EFEK PEMBERIAN EKSTRAK BIJI JINTAN HITAM (Nigella sativa) TERHADAP KADARGLUT-4 PADA TIKUS WISTAR MODEL DIABETES MELLITUS TIPE 2

Efta Triastuti, M. Farm. Klin., Apt. *, Valentina Yurina, M. Si. *, Marlina Qurratul Aini*

Abstrak

Latar Belakang: Jumlah penderita diabetes melitus tipe 2 (DM2) semakin meningkat dariwaktu ke waktu. Kondisi DM2 ditandai dengan resistensi insulin yang terjadi karenapenurunan kadar GLUT-4 di permukaan sel. Jintan hitam merupakan salah-satu tanamanyang digunakan dalam pengobatan DM2 secara tradisional. Berbagai penelitianmenunjukkan bahwa biji jintan hitam mampu menjaga kadar glukosa darah.Tujuan: Mengetahui efek ekstrak biji jintan hitam terhadap kadar GLUT-4 di jaringan otot.Metode: Desain penelitian yang digunakan adalah true eksperimental, dengan sampel tikuswistar jantan berjumlah 30 ekor. Sampel dibagi kedalam 6 kelompok perlakuan yaitukelompok normal (tanpa induksi DM), kontrol positif (induksi DM, terapi metformin), kontrolnegatif (induksi DM, mendapat aquadest) dan 3 kelompok ekstrak biji jintan hitam dengandosis yang berbeda-beda (induksi DM, terapi jintan hitam dosis 0.024 mg/gBB, 0.048mg/gBB, 0.096 mg/gBB). Induksi DM dilakukan dengan diet tinggi fruktosa selama 6 minggu.Terapi dilakukan setelah induksi DM2, selama 30 hari.Hasil: Tidak ada perbedaan kadar GLUT-4 yang signifikan pada masing-masing kelompokperlakuan (ANOVA, p>0,05) dan tidak terdapat perbedaan rerata glukosa darah yangsignifikan pada tikus wistar sebelum dan sesudah perlakuan (Wilcoxon, Asymp. p>0,05).Perubahan glukosa darah pre dan post treatment ( glukosa darah) tidak berkorelasidengan konsentrasi GLUT-4 pada jaringan otot (Korelasi, p = 0,131).Kesimpulan: Dalam penelitian ini kesimpulan yang didapat adalah tidak ada perbedaanyang signifikan antara kadar GLUT-4 tikus masing-masing kelompok perlakuan, sehinggadosis optimum tidak dapat ditentukan.

Kata kunci: Diabetes melitus tipe 2 (DM2), biji jintan hitam, GLUT-4

AbstractBackground: The prevalence of type 2 diabetes mellitus (DM2) is increasing over time.DM2 is characterized by insulin resistance that occurs because of decreasing GLUT4translocation to cells membran. Black seed is used traditionally to treat DM2, previousstudies shown that black seed able to control blood glucose level.Objective: To examine the effect of black seed extract on GLUT-4 level.Methods: True experimental design was conducted in this reseach, and the subjects were30 male wistar rats that randomly assigned into 6 groups: normal group (without DM2induction), positive control (DM2 induction, treated with metformin), negative control (DM2induction, received aquadest), and three groups were treated with black seed extract indifferent doses (DM2 induction, 0.024 mg/gBB, 0.048 mg/gBB, 0.096 mg/gBB). High dosefructose diet for 6 weeks was used to induce DM2, and the treatment started over 30 daysafter the induction.Results: There was no significant difference between GLUT4 level each group (ANOVA,p>0,05) and there was no significant difference between blood glucose level mean pre andpost treatment (Wilcoxon, Asymp. P>0,05). Blood glucose level alteration ( blood glucose)has very poor correlation with GLUT4 level in muscle tissue (Corelation, p=0,131).Conclusions: This study conclude that the effect of black seed extract on GLUT-4 level wasno significant difference, those optimum dose could not be determined.

Keywords: Type 2 diabetes mellitus (DM2), black seed, GLUT-4*Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya.

PendahuluanPenderita diabetes melitus dari

tahun ke tahun terus yang meningkat.

Berdasarkan data International Diabetes

Federation (IDF) 2012, ditemukan

371.329.100 kasus diabetes di seluruh

dunia dan 7.551.940 kasus terdapat di

Indonesia. Jumlah tersebut menempatkan

Indonesia di urutan ke-7 negara dengan

penderita terbanyak di dunia1. Pada

Diabetes Mellitus tipe 2 terjadi penurunan

jumlah sekresi insulin, dan ketidakpekaan

terhadap reseptor insulin (resistensi

insulin). Resistensi insulin merupakan

suatu kondisi yang berhubungan dengan

kegagalan organ target untuk aktvitas

insulin secara normal2. Resistensi insulin

dapat ditandai dengan penurunan kadar

GLUT-4 di jaringan otot atau jaringan

lemak. GLUT-4 merupakan glukose

transporter yang bertanggung jawab

dalam menginduksi pengangkutan

glukosa oleh insulin ke dalam sel3.

Resistensi insulin menyebabkan

kegagalan pemasukan glukosa ke dalam

sel, menurunnya sintesa glikogen, serta

terjadinya glikogenolisis dan

glukoneogenesis secara berlebihan

sehingga berefek pada peningkatan kadar

glukosa dalam darah4. Sehingga dengan

pengukuran kadar GLUT-4 di jaringan otot

dapat menunjukkan tingkat resistensi

insulin5.

Jintan hitam (Nigella sativa) telah

digunakan secara tradisional di Asia untuk

terapi beberapa penyakit salah satunya

diabetes melitus6,7. Minyak atsiri

thymoquinine bekerja sebagai

antiinflamasi, dimana inflamasi merupakan

salah-satu penyebab terjadinya resistensi

insulin8 sehingga jintan hitam diduga

dapat digunakan sebagai agen

hipoglikemik. Penelitian bertujuan

menganalisa efek pemberian jintan hitam

terhadap kadar GLUT-4, membandingkan

kadar GLUT-4 pada tikus model DM2

yang diterapi dengan jintan hitam dan

metformin, serta menentukan dosis

optimum jintan hitam.

MetodeDesain penelitian. Penelitan ini

menggunakan desain true experimental,

metode yang digunakan adalah posttest-

only controlled design. Sampel berupa 30

ekor tikus wistar jantan dibagi menjadi 6

kelompok perlakuan, yaitu kontrol positif

(metformin), kontrol negatif (aquadest),

kontrol normal (tanpa induksi DM2),

kelompok ekstrak biji jintan hitam dengan

dosis yang berdeda-beda 0.024 mg/gBB,

0.048 mg/gBB, 0.096 mg/gBB.

Ektraksi. Metode ekstraksii dirujukdari jurnal yang ditulis oleh Ali

Benhaddou-Andaloussi8 Serbuk biji jintan

hitam diperoleh dari Balai Materia Medika

Jawa Timur. Sebanyak 400 gram serbuk

biji jitan hitam dimaserasi menggunakan

etanol 80% dengan perbandingan 1:5

selama 24 jam, pengadukan dilakukan

pada 1 jam pertama dengan kecepatan

510 rpm. Remaserasi dilakukan

menggunakan etanol 50% selama 2 jam.

Hasil maserasi diuapkan menggunakan

rotatory evaporator pada suhu 40o C

kecepatan 30 rpm, selanjutnya dioven

pada suhu 37o C hingga terbentuk ekstrak

kental.

Uji Fitokimia. Uji fitokimiadilakukan untuk empat macam zat yang

dimungkinkan ada di biji jintan hitam.

Prosedur uji fitokimia dirujuk dari jurnal

yang ditulis oleh Soerya Dewi Marliana

tahun 20059. Minyak atsiri diuji

menggukan sudan III, hasil positif

ditunjukkan dengan perubahan warna

menjadi merah. Saponin diuji

menggunakan metode Forth atau

pengocokan, hasil positif ditujukkan

dengan terbentuknya busa stabil lebih dari

3 cm. Protein diuji menggunakan nitrit

acid, hasil positif ditunjukkan denga

perubahan warna menjadi kuning. Alkaloid

diuji menggunakan reagen wagner (Iodin

dalam kalium iodida) dan meyer

(Potassium Mercuric Iodide), hasil positif

ditunjukkan dengan terbentuknya endapan

coklat hingga kuning untuk reagen wagner

dan putih untuk reagen meyer.

Induksi DM2. Perlakuan padahewan coba diawali dengan

pengkondisian hewan coba selama 7 hari

di laboratorium Farmakokinetika, Farmasi

FKUN. Induksi DM2 dilakuan

menggunakan diet tingi fruktosa selama 6

minggu10.

Euthanasia. Sebelum dilakukaneuthasia, tikus dianastesi menggunakan

ketamin untuk dilakukan pembedahan di

bagian peritonial. Pembedahan dilakukan

untuk menginjeksikan rapid acting insulin

ke vena porta hepatika, ditunggu selama

120 detik setelah injeksi lalu tikus

dieuthanasia dan diambil jaringan otot.

Isolasi Protein. Jaringan ototdisimpan di suhu -40o C sebelum

dilakukan isolasi protein. Isolasi protein

dilakukan menggunakan buffer lysis

sesuai resep pada tabel 1.

Tabel 1. Resep Buffer Lysis

Bahan Jumlah FungsiTris Base 0,1211 g Mengatur pH antara 7 9 agar protein tidak rusakEDTA 0,0074 g Melindungi protein dari metal ionNaCl 0,8775 Mengendapkan proteinPMSF 0,009 g Protease inhibitor untuk trypsin, chymotrypsin,

thrombin and papain.NP 40 0,125 Non ionic detergenProtease Inhibitor Cocktail(PIC) merk Sigma

50 l Menghambat enzim protease yang menyebabkandenaturasi protein.

Sejumlah 100 mg jaringan otot

ditambahkan buffer lysis sebanyak 1 ml

digerus hingga halus, selanjutnya

disentrifugasi dengan kecepatan

kecepatan 6000 rpm selama 10 menit

pada suhu 4C. Supernatan dipisahkan

untuk dianalisa menggunakan ELISA.

Pengukuran Kadar GLUT-4 OtotMenggunakan ELISA. Penelitian inimenggunakan ELISA kit merk Medicine

kit. Larutan standar terdiri dari GLUT-4

dengan konsentrasi 48 g/mL, 24 g/mL,

12 g/mL, 6 g/mL, 3 g/mL dan 0 g/mL.

Proses diawali dengan memasukkan

larutan standar dan sampel ke dalam

masing-masing well yang telah tercoating

antiGLUT-4, inkubasi dilakukan selama 30

menit. Well dicuci sebanyak 5 kali

menggunakan washing solution, lalu

ditambahkan HRP-conjugat dan diinkubasi

selama 30 menit. Pencucian dilakukan

kembali sebanyak 5 kali, lalu ditambahkan

larutan chromogenik A dan B dan

diinkubasi selama 10 menit. Kemudian

dimasukkan stop solution dan diukur

absorbansinya menggunakan ELISA

reader pada panjang gelombang 450 nm.

Analisa Data. Hasil pengukurankadar GLUT-4 dari jaringan otot kelompok

kontrol dan perlakuan dianalisa secara

statistik dengan tingkat signifikansi 0,05

(p = 0,05) dan tingkat kepercayaan 95%

( = 0,05). Langkah-langkah uji hipotesis

komparatif dan korelatif adalah sebagai

berikut : Uji Normalitas data, Uji

homogenitas varian, Uji One-way ANOVA,

Post hoc test (uji Least Significant

Difference) dengan = 0,05 sehingga

perbedaan dinyatakan signifikan jika 0,05

dan Uji korelasi Pearson.

Hasil PenelitianHasil Ekstraksi dan Uji Fitokimia

Sejumlah 200 gram serbuk biji

jintan hitam dimaserasi menghasilkan

ekstrak kental sejumlah 33 gram.

Dilakukan uji fitokimia secara kualitatif,

untuk mengetahui kandungaan senyawa

dalam ekstrak biji jintan hitam, namun

tidak mengetahui jumlahnya. Hasil uji

fitokimia dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia

Jenis Uji Metode Hasil Ket.Saponin Pengocokan Tidak berbusa -Minyak Atsiri Sudan III Warna merah +Protein Nitrit Acid Warna kuning +Alkaloid Meyer (Potassium Mercuric Iodide) Endapan putih +

Wagner (Iodin dalam kalium iodida) Endapan coklat muda +

Hasil Pengukuran Glukosa DarahPengukuran glukosa darah

sebelum perlakuan (pre-treatment)

dilakukan setelah tikus mendapat induksi

fruktosa selama 6 minggu yakni pada

tanggal 02 Mei 2013, yang berfungsi

sebagai prediktor kondisi diebetes melitus.

Pengukuran glukosa darah setelah

perlakuan (post-treatment) dilakukan pada

setelah tikus mendapat perlakuan selama

30 hari yakni pada tanggal 02 juni 2013.

Perbandingan glukosa darah sebelum dan

setelah perlakuan dapat dilihat pada

gambar 1.

Gambar 1. Grafik Glukosa Darah Pre dan Post Perlakuan

Hasil Pengukuran Kadar GLUT-4

Konsentrasi GLUT4 diperoleh dari

memasukkan nilai absorbansi sampel

kedalam persamaan kurva baku. Kurva

baku antara log rata-rata absorbansi

terhadap log konsentrasi memiliki nilai R2=

0,932 dan persamaan y = 0,808x + 2,047

dimana y = absorbansi dan x =

konsentrasi. Kurva baku didapat dari

pengukuran ELISA menggunakan larutan

baku. Rerata kadar GLUT-4 masing-

masing kelompok perlakuan dapat dilihat

pada gambar 2.

405060708090

100110120130140

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22

Gluko

sa Da

rah (m

g/dL)

Nomor Tikus

Perbandingan Glukosa Darah Sebelum dan Setelah Perlakuan

49

Gambar 2. Rerata kadar GLUT-4

Hasil uji normalitas data dan

homogenits varian tiap kelompok

terpenuhi untuk glukosa darah pre-

treatment, namun sebaran data glukosa

darah post-treatment tidak normal. Telah

dilakukan transformasi data untuk glukosa

darah post-treatment, namun tidak

berhasil. Sehingga digunakan uji non

parametrik Wilcoxon test, karena

merupakan data berpasangan lebih dari

dua kelompok. Hasil uji Wlicoxon

menunjukkan nilai P = 0,218 sehingga

diketahui tidak terjadi perbedaan glukosa

darah yang signifikan antara pre-treatment

dan post-treatment, karena nilai P > 0,05.

Hasil Perubahan Glukosa DarahGlukosa darah merupakan

prediktor kondisi DM 2. Setelah dilakukan

pengukuran glukosa darah pre-treatment

(02/05/13), tidak nampak nilai glukosa

yang melebihi 200 mg/dL yang artinya

belum terjadi konsidi DM 2 pada hewan

coba. Dari hal tersebut, ingin diketahui

pengaruh perubahan glukosa darah pre-

treatment dan post-treatment terhadap

konsentrasi GLUT4 pada jaringan otot.

Hasil perubahan glukosa darah pre-

treatment dan post-treatment dapat dilihat

pada gambar 3.

0100200300400500600700800

Pn (aquadest) Pp (metformin) P1 (ekstrak0.024 mg/gBB)

P1 (ekstrak0.048 mg/gBB)

P1 (ekstrak0.096mg/gBB)

P0 (tanpa DM2)

Kada

r GLU

T-4 (

g/ml)

Kelompok Perlakuan

Rerata Kadar GLUT-4

Gambar 3. Grafik Perbandingan Perubahan Glukosa Darah dan Konsentrasi GLUT-4

Hasil uji normalitas data

konsentrasi GLUT4 didapatkan nilai

p>0,05 untuk seluruh kelompok perlakuan

kecuali perlakuan 3, sehingga data di

transformasi menggunakan 1/squareroot.

Hasil dari transformasi memiliki sebaran

normal untuk seluruh kelompok. Hasil uji

homogenitas varian dari transformasi

menunjukkan data homogen. Kemudian

dilanjutkan dengan uji one way ANOVA

dengan nilai P = 0,526, nilai P > 0,05

sehingga tidak terjadi perbedaan

konsentrasi GLUT4 yang signifikan antar

kelompok perlakuan.

Pembahasan

Efek Ekstrak Biji Jintan Hitam TerhadapPerbedaan Konsentrasi GLUT4 AntarKelompok

Parameter yang digunakan untuk

menilai kondisi diabetes melitus tipe

adalah kadar glukosa darah, dinyatakan

mengalami diabetes melitus jika kadar

glukosa darah puasa 200 mg/dl,

sedangkan pada hewan coba kadar

glukosa darah tidak mencapai 200 mg/dl.

Sehingga dapat diketahui bahwa tikus

belum mengalami diabetes melitus saat

dimulai perlakuan. Hal tersebutlah yang

dimungkinkan menjadi penyebab kadar

GLUT-4 antar perlakuan tidak signifikan.

Hasil pengukuran konsentrasi

GLUT4 dimungkinkan dipengaruhi

berbagai hal, namun yang paling utama

adalah proses pengukuran menggunakan

ELISA. Nilai R2 kurva baku yang didapat

adalah 0,932 menunjukkan kualitas

standar tidak terlalu baik, ditunjukkan pula

dengan nilai absorbansi standar yang

11 8-27

15 18-38

36 25 50 20 53 5 34 6-47 -5

137,40198,81

61,42

190,90152,34289,50

692,75

152,34 122,77

422,47

159,91115,58

247,47

743,53

167,56115,58

-1000

100200300400500600700800900

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Perbandingan antara Glukosa Darah terhadap Kadar GLUT-4

berada diluar direntang 0,2 0,8. Pada

pelaksanaan pengukuran menggunakan

ELISA semua prosedur telah dilaksanaan

sesuai dengan manual data sheet kit,

namun dimungkinkan hal-hal yang

berpengaruh terhadap hasil konsentrasi

adalah:

1. Pengeringan setelah pencucian well

menggunakan wash solution tidak

maksimal, sehingga masih ada wash

solution yang tersisa.

2. Waktu inkubasi sampel kurang lama,

saat inkubasi sampel yang

mengandung GLUT4 akan berikatan

dengan antibodi yang telah ter-coating

di well. Waktu inkubasi untuk ELISA

manual biasanya 24 jam. Pada kit ini,

waktu inkubasi hanya 30 menit yang

mengakibatkan ikatan antara antibodi

dan sampel belum cukup kuat sebelum

dicuci.

3. Pengenceran wash solution yang

kurang dan jumlah pencucian yang

terlalu banyak. Pada dasarnya wash

solution mengandung detergen untuk

membuang protein lain yang tidak

berikatan dengan antibodi, biasanya

merupakan PBS. Jika konsentrasinya

terlalu tinggi, maka dapat membuang

sampel yang berikatan dengan

antibodi. Jumlah pencucian yang yang

terlalu banyak juga dapat membuang

sampel yang berikatan dengan

antibodi.

Hal-hal tersebut diatas berakibat pada

rendahnya jumlah konsentrasi GLUT4

yang terukur, juga mengganggu validitas

konsentrasi protein yang terukur.

Efek Pemberian Ekstrak Biji JintanHitam Terhadap Perbedaan GlukosaDarah Sebelum dan Sesudah Perlakuan

Pada jurnal oleh Bilal tahun 2009

tentang efek jintan hitam dalam berbagai

preparasi, diketahui bahwa jintan hitam

memiliki beberapa mekanisme kerja untuk

menurunkan kadar glukosa darah,

diantaranya dengan mencegah

glukoneogenesis, menjaga dan

memperbaiki integritas sel -langerhan,

serta insulinotropik11. Sebelum dilakukan

perlakuan, glukosa darah tikus masih

dalam rentang normal, sehingga proses

glukoneogenesis, penurunan sekresi

insulin dan kerusakan sel -langerhan

belum terjadi oleh karena itu penggunaan

ekstrak biji jintan hitam tidak berpengaruh

besar. Dalam keadaan normal,

glukoneogenesis tidak terjadi sehingga

ekastrak biji jintan hitam tidak melakukan

fungsinya untuk mencegah

glukoneogenesis. Begitu pula dengan

insulinotropik, jumlah insulin dalam

keadaan normal masih mencukupi.

Korelasi Perubahan Glukosa DarahTerhadap Konsentrasi GLUT4

Konsentrasi GLUT4 merupakan

penanda terjadinya resistensi insulin pada

diabetes melitus tipe 2, sedangkan

perubahan glukosa darah sebelum dan

sesudah perlakuan merupakan penanda

perbaikan kondisi hewan coba.

Berdasarkan hasil korelasi pearson, delta

glukosa darah berkorelasi sangat lemah

dengan konsentrasi GLUT4. Nilai glukosa

darah pre-treatment seluruh hewan coba

berada dalam rentang normal, artinya

belum terjadi kondisi DM 2. Setelah

dilakukan perlakuan, terjadi perubahan

glukosa darah sebelum dan setelah

perlakuan namun tetap dalam rentang

normal. Peningkatan glukosa darah dalam

tubuh menstimulasi peningkatan sekresi

insulin dan menyebabkan masuknya

glukosa ke dalam sel, sintesa glikogen,

dan hambatan glikonegnolisis serta

glukoneogenesis untuk menjaga kondisi

normoglikemik12. Dari pernyataan ini dapat

diketahui bahwa tujuan utama sekresi

insulin adalah menjaga glukosa darah

dalam kadar normal.

Keterbatasan PenelitianJumlah sampel setiap kelompok

perlakuan tidak sama, hal ini terjadi

karena, pemberian fruktosa secara

intragastric dalam waktu lama

menyebabkan kematian pada beberapa

tikus. Konsidi DM 2 tidak tercapai setelah

induksi selama 6 minggu, sehingga

pemberian perlakuan dilakukan sebelum

tikus mengalami DM 2. Jumlah konsumsi

fruktosa masing-masing tikus tidak sama,

karena sebagian fruktosa diberikan

bersama makanan sehingga tidak dapat

dikontrol sepenuhnya.

KesimpulanInduksi fruktosa sebesar 7,5 gram untuk

masing-masing selama 6 minggu belum

dapat menyebabkan resistensi insulin

yang merupakan proses awal pada

patologi DM2. Tikus yang belum

mengalami DM2 diberi perlakuan sesuai

kelompok perlakuan dan tetap diberi diet

fruktosa sebesar 7,5 gram setiap tikus,

sehingga kesimpulan yang didapatkan

adalah:

1. Pemberian ekstrak biji jintan hitam

tidak menyebabkan perbedaan kadar

GLUT4 dari jaringan otot tikus yang

signifikan.

2. Tidak terdapat perbedaan kadar GLUT-

4 yang signifikan pada tikus induksi DM

yang diterapi dengan ekstrak biji jintan

hitam dengan tikus yang diterapi

dengan metformin.

3. Dosis ekstrak biji jintan hitam optimum

tidak dapat ditentukan karena tidak ada

perbedaan konsentrasi GLUT-4 yang

signifikan antar kelompok perlakuan.

SaranDibutuhkan penelitian lebih lanjut

mengenai induksi DM2 menggunakan diet

tinggi fruktosa. Perbandingan induksi DM2

menggunakan diet tinggi fruktosa dengan

metode lainnya seperti penggunaan

kombinasi niacin dan streptosozin, serta

aloxan akan sangat bermanfaat untuk

mengetahui efektifitas metode meliputi

biaya serta waktu. Optimasi induksi DM2

menggunakan diet tinggi fruktosa juga

perlu dilakukan. Selain itu, juga perlu

dilakukan penelitian kembali untuk

mengatahui efek pemberian ekstrak biji

jintan hitam terhadap kadar GLUT4.

Daftar Pustaka

1. International Diabetes Federation.2012. IDF Diabetes Atlas, edisi 5.

Merck and Co., Inc. Brussel.

2. Sulistyoningrum, E. TinjauanMolekuler dan Aspek Klinis Resistensi

Insulin. Mandala of Health, 2010

Volume 4, Nomor 2: 132-134.

3. Berenguer, M., Martinez, L., Giorgetti-Peraldi, S., Marchand-Brustel, YL.,

Govers, R. A Serum Factor Induces

Insulin-Independent Translocation of

GLUT4 to the Cell Surface which Is

Maintained in Insulin Resistance.

Mediterranean Research Center for

Molecular Medicine. 2010, Volume 5.

4. Rhodes, CJ., White, MF. MolecularInsights Into Insulin Action and

Secretion. European Journal of

Clinical Investigation, 2002; 32 (Suppl.

3), 313.

5. Fauci, AS., Braunwald, E., Kasper,DL., Hauser, SL., Longo, DL.,

Jameson, JL., Loscalzo, J. 2008.

Harrisons; Principles of Internal

Medicine, 17th Edition. McGraw-Hill

Company. New York.

6. Gali-Muhtasib, H., El-Najjar, N.,Schneider-Stock, R. The Medicinal

Potential of Black Seed (Nigella sativa)

and Its Components. Elsevier, 2006

M.T.H. Khan and A. Ather (eds.): 133.

7. Gilani, AH., Jabeer, Q., Khan, MAU. AReview of Medicinal Uses and

Pharmacological Activities of Nigella

sativa. Pakistan Journal of Biological

Sciences 7, 2007: 41-451, ISSN 1028-

8880.

8. Andaloussi, A., Martineau, L., Vuong,T., Meddah, B., Settaf, PM., Haddad ,

PS. The In Vivo Antidiabetic Activity of

Nigella sativa Is Mediated through

Activation of the AMPK Pathway and

Increased Muscle GLUT4 Content.

Evidence-Based Complementary and

Alternative Medicine, 2011: 1-9.

9. Widad, S., Bachra, K., Messaoud, B.,Djebbar, A., Pierre, D., Mustapha, B.

Hepatotoxicity and Langerhans Islets

Regenerative Effects of Polar and

Neutral Lipids of Nigella sativa L. in

Nicotinamide/streptozotocin Induced

Diabetic Rats. Pteridines, 2011 Vol.

22, 2011: 97 104.

10. Qin, B.; Nagasaki, M., Ren, M.,Najotto, G., Oshida, Y., Sato, Y.

Cinnamon Extract Prevents the Insulin

Resistance Induced by High-fructose

Diet. Horm. Metab. Res., 2004, 36:

119-125.

11. Bilal, A. 2008. Effects of DifferentPreparation of Nigella sativa (NS) on

Glucose and Lipid Metabolism in Type

II Diabetic Patient. Disertasi. Tidak

diterbitkan. Department of Food

Technology Faculty of Crop and Food

Sciences, Pir Mehr Ali Shah, Arid

Agriculture University Rawalpindi,

Pakistan.

12. Rhodes, CJ., White, MF. MolecularInsights Into Insulin Action and

Secretion. European Journal of

Clinical Investigation, 2002; 32 (Suppl.

3), 313.

Persetujuan Pembimbing I

Efta Triastuti, M. Farm. Klin., Apt

NIK. 810504 07 12 0046