2250 buku yg sangat bermanfaaat.pdf

8/14/2019 2250 buku yg sangat bermanfaaat.pdf

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V o l . 3 4 , N o . 1 1N T I M I C R O B I A L AGENTS ND C H E M O T H E R A P Y , N o v . 1 9 9 0 p . 2 2 5 0 - 2 2 5 30 0 6 6 - 4 8 0 4 / 9 0 / 1 1 2 2 5 0 - 0 4 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t X ) 1 9 9 0 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

E f f e c t s o f B u t e n a f i n e H y d r o c h l o r i d e , a N ew B e n z y l a m i n eD e r i v a t i v e , on E x p e r i m e n t a l D e r m a t o p h y t o s i s i n G u i n e a P i g sT AD A SHI A R I K A , 1 * MAMORU Y O K O O , 1 TOYOJI H A S E , 1 TETSUY MAED A,' KOUJI AMEMIYA,'

AND HIDEYO YAMAGUCHI2C e n t r a l R e s e a r c h L a b o r a t o r i e s , K a k e n P h a r m a c e u t i c a l C o . L t d . , 2 - 2 8 - 8 , Honkomagome, B u n k y o - k u , T o k y o 1 1 3 3 a n dR e s e a r c h C e n t e r f o r M e d i c a l M y c o l o g y , T e i k y o U n i v e r s i t y , 3 5 9 O t s u k a , H a c h i o j i - s h i , T o k y o 1 9 2 0 3 , 2 J a p a n

R e c e i v e d 1 5 M a r c h 1 9 9 0 / A c c e p t e d 1 5 A u g u s t 1 9 9 0B u t e n a f i n e h y d r o c h l o r i d e , N - 4 - t e r t - b u t y l b e n z y l - N - m e t h y l - l - n a p h t h a l e n e m e t h y l a m i n e h y d r o c h l o r i d e ( b u t e n -a f i n e ) , i s a n o v e l a n t i f u n g a l a g e n t o f t h e c l a s s o f b e n z y l a m i n e d e r i v a t i v e s . B u t e n a f i n e wa s i n v e s t i g a t e d f o r i t sa c t i v i t y a g a i n s t g u i n e a p i g d e r m a t o p h y t o s i s c a u s e d b y T r i c h o p h y t o n m e n t a g r o p h y t e s o r M i c r o s p o r u m c a n i s i nc o m p a r i s o n w i t h t h o s e o f n a f t i f i n e , t o l n a f t a t e , c l o t r i m a z o l e , a n d b i f o n a z o l e . T o p i c a l b u t e n a f i n e s h o w e de x c e l l e n t e f f i c a c y a g a i n s t d e r m a t o p h y t o s i s w h e n i t wa s a p p l i e d o n ce d a i l y , a n d t h e e f f e c t wa s s u p e r i o r t o t h o s eo f a l l f o u r r e f e r e n c e d r u g s . When a p p l i e d o n ce a t 2 4 o r 4 8 h b e f o r e i n f e c t i o n , t h e d r u g e x h i b i t e d e x c e l l e n tp r o p h y l a c t i c e f f i c a c y a g a i n s t e x p e r i m e n t a l T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n . T h e c o n c e n t r a t i o n s o f b u t e n a f i n e i na n i m a l s k i n a t 2 4 a n d 4 8 h a f t e r a p p l i c a t i o n o f 0 . 2 m l o f a 1 s o l u t i o n were s e v e r a l h u n d r e d t i m e s h i g h e r t h a nt h o s e r e q u i r e d t o k i l l T . m e n t a g r o p h y t e s a n d M. c a n i s . T h e g o o d e f f i c a c y o f b u t e n a f i n e a g a i n s t d e r m a t o p h y t o s i s

may b e a t t r i b u t a b l e t o i t s f u n g i c i d a l a c t i v i t y a n d l o n g r e t e n t i o n i n t h e s k i n a f t e r t o p i c a l a p p l i c a t i o n .I m i d a z o l e a n t i f u n g a l a g e n t s s u c h a s c l o t r i m a z o l e , m i c o n -a z o l e , e c on a zo l e , o x i c o na z ol e , a n d b i f o n a z o l e h a v e b e e nw i d e l y u s e d i n t h e t o p i c a l t r ea t m en t o f s u p e r f i c i a l f u n g a li n f e c t i o n s . R e c e n t l y , n a f t i f i n e , a n a n t i f u n g a l a g e n t o f t h ea l l y l a m i n e c l a s s , h a s b e e n d e v e l o p e d . N a f t i f i n e h a s a b r o a ds p e c t r u m o f a n t i f u n g a l a c t i v i t y i n v i t r o a n d e x h i b i t s h i g he f f i c a c y a g a i n s t e x p e r i m en t a l g u i n e a p i g d e r m a t o p h y t o s i s 1 ,4 ) . I t i n t e r f e r e s w i t h f u n g a l e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s b y i n h i b -i t i n g t h e c o n v e r s i o n o f s q u a l e ne i n t o s q u a l e n e e p o x i d e w h i c hi s c a t a l y z e d b y s q u a l e n e e p o x i d as e . T h u s , t h e m e c h a n i s m o fa c t i o n o f n a f t i f i n e i s d i s t i n c t f r o m t h a t o f i m i d a z o l e a n t i f u n g a la g e n t s w h i c h b l o c k a l a t e r p r o c e s s i n t h e e r g o s t e r o l b i o s y n -

t h e s i s p a t h w a y i n v o l v i n g 1 4 - a- d em et h y l a t i o n o f l a n o s t e r o l( 3 , 7 , 9 ) . M o r e r e c e n t l y , i t h a s b e e n c l a r i f i e d t h a t t h e m o d e o fa c t i o n o f a t h i o c a r b a m a t e a n t i f u n g a l a g e n t , t o l n a f t a t e ,a g a i n s t d e r m a t o p h y t o s i s i s s i m i l a r t o t h a t o f n a f t i f i n e ( 2 , 8 ) .B u t e n a f i n e ( N - 4 - t e r t - b u t y l b e n z y l - N - m e t h y l - 1 - n a p h t h a -l e n e m e t h y l a m i n e h y d r o c h l o r i d e ) b e l o n g s t o t h e c l a s s o fb e n z y l a m i n e d e r i v a t i v e s a n d w a s s y n t h e s i z e d b y M a e d a e ta l . ( T . M a e d a , T . A r i k a , K . A m e m i y a , a n d K . S a s a k i , C h e m .P h a r m . B u l l . , i n p r e s s ) . B u t e n a f i n e i s e a s i l y s o l u b l e i nm e t h a n o l , e t h a n o l , d i c h l o r o m e t h a n e , a n d c h l o r o f o r m ; a n d i so n l y s l i g h t l y s o l u b l e i n w a t e r ; s h o w s a b r o a d s p e c t r u m o fa n t i f u n g a l a c t i v i t y ; a n d i s p a r t i c u l a r l y a c t i v e a g a i n s t d e r -m a t o p h y t e s , a s p e r g i l l i , d i m o r p h i c f u n g i , a n d d e ma t i ac eo u sf u n g i ( M a e d a e t a l . , i n p r e s s ) . L i k e a l l y l a m i n e a n d t h i o c a r -b a m a t e a n t i f u n g a l a g e n t s , b u t e n a f i n e i n h i b i t s s t e r o l s y n t h e s i sb y b l o c k i n g t h e s q u a l e n e e p o x i d a t i o n s t e p i n f u n g i ( T .H i r a t a n i a n d H . Y a m a g u c h i , u n p u b l i s h e d d a t a ) . I n t h i sr e p o r t , we a d d r e s s t h e e f f e c t o f b u t e n a f i n e a g a i n s t g u i n e a p i gd e r m a t o p h y t o s i s c a u s e d b y T r i c h o p h y t o n m e n t a g r o p h y t e so r M i c r o s p o r u m c a n i s .( T h e s e d a t a w e r e p r e s e n t e d i n p a r t a t t h e 2 7 t h I n t e r s c i e n c eC o n f e r e n c e o n A n t i m i c r o b i a l A g e n t s a n d C h e m o t h e r a p y , 4t o 7 O c t o b e r 1 9 8 7 , N ew Y o r k [ T . A r i k a , M . Y o k o o , T .M a e d a , K . A m e m i y a , a n d K . S a s a k i , P r o g r a m A b s t r . 2 7 t h

* C o r r e p o n d i n g a u t h o r .

I n t e r s c i . C on f . A nt i m i c r ob . A g e n t s C h e m o t h e r . , a b s t r . n o .9 8 0 , 1 9 8 7 ] . )MATERIALS A N D ME THOD S

A n i m a l s . M a l e H a r t l e y s t r a i n g u i n e a p i g s ( w e i g h t , 6 5 0 t o9 0 0 g ) w e r e u s e d i n t h i s s t u d y . E x p e r i m e n t s w e r e d o n e w i t hg r o u p s o f f i v e a n i m a l s .T es t o r g a ni s ms . C l i n i c a l i s o l a t e s o f T . m e n t a g r o p h y t e sK D - 0 4 a n d M. c a n i s K D - 3 0 5 w e r e k i n d l y s u p p l i e d b y H .T a k a h a s h i , T e i k y o U n i v e r s i t y S c h o o l o f M e d i c i n e , T o k y o ,J a p a n , a n d T . H o r i e , H o r i e D e r m a t o l o g i c a l C l i n i c , T o k y o ,J a p a n , r e s p e c t i v e l y .P r e p a r a t i o n o f i n o c u l a . C o n i d i a w e r e h a r v e s t e d f r o m T .m e n t a g r o p h y t e s K D - 0 4 c u l t u r e s g r o w n o n p o t a t o s u c r o s ea g a r s l a n t s a t 2 7 C f o r 3 w e e k s . T h e c u l t u r e w a s f l o o d e d w i t hs t e r i l e s a l i n e c o n t a i n i n g 0 . 1 Tween 8 0 a n d s c r a p e d o f f w i t ht h e a i d o f a l o o p . T h e c o n i d i a l s u s p e n s i o n w a s t h e n p i p e t t e di n t o a t e s t t u b e . A f t e r s h a k i n g , t h e s u s p e n s i o n w a s f i l t e r e dt h r o u g h g a u z e t o r e m o v e h y p h a l f r a g m e n t s a n d a g a r b l o c k s .T h e s u s p e n s i o n w a s a d j u s t e d t o m a k e a c o n i d i a l c o n c e n t r a -t i o n o f 2 x 1 0 c e l l s p e r m l b y c o u n t i n g w i t h a h e m a c y t o m -e t e r . C o n i d i a a n d m y c e l i a o f M. c a n i s K D - 3 0 5 w e r e h a r -v e s t e d f r o m c u l t u r e s g r o w n o n S a b o u r a u d g l u c o s e a g a rs l a n t s a t 2 7 C f o r 3 w e e k s . T h e e x p e r i m e n t a l c e l l s u s p e n s i o nw a s p r e p a r e d a s d e s c r i b e d a b o v e , e x c e p t t h a t t h e f i l t r a t i o ns t e p w a s n o t d o n e .D e t e r m i n a t i o n o f MIC a n d MFC. T h e i n v i t r o f u n g i s t a t i c

c o n c e n t r a t i o n s w e r e d e t e r m i n e d b y a s e r i a l d i l u t i o n m e t h o db y u s i n g S a b o u r a u d g l u c o s e b r o t h . C o n c e n t r a t i o n s o f t h ed r u g s r a n g e d f r o m 0 . 0 0 3 t o 1 0 0 , u g / m l . A l l t u b e s c o n t a i n i n g 3m l o f t h e a s s a y m e d i u m w e r e i n o c u l a t e d w i t h a p p r o x i m a t e l y3 x 1 0 4 c e l l s a n d i n c u b a t e d a t 3 0 C f o r 7 d ay s . T h e MIC w a se s t i m a t e d a s t h e l o w e s t c o nc en t r at i o n t h a t c o m p l e t e l y i n h i b -i t e d t h e g r o w t h o f d e r m a t o p h y t e s . T h e m i n i m a l f u n g i c i d a lc o n c e n t r a t i o n ( M F C ) w a s e s t i m a t e d a s t h e l o w e s t c o n c e n -t r a t i o n t h a t p r e v e n t e d v i s i b l e g r o w t h w h e n s u b c u l t u r e d o n t oS a b o u r a u d g l u c o s e a g a r p l a t e s a t 3 0 C f o r 7 d a y s .I n f e c t i o n . I n f e c t i o n was e s t a b l i s h e d b y t h e p r o c e d u r e o fS a k a i e t a l . ( 1 0 ) . B r i e f l y , h a i r was p l u c k e d b y h a n d f r o m a na r e a ( 3 b y 3 c m ) o n t h e b a c k s o f t h e g u i n e a p i g s t o m a k e a2 2 5 0


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E FF ECT S OF BU T E N A FI N E ON D ER M A T OPHY T O SI S 2 2 5 1TABLE 1 . F u n g i s t a t i c a n d f u n g i c i d a l a c t i v i t i e s o f b u t e n a f i n e , n a f t i f i n e , t o l n a f t a t e , c l o t r i m a z o l e , a n d b i f o n a z o l ea g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s K D - 0 4 a n d M. c a n i s K D - 3 0 5

B u t e n a f i n e N a f t i f i n e T o l n a f t a t e C l o t r i m a z o l e B i f o n a z o l eS t r a i n MIC MFC MIC MFC MIC MFC MIC MFC MIC MFC

( > L g / m l ) ( ~ L g / m l ) t L g / m l ) t L g / m l ) ( L g / m l ) ( , u g / m l ) ( , u g / m l ) ( > L g / m l ) 4 4 g m l ) ( , u g / m l )T . m e n t a g r o p h y t e s K D - 0 4 0 . 0 1 2 0 . 0 1 2 0 . 0 5 0 . 0 5 0 . 2 0 0 . 3 9 0 . 3 9 0 . 7 8 0 . 7 8 1 . 5 6M. c a n i s K D - 3 0 5 0 . 0 2 5 0 . 0 5 0 . 1 0 0 . 2 0 0 . 3 9 0 . 3 9 0 . 7 8 3 . 1 3 1 . 5 6 6 . 2 5h a i r l e s s s q u a r e . On t h e f o l l o w i n g d a y , t h e s k i n w a s l i g h t l ya b r a d e d w i t h s a n d p a p e r , a n d 5 0 R I o f t h e i n o c u l u m ( 1 0 6 c e l l s )w a s a p p l i e d w i t h a g l a s s r o d ( d a y 0 ) .D r u g s a n d t r e a t m e n t . B u t e n a f i n e ( l o t 8 4 0 3 1 7 ) , n a f t i f i n e ( l o t8 3 1 0 1 1 ) , c l o t r i m a z o l e ( l o t 8 4 0 6 1 4 ) , a n d b i f o n a z o l e ( l o tS 1 1 8 5 8 ) w e r e s y n t h e s i z e d i n o u r l a b o r a t o r i e s . T o l n a f t a t e ( l o t8 5 0 9 ) w a s p u r c h a s e d f r o m S a g a m i K a s e i K o g y o C o . , L t d . ,M a c h i d a , J a p a n . B u t e n a f i n e , n a f t i f i n e , c l o t r i m a z o l e , a n db i f o n a z o l e w e r e d i s s o l v e d i n a m i x t u r e o f p o l y e t h y l e n eg l y c o l 4 0 0 ( P E G ) - e t h a n o l ( 7 5 : 2 5 ; v o l / v o l ) ; a n d t o l n a f t a t e w a sd i s s o l v e d i n a m i x t u r e o f P E G - a c e t o n e ( 7 5 : 2 5 ; v o l / v o l ) ( 4 ) .E a c h g u i n e a p i g w a s t o p i c a l l y t r e a t e d w i t h 0 . 2 m l o f t h es o l u t i o n o f t h e t e s t c o m p o u n d . T h e t r e a t m e n t w a s s t a r t e d o nd a y 2 , 3 , o r 4 p o s t i n f e c t i o n a n d w a s c o n t i n u e d f o r 4 o r 1 0d a y s .E v a l u a t i o n . C u l t u r e s t u d i e s w e r e d o n e t o a s s e s s t h e e f -f i c a c y o f t r e a t m e n t . Two d a y s a f t e r t h e l a s t t r e a t m e n t , a l la n i m a l s w e r e s a c r i f i c e d u n d e r e t h e r a n e s t h e s i a , a n d 1 0 s k i ns e c t i o n s w e r e o b t a i n e d f r o m e a c h t r e a t e d s i t e . E a c h s e c t i o nw a s i m p l a n t e d o n t o a S a b o u r a u d g l u co s e a g ar p l a t e c o n t a i n -i n g 5 0 0 , u g o f c y c l o h e x i m i d e p e r m l , 5 0 p t g o f k a n a m y c i n p e rm l , a n d 5 , u g o f g e n t a mi c i n p e r m l ; a n d a l l p l a t e s w e r ei n c u b a t e d a t 2 7 C f o r 1 0 d a y s . T h e t r e a t m e n t w a s a s s e s s e d a se f f e c t i v e i f n o f u n g a l g r o w t h w a s d e t e c t e d .P r o p h y l a c t i c e f f e c t . A h a i r l e s s a r e a ( 3 b y 3 c m ) w a sp r o d u ce d o n t h e b a c k o f g u i n ea p i g s a s d e sc r i be d a b o ve . Ont h e f o l l o w i n g d a y , t h e s k i n w a s t r e a t e d w i t h 0 . 2 m l o f a 1s o l u t i o n o f b u t e n a f i n e o r b i f o n a z o l e . A t 2 4 , 4 8 , o r 7 2 h a f t e rd r u g a p p l i c a t i o n , 5 0 , u l ( 1 0 6 c e l l s ) o f t h e T . m e n t a g r o p h y t e ss u s p e n s i o n w a s r u b b e d o n t o t h e p r e t r e a t e d a r e a o f t h e s k i nw i t h a g l a s s r o d . B e f o r e i n f e c t i o n , t h e u n a b s o r b e d d r u g w a sw i p e d o f f w i t h a c o t t o n s w a b c o n t a i n i n g 70 e t h a n o l . A l li n f e c t e d s i t e s w e r e v i s u a l l y e x a m i n e d d a i l y t h r o u g h o u t t h ee x p e r i m e n t a l p e r i o d t o a s s e s s s k i n l e s i o n s . T h e i n t e n s i t y o ft h e l e s i o n s w a s g r a d e d 1+ t o 4+ b y t h e s c o r i n g s y s t e m o fW e i n s t e i n e t a l . ( 1 2 ) . On d a y 1 7 p o s t i n f e c t i o n , c u l t u r e s t u d i e sw e r e d o n e .C o n c e n t r a t i o n s o f b u t e n a f i n e i n t h e s k i n . i ) E x t r a c t i o n o fb u t e n a f i n e f r o m t h e s k i n . A n a r e a ( 3 b y 3 c m ) o f t h e b a c k s o ft h e g u i n e a p i g s w a s c l i p p e d a n d t r e a t e d w i t h 0 . 2 m l o f a 1b u t e n a f i n e s o l u t i o n . A t 2 4 , 4 8 , o r 7 2 h a f t e r - b u t e n a f i n et r e a t m e n t , t h e u n a b s o r b e d d r u g w a s w i p e d o f f w i t h a c o t t o ns w a b c o n t a i n i n g 7 0 e t h a n o l a n d t h e t r e a t e d s k i n w a sr e m o v e d . A f t e r a s p e c i m e n o f t h e s k i n w a s c h o p p e d i n t os m a l l p i e c e s ( < 1 m m ) a n d a l k a l i n i z e d w i t h 1 N NaOH ( 2 m l ) ,b u t e n a f i n e w a s e x t r a c t e d t w i c e w i t h 1 0 m l o f m e t h a n o l . A l lm e t h a n o l e x t r a c t s w e r e c o m b i n e d a n d c o n c e n t r a t e d u n d e rr e d u c e d p r e s s u r e , D 7 - b u t e n a f i n e ( N - 4 - t e r t - b u t y l b e n z y l - N -m e t h y l - i - [ 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 - 2 H 7 ] n a p h t h a l e n e m e t h y l a m i n eh y d r o c h l o r i d e ) w a s a d d e d a s a n i n t e r n a l s t a n d a r d , a n d t h es o l u t i o n w a s a p p l i e d t o a g l a s s c o l u m n o f E x t r e l u t ( 3 g ;M e r c k ) a n d e l u t e d w i t h 3 0 m l o f n - h e x a n e . T h e e l u a t e w a se v a p o r a t e d u n d e r n i t r o g e n g a s , a n d t h e r e s i d u e was d i s -s o l v e d i n CH3CN a n d N , O - b i s ( t r i m e t h y l s i l y l ) t r i f l u o a c e t a -m i d e ( 5 0 , u l e a c h ) . T h e s a m p l e was s u b m i t t e d t o g a s c h r o -m a t o g r a p h y - m a s s s p e c t r o m e t r y .

i i ) G a s c h r o m a t o g r a p h y - m a s s s p e c t r o m e t r y . A JEOLm o d e l J M S - D 3 0 0 m a s s s p e c t r o m e t e r c o n n e c t e d w i t h a S h i -m a d z u GC-7A g a s c h r o m a t o g r a p h w a s u s e d f o r g a s c h r o m a -t o g r a p h y - m a s s s p e c t r o m e t r y . T h e f l o w r a t e o f t h e h e l i u mc a r r i e r g a s w a s 5 0 m l / m i n . S e p a r a t i o n was p e r f o r m e d b yu s i n g a g l a s s c o l u m n ( 1 m b y 3 m m ) p a c k e d w i t h 4 O V - 1 0 1o n 1 0 0 - 1 2 0 mesh G a s c h r o m Q . T h e c o l u m n w a s h e a t e d t o2 7 0 C . I n j e c t o r a n d e n r i c h e r t e m p e r a t u r e s w e r e 3 0 0 a n d2 5 0 C , r e s p e c t i v e l y . O t h e r o p e r a t i n g c o n d i t i o n s w e r e a sf o l l o w s : e l e c t r o n e n e r g y , 7 0 e V ; e l e c t r o n beam c u r r e n t , 2 0 0v . A ; a n d s e l e c t e d m o n i t o r i n g i o n , m / z 3 1 7 ( b u t e n a f i n e ) , m / z3 2 4 ( D 7 - b u t e n a f i n e ) .S t a t i s t i c a l a n a l y s i s . T h e p e r c e n t a g e o f n e g a t i v e c u l t u r e sw a s a n a l y z e d b y t h e x 2 t e s t . P v a l u e s o f l e s s t h a n 0 . 0 5 w e r er e g a r d e d a s s i g n i f i c a n t .RESULTS

I n v i t r o f u n g i s t a t i c a n d f u n g i c i d a l a c t i v i t i e s . T h e f u n g i s t a t i c( M I C ) a n d f u n g i c i d a l ( M F C ) a c t i v i t i e s o f b u t e n a f i n e a g a i n s tT . m e n t a g r o p h y t e s KD-04 a n d M. c a n i s K D - 3 0 5 w e r e c o m -p a r e d w i t h t h o s e o f t h e r e f e r e n c e d r u g s . MICs a n d MFCs o fb u t e n a f i n e f o r t h e t w o d e r m a t o p h y t e s t r a i n s w e r e i n t h er a n g e o f 0 . 0 1 2 t o 0 . 0 2 5 a n d 0 . 0 1 2 t o 0 . 0 5 , u g / m l , r e s p e c t i v e l y( T a b l e 1 ) , s h o w i n g t h a t b u t e n a f i n e e x h i b i t s p o t e n t f u n g i c i d a la c t i v i t y . T h e a n t i d e r m a t o p h y t e a c t i v i t y o f b u t e n a f i n e i n v i t r ow a s 4 t i m e s g r e a t e r t h a n t h a t o f n a f t i f i n e a n d 8 t o 1 2 8 t i m e sg r e a t e r t h a n t h o s e o f t h e o t h e r r e f e r e n c e d r u g s .T h e r a p e u t i c e f f i c a c y a g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n . I nt h e f i r s t e x p e r i m e n t , o n c e d a i l y t o p i c a l t r e a t m e n t w i t h 0 . 0 1 ,0 . 1 , a n d 1 . 0 s o l u t i o n s o f b u t e n a f i n e a n d t h e r e f e r e n c e d r u g sw a s s t a r t e d o n d a y 2 p o s t i n f e c t i o n a n d w a s c o n t i n u e d f o r 1 0d a y s . A s s h o w n i n T a b l e 2 ( e x p e r i m e n t 1 ) , 1 . 0 s o l u t i o n s o fb u t e n a f i n e , n a f t i f i n e , a n d t o l n a f t a t e w e r e s a t i s f a c t o r i l y e f f e c -t i v e , w i t h c o m p l e t e e r a d i c a t i o n o f f u n g i f r o m t h e f o c u s , w h i l et h e n e g a t i v e c u l t u r e r a t e o b t a i n e d w i t h a 1 . 0 s o l u t i o n o fc l o t r i m a z o l e was o n l y 2 8 . T h e n e g a t i v e r a t e s w i t h 0 . 1 a n d0 . 0 1 s o l u t i o n s o f b u t e n a f i n e w e r e 9 4 a n d 6 0 , r e s p e c -t i v e l y . C o m p a r a b l e c o n c e n t r a t i o n s o f n a f t i f i n e a n d t o i n a f t a t ew e r e l e s s e f f e c t i v e . I n a n o t h e r s t u d y , t h e a n i m a l s w e r et r e a t e d f o r 4 c o n s e c u t i v e d a y s . As s h o w n i n T a b l e 2 ( e x p e r -i m e n t 2 ) , t r e a t m e n t w i t h a 1 s o l u t i o n o f b u t e n a f i n e c o m -p l e t e l y c u r e d t h e T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n , w h i l e t h e

r a t e s o f c u r e w i t h n a f t i f i n e a n d t o l n a f t a t e w e r e 8 2 a n d 6 4 ,r e s p e c t i v e l y .I n t h e n ex t e x p e r i m e n t , o n c e d a i l y t r e a t m e n t w a s s t a r t e do n d a y 3 o r 4 a f t e r i n f e c t i o n a n d was c o n t i n u e d f o r 4 o r 1 0d a y s . B u t e n a f i n e was a g a i n e f f e c t i v e a g a i n s t t h e e x p e r i m e n -t a l T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n , a l t h o u g h 1 0 d a y s was n e c -e s s a r y t o e r a d i c a t e f u n g i f r o m t h e s k i n l e s i o n s ( T a b l e 3 ) .T h e t h i r d e x p e r i m e n t was p e r f o r m e d t o c o m p a r e t h et h e r a p e u t i c e f f i c a c i e s o f t h e t w o d i f f e r e n t b u t e n a f i n e t r e a t -m e n t r e g i m e n s . O n c e o r t w i c e d a i l y t r e a t m e n t w i t h 0 . 1 2 5 ,0 . 2 5 , 0 . 5 , a n d 1 . 0 s o l u t i o n s o f b u t e n a f i n e was s t a r t e d ond a y 4 p o s t i n f e c t i o n a n d was c o n t i n u e d f o r 1 0 d a y s . T h et h e r a p e u t i c e f f i c a c y o f t w i c e d a i l y t r e a t m e n t w i t h a 0 . 1 2 5 o r

V O L . 3 4 , 1 9 9 0


3/4

A N T I M I C R O B . AGENTS CHEMOTHER.

T A BL E 2 . T h e r a p e u t i c e f f i c a c i e s o f b u t e n a f i n e , n a f t i f i n e ,t o l n a f t a t e , a n d c l o t r i m a z o l e s o l u t i o n s a g a i n s tT . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n b y o n c e d a i l ya p p l i c a t i o n f o r 4 o r 1 0 d a y s s t a r t i n go n d a y 2 a f t e r i n f e c t i o nD u r a t i o n o f N o . ( ) o f s k i n s e c t i o n sE x p t m n o t r e a t m e n t w i t h n e g a t i v e c u l t u r e st r e a t m e n t ( d a y s ) ( n = 5 0 )

E x p t 10 . 0 1 B u t e n a f i n e 1 0 3 0 ( 6 0 )0 . 1 B u t e n a f i n e 1 0 4 7 ( 9 4 )1 . 0 B u t e n a f i n e 1 0 5 0 ( 1 0 0 ) a0 . 0 1 N a f t i f i n e 1 0 2 ( 4 ) a . b0 . 1 N a f t i f i n e 1 0 2 9 ( 5 8 ) b1 . 0 N a f t i f i n e 1 0 5 0 ( 1 0 0 ) a0 . 0 1 T o l n a f t a t e 1 0 5 ( 1 0 ) a b0 . 1 T o l n a f t a t e 1 0 2 0 ( 4 0 ) b1 . 0 T o l n a f t a t e 1 0 5 0 ( 1 0 0 ) a1 . 0 C l o t r i m a z o l e 1 0 1 4 ( 2 8 ) b . cP l a c e b o ( P E G - e t h a n o l ) 1 0 0 ( 0 )P l a c e b o ( P E G - a c e t o n e ) 1 0 0 ( 0 )No ne 0 ( 0 )E x p t 2

1 B u t e n a f i n e 4 5 0 ( 1 0 0 )1 N a f t i f i n e 4 4 1 ( 8 2 ) d1 T o l n a f t a t e 4 3 2 ( 6 4 ) eNo ne 0 ( 0 )P < 0 . 00 1 v er s u s t h e 0 . 0 1 b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .b p < 0 . 0 0 1 v e r s u s t h e 0 . 1 % b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .C P < 0 . 0 1 v e r s u s t h e 0 . 0 1 b u t e n a f i n e t r ea t me nt g r o up .d p < 0 . 0 1 v e r s u s t h e 1 . 0 % b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .e p < 0 . 0 0 1 v e r s u s t h e 1 b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .

0 . 2 5 s o l u t i o n was b e t t e r t h a n t h a t o f o n c e d a i l y t r e a t m e n t .H o w e v e r , o n c e d a i l y t r e a t m e n t s w i t h 0 . 5 a n d 1 s o l u t i o n s o fb u t e n a f i n e were s u f f i c i e n t l y e f f e c t i v e ( T a b l e 4 ) .T h e r a p e u t i c e f f i c a c y a g a i n s t M. c a n i s i n f e c t i o n . Once d a i l yt o p i c a l t r e a t m e n t w i t h a 0 . 1 o r 1 . 0 s o l u t i o n o f b u t e n a f i n ea n d t h e r e f e r e n c e d r u g s was s t a r t e d on d a y 2 or 4 p o s t i n f e c -t i o n a n d was c o n t i n u e d f o r 1 0 d a y s . B u t e n a f i n e , n a f t i f i n e ,a n d t o l n a f t a t e showed a l m o s t t h e same a c t i v i t y a g a i n s t M.c a n i s i n f e c t i o n s as t h e y d i d a g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s

T AB L E 3 . T h e r a p e u t i c e f f i c a c i e s o f b u t e n a f i n e a n d n a f t i f i n es o l u t i o n s a g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n b y o n c e d a i l ya p p l i c a t i o n f o r 4 o r 1 0 d a y s s t a r t i n g on d a y 3 o r 4 a f t e r i n f e c t i o nreatmentr e a t m e n t p e r i o d No ( ) o f skin sectionsTTreatment at m with negative cultures~ ~ ~ ~ n 50 )

1 B u t e n a f i n e 3 - 6 3 9 ( 7 8 ) a1 N a f t i f i n e 3 - 6 8 ( 1 6 )N o ne 0 ( 0 )1 B u t e n a f i n e 3 - 1 2 5 0 ( 1 0 0 )1 N a f t i f i n e 3 - 1 2 4 5 ( 9 0 )N o n e 0 ( 0 )1 B u t e n a f i n e 4 - 7 1 9 ( 3 8 ) b1 N a f t i f i n e 4 - 7 8 ( 1 6 )N one 0 ( 0 )1 B u t e n a f i n e 4 - 1 3 5 0 ( 1 0 0 ) a1 N a f t i f i n e 4 - 1 3 2 6 ( 5 2 )N one 0 ( 0 )p< 0 . 0 0 1 versus t h e n a f t i f i n e t r e a t m e n t group.b p o . 0 5 .

T ABLE 4 . T h e r a p e u t i c e f f i c a c y o f b u t e n a f i n e s o l u t i o n a g a i n s tT . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n b y o n c e o r t w i c e d a i l ya p p l i c a t i o n f o r 1 0 d a y s s t a r t i n g o n d a y 4 a f t e r i n f e c t i o nN o . ( ) o f s k i n s e c t i o n sT r e a t m e n t w i t h n e g a t i v e c u l t u r e s( n = 5 0 )

0 . 1 2 5 B u t e n a f i n eOnce d a i l y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 5 ( 5 0 )T w i c e d a i l y . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . 3 6 ( 7 2 ) a0 . 2 5 B u t e n a f i n eO n c e d a i l y .................................. 3 0 ( 6 0 )T w i c e d a i l y .................................. 4 0 ( 8 0 ) a0 . 5 B u t e n a f i n eO n c e d a i l y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 8 ( 9 6 )T w i c e d a i l y . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . 5 0 ( 1 0 0 ) b1 . 0 B u t e n a f i n eO n c e d a i l y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 0 ( 1 0 0 )T w i c e d a i l y . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 0 ( 1 0 0 ) bN one . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0 ( 0 )

I P < 0 . 0 5 v e r s u s t h e o n c e d a i l y t r e a t m e n t g r o u p .b N o t s i g n i f i c a n t v e r s u s t h e o n c e d a i l y t r e a t m e n t g r o u p .i n f e c t i o n s ( T a b l e 5 ) . C l o t r i m a z o l e , w h i c h was t h e l e a s tp o t e n t a g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n , a g a i n h a d a c t i v -i t y l o w e r t h a n t h o s e o f t h e o t h e r d r u g s i n t h i s m o d e l .P r o p h y l a c t i c e f f e c t s o f b u t e n a f i n e a n d b i f o n a z o l e . G u i n e ap i g s w e r e p r e t r e a t e d w i t h 0 . 2 m l o f 1 s o l u t i o n s o f t h e d r u g sa t 2 4 , 4 8 , o r 7 2 h b e f o r e T . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n .L e s i o n s i n t h e u n t r e a t e d g r o u p w e r e t h e m o s t i n t e n s e ( s c o r e4 + ) o n d a y 1 2 ( F i g . 1 ) . I n t h e g r o u p t h a t was p r e t r e a t e d w i t hb i f o n a z o l e 2 4 h b e f o r e i n f e c t i o n , l e s i o n s d e v e l o p e d i n f o u r o ff i v e a ni m al s o n d a y 1 7 a f t e r i n f e c t i o n . When a 1 s o l u t i o n o fb u t e n a f i n e was a p p l i e d o n c e a t 2 4 o r 4 8 h b e f o r e i n f e c t i o n , n ol e s i o n d e v e l o p e d , a n d m y c o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f t h e l e -s i o n s p e r f o r m e d o n d a y 1 7 a f t e r i n f e c t i o n i n d i c a t e d n o v i a b l e

TABLE 5 . T h e r a p e u t i c e f f i c a c i e s o f b u t e n a f i n e , n a f t i f i n e ,t o l n a f t a t e , a n d c l o t r i m a z o l e s o l u t i o n s a g a i n s t M. c a n i si n f e c t i o n b y o n c e d a i l y a p p l i c a t i o n f o r 1 0 d a y ss t a r t i n g f r o m d a y 2 o r 4 a f t e r i n f e c t i o nT r e a t m e n t N o . ( % ) o f s k i n s e c t i o n sT r e a t m e n t rawith n e g a t i v e c u l t u r e speriodd a y s ) ( n = 5 0 )

0 . 1 B u t e n a f i n e 2 - 1 1 4 7 ( 9 4 )1 . 0 B u t e n a f i n e 2 - 1 1 5 0 ( 1 0 0 )0 . 1 N a f t i f i n e 2 - 1 1 2 1 ( 4 2 ) a . b1 . 0 N a f t i f i n e 2 - 1 1 5 0 ( 1 0 0 )0 . 1 T o l n a f t a t e 2 - 1 1 8 ( 1 6 ) a . b1 . 0 T o l n a f t a t e 2 - 1 1 4 2 ( 8 4 ) '1 . 0 C l o t r i m a z o l e 2 - 1 1 3 0 ( 6 0 ) a . bP l a c e b o ( P E G - e t h a n o l ) 2 - 1 1 0 ( 0 )P l a c e b o ( P E G - e t h a n o l ) 2 - 1 1 0 ( 0 )N one 0 ( 0 )1 . 0 B u t e n a f i n e 4 - 1 3 4 9 ( 9 8 )1 . 0 N a f t i f i n e 4 - 1 3 3 9 ( 7 8 ) d1 . 0 T o l n a f t a t e 4 - 1 3 2 4 ( 4 8 ) eN one 0 ( 0 )

P < 0 . 0 0 1 v e r s u s t h e 0 . 1 b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .b p < 0 . 0 0 1 v e r s u s t h e 1 . 0 % b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .C P < 0 . 0 1 v e r s u s t h e 1 . 0 % b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .d p < 0 . 0 1 v e r s u s t h e 1 . 0 % b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .IP 0 . 0 0 1 v e r s u s t h e 1 . 0 b u t e n a f i n e t r e a t m e n t g r o u p .

2 2 5 2 ARIKA E T A L .


4/4

E F F E C T S OF BUT E N A F I N E ON D ER M A T OPHY T O SI S 2 2 5 34

'3 )wU nu z

U

3

2

O 1 ~ z I1 3 5 7 9 11 13 15 17

Days after infectionF I G . 1 . P r o p h y l a c t i c e f f e c t s o f b u t e n a f i n e a n d b i f o n a z o l e a g a i n s tT . m e n t a g r o p h y t e s i n f e c t i o n . S y m b o l s : 0 u n t r e a t e d c o n t r o l ; * , 1b i f o n a z o l e ( 2 4 h b e f o r e i n f e c t i o n ) ; A , 1 b u t e n a f i n e ( 7 2 h b e f o r ei n f e c t i o n ) ; O , 1 b u t e n a f i n e ( 4 8 h b e f o r e i n f e c t i o n ) ; x 1 b u t e n -a f i n e ( 2 4 h b e f o r e i n f e c t i o n ) .

f u n g i , w h i l e i n t h e g r o up t h a t was p r e t r e a t e d w i t h a 1s o l u t i o n o f b u t e na fi ne 7 2 h b e f o r e i n f e c t i o n , l e s i o n s d e v e lo p e d i n two o f f i v e a n i m a l s .C o n c e n t r a t i o n s o f b u t e n a f i n e i n t h e s k i n . T h e c o n c e n t r a t i o no f b u t e n a f i n e i n t h e s k i n o f f i v e g u i n e a p i g s was m e a s u r e d a t2 4 , 4 8 , o r 7 2 h a f t e r a p p l i c a t i o n o f 0 . 2 m l ( 2 mg o f b u t e n a f i n e )o f a 1 s o l u t i o n . T h e c o n c e n t r a t i o n ( m e a n s t a n d a r dd e v i a t i o n ) o f b u t e n a f i n e i n t h e s k i n a t 2 4 h was 3 1 . 5 4 . 9, u g / g o f t i s s u e , a n d i t g r a d u a l l y d e c r e a s e d t o 1 8 . 3 6 . 9 , u g / ga t 4 8 h a n d t o 8 . 8 5 . 1 , u g / g a t 7 2 h .

DISCUSSIONB u t e n a f i n e was i n v e s t i g a t e d f o r i t s a c t i v i t y a g a i n s t g u i n e a

p i g d e r m a t o p h y t o s i s i n c o m p a r i s o n w i t h t h e a c t i v i t i e s o fn a f t i f i n e , t o l n a f t a t e , c l o t r i m a z o l e , a n d b i f o n a z o l e .B e c a u s e t h e e x p e r i m e n t a l d e r m a t o p h y t o s i s p r o d u c e d i nt h e d o r s a l s k i n o f g u i n e a p i g s causes K e r i o n C e l s i - l i k el e s i o n s a t a d v a n c e d s t a g e s o f i n f e c t i o n , t o p i c a l t r e a t m e n t o ft h e d r u g s was s t a r t e d o n d a y 2 , 3 , o r 4 p o s t i n f e c t i o n , whenl e s i o n s were b a r e l y d e t e c t a b l e . B u t e n a f i n e e x h i b i t e d e x c e l -l e n t t h e r a p e u t i c e f f i c a c y a g a i n s t T . m e n t a g r o p h y t e s a n d M.c a n i s i n f e c t i o n s when a p p l i e d o n c e d a i l y f o r 1 0 d a y s ; i t se f f e c t was s i g n i f i c a n t l y s u p e r i o r t o t h o s e o f n a f t i f i n e , t o l n a f -t a t e , a n d c l o t r i m a z o l e ( T a b l e s 2 , 3 , a n d 5 ) . U n l i k e b u t e n -a f i n e , c l o t r i m a z o l e was a c t i v e a g a i n s t M. c a n i s i n f e c t i o n( 6 0 cure r a t e ) b u t was l e s s a c t i v e a g a i n s t T . mentagro-p h y t e s i n f e c t i o n ( 2 8 cure r a t e ) ( T a b l e s 2 a n d 5 ) . Asr e p o r t e d e l s e w h e r e ( 4 , 5 ) , t h e e f f i c a c y o f i m i d a z o l e a n t i f u n g a la g e n t s s u c h as e c o n a z o l e a g a i n s t e x p e r i m e n t a l d e r m a t o p h y -t o s i s i s d e p e n d e n t on t h e s t r a i n o f T . m en t a g r o p h y t e s u s e df o r c h a l l e n g e . T h e MICs o f c l o t r i m a z o l e a g a i n s t T . menta-g r o p h y t e s a n d M. c a n i s were 0 . 3 9 a n d 0 . 7 8 g / m l , respec-t i v e l y , i n t h e p r e s e n t s t u d y ( T a b l e 1 ) . T h e d i f f e r e n c e i n t h ee f f i c a c y o f c l o t r i m a z o l e b e t w e e n T . m e n t a g r o p h y t e s a n d M.c a n i s i n f e c t i o n s m i g h t b e a s s o c i a t e d w i t h t h e v i r u l e nc e o f t h ef u n g i o r o t h e r p a t h o g e n i c f a c t o r s .As r e p o r t e d b y P l e m p e l e t a l . ( 6 ) , when b i f o n a z o l e i st o p i c a l l y a p p l i e d b e f o r e i n f e c t i o n w i t h T . m e n t a g r o p h y t e s , i t

s h o w s a p r o p h y l a c t i c e f f e c t a g a i n s t t h e i n f e c t i o n . T h e ys u g g e s t e d t h a t t h i s e f f e c t m i g h t b e a t t r i b u t a b l e t o t h e l o n gc u t a n e o u s r e t e n t i o n o f t h e d r u g a f t e r t o p i c a l a p p l i c a t i o n .B u t e n a f i n e e x e r t e d e x c e l l e n t p r o p h y l a c t i c e f f i c a c y whena p p l i e d e v e n a t 4 8 h b e f o r e i n f e c t i o n ( F i g . 1 ) . On t h e o t h e rh a n d , t h e c o n c e n t r a t i o n o f b u t en af i n e i n t h e s k i n a t 2 4 , 4 8 ,a n d 7 2 h a f t e r a p p l i c a t i o n o f 0 . 2 m l o f a 1 s o l u t i o n wass e v e r a l h u n d r e d t i m e s h i g h e r t h a n t h e MFCs a g a i n s t T .m e n t a g r o p h y t e s a n d M. c a n i s ( T a b l e 1 ) . D e s p i t e t h e h i g hc o n c e n t r a t i o n o f b u t e n a f i n e i n t h e s k i n , l e s i o n s d e v e l o p e d i nt h e g r o u p t h a t w a s p r e t r e a t e d w i t h b u t e n a f i n e 7 2 h b e f o r ei n f e c t i o n ( F i g . 1 ) . T a k a h a s h i e t a l . ( 1 1 ) r e p o r t e d t h a t manya n t i f u n g a l a g e n t s m i g h t h a v e r e d u c e d p o t e n c i e s when t h e ya r e b o u n d t o h o r n y m a t e r i a l s i n t h e e p i d e r m i s . F u r t h e rp h a r m a c o k i n e t i c s t u d i e s a r e n e e d e d t o e l u c i d a t e w h e t h e r t h ep o t e n c y o f b u t e n a f i n e d e c r e a s e s i n t h e h o r n y l a y e r .From t h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y , i t a p p e a r s t h a t t h e e f f i c a c yo f b u t e n a f i n e may b e d u e t o i t s f u n g i c i d a l a c t i v i t y a n d l o n gc u t a n e o u s r e t e n t i o n a f t e r t o p i c a l a p p l i c a t i o n a n d t h a t o n c ed a i l y a p p l i c a t i o n o f b u t e na fi n e m ay h a v e p o t e n t i a l f o r t h et r e a t m e n t o f d e r m a t o p h y t o s i s i n h u m a n s .LITERATURE CITED

1 . G e o r g o p o u l o s , A . , G . P e t r a n y i , H . M i e t h , a n d J . D r e w s . 1 9 8 1 . I nv i t r o a c t i v i t y o f n a f t i f i n e , a new a n t i f u n g a l a g e n t . A n t i m i c r o b .A g e n t s C h e m o t h e r . 1 9 : 3 8 6 - 3 8 9 .2 . M o r i t a , T . , a n d Y . N o z a w a . 1 9 8 5 . E f f e c t s o f a n t i f u n g a l a g e n t s o ne r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n C a n d i d a a l b i c a n s a n d T r i c h o p h y t o nm e n t a g r o p h y t e s : d i f f e r e n t i a l i n h i b i t o r y s i t e o f n a p h t h i o m a t e a n dm i c o n a z o l e . J . I n v e s t . D e r m a t o l . 8 5 : 4 3 4 - 4 3 7 .3 . P a l t a u f , F . , G . Daum, G . Z u d e r , G . H o g e n a u e r , G . S c h u l z , a n dG . S e i d l . 1 9 8 2 . S q u a l e n e a n d e r g o s t e r o l b i o s y n t h e s i s i n f u n g it r e a t e d w i t h n a f t i f i n e , a new a n t i m y c o t i c a g e n t . B i o c h i m .B i o p h y s . A c t a 7 1 2 : 2 6 8 - 2 7 3 .4 . P e t r a n y i , G . , A . G e o r g o p o u l o s , a n d H . M i e t h . 1 9 8 1 . I n v i v oa n t i m y c o t i c a c t i v i t y o f n a f t i f i n e . A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o -t h e r . 1 9 : 3 9 0 - 3 9 2 .5 . P e t r a n y i , G . , J . G . M e i n g a s s n e r , a n d H . M i e t h . 1 9 8 7 . A c t i v i t y o ft e r b i n a f i n e i n e x p e r i m e n t a l f u n g a l i n f e c t i o n s o f l a b o r a t o r y a n i -m a l s . A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r . 3 1 : 1 5 5 8 - 1 5 6 1 .6 . P l e m p e l , M . , E . R e g a l , a n d H . B u c h e l . 1 9 8 3 . A n t i m y c o t i ce f f i c a c y o f b i f o n a z o l e i n v i t r o a n d i n v i v o . A r z n e i m . F o r s c h .D r u g R es . 3 3 : 5 1 7 - 5 2 4 .7 . R y d e r , N . S . , a n d M. C . D u p o n t . 1 9 8 5 . I n h i b i t i o n o f s q u a l e n ee p o x i d a s e b y a l l y l a m i n e a n t i m y c o t i c c o m p o u n d s . B i o c h e m . J .2 3 0 : 7 6 5 - 7 7 0 .8 . R y d e r , N . S . , I . F r a n k , a n d M. C . D u p o n t . 1 9 8 6 . E r g o s t e r o lb i o s y n t h e s i s i n h i b i t i o n b y t h e t h i o c a r b a m a t e a n t i f u n g a l a g e n t st o l n a f t a t e a n d t o l c i c l a t e . A n t i m i c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r . 2 9 :8 5 8 - 8 6 0 .9 . R y d e r , N . S . , G . S e i d l , a n d P . F . T r o k e . 1 9 8 4 . E f f e c t o f t h ea n t i m y c o t i c d r u g n a f t i f i n e o n g r o w t h o f a n d s t e r o l b i o s y n t h e s i si n C a n d i d a a l b i c a n s . A n t i m i c r o b . A g en t s C h em o t h e r . 2 5 : 4 8 3 -4 8 7 .1 0 . S a k a i , S . , T . K a d a , G . S a i t o , N . M u r a o k a , a n d Y . T a k a h a s h i .1 9 5 2 . S t u d i e s o n c h e m o t h e r a p y o f T r i c h o p h y t o n i n f e c t i o n . 1 .A n t i f u n g a l p r o p e r t i e s o f h a l og e n p h e n ol e s t e r s . J . S c i . R e s . I n s t .4 6 : 1 1 3 - 1 1 7 .1 1 . T ak ah a sh i , H . , A . H a s e g a w a , 0 . K a n e k o , A . S a i t o , a n d Y .T a n a k a . 1 9 8 6 . C l i n i c a l s t u d i e s o f f u n g i c i d a l a g e n t s w i t h r e s p e c tt o t h e i r r e l a t i o n s h i p s i n v i t r o a n d i n v i v o , p . 2 2 7 - 2 4 0 . I n K . I w a t aa n d H . V a n d e n B o s s c h e ( e d . ) , I n v i t r o a n d i n v i v o e v al u a t i o n o fa n t i f u n g a l a g e n t s . E l s e v i e r S c i e n c e P u b l i s h e r s , A m s t e r d a m .1 2 . W e i n s t e i n , M. J . , E . M. O d e n , a n d E . M o s s . 1 9 6 5 . A n t i f u n g a lp r o p e r t i e s o f t o l n a f t a t e i n v i t r o a n d i n v i v o , p . 5 9 5 - 6 0 1 . A n t i m i -c r o b . A g e n t s C h e m o t h e r . 1 9 6 4 .

VOL. 3 4 , 1 9 9 0

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