Post on 06-Jul-2018
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
1/40
Spektroskopi Serapan
-Pereaksi Geser
Angelina Wening
Ayu Intansari
Didit Darmawan
Josy Kurnia W
Karina Indra Dewi
I Gusti Ngurah Raka
Intan Arafah
Izzatu Rizqiyah
RR Aprilla Wulan
Riana Maya
Shinta Marlin
Tryas Yanuari
FITOKIMIA II 2015Kelompok 2
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
2/40
PendahuluanIntan Arafah
1206230454
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
3/40
PendahuluanBeberapa cara untuk menganalisis flavonoid antara lain:
- Spektroskopi NMR
- Spektroskopi Massa
- Spektroskopi IR
- Spektroskopi Serapan UV-Vis
- Spektroskopi sirkular dikroisme
- Kristalografi X-ray
Pada presentasi ini akan dijelaskan dengan cara
Spektroskopi serapan UV-Vis
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
4/40
Spektrum Umum• Spektrum flavonoid biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarutmetanol atau etanol. Spektrum khas flavonoid terdiri atas dua maksimalpada rentang 230-295 nm (pita II)dan 300-560 nm (pita I).
• Senyawa hasil isolasi dilarutkan dalam metanol (Biasa digunakan pelarutmetanol atau etanol, tetapi spektrum yang dihasilkan dalam etanol kurangbaik), kemudian diidentifikasi menggunakan spektroskopi UV.Pengamatan dilakukan pada panjang gelombang 200-800 nm
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
5/40
Rentang Spektrum UV-Vis Flavon
Andersen, Øyvind M.; Kenneth R. Markham. 2006. Flavonoids Che Biochemistry, and Applications. Boca Raton: CRC Press.
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
6/40
Bentuk daerah spektrum flavonoid padaSpektrofotometri UV-Tampak
ejournal.unp.ac.id/students/index.php/fis/article/download56/513 analisis flavonoid uv
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
7/40
Pergeseran Pita pad
Flavon dan FlavonolDidit Darmawan1206211064
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
8/40
Flavon & Flavonol
a. Flavonb. Flavonol
Perbedaan pada peak I
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
9/40
1. Perubahan substitusi cincin A serapapita II
Perubahan substitusi cincin B & C
serapan pita I
2. Oksigenasi tambahan (terutamhiroksilasi! pergeseran pita "an
sesuai ke pan#ang gelombang "ang leb
C
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
10/40
3.Metilasi atau glikolisasi (terutama 3, 5, 7,dan 4’-OH) pergeseran pita ke panjanggelombang lebih rendah
4.Asetilasi cenderung menghilangkanpengaruh gugus hidroksil fenol terhadapspektrum
5.Asam sinamat sebagai asil pada flavonoid dideteksi pada pita serapan kira-kira 320 nm
6.Pada flavon dan flavonol, sistem 3’, 4’-di OH puncak kedua pada pita kedua (kadangberupa bahu)
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
11/40
Pereaksi GeserShinta Marlin1206240000
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
12/40
Pereaksi Geser Pereaksi yang menyebabkan pergeseran puncak pita serapan yang
terjadi
Berguna untuk menentukan kedudukan gugus hidroksil fenol bebas pada
inti flavonoid
Secara tidak langsung juga dapat menentukan kedudukan gula atau metilyang terikat pada salah satu gugus hidroksil fenol
Jenis pereaksi geser: NaOMe, NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
13/40
Pereaksi Geser
Membuat Pereaksi Geser
•Kira‐kira 2,5 g logam natrium (ditimbangdalam keadaan terendam dalam eter minyakbumi/heksana di dalam gelas piala) dipotongkecil‐kecil dan ditambahkan ke dalam 100 mmetanol. Larutan yang diperoleh harusdisimpan di dalam botol kaca bertutupplastik.
Natriummetoksida(NaOMe)
• Digunakan serbuk NaOAc AR anhidrat.Pelumeran NaOAc untuk menghilangkanHOAc sisa biasanya tidak dilakukan.
Natrium asetat(NaOAc)
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
14/40
• Kira‐kira 5 g AlCl3 segar dan keringditambahkan dengan hati-hati kedalam 100 mL metanol AR. Simpandalam botol plastik bertutup.
Alumunium klorida
(AlCl 3 )
• 50 mL HCl pekatditambahkan ke dalam 100mL aquadest.
Asamhidroklorida(HCl)
• Digunakan serbuk asamborat anhidrat AR.
Asam borat(H 3 BO 3 )
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
15/40
Tahapan Kerja
Pereaksi Geser Angelina Wening W.1206224224
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
16/40
Pereaksi Geser
Tahapan Kerja
6 tetes pereaksi AlCl3, ditambahkan ke dalam larutan flavonoid, campur, laukur spektrum ‘AlCl3’. Selanjutnya ditambahkan 3 tetes HCl, campur, lalu u
spektrum ‘AlCl3/HCl’. Akhirnya cuplikan dibuang dan cuci kuvet
Setelah itu, tambahkan 3 tetes NaOMe ke dalam kuvet, campur, lalu rekamlspektrum ‘NaOMe’. Untuk memeriksa adanya penguraian, spektrum ‘NaOM
direkam lagi setelah kira‐kira lima menit. Kemudian, buang cuplikan dan kuyang telah dicuci diisi lagi dengan larutan flavonoid persediaan.
Mengukur spektrum cuplikan dalam MeOH (spektum ‘MeOH’)
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
17/40
Cont$
Lalu spektrum ‘NaOAc/ H3BO3’ diukur setelah ditambahkan H3BOdan dicampur (banyaknya H3BO3 kira‐kira setengah dari NaOAc)
Untuk memeriksa apakah ada penguraian, spektrum ‘NaOAc’ diukuulang setelah kira‐kira 5 menit.
Kemudian, tambahkan serbuk NaOAc ke dalam larutan flavonoid
persediaan dalam kuvet sedemikian rupa sehingga terdapat kira‐ki2mm lapisan NaOAc pada dasar kuvet, kocok, ukur spektrum ‘NaOA
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
18/40
Penafsiran Spektrum
NaOMeKarina Indra Dewi1206260154
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
19/40
Spektrum NaOMe•
Merupakan spektrum flvonoid yang gugus hidroksilfenolnya sampai batas tertentu terionisasi.
• Merupakan petunjuk ‘sidik jari’ pola hidroksilasi dan juga bermanfaat untuk mendeteksi gugus hidroksil yanglebih asam dan tidak tersubtitusi
•
Degradasi atau pengurangan kekuatan spektrumsetelah waktu tertentu merupakan petunjuk baik akanadanya gugus yg peka terhadap basa.
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
20/40
Jenis
flavonoid
Pergeseran yg tampak Petunjuk penafsira
pita 1 pita 2
flavon
flavonol
• Kekuatan
menurun terus
(artinyapenguraian)
• Mantap + 45 -65
nm kekuatan tak
menurun
• Mantap +45-65 nm
kekuatan menurun
•
Pita baru(dibandingkan dgn
MeOH), 320-335
nm
• 3,4’-OH, o-diOH pa
cincin A; pada cinc
OH yang berdampi
• 4’-OH
• 3-OH, tak ada 4’-O
bebas
• 7-OH
Isoflavon Tidak ada pergeseran, tak ada OH pada cinc
Flavanon
Dihidroflav
onol
• Kekuatan menurun
dengan berjalannya
waktu
• o-diOHpada cincin
(penurunan lamba
diOH pada cincin B
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
21/40
• K=kira-kira
Jenis
flavonoid
Pergeseran yg tampak Petunjuk penafsir
pita 1 pita 2
Khalkon
auron
• +80-95 nm
(kekuatan naik)
• +60-70 nm
(kekuatan naik)
• Pegeseran lebih
kecil
• 4’OH (auron)
• 6-OH tanpa oksi
pada 4’(auron)
• 6-OH dengan oks
pada 4’ (auron)
• +60-100nm
(kekuatan naik)• Tanpa kenaikan
kekuatan
• +40 – 50 nm
• 4-OH (Khalkon)
• 2-OH atau 4’-OH
tanpa 4-OH
• 4’-OH (2’-OH atau
juga ada)
Antosianidi
n
Antosianin
Semuainya terurai kecuali 3-deoksiantosianidin • Nihil
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
22/40
Menafsirkan
Spektrum NaOAcRr. Aprilla Wulansari1206247032
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
23/40
Langkah Pertama
Menentukan jenis flavonoid denganmemperhatikan:• Bentuk umum spektrum serapan senyawa dalam MeOH
• Panjang gelombang pita serapan
• Data kromatografi kertas
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
24/40
Langkah Kedua•
Mempertimbangkan arti perubahan spektrumyang disebabkan oleh berbagai pereaksi geser.
• Penafsiran perubahan spektrum dapat dilihatpada tabel berdasarkan jenis flavonoid yangdisertakan untuk setiap pereaksi geser.
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
25/40
Spektrum NaOAc•
Natrium asetat (NaOAc) hanya menyebabkanpengionan yang berarti pada gugus hidroksilflavonoid yang paling asam.
•Digunakan terutama untuk mendeteksi adanyagugus 7-hidroksil bebas (atau yang setara).
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
26/40
Penafsiran Spektrum NaOAc
JenisFlavonoid
Pergeseran yang TampakPetunjukPenafsiranPita I Pita II
Flavon
Flavonol
Isoflavon
+5 sampai 20 nm (berkurang
bila ada oksigenasi pada 6
atau 8)
7-OH
Kekuatan berkurang dengan
bertambahnya waktu
Gugus yang
peka terhadap
basa,
misalnya 6,7
atau 7,8 atau’
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
27/40
Flavanon
Dihidroflavon
ol
+35 nm
+60
7-OH (dengan 5-
OH)
7-OH (tanpa 5-
OH)
Kekuatan
berkurang
dengan
bertambahnya
waktu
Gugus yang peka
terhadap basa,
misalnya 6,7 atau
7,8-diOH
Khalkon
Auron
Pergeseran batokrom pada
panjang gelombang yang
lebih panjang
4’ dan/atau 4-OH
(khalkon)
4’ dan/atau 6-OH
(auron)
Keterangan:
+ (pergeseran batokromik, untuk memperpanjang panjang gelombang)
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
28/40
Pergeseran Spektrum dengan Pereaksi Geser
Natrium Asetat
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
29/40
Spektrum NaOAc-
H3BO3 Riana Maya1206210931
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
30/40
Spektrum NaOAc/H3BO3
Menjembatani kedua gugus hidroksil pada guguso-dihidroksi dan digunakan untuk mendeteksinya
.
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
31/40
Penafsiran Spektrum NaOAc/H3B
Jenis
Flavonoid
Pergeseran yang TampakPetunjuk
PenafsiraPita I Pita II
Flavon
Flavonol
Auron
Khalkon
+12 sampai
36 nm (nisbi
terhadap
spektrumMeOH)
Pergeseran
lebih kecil
O-diOH pad
cincin B
O-diOH pad
cincin A (6
atau 7,8)
Isoflavon+10 sampai
15 nm (nisbi O-diOH pad
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
32/40
Penafsiran Spektrum
AlCl3 dan AlCl3/HCJosy Kurnia Wulandari1206257701
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
33/40
JENIS FLAVONOID
(PEREAKSI)
PERGESERAN YANG TAMPAK PETUNJUK
PENAFSIRAPITA I PITA II
Flavon dan Flavonol
(AlCl3/HCl)
(AlCl3)
+35 sampai 55 nm 5-OH
+17 sampai 20 nm 5-OH dengan
oksigenasi pa
Tak berubah Mungkin 5-O
gugus prenil
+50 sampai 60 Mungkin 3-O
(dengan atauOH)
Pergeseran AlCl3/HCl
tambah 30 sampai 40
nm
o-diOH pada
Pergeseran AlCl3/HCl
tambah 20 sampai
o-diOH pada
(tambahan p
Isoflavon , flavanon dan
dihidroflavonol
+10 sampai 14 nm 5-OH (isofl
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
34/40
dihidroflavonol
(AlCl3/HCl)
(AlCl3)
+20 sampai 26 nm 5-OH
(flavanon,d
)
Pergeseran AlCl3/HCl,
tambah 11 sampai 30nm
o-diOH pa
(6,7 dan 7,
Pergeseran AlCl3/HCl,
tambah 30 nm sampai
38 nm (peka terhadap
NaOAc)
Dihodrofla
5-OH (tam
sembarang
o-diOH)
Auron
Khalkon
(AlCl3/HCl)
+48 sampai 54 nm
+40 nm
2’-OH (kha
2’-OH (kha
oksigenasi
+60 sampai 70 nm 4-OH (aur
Antosianidin +25sampai35nm o-diOH
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
35/40
Antosianidin
Antosianin
(AlCl3)
+25 sampai 35 nm
(pada pH 2-4)
odiOH
Pergeseran lebih esar Banyako
diOH (3-d
antosiani
Spektrum AlCl3 dan AlCl3/HCl karena membentuk kompleks tahan asam antara gudihidroksil, pereaksi ini dapat digunakan untuk mendeteksi kedua gugus tersebut. Jspectrum AlCl3 merupakan penjumlahan pengaruh semua kompleks terhadap spectsedangkan spectrum AlCl3/HCl hanya merupakan pengaruh kompleks hidroksi-ketodicatat bahwa jika etanol yang digunakan sebagai pelarut (bukan methanol), pergesterjadi sangat peka terhadap sesepora air.
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
36/40
Contoh Pengaruh
Pereaksi Geser Ayu Intansari R. Putri1206225201
Izzatu Rizqiah
1206246742
C thM f tP ki
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
37/40
Contoh Manfaat PereaksiGeserNaOMe
%umber 'arkham ). *.. 1+,,. Cara Mengidentifkasi Flavonoid. Banun
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
38/40
Con’d
%umber 'arkham ). *.. 1+,,. Cara Mengidentifkasi Flavonoid. Banun
C thM f tP kiG
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
39/40
Contoh Manfaat Pereaksi GeserNaOAc
%umber 'arkham ). *.. 1+,,. Cara Mengidentifkasi Flavonoid. Banun
8/17/2019 Fitokimia: Analisis Flavonoid dengan Spektroskopi Serapan UV - Pereaksi Geser
40/40
Daftar Pustaka• Markham K R. 1988.Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : Penerbit
ITB.• Andersen, Øyvind M.; Kenneth R. Markham. 2006. Flavonoids Chemistry,Biochemistry, and Applications. Boca Raton: CRC Press.