya disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 0C

dengan tekanan 1 Atm selama 15 menit (Ahmad et al, 2004). Dibuat juga Minimal medium

dengan komposisi yang sama, namun berbeda pada penambahan triptofan yaitu 2 g/1 liter

akuades.

Pembuatan Medium Luria Bertani Glukosa Triptofan (MLBGT).

Komposisi medium Luria Bertani Glukosa Triptofan dalam 1 liter akuades terdiri dari 10 g

glukosa, 10 g bacto tryptone, 5 g bacto yeast ekstrak, 5 g NaCl dan 2 g triptofan yang

dilarutkan dalam 1 liter aquades, pH diatur 6,8-7. Kemudian dimasukkan yang masing-

masing diisi 20 ml ke dalam 3 labu Erlenmeyer ukuran 100 ml dan masing-masing 50 ml

sebagian larutan ke dalam 9 labu Erlenmeyer ukuran 250 ml. Larutan medium selanjutnya

disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 0C dengan tekanan 1 Atm selama 15 menit

(Jinichiro et al, 1990).

Pembuatan Medium Minimal Salt (MMS). Komposisi medium Minimal Salt dalam

900 ml akuades terdiri dari 1.36 g KH2PO4, 0,2 g MgSO4.7H2O, 2,13 g Na2HPO4, dan 0,5 g

sodium sitrat, yang dilarutkan dalam 1 liter aquades, pH diatur 6,8-7. Kemudian dimasukkan

yang masing-masing diisi 18 ml ke dalam 3 labu Erlenmeyer ukuran 100 ml dan yang

masing-masing 45 ml sebagian larutan medium ke dalam 9 labu Erlenmeyer ukuran 250 ml.

Larutan medium selanjutnya disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 0C dengan tekanan 1

Atm selama 15 menit. Setelah itu ditambah 10 g glukosa, 0.1 g yeast ekstrak dan 2 g triptofan

dalam 100 ml aquades yang telah disterilisasi dalam autoklaf pada suhu 121 0C dengan

tekanan 1 Atm selama 15 menit pada tempat yang berbeda.Cara penambahannya diambil 2

ml ke dalam Erlenmeyer ukuran 100 ml yang telah berisi larutan 18 ml dan dan diambil 5 ml

ke dalam beberapa Erlenmeyer ukuran 250 ml yang telah berisi larutan 45 ml ( Husen, 2003).

Pembuatan Kultur Starter: Sebanyak 1 ose isolat murni masing-masing bakteri dari

media agar miring NA diinokulasikan ke dalam 20 ml masing-masing medium dalam

Erlenmeyer 100 ml, kemudian diinkubasi dalam incubator shaker dengan kecepatan 150 rpm

pada suhu kamar selama 24 jam.

Perhitungan Sel Bakteri dalam Larutan Kultur Starter: Perhitungan sel bakteri

bertujuan untuk mengetahui jumlah bakteri yang ada dalam kultur starter. Perhitungan sel

bakteri dilakukan dengan metode Total Plate Count (TPC) dengan cara sebagai berikut:

diambil larutan starter sebanyak 1 ml, kemudian dilarutkan dalam 9 ml aquades steril maka

diperoleh larutan dengan pengenceran 10- 1

kemudian dilakukan pengenceran sampai 10-5

.

Dari pengenceran 10-3

, 10-4

dan 10-5

diambil 100 l kemudian diinokulasikan secara pour

plate pada medium NA. Setelah diinkubasi pada suhu 28 0C selama 48 jam jumlah koloni

yang tumbuh dihitung dengan syarat jumlah koloni yang tumbuh antara 30-300. Jumlah sel

bakteri dihitung dengan cara mengalikan jumlah koloni yang terhitung dengan faktor

pengencaran.

Inokulasi dan Inkubasi Kultur Produksi Fitohormon IAA: Sebanyak 3 ml kultur

starter dengan kepadatan sel 106 masing-masing diinokulasikan ke dalam 50 ml medium

produksi dalam Erlenmeyer 250 ml dan diinkubasi dalam incubator shaker dengan kecepatan

150 rpm pada suhu kamar selama 48 jam.

Recovery Produk Fitohormon IAA: Kultur bakteri yang telah diinkubasi selama 48

jam disentrifugasi dengan kecepatan 7.000 rpm selama 25 menit.

Fitohormon IAA dari supernatan bakteri diekstrak dengan etil asetat yang dilakukan

sebanyak 4 kali dengan volume etil asetat sama dengan volume supernatan bakteri. Fraksi etil

asetat dievaporasi hingga kering dengan rotavapor.

Ekstrak yang diperoleh dilarutkan dalam 300 l metanol glacial.

Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA. Secara Kualitatif Menggunakan TLC.:

Prosedur pengujian aktivitas fitohormon IAA dengan metode TLC dilakukan dengan cara

sebagai berikut : Plat silica gel GF254 dipotong dengan panjang 6 cm dan lebarnya sama

dengan jumlah senyawa yang akan ditotol dikalikan 0,5 cm. Kedua ujung plat diberi garis

dengan pensil dengan jarak 0,5 cm untuk menentukan batas atas dan batas bawah. Plat TLC

diberi tanda sesuai dengan senyawa auksin standar dan kode sampel pada batas bawah

dengan jarak 0,5 cm. Sampel, auksin standar IAA dan kontrol ditotolkan pada titik sesuai

dengan nama pada batas bawah plat silica gel GF254.Plat silica gel kemudian di elusidasi dari

batas bawah dengan eluen kloroform : etil asetat : asam format (50 : 40 : 10, v/v). Setelah

dielusidasi, plat silica gel kemudian di angin-anginkan hingga kering. Plat silica gel disinari

dengan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Spot-spot auksin dilingkari dengan

pensil. Setelah kering, plat silica gel di semprot dengan reagent Ehrlich. Reagent Ehrlich

dibuat dengan melarutkan 1 g -dimetil-amino-benzaldehid dan 20 ml HCl pekat dalam 95

ml etanol 96 %. Plat silica gel di panaskan di atas penangas air hingga spot-spot auksin

terlihat jelas.

Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA Secara Kuantitatif Menggunakan HPLC.:

Prosedur pengujian aktivitas fitohormon IAA dengan metode HPLC dilakukan dengan cara

sebagai berikut : Eluen dibuat dari metanol : waters dengan perbandingan 60: 40 v/v

kemudian disaring dengan membran selulosa asetat dengan porositas 0,2 m. Sebanyak

0,0025 g IAA standar dilarutkan dalam 20 ml metanol glacial dan diencerkan secara bertahap

dengan metanol glacial dengan perbandingan 1 : 1. Sampel, eluen, dan IAA standar

disonikasi selama 15 menit. Kemudian eluen di running dalam kolom HPLC shimpak CLC-

ODS C-18 dengan diameter 0,6 mm dan tunggu 10 menit. Sebanyak 10 l IAA standar

dengan berbagai konsentrasi disuntikan kedalam kolom HPLC. Sampel dengan berbagai

pengenceran mulai dari 3,5,10,20 kali pengenceran disuntikan sebanyak 10 l ke dalam

kolom HPLC. Hasil yang positif ditunjukkan dengan waktu retensi kromatogram sampel

relatif sama dengan waktu retensi kromatogram auksin standar. Konsentrasi fitohormon IAA

yang dihasilkan dapat dihitung dengan menggunakan variabel area IAA standar dan area

sampel serta faktor pengenceran.

Rancangan Percobaan: Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap

dengan pola Faktorial (Torrie et al., 1991). Terdapat perlakuan yang merupakan kombinasi

dua faktor, masing-masing faktor tersebut adalah : Jenis isolat bakteri terdiri atas tiga taraf :

B1 = isolat bakteri rizosfer dari tanaman kangkung (KNG.RT1), B2 = isolat bakteri endofit

dari tanaman mangga (ME1A3) , B3 = isolat bakteri endofit dari tanaman jagung (JGEA7).

Komposisi medium kultur produksi fitohormon IAA terdiri atas empat taraf: M1 = Minimal

Medium dengan penambahan triptofan 1 g/liter, M2 = Minimal Medium dengan penambahan

triptofan 2 g/liter, M3= Luria Bertani Glukosa Triptofan dengan penambahan triptofan 2

g/liter, M4 = Minimal Salt dengan penambahan triptofan 2 g/liter

Analisa Data: Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis Sidik Ragam

berdasarkan uji F menggunakan program SPSS 17 (Uyanto, 2009). Apabila hasilnya

menunjukkan perbedaan yang nyata, analisis dilanjutkan dengan uji Duncan Multiple Range

Test (DMRT).

III.HASIL DAN ANALISIS HASIL

Pembuatan Starter

Pembuatan starter berfungsi untuk memperbanyak jumlah sel bakteri, mengaktifkan

sel bakteri dan untuk mengadaptasikan sel bakteri. Waktu inkubasi starter selama 24 jam.

Hasil perhitungan jumlah sel bakteri yang terkandung dalam larutan starter setelah

diinkubasi 24 jam dapat dilihat pada Tabel 2.

Tabel 2. Jumlah Sel Bakteri dalam Starter

Perlakuan Jumlah sel

bakteri/ml

Kombinasi

Perlakuan

Hasil

Pengamatan Isolat

Bakteri

Medium

B1 M1 1,3 x 106 B1M1 merah keruh

M2 B1M2 merah keruh

M3 B1M3 kuning keruh

M4 B1M4 merah keruh

B2 M1 1,5 x 106 B2M1 merah keruh

M2 B2M2 merah keruh


M4 B2M4 merah keruh

B3 M1 2, 7 x 106 B3M1 merah keruh

M2 B3M2 merah keruh



Hasil Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA secara Kualitatif Menggunakan TLC

Hasil pengujian aktivitas fitohormon IAA secara kualitatif dengan TLC menunjukkan

bahwa kombinasi dari tiga isolat bakteri dan empat komposisi medium produksi yang

dicoba semuanya positif menghasilkan IAA.

Hasil Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA secara Kuantitatif Menggunakan HPLC

Hasil pengujian aktivitas fitohormon IAA secara kuantitatif dengan metode HPLC

terhadap larutan ekstrak kultur bakteri pada perlakuan yang dicoba dapat dilihat pada Tabel 4

sebagai berikut:

Tabel 4. Hasil Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA Menggunakan HPLC

Perlakuan Pengulangan Konsentrasi

IAA (ppm)

Rata-rata

(ppm) Isolat Bakteri Komposisi Medium

B1 M1 1 3,680 3,680

2 -

3 -

M2 1 8,795 7,694

2 8,250

3 6,038

M3 1 9,329 9,019

2 9,271

3 8,459

M4 1 12,333 9,789

2 4,480

3 12,554

B2 M1 1 5,192 4,875

2 3,427

3 6,006

M2 1 5,626 5,616

2 5,466

3 5,757

M3 1 3,435 3,484

2 3,559

3 3,457

M4 1 0,810 0,737

2 0,674

3 0,728

B3 M1 1 1,216

1,766

2 1,899

3 2,182

M2 1 1,737 2,287

2 3,292

3 1,833

M3 1 2,527 2,527

2 -

3 -

M4 1 1,118 1,179

2 1,027

3 1,393

Hasil Uji Duncan Multipe Range Test (DMRT)

Tabel 5. Nilai Rata-rata Konsentrasi Fitohormon IAA oleh Perlakuan Isolat Bakteri

Berdasarkan Uji Duncan Multiple Range Test (DMRT)

Duncana,,b

Isolat Bakteri N

Rata-rata

1 2 3

B3 12 1,939

B2 12 3,678

B1 12 7,546

P>F. 1 1 1

Error = 27,48

a. N= 12.

b. Alpha = 0,05.

Hasil uji DMRT menunjukkan bahwa nilai rata-rata konsentrasi fitohormon IAA yang

paling tinggi dihasilkan oleh perlakuan komposisi medium kultur M2 yaitu 5,199 ppm,

seperti dapat dilihat pada Tabel 6.

abe

Duncana,,b

Komposisi Medium N

Rata-rata

1 2

M1 9 3,440

M4 9 3,902 3,902

M3 9 4,449

M2 9 5.199

P>F 0,115 0,129

Error = 27,48

a. N= 9

b. Alpha = 0,05.

IV.PEMBAHASAN DAN PENDAPAT

A. Pembuatan Kultur Starter dan Inokulasi ke Medium Produksi Fitohormon IAA

Pembuatan kultur starter bertujuan untuk memperbanyak jumlah sel bakteri,

mengaktifkan sel bakteri dan untuk mengadaptasikan sel bakteri dengan medium yang akan

digunakan untuk produksi fitohormon IAA. Hasil perhitungan metode Total Plate Count

(TPC) jumlah sel bakteri dalam larutan starter masing-masing adalah 1,3 x 106 sel bakteri /

ml, 1,5 x 106 bakteri / ml dan 2,7 x 10

6 sel bakteri / ml. Hasil tersebut menunjukkan

kandungan jumlah sel bakteri yang hampir sama pada masing-masing isolat bakteri dan

medium yang digunakan. Proses pembuatan starter inkubasi dilakukan pada rotary shaker

dalam kondisi gelap. Hal ini bertujuan untuk menghindari degradasi IAA yang dihasilkan

bakteri akibat intensitas cahaya yang tinggi. Seperti pada peristiwa fototropisme dimana IAA

selalu terkonsentrasi pada jaringan tanaman yang tidak terkena cahaya matahari secara

langsung. Selain itu juga bukti yang dijumpai pada petunjuk penggunaan hormon IAA

komersial yang menyatakan produknya harus di simpan pada suhu 2-6 0C dalam kondisi

gelap.

B. Inokulasi Starter dan Inkubasi Kultur Produksi Fitohormon IAA

Isolat bekteri diinokulasikan pada medium M1, M2, M3 dan M4. Medium kultur

produksi dapat dilihat pada Gambar 6. Berbagai komposisi medium kultur yang dicoba

diharapkan dapat mengetahui komposisi medium kultur yang paling tepat untuk produksi

fitohormon IAA dari isolat bakteri tesebut.

Gambar 6. Medium Kultur Produksi IAA

Kandungan glukosa pada ke empat medium yang digunakan hanya di buat 10 g/liter.

Hal ini bertujuan untuk membatasi pertumbuhan populasi bakteri, memperpendek fase

logaritmik dan memperpanjang fase stasioner. Apabila kadar glukosa lebih banyak dari 10 g,

maka sel-sel bakteri akan terus berkembang biak, sehingga kerapatan sel bakteri dalam

kultur cair pada medium M1, M2, M3 dan M4 akan sangat tinggi. Kadar glukosa 10 g

diharapkan populasi bakteri tidak terlalu tinggi, sehingga jika glukosa habis, maka bakteri

akan menggunakan triptofan sebagai sumber energi dan bakteri tersebut akan mengkonversi

triptofan menjadi IAA.

Komponen K2HPO4, dan MgSO.7H2O pada medium M1 dan M2 dan komponen

KH2PO4 dan MgSO.7H2O pada medium M4 berfungsi sebagai sumber fosfor dan

magnesium, selain itu juga berperan sebagai buffer fosfat yang berfungsi untuk menjaga agar

ion H+ pada kultur cair tidak berubah. Komponen Na2HPO4 pada medium M4 berfungsi

sebagai pengatur pH dan medium M4 juga mengandung yeast ekstrak sebagai sumber protein

dengan konsentreasi yang rendah. Medium M3 yang mengandung bacto trypyone, yeast

ekstrak berfungsi sebagai sumber protein dan juga vitamin untuk bakteri, sedangkan NaCl

pada medium M3 berfungsi dalam menjaga kekuatan ion. Komponen sodium sitrat pada

medium M1, M2 dan M4 berperan sebagai koenzim Tryptophan-mono-oxygenase dan

Indole-3-asetalamid hydrolase yang di hasilkan bakteri penghasil auksin.

Fitohormon IAA merupakan produk transformasi dihasilkan setelah fase stasioner.

Produk transformasi terjadi melalui modifikasi suatu senyawa yang ditambahkan kedalam

medium kultur produksi untuk menghasilkan senyawa lain, yaitu triptofan yang dikonversi

menjadi fitohormon IAA. Medium kultur produksi fitohormon IAA di perkaya dengan

triptofan yang berperan sebagai prekursor (bahan baku) auksin. Bakteri penghasil auksin

mempunyai gen Tms 1 dan Tms 2 yang mengkodekan enzim-enzim untuk mengkonversi

triptofan menjadi IAA. Gen Tms 1 mensisntesis enzim Trypthophan-mono-oxygenase yang

mengkorvesi triptofan menjadi Indole-3-acetamid, sedangkan gen Tms 2 mensintesis enzim

Indole-3-acetamid hydrolase yang mengkonversi Indole-3-acetamid menjadi indole-3-Acetic

Acid (IAA). Menurut Jinichiro et al. (1990) secara keseluruhan metabolisme triptofan dapat

dilihat pada Gambar 7.

Tryptophan (Trp)

Tryptamine

Indole-3-acetamide (IAAm) Indole-3-pyruvic acid (IPyA) Indole-3-lactic acid

(ILA)

Indole-3-acetaldehyde (IAAld) Trytophol (tol)

Indole-3-acetic acid (IAA)

Gambar 7. Biosintesis Triptofan oleh Bakteri (Jinichiro et al., 1990)

Agitasi pada kecepatan 150 rpm bertujuan untuk meratakan dispersi larutan sel-sel

mikroba dan nutrisi-nutrisi yang terkandung dalam medium kultur, agar ketersediaan nutrisi

untuk sel bakteri tetap terjaga. Agitasi membantu bekteri untuk menbuang gas-gas dan

produk samping hasil proses katabolisme. Agitasi juga membantu penyediaan O2 untuk sel

bakteri, apalagi pada kultur bakteri yang kepadatan populasi yang tinggi. Asimilasi glukosa

biasanya meningkat seiring dengan meningkatnya kecepatan agitasi.

C. Recovery Produksi Fitohormon IAA

Supernatan dipisahkan dari sel-sel bakteri dengan cara sentrifugasi pada suhu 4 0C,

kecepatan 7000 rpm selama 25 menit setelah diinkubasi 48 jam. Suhu harus tetap dijaga

dingin agar auksin tidak rusak. Sebelum diekstraksi supernatan diasamkan sampai pH 2,5-3,

kemudian diekstrak dengan etil asetat sebanyak empat kali volume supernatan. Senyawa

indole yang bersifat asam seperti IAA dapat terekstraksi dengan supernatant pada pH 2,5-3

menggunakan etil asetat (Ahmad et al. 2004). Menggunakan pelarut etil asetat karena etil

asetat mempunyai kepolaran yang relatif sama dengan auksin, mudah di evaporasi yaitu cepat

menguap pada suhu 400 C dalam evaporator, tidak bercampur dan mempunyai massa jenis

yang berbeda dengan supernatan mikroba sehingga mudah untuk dipisahkan dari supernatan

mikroba pada waktu ekstraksi. IAA yang terkandung dalam supernatan akan diikat oleh etil

asetat pada saat ekstraksi. Proses ekstraksi dapat dilihat pada Gambar 9. Pada Gambar 8

terlihat 2 lapisan yaitu lapisan atas dan bawah. Lapisan atas merupakan etil asetat karena

massa jenis etil asetat lebih kecil dibanding massa jenis air, sehingga etil asetat berada di atas

dan etil asetat akan manarik fitohormon IAA yang terkandung pada lapisan bawah.

Gambar 8. Proses Ekstraksi

Ekstrak yang dihasilkan berupa etil asetat yang berisi IAA dan senyawa-senyawa lain.

Sebelum diuji TLC dan HPLC, etil asetat harus diuapkan hingga kering pada suhu 40 0C dan

segera dilarutkan dengan 300 l methanol. Makin pekat konsentrasi ekstraknya akan semakin

baik juga hasil pengujian TLC dan HPLC. Ekstrak supernatant isolat-isolat bakteri yang telah

dipekatkan dapat dilihat pada Gambar 9.

Gambar 9. Ekstrak Sampel yang telah Dipekatkan

C. Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA Menggunakan TLC

Sampel yang menghasilkan IAA dapat diketahui dengan membandingkan warna dan

jarak spot sampel dari batas bawah plat silika gel dengan warna dan jarak dari spot IAA

standar. Jika warna dan jarak spotnya sama, maka di pastikan sampel tersebut menghasilkan

IAA secara kualitatif. Gambar 10 tampak spot dan jarak yang sejajar dan warnanya mirip

dengan IAA standar. Oleh karena itu, semua sampel dipastikan positif mengandung IAA.

Hasil uji kualitatif dengan menggunakan metode TLC menunjukkan semua isolat bakteri

dengan medium M1, M2, M3 dan M4 positif mengandung IAA, sedangkan kontrol (hanya

medium saja tanpa diinokulasi dengan bakteri) tidak ada jarak dan warna spot-spot isolat

yang sejajar, hal ini menunjukan bahwa tidak adanya aktivitas bakteri dan tidak mengandung

fitohormon IAA.

Gambar 10. Plat TLC yang telah Disemprot dangan Reagent Ehrlich dan

setelah Dipanaskan.

D. Pengujian Aktivitas Fitohormon IAA Menggunakan HPLC

Semua sampel yang telah diuji aktivitas fitohormonnya dengan TLC dan

menunjukkan hasil yang positif mengandung fitohormon IAA secara kualitatif, selanjutnya

dilakukan pengujian dengan HPLC untuk mengetahui berapa konsentrasi fitohormon IAA

yang dihasilkan.

Kromatrogam auksin standar dengan wakru retensi 1.777 ppm dapat dilihat pada

Gambar 11. Waktu retensi ini menjadi patokan untuk menentukan kandungan IAA pada

sampel.

AU

-1.00

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

Minutes

0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00

1.

60

7

1.

78

6

2.

04

1

2.

53

4

3.

04

8

3.

44

2

4.

76

2

5.

14

1

AU

-1.00

-0.50

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

Minutes

0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00

1.

77

7

Gambar 11. Kromatrogam Fitohormon IAA Standar

Kromatrogam HPLC berupa peak-peak dari IAA sampel yaitu bakteri yang berasal

rizosfer kangkung pada perlakuan B1M4 ulangan ke 3 dapat dilihat pada Gambar 12. Bakteri

rizosfer kangkung tersebut ternyata mengandung IAA dengan konsenterasi 12,554 ppm,

dapat diketahui menghasilkan IAA yaitu dengan cara membandingkan waktu retensi yang

terdapat di ujung peak-peak kromatogram sampel dengan kromatrogram IAA standar. Waktu

retensi IAA standar 1,777 dan waktu retensi IAA sampel 1,786, karena waktu retensi IAA

standar dengan waktu retensi IAA sampel relatif sama maka dapat dinyatakan IAA sampel

tersebut mengandung auksin.

Name Retention

Time Area

Heig

ht

1 IAA 200

ppm 1.777

35545

69

3206

83

Retention

Time

Area Height

1 1.607 2518198

0

1515738

2 1.786 1213287

0

1296742

3 2.041 7591714

7

3680191

4 2.534 1992241

6

1103139

Gambar 12. Kromatrogam Fitohormon IAA Sampel pada Perlakuan

B1M4 Ulangan 3

Hasil analisis HPLC dari bakteri rizosfer tanaman kangkung dalam menghasilkan

fitohormon IAA yaitu pada perlakuan B1M1 dengan konsentrasi rata-rata 3,680 ppm,

perlakuan B1M2 dengan konsentrasi rata-rata 7,694 ppm, perlakuan B1M3 dengan

konsentrasi rata-rata 9,019 ppm dan pada perlakuan B1M4 dengan konsentrasi rata-rata

9,789 ppm. Dari hasil perhitungan HPLC bakteri rizosfer tanaman kangkung konsentrasi rata-

rata tertinggi yaitu pada perlakuan B1M4 yaitu sebesar 9,879 ppm. Konsentrasi fitohormon

IAA yang dihasilkan oleh bakteri B1 sangat di pengaruhi oleh triptofan dan medium M4 yang

dapat menghasilkan konsentrasi rata-rata tertinggi

Hasil analisa HPLC dari bakteri endofit akar mangga dalam menghasilkan




0,737 ppm. Dari hasil perhitungan HPLC bakteri endofit tanaman mangga konsentrasi rata-

rata tertinggi yaitu pada perlakuan B2M2 adalah sebesar 5,616 ppm. Isolat bakteri dengan

kode B2 dengan komposisi medium kultur yang berbeda-beda sangat mempengaruhi

konsentrasi fitohormon IAA walaupun dengan konsentrasi triptofan 2 g/liter. Interaksi antara

B2 dan M2 dapat menghasilkan fitohormon IAA yang tinggi dibandingkan dengan M1, M3

dan M4

Hasil analisa HPLC dari bakteri endofit tanaman jagung dalam menghasilkan




5 3.048 1068716

3

575854

6 3.442 1966227

1

438047

7 4.762 1881176 115656

8 5.141 4613205 140261

1,179 ppm. Dari hasil perhitungan HPLC bakteri endofit tanaman jagung konsentrasi rata-

rata tertinggi yaitu pada perlakuan B3M2 yaitu sebesar 2,287 ppm. Isolat bakteri dengan kode

B3 dengan komposisi medium kultur yang berbeda-beda sangat mempengaruhi fitohormon

IAA walaupun dengan konsentrasi trriptofan 2 g/liter. Interaksi anatara B2 dan M3 dapat

menghasilkan konsentrasi fitohormon IAA yang tinggi di bandingkan dengan dengan M1,

M2 dan M4. Hal ini menunjukkan isolat bakteri dengan kode B3 dalam menghasilkan

fitohormon IAA sangat di pengaruhi oleh sumber nitrogen dan NaCl yang berfungsi menjaga

kekuatan ion yang terkandung dalam medium M3, medium M4 juga mengandumng sumber

nitrogen tetapi lebih rendah dibanding dengan medium M3

Penelitian tahun pertama, isolat bakteri dengan kode KNGRT1 dapat menghasilkan

fitohormon IAA dengan konsentrasi 10,998 ppm, sedangkan pada penelitian ini isolat bakteri

dengan kode KNGRT1 (B1) dapat menghasilkan fitohormon IAA dengan konsentrasi 12,333

ppm, 4,480 ppm (konsentrasi kecil karena pada uji HPLC kurang sempurna) dan 12,554 ppm.

Konsentrasi fitohormon IAA pada penelitian ini lebih tinggi dibandingkan pada penelitian

sebelumya, karena penelitaian ini menggunakan medium Minimal Salt (M4) yang ada

kandungan sumber nitrogen sedangkan penelitian sebelumnya menggunakan medium

Minimal Medium yang tidak mengandung sumber nitrogen.

Isolat bakteri dengan kode ME1A3 (B2) dengan M2 dapat menghasilkan fitohormon

IAA dengan konsentrasi tetinggi 5,616 ppm. Konsentrasi tersebut lebih kecil dibandingkan

dengan penelitian yang dilakukan di tahun pertama, isolat bakteri dengan kode ME1A3

dengan Minimal Medium (M1) dapat menghasilkan fitohormon IAA dengan konsentrasi

7,638 ppm. Penelitian ini dengan isolat bakteri dan medium kultur yang sama juga

menghasilkan konsentrasi fitohormon IAA lebih kecil di bandingkan dengan penelitian yang

dilakukan di tahun pertama, karena penelitian ini menggunakan waktu inkubasi 48 jam

sedangkan penelitian sebelumnya dengan waktu 120 jam

Isolat bakteri dengan kode JGEA7 (B3) dengan medium kultur M3 dapat

menghasilkan fitohormon IAA tertinggi dengan konsentrasi rata-rata 2,527 ppm. Konsentrasi

tersebut lebih kecil di banding isolat bakteti B1 dan B2, karena isolat bakteri B3 selain dapat

menghasilkan fitohormon IAA dapat juga menghasilkan fitohormon sitokinin.

Penelitian yang dilakukan oleh Wirastuti (2004), yang memproduksi fitohormon IAA

dengan konsentrasi 2,79 g/ml (ppm) yang lebih kecil dibandingkan dengan hasil

konsentrasi fitohormon IAA dengan isolat bakteri B1 dan B2, tetapi lebih tinggi jika dan

dibandingkan dengan isolat bakteri B3. Hal ini terjadi karena peneltian yang dilakukan oleh

Wirastuti (2004) menggunakan medium Nutrient Broth yang banyak mengandung sumber

nitrogen tanpa adanya sumber karbon dan sumber mineral.

Komposisi triptofan yang digunakan sebanyak 2 g/liter berdasarkan hasil penelitian

yang dilakukan oleh Ahmad et al (2004) yang memproduksi fitohormon IAA yang terbaik

dilakukan dengan triptofan 2 g/liter dengan konsentrasi 24,80 g/ml. Komposisi M2 dengan

penambahan triptofan 2 g /liter lebih baik dalam menghasilkan fitohormon IAA di

bandingkan dengan komposisi M1 dengan penambahan triptofan 1 g/liter. Interaksi antara

bakteri B1 dan medium M2 dalam menghasilkan fitohormon IAA yaitu 7,694 ppm lebih

tinggi dari interaksi antara bakteri B1 dan medium M1 yaitu 3,680 ppm. Interaksi antara


tinggi dari interaksi antara bakteri B2 dan medium M1 yaitu 4,875 ppm. Interaksi antara


tinggi dari interaksi antara bakteri B3 dan medium M1 yaitu 1,766 ppm.

Hasil analisis ragam pengaruh isolat bakteri dan komposisi medium serta interaksi

terhadap konsentrasi fitohormon IAA dapat dilihat pada Lampiran 45. Perlakuan isolat

bakteri berpengaruh sangat nyata terhadap konsentrasi fitohormon IAA yang dihasilkan

(P

Perlakuan komposisi medium kultur yang dicoba memberikan pengaruh sangat nyata

terhadap nilai rata-rata konsentrasi fitohormon IAA. Hal ini menunjukkan bahwa ke empat

medium kultur yang dicoba mempunyai kemampuan yang berbeda-beda dalam

memproduksi fitohormon IAA. Menggunakan Duncans multiple range test dapat dilihat

bahwa komposisi medium menghasilkan nilai rata-rata tertinggi pada komposisi medium M2

yaitu 5,199 ppm (Tabel 6). Hasil tersebut berbeda sangat nyata dengan nilai rata-rata

konsentrasi fitohormon IAA yang dihasilkan oleh komposisi medium M1 (3,440 ppm), M3

(4,449 ppm) dan M4 (3,902 ppm). Komposisi medium M2 mengandung K2HPO4 dan

MgSO4.7H2O yang berfungsi sumber fosfor dan magnesium, selain itu juga berfungsi sebagai

buffer fosfat untuk menjaga ion H+ pada kultur cair tidak berubah yang tidak dimiliki oleh

medium M3, dengan sumber karbon yang rendah dan tidak mengandung sumber nitrogen

seperti pada medium M3 dan M4. Medium M2 mengandung triptofan sebagai prekursor dan

juga mengandung sodium sitrat yang berfungsi sebagai koenzim Triptophan-mono-oxygenase

dan Indole-3-asetalamid hydrolase.

Perlakuan isolat bakteri dengan komposisi medium kultur yang dicoba memberikan

pengaruh sangat nyata terhadap nilai rata-rata konsentrasi fitohormon IAA Konsentrasi

fitohormon IAA. Hal ini menunjukkan bahwa antara isolat bakteri dan komposisi medium

kultur terjadi interaksi dalam menghasilkan dan memproduksi fitohormon IAA. Interaksi

perlakuan antara isolat bakteri dan komposisi medium kultur menghasilkan nilai rata-rata

tertinggi pada B1M4 yaitu 9,789 ppm. Hal tersebut berbeda nyata dengan nilai rata-rata

konsentrasi fitohormon IAA yang dihasilkan oleh interaksi perlakuan antara isolat bakteri dan

komposisi medium B1M3 (9,019 ppm), B1M2 ( 7,694 ppm), B2M4 (5,616 ppm), B2M1

(4,875 ppm), B1M1 (3,680 ppm), B2M3 (3,484 ppm), B3M3 (2,527 ppm), B3M2 (2,287

ppm), B3M1 (1,767 ppm), B3M4 (1,179 ppm), dan B2M4 (0,737 ppm).

Interaksi perlakuan antara isolat bakteri B1 dan medium M4 dapat menghasilkan nilai

rata-rata konsentrasi fitohormon IAA tertinggi, karena medium M4 mengandung KH2PO4 dan

MgSO.7H2O berfungsi sebagai sumber fosfor dan magnesium selain itu juga berperan

sebagai buffer fosfat yang berfungsi untuk menjaga agar ion H+ pada kultur cair tidak

berubah. Yeast ekstrak yang berfungsi sebagai protein, triptofan sebagai prekursor dan juga

komponen sodium sitrat yang berfungsi sebagai koenzim Tryptophan-mono-oxygenase dan

Indole-3-asetalamid hydrolase yang di hasilkan bakteri penghasil auksin. Selain itu pada

medium M4 juga terdapat Na2HPO4 yang berbeda dengan medium lain yaitu berfungsi

sebagai pengatur pH.

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A.Kesimpulan

1. Jenis isolat bakteri (B1, B2, B3) dan komposisi medium kultur (M1, M2, M3, M4)

berpengaruh sangat nyata terhadap konsentrasi fitohormon IAA yang dihasilkan.

2. Isolat bakteri B1 dan komposisi medium kultur M2 menghasilkan nilai rata-rata

konsentrasi fitohormon IAA yang paling tinggi. Kombinasi antara jenis isolat bakteri

dan komposisi medium kultur yang baik untuk produksi fitohormon IAA adalah B1

dengan M4 yang menghasilkan konsentrasi sebesar 9,789 ppm.

3. Beberapa komposisi medium dapat digunakan sebagai medium kultur produksi

fitohormon IAA. Penambahan triptofan sebanyak 2 g/liter dapat menghasilkan

fitohormon IAA yang lebih tinggi dibanding dengan penambahan triptofan 1 g/liter.

B.Saran

Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan untuk

penelitian selanjutnya, yaitu dilakukan produksi fitohormon IAA dalam skala besar

menggunakan isolat bakteri B1 dan menggunakan medium M4.

DAFTAR PUSTAKA

Abidin, Z. 1982. Dasar-dasar Pengetahuan Tentang Zat Pengatur Tumbuh. Penerbit Angkasa.

Bandung.

Ahmad F, I. Ahmad and M. S. Khan. 2004. Indole Ecetic Acid Produktion by the

Indigenous Isolates of Azotobacter and Pseudomonas in the Presence and Absence of

triptofan. Departement of Agricultural Microbiology, Faculty of Agricultural

Sciences, Aligarh Muslim University, Aligarh.

Arkhipchenko, I. A., A. I Shaposhnikou, L. V and Kravchen,. 2006. Triptophan Concertation

of Animal Waste and Organic Fertilizer. Http://www.science.direct.com (2 Agustus

2009)

Aslamsyah, S. 2002. Peranan Hormon Tumbuh dalam Memacu Pertumbuhan Alga.

Http://tumoutou.net/702_05123/Siti Aslamsyah.htm (15 Juli 2009).

Barbieri, P. and E. Galli. 1993. Effect on Wheat Root Development of Inoculation with an

Azospirillum brasilense Mutant with Altered Indole-3-Acetic Acid Production. Res.

Microbiol. 144:69-75.

Barbieri, P., T. Zanelli, E. Galli, and G. Zanetti. 1986. Inoculation with Azospirillum

brasilense Sp6 and some Mutants Altered in Nitrogen Fixation and indole-3-acetic

acid Production. FEMS Microbiol. Lett. 36:87-90.

Cappuyuns A., I. Smets, K Bernaerts, O. Ona, J Somers, E. Prinsen and J. Van Impe. 2004.

Forward a Model for Indole-3-Acetic Acid (IAA) Production by Azospirilium

brasilense Sp245. Croylaan 46, B-3001 Leuven.

Clark Jim. 2007. Thin Layer Chromatografi, Whasington D.C

Connor, P.R. 1982. Chemistry, Experiment and Principle, 4th

.ed. Healt and Company,

London

Cook T. J., D. B. Poli, A.E. Sztein and Jerry D. Cohen. 2002. Evolutionary Patterns in Auxin

Action. Department of Cell Biology and Molecular Genetics, University of Maryland,

College Park

.

Dascaliuc. 2002. Hormones and Synthetic Plant Growth Regulators in Agriculture. Institute

of Genetic and Plant Psysiology, Academy of Sciences of Maldova, 20 Padurri str.,

Chisinau, Maldova.

Day R.A dan A.L Underwood. 1986. Analisa Kimia Kuantitatif. Edisi VII. Erlangga, Jakarta.

Dobbelaere, S., A. Croonenborghs, A. Thys, A.Vande Broek, and J. Vanderleyden. 1999.

Phytostimulatory effect of Azospirillum brasilense wild type and Mutant Strains

Altered in IAA Production on Wheat. Plant Soil 212:155-164.

Gardner dan Franklin, P. 1991. Fisiologi Tanaman Budidaya. Universitas Indonesia Press,

Jakarta.

Hallmann, J. 2001. Plant Interaction With Endophytic Bacteria. Biotic Interactions in Plant-

Phatogen Association., 87-119.

Harjadi S. S. 2009. Zat Pengatur Tumbuh. Penebar Swadaya, Jakarta.

Hartman, H.T and D.E. Ketser. 1975. Plan Propagation. Prentince Hall International, London.

Hindersah, R, M. R. Setiawati dan B.N. Fitriatin, 2003. Inokulasi Azotobacter sp Melalui

Filosofir dan Rizosfer pada Pembibitan Selada (Laciuca sativa L). Loporan

Penelitian. Lrembaga Penelitian Universilas Padjadjaran, Bandung.

Husen Edi. 2003. Screening of Soil Bacteria for Plant Growth Promotion Activities Invitro.

Indonesian Soil Research Institute, Bogor.

Jinichiro K, T. Adachi and H. Hidaka. 1990 IAA Biosynthetic Pathway from Tryptophan via

Indole-3-pyruvic Acid in Enterobacter cloacae. Bio Science Laboratories, Meiji Seika

Kaisha, Ltd., Chiyoda.

Nyoman I. P., A.D.P. Lestari dan Dwi P. 2004. Mikroba Penghasil Fitohormon. Departemen

Biologi. ITB, Bandung.

Razie, F dan I. Anas. 2005. Potensi Azotobacter spp. (dari Lahan Pasang Surut Kalimantan

Selatan) dalam Menghasilkan Indole Acetic Acid (IAA). Jurnal Tanah dan

Lingkungan. 7:35-39.

Sridevi M. and K. V. Mallaiah. 2007. Production of Indole-3-Acetic Acid by Rhizobium

isolates from Sesbania species. Department of Microbiology, Acharya Nagarjuna

University, Nagarjuna Nagar-522 510, Andhra Pradesh.

Somers, E. D. Ptacek, P. Gysegom, M. Srinivasan, and J. Vanderleyden. 2004. Azospirillum

brasilense Produces the Auxin-Like Phenylacetic Acid by Using the Key Enzyme for

Indole-3-Acetic Acid BiosynthesCentre of Microbial and Plant Genetics, Katholieke

Universiteit Leuven, B-3001 Heverlee.

Teale W. D., A. P. Ivan and P. Klaus. 2006. Auxin in Action : Signaling, Transport and the

Control of Plan Growth and Development. Institut fur Biologie II/ Botanik,

Schanzlestrase, 79104 Freiburg.

Tien T. M., M. H. Gaskin and D. H. Hubbel. 1979. Plant Growth Substances Produced by

Azospirillum brasilense and Their Effect on the Growth of Pearl Millet (Pennisetum

americanum L.). U.S. Department of Agriculture Institute of Food and Agricultural

Sciences, Gainesville.

Tjitrosomo, S.S. 1985. Botani Umum 2. Angkasa, Bandung.

Torrie James H. Steel dan G.D. Roberth. 1991. Prinsip dan Prosedur Statistika. PT Gramedia

Pustaka Utama, Jakarta.

Uyanto, S. S. 2009. Pedoman Analisis Data dengan SPSS. Graha Ilmu, Yogyakarta

Waluyo Lud. 2008. Teknik Metode Dasar Mikrobiologi. UMM Press, Malang.

Wedhastri, S. 2002. Isolasi dan seleksi Azotobacter spp. Penghasil Faktor Tumbuh dan

Penambat Nitrogen dari Tanah Masam. Jurnal Ilmu Tanah dan Lingkungan. 3:45-51.

Wilson, D. 1995. Endophyte the Evolution of a Term, and Clarification of its use and Definition. Oikos 73, 274-276.

Wirastuti, B. E. 2004. Produksi Hormon Tumbuh IAA oleh Isolat Bakteri Rizosfer pada

Beberapa Variasi Waktu Inkubasi. Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati, ITB,

Bandung.

B.6 Prosiding Seminar Nasional 1.a.3).a) 3. Optimasi Media Dan Isolat Bakteri Lokal Dalam Produksi...

Documents

Transcript of B.6 Prosiding Seminar Nasional 1.a.3).a) 3. Optimasi Media Dan Isolat Bakteri Lokal Dalam Produksi...