PENGANTAR PRAKTIKUMTEKNIK PEMISAHAN PROTEIN

AndrianiDept. Biokimia dan Biologi Molekuler

FK UNTAN

PROTEIN

- Molekul organik terbanyak dalam sel- Struktur fungsional- Merupakan heteropolimer asam amino- Terikat dengan ikatan peptida

• Sifat protein dapat membentuk koloid • Pengaruh mantel air • Mantel air dihilangkan → protein mengendap • Penghilang mantel air : Garam konsentrasi tinggiEtanol absolut

• Pemberian pereaksi2 tertentu seperti alkaloid dan logam berat juga dapat mengendapkan protein

• Pada kondisi pI protein akan larut• Pemisahan protein juga dapat menggunakan

muatan listrik (elektroforesis) atau juga dengan teknik kromatografi (pemisahan berdasarkan muatan, berat molekul, afinitas)

I. PENGENDAPAN PROTEIN DENGAN LARUTAN GARAM KONSENTRASI TINGGI (SALTING OUT)

• TUJUAN : mengetahui bahwa protein dapat diendapkan dengan garam konsentrasi tinggi

• DASAR TEORI : garam konsentrasi tinggi menyebabkan protein mengendap karena ditariknya mantel air. Dalam serum darah globulin akan mengendap pada garam konsentrasi setengah jenuh sedangkan albumin akan mengendap pada garam konsentrasi jenuh

CARA KERJA • Kepada 25mL serum di dalam gelas kimia ditambahkan kristal

amonium sulfat, sedikit demi sedikit sampai 50% jenuh dengan amonium sulfat. Globulin akan mengendap pada konsentrasi amonium sulfat 50% jenuh. Pisahkan presipitat globulin dengan menyaring dengan kertas saring. Ambil sedikit presipitat globulin, larutkan di dalam NaCl encer dan lakukan uji biuret. Catat hasilnya.

• Kepada supernatan atau filtrat, tambahkan lagi kristal amonium sulfat sehingga menjadi 100% jenuh. Pisahkan presipitat albumin dengan memusing atau menyaring. Ambil sedikit presipitat albumin, larutkan dalam NaCl encer dan lakukan uji biuret. Catat hasilnya.

• Lakukan uji biuret terhadap filtrat amonium sulfat 100%.

Uji Biuret

• Masukkan 2 mL larutan protein ke dalam tabung reaksi

• Tambahkan 2 mL larutan NaOH 10%, kocok• Tambahkan larutan CuSO4 0,1% 2-3 tetes,

kocok• Uji positif bila tampak warna merah

lembayung

TABEL HASILNO TABUNG UJI BIURET (WARNA)

1 SERUM

2 PRESIPITAT 50%

3 FILTRAT 50%

4 PRESIPITAT 100%

5 FILTRAT 100%

II. PEMISAHAN PROTEIN DENGAN ETANOL ABSOLUT

• TUJUAN : protein yang terlarut dapat diendapkan dengan menambahkan etanol absolut

• DASAR TEORI : etanol absolut bersifat higroskopis, dapat menarik mantel air yang menyelubungi protein, sehingga protein mengendap

TABUNG 1 2

Serum 2 mL -

Larutan albumin telur - 2 mL

Etanol absolut 2 mL 2 mL

Endapan : ada/tidak ada

Pisahka endapan dengan menyaringUji Biuret terhadap -Filtrat- Endapan

III. PENGENDAPAN PROTEIN PADA TITIK ISOELEKTRIK (demo)

• TUJUAN : mengetahui bahwa kelarutan protein sangat dipengaruhi oleh pH lingkungan

• DASAR TEORI : pada pH tertentu, muatan positif suatu protein tepat sama dengan muatan negatif sehingga muatan keseluruhan menjadi nol → pI

TABUNG 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Na Asetat 0,1 M (mL)

1 1 2 3 5 6 8 9 15

Asam Asetat 0,1 M (mL)

15 9 8 6 5 3 2 1 1

pH 3,0 3,8 4,1 4,4 4,7 5,0 5,3 5,6 6,5

Larutan kasein (tetes)

3 3 3 3 3 3 3 3 3

kekeruhan

SELAMAT BEKERJA