Spektrofotometri

DR. Harrizul Rivai, M.S.Lektor Kepala Kimia AnalitikFakultas FarmasiUniversitas Andalas28/03/2013

Harrizul Rivai 1

Komponen utama spektrofotometer Sumber energi radiasi yang stabil

Pemilih panjang gelombang yang dapat mengisolasi daerah panjang gelombang tertentu (filter dan monokromator)

Wadah tempat sampel (kuvet)

Detektor radiasi, yang mengubah energi radiasi menjadi signal yang dapat diukur (biasanya signal listrik)

Alat pengolah signal dan readout

28/03/2013 Harrizul Rivai 2Diagram Skematik Spektrofotometer UV-Vis28/03/2013

Harrizul Rivai 3Sumber energi radiasi (sumber cahaya)Sumber Cahaya: memberikan cahaya untuk dilewatkan ke dalam sampel1. Lampu Tungsten: untuk daerah visible (350-900 nm)- based on black body radiation:heat solid filament to glowing, light emitted will be characteristic of temperature more than nature of solid filamentLow pressure (vacuum) Tungsten Filament2. Lampu Deuterium: untuk daerah ultraviolet (190-350 nm)D2 or H2 GasFilament

In presence of arc, some of the electrical energy is absorbed by D2 (or H2) which results in theation of the gas and release of light40V Electric Arc

dissoci

rtz TubeElectrode

D2 + Eelect D*2 D + D + h (light produced)Excited state

28/03/2013

3. Xenon arc lamp is a specialized type of gas discharge lamp, an electric light that produces light by passing electricity through ionized xenon gas at high pressure (wavelength range 200 1100 nm).

Harrizul Rivai 4Pemilih Panjang Gelombangpanjang ak

(visibel)

28/03/2013 Harrizul Rivai 5Monokromator digunakan untuk memilih panjang gelombang di daerah sinar ultraviolet dan sinar tampak.

28/03/2013

Harrizul Rivai 62. Monokromator 28/03/2013 Harrizul Rivai 7Wadah Tempat SampelWadah t l tertentu (b).

- Bentuknya biasanya berupa kuvet bundar atau kotak- Bahan kuvet berpengaruh terhadap panjang gelombang yang dipakai:1. Kaca panjang gelombang sinar tampak2. Kuarsa ultraviolet28/03/2013

Harrizul Rivai 8DetektorPhotomu tors in UV-VIS spectrophotometers, while thermcouples (heat sensors) are used as detectors for infrared (IR) spectrometry. This is the reason UV-VIS instruments are called spectrophotometers while IR instrument are called spectrometers.

28/03/2013 Harrizul Rivai 9Jenis Spectrophotometer1.Single-Beam Instrument: sample and blank are alternatively measured in same sample chamber.

28/03/2013

Harrizul Rivai 10Jenis Spectrophotometer2. Double-Beam Instrument- Continuously compares sample and blank-Automatically corrects for changes in electronic signal or light intensity of source28/03/2013

Harrizul Rivai 11

KALIBRASI INSTRUMEN1. Kalibrasi Skala AbsorbansiKalibrasi skala absorbansi menggunakan kalium bikromat0,006% dalam H2SO4 0,005M, dinyatakan sebagaihubungan antara panjanggelombang tertentu harusterletak pada kisaran E(1%,1cm) atau A(1%, 1 cm)tertentu28/03/2013 Harrizul Rivai 12Tabel 1. Hubungan kalium bikomat dengankisaran nilai E 1%1cm, nm

E 1%1cm235 122,9 - 126,1257 142,4 145,7313 47,0 50,3350 104,9 - 108,228/03/2013 Harrizul Rivai 13

2. Kalibrasi Skala PanjangGelombangMenetapkan panjang gelombang maksimal spesifik dari suatu larutan holmium perklorat 5% b/v. Toleransi untuk kal panjang gelombang adalah 241,15 1 nm;287,15 1; dan 361,5 1nm.28/03/2013 Harrizul Rivai 14

3. Penentuan Resolusi (Daya Pisah)SpektrometerDaya pisah spektrofotometer biasanya dikontrol dengan lebar celah. Dapat diuji dengan menggunakan larutan toluen 0,02% b/v dalam heksan. Farmakope Inggris mensyaratkan bahwa rasio antara absorbansi larutan ini pada panjang gelombang 269 nm terhadap absorbansi pada panjang gelombang 266 nm harus 1,528/03/2013 Harrizul Rivai 154. Penentuan Adanya Sesatan Sinar(Stray Radiation)Sesatan sinar adalah sinar yang sampai ke detektor akan tetapi tidak melewati sampel. Keadaan ini akan memberikan pembacaan absorbansi yang rendah tapi palsu terhadap suatu sampel, karena seolah sampel hanya mengabsorpsi sedikit sinar dari yang seharusnya.Cara kalibrasi dengan mengukur absorbansi larutan KCl 1,2% b/v dalam air terhadap blangko air pada panjang gelombang 200 nm. Jika absorbansi larutan ini kurangdari 2 maka terjadi sesatan sinar danspektrofotometer harus diperbaiki28/03/2013 Harrizul Rivai 16

Sealed Qua

Filter Filter digunakan untuk memilih gelombang di daerah sinar tamp

1.

2. Monokromator

empat sampel biasa disebut kuvet mempunyai teba

ltiplier tubes or photodiodes (light sensors) are used as detec

ibrasi