ISOLASI DNA

Nama : Yudhistira Wharta WahyudiNIM : 105040204111013Kelas : KAsist : Mita

Isolasi DNA adalah pemisahan

DNA untuk mengetahui sifat dari

tanaman untuk rekayasa genetika.

Pengertian

ada 3 tahapan dalam isolasi DNA, yaitu :

1. Perusakan dinding sel

2. Lisis membran sel

3. Presipitasi.

Tahapan

1. Perusakan dinding sel

Perusakan dinding sel ini menggunakan

nitrogen cair yang memiliki suhu -

169˚C. Penggunakan nitrogen cair

dimaksudkan untuk membekukan sel,

setelah sel beku lalu sel dirusak

(digerus) sampai benar benar halus

dengan mortar agar dinding sel rusak.

Perlakuan ini dilakukan engan gesit

sebelum nitorgen cair menguap.

Dokumentasi

2. Lisis Membran Sel

Lisis membran sel yaitu proses untuk

meluruhkan membran sel pada nukleus

dengan larutan deterjen kationik (CTAB).

Penggunakan CTAB berfungsi untuk

mengurangi kontaminan, mengurangi

browning dan untuk menjaga DNA agar tidak

rusak.

3. Pemurnian

Pemurnian yaitu menghilangkan beberapa

kontaminan seperti senyawa sekunder (fenol),

poli sakarida, Rna dan juga protein.

Pemurnian ini merupakan tahapan

paling penting dalam Isolasi DNA. Karena bila ada kontaminan selain DNA maka hasil isolasi DNA yang dilakukan diangap gagal. Kontaminasi ini dapat menurunkan kwalitas DNA hasil isolasi dan mengakibatkan data yang didapat tidak valid.

Dalam pemurnian juga dilakukan kegiatan

Presipitasi. Kegiatan ini yaitu proses

pengumpulan DNA menggunakan isopropanol

dingin.

Alat• Mortar• Mikro

pipet• Pipet• Vortex• Pastle• Stirer• oven

Cara kerja

• Mikrowave• Kamera• Mesin PCR• Lemari es• Ingkubator• Spatula• Erlenmeye

r• Tabung

reaksi

• Mesin UV transluminator

• Timbangan analitik

• Plastik pembungkus

• Tabung Ependorf

Bahan• Daun kakao• Nitrogen cair• CIA• CISA

Cara kerja

Langkah kerja Timbang daun 0.5 gr gerus

(+nitrogen cair dan PVP)

+ buffer CTAB 1 ml + beta mertcaptoethanol 5 µl

Vortek, inkubasi T=650C 30 menit

+ CHISAM/CIA 500µl, vortek

Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit

Ambil supernatan + 1 ml CHISAM

Sentrifuse 8000 rpm, 10 menit

Ambil fase atas + 1 ml isopropanol dingin, inkubasi

freezer 30 menit

Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit

Ambil pelet dan buang supernatannya

+ 200µl buffer pencuci (2x)

Endapan dikeringanginkan

+ 500µl buffer TE (resuspensi DNA) + 1µl RNASE, inkubasi

T=350C, 30 menit

Setelah dingin + ethanol dingin, inkubasi dalam freezer 30 menit

Sentrifuse 6000 rpm, 10 menit

Endapan dikeringanginkan

Resuspensi 200µl buffer TE

Elektroforesis

Metode isolasi Dna yang saya ikuti,

mengikuti alur kerja dari Karsinah.

Mungkin dari buku atau jrnal lain akan

beda alur kerja dan perlakuannya serta

berbeda setiap komoditas yang

digunakan.

TERIMA KASIH