2.2. Alat dan Bahan

i. Alat-alat Percobaan

No. Alat Gambar Keterangan

1. AutoklafAutoklaf digunakan untuk mematikan sel

bakteri.

2. Erlenmeyer

Erlenmeyer dalam percobaan ini digunakan sebagai wadah sementara

untuk memindahkan sampel dari biofermentor ke kuvet dan microtube.

3. Timbangan digital

Timbangan digital digunakan untuk mengukur massa

microtube, sel basah dan sel kering yang diperoleh

dari hasil percobaan.

4. MicrotubeMicrotube digunakan sebagai wadah sampel

untuk sentrifugasi.

5. Pipet mikro

Pipet mikro digunakan untuk memindahkan

sampel dari erlenmeyer ke kuvet dan microtube, serta untuk mengambil supernatant dari hasil

sentrifuge.

6. SentrifugeSentrifuge digunakan untuk memisahkan sel

dan larutan supernatant.

7. KuvetKuvet digunakan sebagai wadah bagi sampel untuk

spektrofotometri.

8. Spektrofotometer

Spektrofotometer digunakan untuk

mengukur nilai OD sampel.

9. Biofermentor

Biofermentor diatur pada pH 7, suhu 370C dan laju

aerasi 0,5 v/v/m. Biofermentor digunakan

sebagai wadah untuk mengalirkan medium LB,

mencampurkan xylose dan mengaduk bakteri.

10. Oven

Oven digunakan untuk mengeringkan microtube

pada awal percobaan, serta untuk mengeringkan sel basah yang diperoleh dari hasil sentrifugasi.

11. Desikator

Desikator digunakan untuk mengabsorpsi uap

air yang terbentuk di dinding microtube setelah

di oven.

ii. Bahan: Stock CultureEscheiricia Coli Medium LB cair Aquadest Antibiotik (Tetrasiklin) Glukosa 0,1%

2.3 Prosedur Percobaan

No. Prosedur Pengamatan

Persiapan Medium Kultivasi

1. Menyiapkan 200 ml medium LB cair

yang sudah jadi (komposisi per

liternya adalah 10g pepton. 5g ekstrak

yeast dan 5g NaCl)

2. Melakukan sterilisasi medium dengan

menggunakan autoklaf pada suhu

1210C dan tekanan 2 atm selama 15

menit.

Persiapan pre culture

3. Mengambil Pre-culture yang telah

disiapkan sebelumnya.

Kultur Bakteri dalam Fermentor Berpengaduk

4. Menambahkan 200 mL medium LB

cair sebelum memasukan pre culture

ke dalam fermentor dengan

menggunakan pompa peristaltik

selama 46 menit.

5. Memulai proses kultivasi dengan

memasukkan 1.5 mL pre culture ke

dalam medium LB cair yang telah

disterilisasi.

7. Melakukan proses kultur sel pada

suhu 370C. Laju 0.5 v/v/m dan

kecepatan agitasi 200 rpm sampai

nilai OD600 mencapai 0.8

8. Mengambil sampel selama 1 jam

sekali sebelum nilai OD600 mencapai

0.8 dan dikur nilai OD nya dengan

menggunakan Spektrofotometer.

Pada percobaan, pengambilan sampel

selama 1 jam sekali dilakukan hingga

nilai OD600 mencapai 0.4. Pada

pengambilan sampel ke-3, nila OD600

telah mencapai 0,963.

9. Menambahkan Xylose Setelah OD

mencapai 0.8 dengan menggunakan

pompa peristaltic selama 1.2 menit

Pada percobaan, penambahan Xylose

diganti dengan penambahan tertrasiklin

62,5 µl.

10. Mengambil sampel selama 10 menit

sekali ketika OD telah melewati 0.8

dan diukur dengan menggunakan

spektrofotometer.

Pada percobaan ini, pengambilan sampel

selama 10 menit sekali dilakukan ketika

OD telah melewati 0.4.

11. Melanjutkan kembali kultur sel pada

suhu 370C dengan kecepatan shaker

200 rpm selama 1 jam. Setelah itu

kultur sel diberhentikan.

Pengambilan data dilakukan hingga

pengambilan sampel ke-7. Data

percobaan terlampir.

Pemanenan Sel

12. Melakukan pemanenan sel dengan

sentrifugasi 5000 x g selama 20 menit.

13. Menentukan berat basah dan berat

kering sel yang dihasilkan.