AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN...

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN KIRINYUH

(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) TERHADAP BAKTERI

Propionibacterium acnes

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memenuhi Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Grezelia Feronica Harsono

NIM : 168114078

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2020

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN KIRINYUH

(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) TERHADAP BAKTERI

Propionibacterium acnes

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memenuhi Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Grezelia Feronica Harsono

NIM : 168114078

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2020


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Skripsi ini kupersembahkan untuk:

Bapa, Yesus Kristus dan Roh Kudus yang memberikan hikmat dan kasih-Nya

Papa, Mama dan saudara-saudara yang kukasihi

Sahabat dan teman-teman yang selalu mendukung

Almamaterku Universitas Sanata Dharma


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v

LEMBAR PERSYARATAN PERSETUJUAN .................................................... vi

PRAKATA ............................................................................................................ vii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ................................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii

ABSTRAK ........................................................................................................... xiii

ABSTRACT ........................................................................................................... xiv

PENDAHULUAN .................................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ........................................................................................ 3

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 8

KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................................. 19

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 20

LAMPIRAN .......................................................................................................... 26

BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 47


x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Selisih OD Penentuan KHM........................................................... 13

Tabel II. Persen Penghambatan Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh................. 14

Tabel III. Hasil Uji Post Hoc Tamhane’s Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh.... 15


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Peta Microplate 96 well ....................................................................... 7

Gambar 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata ......................................... 27

Gambar 3. Proses Maserasi Penambahan Pelarut Metanol ................................. 27

Gambar 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh ........................................................ 27

Gambar 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO .......................... 28

Gambar 6. Penetapan Kadar Air Volume Air Akhir ........................................... 28

Gambar 7. Penimbangan bobot tetap ................................................................... 29

Gambar 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 ...................... 30

Gambar 9. Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan indikator

anaerobik ............................................................................................ 32

Gambar 10. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution ........................ 32


xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman ........................................................... 26

Lampiran 2. Tanaman Utuh Chromolaena odorata ............................................ 27

Lampiran 3. Proses Maserasi Daun Kirinyuh ..................................................... 27

Lampiran 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh ..................................................... 27

Lampiran 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO ....................... 28

Lampiran 6. Penetapan Kadar Air dengan Metode Destilasi Toluena ................ 28

Lampiran 7. Bobot Tetap .................................................................................... 29

Lampiran 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 .................... 30

Lampiran 9. Surat keterangan Propionibacterium acnes ATCC 11827 ............. 31

Lampiran 10. Pengkondisian Anaerob ................................................................ 32

Lampiran 11. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution ..................... 32

Lampiran 12. Pengukuran Optical Density Jam ke-0 ......................................... 33

Lampiran 13. Pengukuran Optical Density Jam ke-48 ....................................... 34

Lampiran 14. Uji Statistika ................................................................................. 35


xiii

ABSTRAK

Salah satu penyebab terjadinya jerawat adalah infeksi bakteri oleh

Propionibacterium acnes. Kasus infeksi bakteri semakin parah dengan

meningkatnya kasus resistensi P. acnes terhadap antibiotik dan efek samping obat

anti jerawat. Saat ini banyak pengembangan penelitian antibakteri alami berupa

ekstrak tanaman yang digunakan untuk pengobatan jerawat sebagai alternatif lain

obat anti jerawat. Tanaman Kirinyuh (Chromolaena odorata (L.) R. M. King &

H. Rob.) sering digunakan sebagai obat tradisional di Indonesia bagian Timur dan

memiliki manfaat antibakteri terhadap berbagai bakteri. Pada penelitian ini

tanaman diambil dari Yogyakarta, Indonesia. Pembuatan ekstrak metanol daun

Kirinyuh menggunakan metode maserasi. Uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol

daun Kirinyuh terhadap bakteri P. acnes dengan metode Broth Microdilution.

Pengukuran OD menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 600

nm. Hasil nilai OD digunakan untuk mencari nilai persen penghambatan ekstrak

metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri P. acnes. Nilai persen penghambatan

ekstrak metanol daun Kirinyuh dengan konsentrasi 0,195-6,25 mg/mL yaitu

6,906-80,966% dan nilai persen penghambatan kontrol positif sebesar 60,054%

terhadap bakteri P. acnes. MIC (Minimum Inhibitor Concentration) pada

penelitian ini adalah konsentrasi 3,125 mg/mL. Ekstrak metanol daun Kirinyuh

memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827 yang

ditunjukkan dengan uji statistik data selisih OD secara signifikan memiliki

perbedaan dengan kontrol pertumbuhan (p=0,005).

Kata kunci : Propionibacterium acnes, Chromolaena odorata (L.) R. M. King &

H. Rob., broth microdilution


xiv

ABSTRACT

One cause of acne disease is a bacterial infection by Propionibacterium

acnes. Cases of bacterial infection are getting worse with increasing cases of P.

acnes resistance to antibiotic and side effects of anti-acne drugs. At present there

are many developments in natural antibacterial research in plant extract, that are

used for the treatment of acne as an alternative anti-acne drugs. Kirinyuh plant

(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) is often used as traditional

medicine in eastern Indonesia and has antibacterial benefits against various

bacteria. In this study plants were taken from Yogyakarta, Indonesia. The extract

methanol of Kirinyuh leaf using maceration method. The test of antibacterial

activity of the extract against P. acnes bacteria by Broth Microdilution method.

OD measurements using a microplate reader at a wavelength of 600 nm. The

result of OD values were used to find the percent inhibitory value of extract

against P. acnes bacteria. The percent inhibition value of Kirinyuh extract with a

concentration of 0,195-6,25 mg/mL was 6,906-80,966% and the percent inhibition

valuu of clindamycin was 60,054% against P. acnes bacteria. MIC (Minimum

Inhibitor Concentration) in this study was a concentration of 3,125 mg/mL.

Kirinyuh leaf methanol extract had antibacterial activity against P. acnes ATCC

11827 as indicated by statistical test significantly had a difference with growth

control (p=0,005).

Keywords : Propionibacterium acnes, Chromolaena odorata (L.) R. M. King &

H. Rob., broth microdilution


1

PENDAHULUAN

Jerawat adalah penyakit dermatologik yang sering menyerang pada

remaja karena peningkatan produksi sebum, yang menyebabkan kerusakan folikel

disertai oleh proliferasi bakteri Propionibacterium acnes dan inflamasi (Sukandar

et al., 2014). P. acnes biasanya terdapat pada kelenjar sebaceous pada wajah,

kullit kepala, dada, punggung (Achermann et al., 2014). Prevalensi penderita

jerawat yang disebabkan oleh infeksi P. acnes di Indonesia berkisar 80-85% pada

remaja dengan usia 15-18 tahun, 12% pada wanita usia > 25 tahun dan 3% pada

usia 35-44 tahun (Madelina and Sulistiyaningsih, 2018).

Jerawat bukan gangguan yang mematikan atau melemahkan, jerawat bisa

menyebabkan tekanan psikologis dan beban ekonomi berat. Tekanan psikologis

yang dimaksud adalah peningkatan kecemasan, depresi, dan keinginan bunuh diri

(Nelson et al., 2016). Selain itu dari faktor fisiologis kondisi jerawat parah dapat

menimbulkan keloid dan hypertrophic pada kulit (Ogawa, 2017).

Pengobatan untuk jerawat dapat ditemukan dalam bentuk oral dan

topikal. Obat oral jerawat yang sering digunakan adalah isotretinoin, eritromisin,

doksisiklin, sedangkan obat topikal jerawat diantaranya retinoid, benzoil

peroksida, dan klindamisin (Purath and Coyner, 2017). Namun, kejadian resistensi

P. acnes terhadap antibiotik muncul beberapa tahun terakhir, dengan dilaporkan

bahwa resistensi P. acnes terhadap antibiotik eritromisin dan klindamisin yang

terjadi di negara Perancis sebesar 52,5% (Dumont-Wallon et al., 2010). Selain itu,

beberapa obat anti jerawat memiliki efek samping obat yang dapat menyebabkan

pengeringan pada kulit, sakit kepala, mual dan lain-lain (Vora et al., 2018)

Saat ini pengembangan terapi alami banyak menggunakan ekstrak

tanaman untuk pengobatan jerawat dan mengatasi efek samping dari obat anti

jerawat (Vora et al., 2018). Chromolaena odorata (L.) R. M. King and Rob.

merupakan salah satu tanaman yang dapat ditemui di Indonesia (Rusdy, 2016).

Tanaman ini biasa digunakan sebagai obat tradisional di Indonesia untuk

mengobati luka pada kulit (Chakraborty et al., 2011). C. odorata juga diketahui

memiliki efek farmakologis yang berfungsi sebagai antiinflamasi, antipiretik,

analgesik, antimikroba, sitotoksik dan sebagainya (Vijayaraghavan et al., 2017).


2

Ekstrak Kirinyuh sudah banyak diteliti sebelumnya, seperti penelitian

yang dilakukan oleh Natasha (2019), menggunakan ekstrak etanol Kirinyuh untuk

menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan metode Time-

Kill Assay. Pada penelitian Aviantina (2019), juga menggunakan ekstrak etanol

Kirinyuh yang dapat berperan sebagai penghambatan biofilm S. aureus. Penelitian

lain yang dilakukan oleh Hanphakphoom et al (2016), menunjukkan bahwa

ekstrak metanol daun Kirinyuh memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.

acnes DMST 14916. Aktivitas antibakteri yang dihasilkan dari ekstrak metanol

daun Kirinyuh, disebabkan karena adanya senyawa fitokimia fenol dan flavonoid

(Hanphakphoom et al., 2016). Ekstrak metanol daun tanaman C.odorata memiliki

kandungan senyawa fenol yaitu sebesar 455,55±4,59 µg/mg (Krishanti et al.,

2010). Fenol berperan terhadap aktivitas antimikroba dengan cara menghambat

substrat, dan mengganggu sel membran (Odutayo et al., 2017).

Berdasarkan latar belakang di atas, penelitian ini bertujuan untuk

mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri

P. acnes ATCC 11827. Metode yang digunakan adalah Broth Microdilution. Hasil

Broth Microdilution didapatkan dari pengukuran OD menggunakan microplate

reader dengan panjang gelombang 600 nm. Hasil yang didapatkan berupa nilai

persen penghambatan ekstrak terhadap pertumbuhan bakteri (Quave et al., 2008).

Pada penelitian ini juga memiliki beberapa perbedaan dengan penelitian

sebelumnya yaitu letak geografis asal tanaman, metode yang digunakan dan

karakteristik bakteri. Perbedaan letak geografis dapat mempengaruhi komposisi

senyawa metabolit tanaman. Sebagai contoh, dalam penelitian yang dilakukan

oleh Hanphakphoom et al (2016) menggunakan tanaman C. odorata yang berasal

dari Thailand, sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Putri dan Fatmawati

(2019), tanaman berasal dari Indonesia. Pada penelitian tersebut membuktikan

bahwa terdapat perbedaan hasil komposisi total fenolik dalam ekstrak metanol C.

odorata.

Selain itu, perbedaan dengan penelitian sebelumnya adalah karakteristik

bakteri yang digunakan. Sebagai contoh, penelitian yang dilakukan oleh

Chomnawang et al (2005), ekstrak tanaman C. odorata dapat menghambat

pertumbuhan bakteri P. acnes ATCC 6919. Sedangkan dalam penelitian ini


3

menggunakan P. acnes ATCC 11827. P. acnes ATCC 6919 termasuk kedalam

biotype BIII, yang mana memiliki tingkat perparahan jerawat lebih besar bila

dibandingkan dengan P. acnes ATCC 11827 (biotype BI) (Zhang et al., 2019).

Penelitian oleh Nair et al (2017), menyatakan bahwa perbedaan strain P. acnes,

menyebabkan perbedaan hasil KHM pada agen antimikroba.

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental murni untuk

melihat hubungan dua kelompok perlakuan yang berbeda, terdapat randomisasi

dan pengendalian ketat pada variabel. Subjek penelitian adalah bakteri

Propionibacterium acnes dan objek penelitian adalah daun Kirinyuh (Kuntjojo,

2009). Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia dan

Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah neraca analitik (Ohaus),

platform shaker (Innova 2100), waterbath (Memmert), labu destilator (Schott

Duran), pemanas destilator (M. Topo-E103), pompa vakum (GAST KT40),

corong Buchner, rotatory evaporator (Buchi Switzerland Tipe R-210 dan R-300),

mikropipet (Gilson), blue tip, yellow tip, bunsen, vortex (Gallenkamp), microplate

flexible U-bottom PVC 96 well (Iwaki), multi-mode microplate reader (BioTex

Synergy htx) dilengkapi dengan aplikasi Gen5, jarum ose, spreader, autoklaf

(ALP KT-40), hot plate, magnetic stirrer, nephelometer, oven (Memmert),

inkubator (Memmert dan Heraeus), Biology Safety Cabinet Class II A2 (ESCO

Class II A2 Seri2016), nephelometer (BD Phoenix Spec), pengayak no mess 40,

kontainer airtight (Lion Star), anaerogen (Thermo Scientific), indikator anaerob

(Thermo Scientific), alat-alat gelas (Pyrex) yaitu tabung reaksi, labu takar, erlen

meyer, gelas beker, gelas ukur, pipet volume, cawan petri, batang pengaduk, pipet

tetes.

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun Kirinyuh kering

yang diambil dari Lembaga Pendampingan Usaha Buruh Tani dan Nelayan


4

(LPUBTN) Yogyakarta, bakteri P. acnes ATCC 11827 (Thermo Scientific) dari

PT. Dipa Puspa Labsains, media BHI (Brain Heart Infusion) (Oxoid), media TSA

(Tryptic Soy Agar) (Oxoid), metanol, aquades, DMSO (dimetil sulfoksida) 100%,

kertas saring whatman No.1.

Preparasi Bahan Baku

Daun Kirinyuh yang digunakan diperoleh dari Lembaga Pendampingan

Usaha Buruh Tani dan Nelayan (LPUBTN), kecamatan Tanjung Sari, Gunung

Kidul, Yogyakarta dipilih sesuai dengan kriteria yaitu daun bebas dari serangga,

fragmen hewan atau kotoran hewan, tidak mengandung lendir, jamur, atau tanda-

tanda pengotor lain, dan penanaman dengan pupuk organik. Daun Kirinyuh yang

dipilih adalah daun Kirinyuh dengan ukuran panjang 5-12 cm dan lebar 3-6 cm.

Determinasi Kirinyuh dilakukan di Departemen Biologi Farmasi, Fakultas

Farmasi, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Determinasi menggunakan

simplisia daun dan tanaman yang utuh. Daun Kirinyuh dikeringkan dengan oven

dengan suhu 60°C. Daun Kirinyuh yang sudah kering diserbuk dengan

menggunakan grinder (mesin penyerbuk). Serbuk simplisia menggunakan ayakan

dengan no mesh 40 supaya didapatkan serbuk agak kasar. Kemudian serbuk

disimpan dalam wadah tertutup rapat dan diberikan silica gel agar tidak lembab

dan berjamur.

Penetapan Kadar Air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi toluen. Alat

destilasi disiapkan dengan labu 500 mL yang dihubungkan dengan pendingin air

balik melalui alat penampung yang dilengkapi tabung penerima 5 mL berskala 0,1

mL. Bagian atas alat penampung sebaiknya dibungkus asbes. Tabung penerima

dan pendingin dibersihkan dengan asam pencuci lalu dibilas dengan air dan

dikeringkan. Serbuk ditimbang dengan seksama sejumlah 10 g. Sebanyak lebih

kurang 200 mL toluen p.a dimasukkan ke dalam labu. Labu dipanaskan perlahan-

lahan selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, dilakukan penyulingan dengan

kecepatan lebih kurang 2 tetes per detik hingga sebagian besar air tersuling,

kemudian kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes per detik. Setelah

penyulingan, tabung penerima dibiarkan mendingin hingga suhu kamar dan


5

diusahakan seluruh tetesan air turun. Volume air dibaca setelah toluen dan air

terpisah sempurna. Kadar air dinyatakan dalam persen.

Kadar air olume air

erat sampel 100

Preparasi Ekstrak

Pembuatan ekstrak metanol daun Kirinyuh dilakukan dengan maserasi

menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan RI (2012) dan jumlah serbuk yang

dimaserasi berjumlah 50 gram dan pelarut metanol sebanyak 500 ml. Tahapan

maserasi: merendam 50 gram serbuk simplisia daun Kirinyuh (10 bagian serbuk),

dimasukan ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dalam 375 ml pelarut

metanol (70 bagian). Maserasi dilakukan selama 1x24 jam dengan bantuan

shaker. Hasil maserasi yang diperoleh disaring dengan corong Buchner yang

dilapisi kertas saring dengan bantuan pompa vakum. Serbuk hasil penyaringan

dimaserasi dengan pelarut baru sebanyak 125 ml selama 1x24 jam.

Hasil maserasi pertama dan kedua kemudian diuapkan dengan rotary

evaporator pada suhu 60°C untuk menguapkan pelarut pada ekstrak. Ekstrak

diletakkan pada cawan petri dan diuapkan kembali pada waterbath pada suhu 50-

65°C untuk menguapkan pelarut yang mungkin masih ada dalam ekstrak dan

dimasukkan dalam sampai didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap yang

telah dipersyaratkan. Kemudian dihitung rendemen ekstrak dengan rumus.

endemen obot ekstrak

obot simplisia 100

Penetapan bobot tetap dilakukan dengan ekstrak ditimbang sebelum

dikeringkan atau dipijarkan terlebih dahulu. Penimbangan dinyatakan bobot tetap

jika dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan atau dipijarkan

selama 1 jam tidak lebih dari 0,25% atau perbedaan penimbangan tidak melebihi

0,5 mg dengan timbangan analitik (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia,

2011).

Penyiapan Larutan Uji

Pembuatan larutan stok ekstrak uji dengan melarutkan 500mg ekstrak

metanol daun Kirinyuh dalam 5 ml DMSO. Larutan stok ekstrak dibuat dalam

berbagai konsentrasi yaitu 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL


6

Kultur Bakteri Uji

Propionibacterium acnes dinokulasikan pada media TSA dengan metode

streak dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C. Inkubasi dilakukan dalam

kondisi anaerob. Kondisi anaerob dilakukan di dalam kontainer airtight dan diberi

anaerogen dan indikator anaerob strip. Bakteri tunggal pada media TSA

diinokulasikan ke dalam media cair BHI dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu

37°C.

Uji Aktivitas Antibakteri

Uji aktivitas antibakteri ekstrak dan antibiotik dilakukan dengan

menggunakan metode mikrodilusi pada 96-well plate. Kultur bakteri pada media

BHI disetarakan sebesar 0,5 Mc Farland menggunakan nephelometer. Suspensi

bakteri diinkubasi dalam BHI selama 48 jam dibawah kondisi anaerob dengan

anaerogen dan disesuaikan untuk menghasilkan suspensi bakteri sebesar 1,5x108

CFU/mL. Microplate 96 well disiapkan dalam keadaan steril, 90µL dari ekstrak

tanaman dilarutkan dengan DMSO dan ditambahkan pada sumuran berisi 110 µL

dari suspensi bakteri dalam broth. Pengenceran dibuat dalam broth dalam rentang

konsentrasi 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL ekstrak metanol.

Kontrol positif dibuat dengan menggunakan serbuk klindamisin dari kapsul.

Kemudian serbuk klindamisin ditimbang dengan seksama dan dilarutkan ke dalam

aquadest dan didapatkan konsentrasi 0,504 µg/mL. Klindamisin 0,504 µg/mL

sebanyak 90 µL dilarutkan dalam broth dan ditambahkan ke dalam sumuran yang

berisi 110 µL suspensi dalam broth. Kontrol negatif dibuat dengan 90 µL DMSO

2% ditambahkan dalam sumuran yang berisi 110 µL suspensi dalam broth.

Replikasi 3 kali dilakukan pada setiap konsentrasi. Setelah itu, diinkubasi selama

48 jam pada suhu 37°C dibawah kondisi anaerob.


7

Gambar 1. Peta Microplate 96 well

Keterangan = P1-P5 =Perlakuan ekstrak metanol Kirinyuh dengan dengan konsentrasi

0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL

K+ = Kontrol Positif

K- = Kontrol Negatif

KM = Kontrol Media

KP = Kontrol Pertumbuhan

Penentuan Nilai Persen Penghambatan dan KHM

Setelah 48 jam pasca inokulasi, dilakukan penentuan nilai persen

penghambatan. Efek dari warna ekstrak diperhitungkan pada pembacaan OD600nm

untuk menghitung persen penghambatan dengan menggunakan microplate reader.

Rumus persen penghambatan OD600nm digunakan untuk mengatasi adanya

gangguan warna ekstrak pada saat pembacaan. Persen rata-rata penghambatan dari

uji replikasi digunakan untuk menentukan nilai akhir KHM. KHM dilihat dari

konsentrasi terendah dari senyawa uji yang menghambat pertumbuhan P. acnes

sebesar 50%.

% inhibition = ( ( t 8- t0

gc 8- gc0))

Keterangan = ODt48 = Optical density (600 nm) dari uji pada jam ke 48 setelah inokulasi ODt0 = Optical density (600 nm) dari uji pada jam ke 0 setelah inokulasi

Odgc48 = Optical density (600 nm) dari kontrol pertumbuhan pada jam ke 48 setelah inokulasi

ODgc0 = Optical density (600 nm) dari kontrol pertumbuhan pada jam ke 0 setelah inokulasi


8

Teknik Analisis Data Penelitian

Teknik analisis data untuk menentukan normalitas distribusi data

menggunakan Shapiro-Wilk. Jika p-value > 0,05 maka data terdistribusi normal

dan jika p-value < 0,05 maka data tidak terdistribusi normal. Penentuan

homogenitas data menggunakan Levene’s Test dengan tingkat kepercayaan 95%.

Kemudian data dilanjutkan dengan menggunakan uji Kruskal Wallis dengan Pos

Hoc Mann Whitney. Jika diketahui nilai p < 0,05, maka menunjukkan adanya

perbedaan signifikan pada hasil selisih OD antara konsentrasi dengan kelompok

kontrol pertumbuhan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah Chromolaena

odorata (L.) R. M. King & H. Rob. Spesies tanaman dibuktikan dengan surat

determinasi (Lampiran 1) yang dikeluarkan oleh Departemen Biologi Farmasi

Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, membuktikan bahwa tanaman yang

digunakan adalah tanaman Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.

Senyawa bioaktif tanaman biasanya terakumulasi sebagai metabolit sekunder di

semua sel tanaman, tetapi konsentrasi nya bervariasi sesuai dengan bagian

tanaman yang diambil (Maji et al., 2010). Daun merupakan salah satu bagian

tanaman yang banyak digunakan dalam penelitian, karena daun diketahui

memiliki kandungan protein, karbohidrat dan sumber yang tinggi (Omokhua et

al., 2016). Sehingga diharapkan penggunaan daun sebagai bahan penelitian dapat

menghasilkan metabolit sekunder yang cukup tinggi. Pada penelitian ini bagian

tanaman yang diambil merupakan daun Kirinyuh yang diperoleh dari Lembaga

Pendampingan Usaha Buruh Tani Nelayan (LPUBTN), kecamatan Tanjung Sari,

Gunung Kidul, Yogyakarta.

Penetapan kadar air pada serbuk simplisia daun Kirinyuh menggunakan

metode destilasi toluen (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2009).

Menurut Kementerian Republik Indonesia (2009), kadar air yang ditetapkan tidak

lebih dari 10%. Volume air yang didapatkan adalah 0,9 mL (Lampiran 4) dengan

berat serbuk simplisia 10 gram sehingga kadar air serbuk simplisia daun Kirinyuh


9

sebesar 9 %. Hasil kadar air tidak lebih dari 10% sehingga telah memenuhi syarat

yang ditetapkan. Prosedur penetapan kadar air diberikan untuk menetapkan

kesesuaian dengan persyaratan identitas, kadar, mutu dan kemurnian yang tertera

pada Farmakope Herbal Indonesia (FHI) (Kementrian Kesehatan Republik

Indonesia, 2009).

Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi. Faktor-faktor yang dapat

mempengaruhi hasil ekstraksi adalah ukuran bahan, suhu ekstraksi dan pelarut

(Tambun et al., 2016). Prinsip maserasi melibatkan perendaman bahan tanaman

(kasar atau bubuk) dalam wadah dengan pelarut dan dibiarkan pada suhu kamar

dengan agitasi konsisten. Proses tersebut dimaksudkan untuk melunakkan dinding

sel tanaman untuk melepaskan fitokimia terlarut (Azwanida, 2015). Adanya

metode maserasi dalam proses ekstraksi, diharapkan terjadi pelepasan kandungan

fitokimia dalam ekstrak metanol daun Kirinyuh yang dibuat.

Maserasi dilanjutkan dengan diuapkan pada rotary evaporator untuk

mendapatkan ekstrak. Suhu 60°C dipilih karena metanol memiliki titik didih

sebesar 65°C (Pubchem, 2020). Kemudian ekstrak dilakukan penimbangan untuk

mendapatkan hasil bobot tetap. Penimbangan dinyatakan sudah mencapai bobot

tetap apabila perbedaan dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan

atau dipijarkan selama 1 jam tidak lebih dari 0,25% atau perbedaan seperti

tersebut di atas tidak melebihi 0,5 mg pada penimbangan dengan timbangan

analitik (Depkes RI, 2008). Bobot ekstrak metanol daun Kirinyuh yang didapat

sebesar 7,0912 gram. Selain itu, pada penelitian ini juga dilakukan perhitungan

rendemen. Menurut Wijaya (2018), salah satu parameter mutu ekstrak adalah

rendemen ekstrak yang dihasilkan. Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak

yang diperoleh dengan simplisia awal dengan satuan persen (%). Semakin tinggi

nilai rendemen yang dihasilkan menandakan nilai ekstrak yang dihasilkan

semakin banyak (Wijaya et al., 2018). Hasil rendemen ekstrak metanol daun

Kirinyuh yang didapatkan sebesar 14,1824 %. Jumlah rendemen yang dihasilkan

menandakan banyaknya komponen atau kandungan yang dapat terekstraksi. Hal

tersebut membuat hasil rendemen dari berbagai pelarut berbeda (Maimulyanti et

al., 2016).


10

Pada penelitian ini menggunakan bakteri Propionibacterium acnes

ATCC 11827 diperoleh dari PT Dipa Puspa Labsains. Karakteristik P. acnes

ATCC 11827 memiliki suhu optimal pertumbuhan 37°C dan waktu inkubasi 48

jam, dengan pengkondisian secara anaerobik. P. acnes ATCC 11827 biasanya

dapat ditemukan di area tangan dan punggung (ATCC, 2020). Menurut

Achermann et al (2014), pertumbuhan P. acnes pada umumnya berkisar 2-15 hari.

P. acnes banyak ditemukan di daerah konjungtiva oral, saluran pencernaan dan

saluran telinga luar. Oleh karena itu, P. acnes dapat mentolerir paparan oksigen

selama beberapa jam dan secara in vitro dapat bertahan hidup dalam kondisi

anaerob hingga 8 bulan (Portillo et al., 2013). Pada penelitian ini P. acnes

diinkubasi selama 48 jam dengan suhu inkubator 37°C. Menurut Kamei et al

(2009), inkubasi P. acnes selama 48 jam dengan kondisi anaerob pada suhu 37°C

sudah dapat terlihat pertumbuhan bakterinya (Kamei et al., 2009). Kondisi

anaerob pada penelitian dibuat dengan menggunakan kontainer airtight (Lion

Star) lalu diberi anaerogen (Thermo Scientific) dan indikator anaerob (Thermo

Scientific) (Lampiran 10). Adanya perubahan warna pink pada indikator anaerob

menandakan masih terdapat oksigen didalam ruang tersebut. Jika indikator

anaerob berwarna putih, maka sudah dalam kondisi anaerob ( Thermo Scientific,

2013).

Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode Broth Microdilution.

Broth Microdilution adalah pengujian mikrodilusi menggunakan 96-well

microtiter plates, kemudian standar plate berisi satu atau beberapa konsentrasi

dari zat antimikroba yang akan diuji (Gajdács et al., 2017). Metode Broth

Microdilution dapat memberikan aktivitas antibakteri yang dinyatakan sebagai

KHM pada saat yang sama. Selain itu, alasan Broth Microdilution banyak

digunakan dalam suatu penelitian adalah karena konsentrasi yang telah ditentukan

sebagai KHM dapat terlihat dengan cepat dan hasilnya mudah dibaca (Klančnik et

al., 2010).

Pada penelitian ini ekstrak metanol daun Kirinyuh dibuat dengan

konsentrasi 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL. Pembuatan

larutan uji digunakan pelarut DMSO. Pelarut DMSO digunakan dalam penelitian


11

lain seperti Hanphakphoom et al (2016) dan Yajarla et al (2014). Hal ini karena

DMSO merupakan cairan organik yang memiliki sifat sangat polar, sehingga

secara luas digunakan sebagai pelarut kimia (Pubchem, 2019). Larutan stok

ekstrak dibuat dengan melarutkan ekstrak pada DMSO 100%, kemudian

diturunkan sampai didapatkan range konsentrasi ekstrak 0,195-6,25 mg/mL.

Sehingga pada saat pembuatan broth dalam microplate 96 well, konsentrasi

DMSO terbesar pada well yang didapatkan adalah 2%. Menurut penelitian yang

dilakukan oleh Rukayadi et al (2010), DMSO dengan konsentrasi 10% tidak

mempengaruhi efek penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri. Selain itu,

penelitian Lee et al (2017), menunjukkan tidak ada perubahan morfologi sel yang

signifikan pada penggunaan DMSO dengan konsentrasi rendah. Namun, pada

konsentrasi DMSO 3% dan 10% ada beberapa bentuk sel yang berubah/

menimbulkan efek (Lee et al., 2017). Sehingga pada penelitian ini penggunaan

DMSO 2% yang diharapkan tidak mempengaruhi perubahan morfologi sel bakteri

yang digunakan.

Penelitian ini terdapat 4 kontrol yaitu kontrol media, kontrol

pertumbuhan, kontrol negatif DMSO 2% dan kontrol positif klindamisin. Kontrol

media digunakan untuk mengetahui sterilitas pada media yang dibuat dan

keaseptisan pengerjaan. Kontrol pertumbuhan digunakan untuk mengetahui P.

acnes dapat bertumbuh pada media dengan baik dan digunakan untuk menghitung

persen penghambatan pada kelompok perlakuan (ekstrak dan antibiotik). Tujuan

dibuat kontrol negatif untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri pada DMSO

(sebagai pelarut ekstrak) terhadap bakteri yang digunakan.

Pada penelitian ini menggunakan kontrol positif klindamisin. Antibiotik

digunakan sebagai kontrol positif untuk memastikan nilai MIC antibiotik yang

digunakan dalam penelitian masih dalam rentang MIC yang direkomendasikan

oleh National Committee for Clinical Laboratory Standards (CLSI) (Zgoda and

Porter, 2001). Selain itu, antibiotik digunakan sebagai kontrol positif untuk

menentukan bakteri yang digunakan dalam penelitian resisten atau rentan terhadap

antibiotik (Ozkaya et al., 2019). Menurut Ginting et al (2010), kontrol positif juga

untuk pembanding aktivitas antibakteri dari agen antibakteri yang digunakan.


12

Klindamisin yang digunakan dalam penelitian ini merupakan terapi obat yang

biasa digunakan untuk mengatasi jerawat yang disebabkan karena bakteri P.

acnes. Klindamisin memiliki mekanisme aksi menghambat sintesis protein

dengan berikatan dengan subunit ribosom 50S pada bakteri P. acnes (Purath and

Coyner, 2017). Menurut Dogan et al (2017) yang mengutip dari CLSI, antibiotik

klindamisin dikatakan susceptible terhadap bakteri P. acnes yaitu memiliki MIC ≤

2 µg/mL. Klindamisin dikatakan resisten terhadap bakteri P. acnes yaitu memiliki

konsentrasi ≥ 8 µg/mL ( oğan et al., 2017). Pada penelitian ini konsentrasi

klindamisin yang digunakan adalah 5,04 mg/L atau setara dengan 0,504 µg/mL.

Pemilihan konsentrasi didasarkan pada penelitian oleh Kamei et al (2010) dan

Dinant et al (2016). Pada penelitian Dinant et al (2016), klindamisin dapat

memberikan MIC terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827 di konsentrasi 0,063

µg/mL. Menurut Kamei et al (2010), klindamisin mulai dapat terlihat

penghambatan pertumbuhan bakteri P. acnes ATCC 11827 pada 4xMIC.

Sehingga dari kedua penelitian tersebut didapatkan konsentrasi sebesar 0,252

µg/mL. Pada penelitian ini menggunakan konsentrasi 0,504 µg/mL karena

konsentrasi tersebut dua kali lipat dari 0,252 µg/mL, sehingga diharapkan dapat

memberi aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri yang tinggi

Setelah 48 jam pasca inokulasi, kemudian microplate 96 well diukur pada

microplate reader. Panjang gelombang yang digunakan dalam pengukuran yaitu

600 nm. Data absorbansi yang sudah didapat kemudian dihitung selisih OD nya

(Tabel I). Persen penghambatan didapatkan dari selisih OD perlakuan yang

dibandingkan dengan selisih OD kontrol pertumbuhan (Quave et al., 2008).

Menurut Quave et al (2008), gangguan warna ekstrak Kirinyuh dapat diatasi

dengan penentuan persen penghambatan pada pembacaan OD600.


13

Tabel I. Selisih Optical Density Penentuan KHM

Perlakuan Selisih OD

Rata-

rata SD Replikasi

1

Replikasi

2

Replikasi

3

EM 6,25

mg/Ml 0,289 0,153 0,338 0,260 0,096

EM 3,125

mg/Ml 0,652 0,626 0,723 0,667 0,050

EM 1,5625

mg/mL 0,861 0,829 0,830 0,840 0,018

EM 0,781

mg/mL 1,142 1,130 1,142 1,138 0,007

EM 0,391

mg/mL 1,209 1,238 1,216 1,221 0,015

EM 0,195

mg/mL 1,255 1,273 1,287 1,272 0,016

Kontrol Media 0,016 0,010 -0,008 0,006 0,012

Kontrol

pertumbuhan 1,392 1,331 1,375 1,366 0,031

CLD 0,504

µg/mL 0,543 0,557 0,537 0,546 0,010

DMSO (2%) 1,345 1,353 1,342 1,347 0,005

Keterangan: EM = Ekstrak Metanol daun Kirinyuh;CLD = Klindamisin

Pada pengujian ini, kontrol media tidak terdapat pertumbuhan bakteri dan

tidak ada kontaminasi. Data selisih OD dianalisis secara statistik (Tabel I). Data

tersebut diuji distribusi normalitasnya menggunakan uji Shapiro-Wilk dan

didapatkan data tidak terdistribusi normal (p < 0,05). Hal ini karena terdapat data

dengan nilai p= 0,000 pada EM 0,781 mg/mL. Selanjutnya, Uji Levene dilakukan

untuk melihat terdapat homogenitas dari varian data yang digunakan. Data

menunjukkan nilai p = 0,007 (p < 0,05), sehingga data tidak terdistribusi homogen

atau varian data yang digunakan berbeda. Pengujian dilanjutkan dengan

menggunakan uji Kruskal Wallis dengan Pos Hoc Mann Whitney.


14

Tabel II. Hasil Uji Kruskal Wallis-Mann Whitney Ekstrak Metanol Daun

Kirinyuh

KP

EM 6,25

EM 3,125

EM 1,5625

EM 0,781

EM 0,391

EM 0,195

CLD 0,504

K

NEG

KP - BB BB BB BB BB BB BB BTB

EM

6,25

BB - BB BB BB BB BB BB BB

EM

3,125

BB BB - BB BB BB BB BB BB

EM

1,5625

BB BB BB - BB BB BB BB BB

EM

0,781

BB BB BB BB - BB BB BB BB

EM

0,391

BB BB BB BB BB - BB BB BB

EM

0,195

BB BB BB BB BB BB - BB BB

CLD

0,504

BB BB BB BB BB BB BB - BB

K NEG BTB BB BB BB BB BB BB BB -

Keterangan : BB = Berbeda Bermakna; BTB = Berbeda Tidak Bermakna; EM =

Ekstrak Metanol daun Kirinyuh (mg/mL); CLD = Klindamisin (µg/mL); K NEG

= DMSO 2%; KP = Kelompok Pertumbuhan

Hasil uji Kruskal Wallis Mann Whitney dapat dilihat pada tabel II. Jika

nilai p ≤ 0,05 , maka menunjukkan hasil berbeda bermakna (Dahlan, 2014). Dari

tabel I ditunjukkan hasil berbeda bermakna antara KP dengan EM 0,195-6,25

mg/mL. Selain itu, hasil berbeda bermakna ditunjukkan antara KP dengan CLD

0,504 µg/mL. Menurut Dahlan (2014), hasil berbeda bermakna berarti terdapat

perbedaan yang signifikan antara kelompok perlakuan dengan kontrol

pertumbuhan. Hasil tersebut menandakan perbedaan yang signifikan terjadi pada

nilai selisih OD. Sedangkan pada K NEG terdapat hasil berbeda tidak bermakna

terhadap KP. Hal ini menandakan tidak ada perbedaan signifikan yang terjadi

pada nilai selisih OD antara K NEG dengan KP. Setelah nilai selisih OD

didapatkan, maka dilakukan perhitungan nilai persen penghambatan sesuai

dengan rumus Quave et al (2008).


15

Tabel III. Persen Penghambatan Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh

Perlakuan Penghambatan (%) ± SD

EM 6,25 mg/mL 80,966 ± 0,096

EM 3,125 mg/mL 50,171 ± 0,050

EM 1,5625 mg/mL 38,507 ± 0,018

EM 0,781 mg/mL 16,691 ± 0,007

EM 0,391 mg/mL 10,615 ± 0,015

EM 0,195 mg/mL 6,906 ± 0,016

CLD 0,504 µg/mL 60,054 ± 0,010

Keterangan : EM = ekstrak metanol daun kirinyuh, CLD = Clindamycin

Berdasarkan data persen penghambatan pada tabel II, ekstrak metanol

daun Kirinyuh dan klindamisin memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.

acnes. Hal ini dapat dilihat rentang nilai persen penghambatan ekstrak metanol

daun Kirinyuh yaitu 6,906-80,966 %. Dari nilai persen penghambatan tersebut

dapat disimpulkan, semakin besar konsentrasi yang digunakan, maka semakin

besar nilai persen penghambatan yang dihasilkan. Secara keseluruhan hasil

tersebut sesuai dengan analisis statistik yang memiliki hasil perbedaan bermakna

antara KP dengan EM 0,195-6,25 mg/mL (p≤0,05).

CLD 0,504 µg/mL memiliki persen penghambatan sebesar 60,054 %,

sehingga klindamisin yang digunakan termasuk susceptible terhadap bakteri P.

acnes ( oğan et al., 2017). Hasil tersebut didukung dengan analisis statistika yang

menunjukkan hasil berbeda bermakna antara KP dengan CLD 0,504 µg/mL (p=

0,050). Beberapa penelitian sebelumnya telah menguji aktivitas antibakteri dari

klindamisin terhadap bakteri P. acnes. Seperti penelitian yang dilakukan oleh

Dinant et al (2016), klindamisin sudah dapat menghambat pertumbuhan bakteri

pada konsentrasi 0,063 µg/mL terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827. Selain itu,

penelitian oleh Kamei et al (2009), klindamisin dapat memberikan MIC pada

konsentrasi 0,03 µg/mL dan baru dapat terlihat hasil bakteriostatik pada 4x MIC

terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827. Penelitian lain yang juga dilakukan oleh

Zhang et al (2019), klindamisin memiliki MIC50 pada konsentrasi 0,5 µg/mL


16

terhadap bakteri P. acnes. Jika dilihat dari penelitian sebelumnya, maka

klindamisin 0,504 µg/mL yang digunakan pada penelitian ini masih dapat

dikatakan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827.

KHM merupakan konsentrasi terendah dari suatu agen antibakteri yang

dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Khanafer et al., 2018). Menurut

Turnidge (2006), dalam menganalisis kerentanan suatu agen antimikroba metode

konvensional yang digunakan adalah determinasi KHM. Penentuan nilai KHM

berdasarkan persen penghambatan terhadap beberapa agen antimikroba yang akan

diuji yaitu > 50%. Nilai MIC (Minimum Inhibitor Concentration) merupakan

konsentrasi minimal yang mewakili 50% agen antimikroba yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri (Schwarz et al., 2010). Dari data tabel II dapat

ditetapkan aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri P. acnes sebesar 50%

mulai terjadi pada konsentrasi 3,125 mg/mL sebesar 50,171%.

Pada penelitian ini ekstrak metanol daun Kirinyuh dapat menghambat

pertumbuhan bakteri P. acnes. Hal ini dikarenakan C. odorata memiliki berbagai

macam kandungan fitokimia. Salah satu senyawa fitokimia yang terdapat dalam

C. odorata adalah fenolik (Putri and Fatmawati, 2019). Kandungan fenolik yang

memiliki berbagai mekanisme dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Senyawa

fenolik berinteraksi dengan komponen dinding sel bakteri. Di konsentrasi tinggi,

senyawa fenolik dapat merusak membran sel sitoplasma dan mengendapkan

protein sel. Senyawa fenol berinteraksi dengan komponen dinding sel bakteri

yang menyebabkan permeabilitas sel bakteri yang lebih tinggi. Sehingga fenolik

juga berdifusi ke dalam sel untuk memperlambat dan bahkan menghentikan

pertumbuhan bakteri (Harlina et al., 2013). Pada penelitian ini tidak menguji

kandungan fitokimia seperti yang dilakukan oleh Putri dan Fatmawati (2019),

sehingga pada penelitian ini belum tentu terdapat kandungan fenolik dan berdasar

pada literatur sebelumnya memungkinkan adanya kandungan fitokimia yang

berbeda pula.

Nilai KHM yang didapatkan pada penelitian ini berbeda dengan nilai

KHM Hanphakphoom et al (2016) yang memiliki nilai KHM 12,5 mg/mL dan

Chomnawang et al (2005) yang memiliki nilai KHM 0,625 mg/mL, yang mungkin


17

disebabkan oleh perbedaan lokasi tanaman di tanam. Seperti penelitian yang

dilakukan oleh Chomnawang et al (2005), ekstrak berbagai tanaman yang diambil

dari Thailand seperti Eupatorium odoratum atau C. odorata, memiliki aktivitas

antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 6919 (Chomnawang et al., 2005).

Sedangkan pada penelitian ini menggunakan ekstrak tanaman yang diambil dari

Indonesia yaitu C. odorata, sehingga perbedaan letak geografis tanaman yang

diambil dapat mempengaruhi hasil aktivitas antibakteri yang ditimbulkan.

Beberapa penelitian telah menguji adanya kandungan fenolik tanaman C.

odorata dari berbagai letak geografis yang berbeda. Seperti penelitian yang

dilakukan oleh Krishanti et al (2016), ekstrak metanol daun C. odorata yang

diambil dari Malaysia diketahui memiliki kandungan fitokimia total fenolik yang

tinggi yaitu sebesar 455,55±4,59 µg/mg. Hasil total fenolik tanaman C. odorata

dari Malaysia berbeda dengan penelitian lain yang dilakukan di Indonesia.

Penelitian oleh Putri dan Fatmawati (2019), menguji kandungan fitokimia ekstrak

metanol daun Kirinyuh yang diambil dari Maluku, Indonesia. Preparasi sampel

menggunakan Folin Ciocalteu Reagent (FCR) dan determinasi total fenolik dibaca

absorbansi sampel menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang

gelombang 750 nm. Dalam penelitian tersebut, ekstrak metanol daun Kirinyuh

memiliki total fenolik yaitu sebesar 57,11 µg/mg (Putri and Fatmawati, 2019).

Pada penelitian ini menggunakan metode Broth Microdilution,

sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Hanphakphoom et al (2016)

menggunakan difusi sumuran dan Broth Macrodilution. Sehingga perbedaan

metode yang digunakan ini dapat mempengaruhi KHM yang dihasilkan. Metode

Broth Microdilution efisien dalam memberikan hasil KHM dalam satu waktu

dengan berbagai konsentrasi dari agen antibakteri yang digunakan (Klancnik et

al., 2010). Selain itu, Broth Microdilution merupakan metode yang reproducible

dalam menentukan MIC (Mayrhofer et al., 2008). Meskipun dalam penelitian

Chomnawang et al (2005) menggunakan metode yang sama dengan penelitian ini

yaitu Broth Microdilution, tetapi penentuan hasil KHM yang digunakan dalam

penelitian Chomnawang et al (2005) berbeda yaitu konsentrasi terkecil agen

antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Chomnawang et al.,

2005). Sedangkan penelitian ini pengertian hasil KHM merupakan konsentrasi


18

minimal yang mewakili 50% agen antimikroba yang dapat menghambat

pertumbuhan bakteri (Schwarz et al., 2010).

Selain itu, perbedaan karakteristik bakteri yang digunakan dalam

penelitian ini dengan penelitian sebelumnya, dapat mempengaruhi hasil KHM.

Sebagai contoh, penelitian Hanphakphoom et al (2016) menggunakan bakteri P.

acnes DMST 14916 yang memiliki perbedaan karakteristik pertumbuhan dengan

bakteri P. acnes ATCC 11827. P. acnes DMST 14916 menggunakan media

Nutrient Broth (NB) sebagai tempat pertumbuhan bakteri dan waktu inkubasi

sekitar 16-18 jam (Techaoei et al., 2017). Sedangkan P. acnes ATCC 11827

memiliki waktu inkubasi yaitu 48 jam (ATCC, 2020). Adanya perbedaan

karakteristik pertumbuhan bakteri dapat menentukan besar aktivitas

bakteriostatik-bakteriosidal dari suatu agen antibakteri (Kanayama et al., 2017).

Saat ini banyak penggunaan obat sintetik maupun antibiotik dalam terapi

obat antijerawat contohnya isotretinoin, eritromisin, klindamisin, benzoil

peroksida dan sebagainya (Purath and Coyner, 2017). Menurut Walsh et al (2016),

klindamisin merupakan salah satu antibiotik oral yang paling sering diresepkan.

Hal ini karena klindamisin memiliki efek samping yang minor (Walsh et al.,

2016). Meskipun klindamisin memiliki efek samping yang minor, klindamisin

memiliki kemungkinan efek samping yang dapat terjadi pada beberapa orang,

seperti iritasi pada kulit, dan pseudomembranous colitis (Purath and Coyner,

2017). Selain itu, menurut European guidelines therapy menyatakan bahwa

klindamisin oral secara umum tidak dianjurkan untuk firstline therapy jerawat.

Hal ini karena klindamisin merupakan antibiotik bakteriostatik sehingga

memperlambat pertumbuhan bakteri dan berpotensi untuk terjadinya resistensi

jika tidak digunakan dengan benar (Walsh et al., 2016).

Oleh karena itu, pengembangan terapi alami dari ekstrak tanaman dapat

digunakan sebagai alternatif terapi untuk jerawat dan mengurangi potensi

terjadinya resistensi terhadap antibiotik (Vora et al., 2018). Menurut Katno

(2008), kelebihan tanaman obat dan obat tradisional yaitu memiliki efek samping

yang relatif kecil jika digunakan secara tepat. Komponen yang terkandung dalam

satu bahan memiliki efek saling mendukung (Katno, 2008). Menurut Zaid et al

(2010), bahwa produk berbasis alam secara inheren lebih baik ditoleransi dalam


19

tubuh daripada bahan kimia sintetis. Hal ini dapat menjadi peluang tinggi untuk

pengembangan obat baru dari bahan alami.

KESIMPULAN DAN SARAN

Ekstrak metanol daun Kirinyuh memiliki aktivitas antibakteri terhadap

bakteri P. acnes ATCC 11827, yang dibuktikan dengan uji statistik data selisih

OD memiliki perbedaan bermakna antara ekstrak terhadap kontrol pertumbuhan

(p=0,005). Rentang nilai persen penghambatan ekstrak metanol daun Kirinyuh

yaitu 6,906-80,966 %. Nilai MIC ekstrak metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri

P. acnes ATCC 11827 yaitu konsentrasi 3,125 mg/mL (50,171%).

Saran bagi penelitian selanjutnya adalah melanjutkan metode Broth

Microdilution dengan uji kandungan fitokimia untuk mengetahui kandungan

fitokimia dalam ekstrak yang dapat diperkirakan memiliki aktivitas antibakteri

ekstrak. Penelitian selanjutnya dapat mengembangkan kembali metode pengujian

lain yang berbeda, seperti metode Time-kill assay, Checkerboard dan sebagainya.

Sehingga tidak hanya berhenti pada hasil KHM saja, tetapi dapat melihat

kemampuan bakteriostatik-bakteriosidal dari agen yang digunakan.


20

DAFTAR PUSTAKA

Achermann, Y., Goldstein, E.J.C., Coenye, T., Shirtliffa, M.E., 2014.

Propionibacterium acnes: from Commensal to Opportunistic Biofilm-

Associated Implant Pathogen. Clinical Microbiology Reviews, 27(3), 419–

440.

ATCC, 2020. Propionibacterium acnes ATCC 11827. http://www.atcc.org/

produsts/all/11827.aspx diakses pada tanggal 9 Januari 2020.

Azwanida, N., 2015. A Review on The Extraction Methods Use in Medicinal

Plants, Principle, Strength and Limitation. Medicinal & Aromatic Plants,

04(03), 3–8.

Chakraborty, A.K., Rambhade, S., Patil, U., 2011. Chromolaena odorata ( L .) :

An Overview. Journal of Pharmacy Research, 4(3), 573–576.

Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkarn, V.S., Gritsanapan, W., 2005.

Antimicrobial Effects of Thai Medicinal Plants against Acne-Inducing

Bacteria. Journal of Ethnopharmacology, 101(1–3), 330–333.

Dahlan, M.S., 2014. Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan.

Depkes RI, 2008. Farmakope Herbal Indonesia.

oğan, ., ektöre*, ., Karabacak, E., Özyurt, M., 2017. İstanbul ’ da akne

lezyonlarından izole edilen Gram-pozitif bakterilerin antibiyotiklere direnç

durumu. Turk Arch Dermatol Venereology, 32–36.

Dumont-Wallon, G., Moyse, D., Blouin, E., Dréno, B., 2010. Bacterial Resistance

in French Acne Patients. International Journal of Dermatology, 49(3), 283–

288.

Gajdács, M., Spengler, G., Urbán, E., 2017. Identification and Antimicrobial

Susceptibility Testing of Anaerobic acteria: ubik’s Cube of Clinical

Microbiology? MDPI, 6(25), 1–29.

Ghasemzadeh, A., Jaafar, H.Z.E., Rahmat, A., 2015. Phytochemical Constituents

and Biological Activities of Different Extracts of Strobilanthes crispus (L.)

Bremek Leaves Grown in Different Locations of Malaysia. BMC

Complementary and Alternative Medicine, 15(1), 1–10.

Hanphakphoom, S., Thophon, S., Waranusantigul, P., Kangwanrangsan, N.,

Krajangsang, S., 2016. Antimicrobial Activity of Chromolaena odorata

Extracts against Bacterial Human Skin Infections. Modern Applied Science,


21

10(2), 159.

Harlan, J., 2018. Analisis Regresi Linear, Penerbit Gunadharma. Penerbit

Gunadharma.

Harlina, H., Prajitno, A., Suprayitno, E., Nursyam, H., 2013. The Identification of

Chemical Compound and Antibacterial Activity Test of Kopasanda

(Chromolaena Odorata L.) Leaf Extract Against Vibriosis-Causing Vibrio

harveyi (MR 275 Rif) on Tiger Shrimp. Aquatic Science and Technology,

1(2), 15–29.

Kamei, Y., Sueyoshi, M., Hayashi, K.I., Terada, R., Nozaki, H., 2009. The novel

anti-Propionibacterium acnes Compound, Sargafuran, Found in The Marine

Brown Alga Sargassum macrocarpum. Journal of Antibiotics, 62(5), 259–

263.

Kanayama, S., Okamoto, K., Ikeda, F., Ishii, R., Matsumoto, T., Hayashi, N.,

Gotoh, N., 2017. Bactericidal Activity and Post-antibiotic Effect of

Ozenoxacin against Propionibacterium acnes. Journal of Infection and

Chemotherapy, 23(6), 374–380.

Katno, 2008. Tingkat Manfaat Keamanan dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat

Tradisional. Badan Penelitian dan Kesehatan Departemen Kesehatan RI.

Khanafer, N., Daneman, N., Greene, T., Simor, A., Vanhems, P., Samore, M.,

Brown, K.A., 2018. Susceptibilities of Clinical Clostridium Difficile Isolates

to Antimicrobials: A Systematic Review and Meta-Analysis of Studies Since

1970. Clinical Microbiology and Infection, 24(2), 110–117.

Klančnik, A., Piskernik, S., Jeršek, ., Možina, S.S., 2010. Evaluation of

Diffusion and Dilution Methods to Determine the Antibacterial Activity of

Plant Extracts. Journal of Microbiological Methods, 81(2), 121–126.

Krishanti, M.P., Rathinam, X., Kasi, M., Ayyalu, D., Surash, R., Sadasivam, K.,

Subramaniam, S., 2010. A Comparative Study on The Antioxidant Activity

of Methanolic Leaf Extracts of Ficus religiosa L, Chromolaena odorata (L.)

King & Rabinson, Cynodon dactylon (L.) Pers. and Tridax procumbens L.

Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 3(5), 348–350.

Kumar, N., Goel, N., 2019. Phenolic acids: Natural Versatile Molecules with

Promising Therapeutic Applications. Biotechnology Reports, 24, 1–10.


22

Lee, H., and Park, J., 2017. Evaluation of The Effects of Dimethylsulphoxide on

Morphology, Cellular Viability, mRNA, and Protein Expression of Stem

Cells Culture in Growth Media. Biomedical Reports, 7, 291-296.

Madelina, W., Sulistiyaningsih, 2018. Review : Resistensi Antibiotik pada Terapi

Pengobatan Jerawat. Jurnal Farmaka, 16(2), 105–117.

Maimulyanti, A., Prihadi, A. R., dan Safrudin, I., 2016. Chemical Composition,

Phytochemical Screening and Antioxidant Activity of Acmella uliginosa

(Sw.) Cass Leaves. Indones J. Chem., 16(2), 162-174.

Maji, S., Dandapat, P., Ojha, D., Maity, C., Halder, S.K., Mohapatra, P.K. Das,

Pathak, T.K., Pati, B.R., Samanta, A., Mondal, K.C., 2010. In Vitro

Antimicrobial Potentialities of Different Solvent Extracts of Ethnomedicinal

Plants against Clinically Isolated Human Pathogens. Journal of Phytology,

2(4), 57–64.

Mayrhofer, S., Domig, K. J., Mair, C., Zitz, U., Huys, G., and Kneifel, W., 2008.

Comparison of Broth Microdilution, Etest, and Agar Disk Diffusion Methods

for Antimicrobial Susceptibility Testing of Lactobacillus acidophilus Group

Members. American Society for Microbiology, 3745-3748.

Mditshwa, A., Fawole, O.A., Al-Said, F., Al-Yahyai, R., Opara, U.L., 2013.

Phytochemical Content, Antioxidant Capacity and Physicochemical

Properties of Pomegranate Grown in Different Microclimates in South

Africa. South African Journal of Plant and Soil, 30(2), 81–90.

Nair , S. S., et al., 2017. A Polycation Antimicrobial Peptide Mimic without

Resistance Buildup against Propionibacterium Acnes. WILLEY-VCH

Advanced Science News Macromolecular Bioscience, 1700090, 1-6.

Nelson, K., Lyles, J.T., Li, T., Saitta, A., Addie-Noye, E., Tyler, P., Quave, C.L.,

2016. Anti-acne activity of Italian Medicinal Plants Used for Skin Infection.

Frontiers in Pharmacology, 7(NOV), 1–14.

Odutayo, F., Ezeamagu, C., Kabiawu, T., Aina, D., Mensah-Agyei, G., 2017.

Phytochemical Screening and Antimicrobial Activity of Chromolaena

odorata Leaf Extract against Selected Microorganisms. Journal of Advances

in Medical and Pharmaceutical Sciences, 13(4), 1–9.

Ogawa, R., 2017. Keloid and Hypertrophic Scars are The Result of Chronic


23

Inflammation in the Reticular Dermis 18, 1–10.

Omokhua, A.G., McGaw, L.J., Finnie, J.F., Van Staden, J., 2016. Chromolaena

odorata (L.) R.M. King & H. Rob. (Asteraceae) in Sub-Saharan Africa: A

Synthesis and Review of Its Medicinal Potential. Journal of

Ethnopharmacology, 183, 112–122.

Ozkaya, G.U., Durak, M.Z., Akyar, I., Karatuna, O., 2019. Antimicrobial

Susceptibility Test for The Determination of Resistant and Susceptible S.

aureus and Enterococcus spp. Using A Multi-Channel Surface Plasmon

Resonance Device. MDPI, 9(4).

Portillo, M.E., Corvec, S., Borens, O., Trampuz, A., 2013. Propionibacterium

acnes: An Emerging Pathogen in Biomaterial-Associated Infection. BioMed

Research International, 1–10.

Pubchem, 2020. Methanol (Pubchem Online). https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

compound/887 diakses pada tanggal 23 Maret 2020.

Purath, J., Coyner, T., 2017. Pharmacologic Therapy for Acne A Primer for

Primary Care. American Academy of Physician Assistants, (October), 22–29.

Putri, D.A., Fatmawati, S., 2019. A New Flavanone as a Potent Antioxidant

Isolated from Chromolaena odorata L. Leaves. Evidence-based

Complementary and Alternative Medicine, 1–12.

Quave, C.L., Plano, L.R.W., Pantuso, T., Bennett, B.C., 2008. Effects of Extracts

from Italian Medicinal Plants on Planktonic Growth, Biofilm Formation and

Adherence of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Journal of

Ethnopharmacology, 118(3), 418–428.

Rusdy, M., 2016. The Spread, Impact and Control of Chromolaena odorata (L.)

R.M. King and H. Robinson in Grassland Area. Journal of Agriculture and

Ecology Research International, 5(1), 1–8.

Schneider, A., Hommel, G., Blettner, M., 2010. Lineare Regressions Analysis.

Deutsches Arzteblatt International, 107(44), 776–782.

Schwarz, S., Silley, P., Simjee, S., Woodford, N., van duijkeren, E., Johnson,

A.P., Gaastra, W., 2010. Editorial: Assessing The Antimicrobial

Susceptibility of Bacteria Obtained from Animals. Journal of Antimicrobial

Chemotherapy, 65(4), 601–604.


24

Scientific, T., 2013. Remel and Oxoid Microbiology Products.

Sukandar, E.Y., Fidrianny, I., Triani, R., 2014. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak

Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.) terhadap

Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis, MRSA dan MRCNS.

Acta Pharmaceutica Indonesia, 39(3 & 4), 51–56.

Tambun, R., Limbong, H.P., Pinem, C., Manurung, E., 2016. Pengaruh Ukuran

Partikel, Waktu Dan Suhu Pada Ekstraksi Fenol Dari Lengkuas Merah

Influence of Particle Size, Time and Temperature To Extract Phenol From

Galangal. Jurnal Teknik Kimia USU, 5(4), 53.

Turnidge, J., Kahlmeter, G., Kronvall, G., 2006. Statistical Characterisation of

Bacterial Wild-Type MIC Value Distributions and The Determination of

Epidemiological Cut-Off Values. Clinical Microbiology and Infection, 12(5),

418–425.

Vijayaraghavan, K., Rajkumar, J., Bukhari, S.N.A., Al-Sayed, B., Seyed, M.A.,

2017. Chromolaena odorata: A Neglected Weed with A Wide Spectrum of

Pharmacological Activities (Review). Molecular Medicine Reports, 15(3),

1007–1016.

Vora, J., Srivastava, A., Modi, H., 2018. Antibacterial and Antioxidant Strategies

for Acne Treatment through Plant Extracts. Informatics in Medicine

Unlocked, 13(June 2017), 128–132.

Walsh, T.R., Efthimiou, J., Dréno, B., 2016. Systematic Review of Antibiotic

Resistance in Acne: An Increasing Topical and Oral Threat. The Lancet

Infectious Diseases, 16(3), e23–e33.

Wijaya, H., Novitasari, Jubaidah, S., 2018. Perbandingan Metode Ekstraksi

terhadap Rendemen Ekstrak Daun Rambut Laut (Sonneratia caseolaris L.

Engl). Jurnal Ilmiah Manuntung, 4(1), 79–83.

Yajarla, V. N. G., et al., 2014. Anti-Inflammatory and Anti-Proliferative

Properties of Chromolaena odorata Leaf Extracts in Normal and Skin-

Cancer Cell Lines. Journal of Herbs, Spices and Medicinal Plants, 20, 359-

371.

Zaid, H., Raiyn, J., Nasser, A., Saad, B., and Rayan, A., 2010. Physicochemical

Properties of Natural Based Products versus Synthetic Chemicals. The Open


25

Nutraceuticals Journal, 3, 194-202.

Zgoda, J.R., Porter, J.R., 2001. A Convenient Microdilution Method for Screening

Natural Products against Bacteria and Fungi. Pharmaceutical Biology, 39(3),

221–225.

Zhang, N., Yuan, R., Xin, K. Z., Lu, Z., and Ma, Y., 2019. Antimicrobial

Susceeptibility, Biotypes and Phylotypes of Clinical Cutibacterium

(Formerly Propionibacterium) acnes Strains Isolated from Acne Patients: An

Observational Study. Dermatol Ther (Heidelb), 9, 735-746.


26

LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman


27

Lampiran 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata

Gambar 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata

Lampiran 3. Proses Maserasi Daun Kirinyuh

Gambar 3. Proses Maserasi Penambahan Pelarut Metanol

Lampiran 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh

Gambar 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh


28

Lampiran 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO

(A) (B) (C)

Gambar 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO

Keterangan : Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada (A) = DMSO 50%; (B) =

DMSO 75%; (C) = DMSO 100%.

Lampiran 6. Penetapan Kadar Air dengan Metode Destilasi Toluena

Gambar 6. Penetapan Kadar Air Volume Air Akhir


29

Lampiran 7. Bobot Tetap

(A) (B) (C)

Gambar 7. Penimbangan bobot tetap (A) Cawan porselen kosong (B)

Ekstrak sebelum di oven (C) Ekstrak setelah di oven

Perhitungan :

Bobot cawan porselen kosong : 80,3417 gram

Penimbangan 1

Penimbangan ekstrak sebelum di oven : 87,4889 gram

Penimbangan dinyatakan sudah mencapai bobot tetap apabila perbedaan dua kali

penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan atau dipijarkan selama 1 jam

tidak lebih dari 0,25%

Penimbangan =

Penimbangan =

= 0,21872 gram

Range bawah = 87,4889 gram – 0,21872 gram = 87,27018 gram

Range atas = 87,4889 gram + 0,21872 gram = 87,70762 gram

Penimbangan 2

Penimbangan ekstrak setelah di oven : 87,4329 gram

Hasil ekstrak = bobot cawan dan isi – bobot cawan

= 87,4329 gram – 80,3417 gram

= 7,0912 gram

Hasil penimbangan ke-2 didapatkan masuk ke dalam range bawah dan range atas,

sehingga memenuhi persyaratan bobot tetap


30

Rendemen =

=

= 14,1824 %

Lampiran 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827

Gambar 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 dengan

Media Blood Agar


31

Lampiran 9. Surat keterangan Propionibacterium acnes ATCC 11827


32

Lampiran 10. Pengkondisian Anaerob

(A) (B) (C)

Gambar 9. Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan

indikator anaerobik

Keterangan : (A) = Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan

indikator anaerobik; (B) = anaerogen; (C) = indikator anaerobik

Lampiran 11. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution

(A) (B) (C)

(D) (E)

Gambar 10. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution

Keterangan : (A) = ekstrak metanol daun Kirinyuh (B) = kontrol negatif (C) =

kontrol pertumbuhan (D) = kontrol media (E) = kontrol positif


33

Lampiran 12. Pengukuran Optical Density Jam ke-0

Perlakuan Replikasi

1

Replikasi

2

Replikasi

3

Rata-

rata SD

EM 6,25

mg/Ml 1,659 1,752 1,660 1,690 0,053

EM 3,125

mg/mL 0,727 0,753 0,662 0,714 0,047

EM 1,5625

mg/mL 0,343 0,335 0,345 0,341 0,005

EM 0,781

mg/mL 0,191 0,194 0,200 0,195 0,005

EM 0,391

mg/mL 0,146 0,131 0,146 0,141 0,009

EM 0,195

mg/mL 0,116 0,104 0,102 0,107 0,008

Kontrol Media 0,016 0,012 0,021 0,016 0,005

Kontrol

pertumbuhan 0,168 0,170 0,167 0,168 0,002

CLD 0,504

µg/mL 0,114 0,115 0,120 0,116 0,003

DMSO (2%) 0,115 0,115 0,114 0,115 0,001



34

Lampiran 13. Pengukuran Optical Density Jam ke-48

Perlakuan Replikasi

1

Replikasi

2

Replikasi

3

Rata-

rata SD

EM 6,25

mg/Ml 1,948 1,905 1,998 1,950 0,047

EM 3,125

mg/mL 1,379 1,379 1,385 1,381 0,003

EM 1,5625

mg/mL 1,204 1,164 1,175 1,181 0,021

EM 0,781

mg/mL 1,333 1,324 1,342 1,333 0,009

EM 0,391

mg/mL 1,355 1,369 1,362 1,362 0,007

EM 0,195

mg/mL 1,371 1,377 1,389 1,379 0,009

Kontrol Media 0,032 0,022 0,013 0,022 0,010

Kontrol

pertumbuhan 1,560 1,501 1,542 1,534 0,030

CLD 0,504

µg/mL 0,657 0,672 0,657 0,662 0,009

DMSO (2%) 1,460 1,468 1,456 1,461 0,006



35

Lampiran 14. Uji Statistika


36


37


38


39


40


41


42


43


44


45


46


47

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul “Aktivitas Antibakteri

Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh (Chromolaena odorata

(L.) R. M. King & H. Rob.) terhadap Bakteri

Propionibacterium acnes” memiliki nama lengkap

Grezelia Feronica Harsono, lahir di Pemalang pada

tanggal 17 Maret 1999. Penulis merupakan anak tunggal

dari pasangan Budi Harsono dan Junilia. Pendidikan

formal yang telah ditempuh yaitu TK Handayani

Pekalongan (2002-2004), SDN Sampangan 01

Pekalongan (2004-2010), SMP PIUS Pekalongan (2010-2013), SMA Santo

Bernardus Pekalongan (2013-2016). Pada tahun 2016, penulis melanjutkan

pendidikan sarjana ke Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Semasa menempuh kuliah penulis aktif berpartisipasi dalam mengikuti

kepanitiaan dan organisasi di kampus seperti Koordinator Divisi Publikasi dan

Dokumentasi dalam kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum (2017), Wakil Ketua

dalam kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum (2018), organisasi DPMF periode

2017 sebagai anggota Komisi Publikasi dan Informasi, dan organisasi DPMF

periode 2018 sebagai koordinator Komisi Publikasi dan Informasi. Selain itu,

penulis juga aktif sebagai asisten praktikum yaitu praktikum Biologi Sel dan

Molekuler (2017-2018), dan praktikum Mikrobiologi (2018-2020).


AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN...

Documents

Transcript of AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN...