UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP …

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP

PERUBAHAN pH DENGAN MENGGUNAKAN

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

SKRIPSI

Ririn Astri Sabdowati

1111102000040

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI

JAKARTA

JUNI 2015

ii

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP

PERUBAHAN pH DENGAN MENGGUNAKAN

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar sarjana Farmasi

Ririn Astri Sabdowati

1111102000040

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDI FARMASI

JAKARTA

JUNI 2015

iii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINILITAS

Skripsi ini adalah hasil karya saya sendiri, dan semua sumber baik yang dikutip

maupun dirujuk telah saya nyatakan benar.

Nama : Ririn Astri Sabdowati

NIM : 1111102000040

Tanda Tangan :

Tanggal : 8 Juni 2015

iv

LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING

NAMA : RIRIN ASTRI SABDOWATI

NIM : 1111102000040

PROGRAM STUDI : Strata-1 Farmasi

JUDUL : UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON

TERHADAP PERUBAHAN pH DENGAN

MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

TINGGI (KCKT)

Disetujui Oleh:

Pembimbing I

Nelly Suryani, Ph.D, Apt

NIP. 19651024 200501 2 001

Pembimbing II

Supandi, M.Si, Apt

Mengetahui,

Kepala Program Studi Farmasi

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Umar Mansur, M. Sc,. Apt

v

HALAMAN PENGESAHAN

Skripsi ini diajukan oleh :


NIM : 1111102000040

Program Studi : Farmasi

Judul Skripsi : Uji Stabilitas Obat Spironolakton Terhadap Perubahan

pH Dengan Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi (KCKT)

Telah berhasil dipertahankan di hadapan Dewan Penguji dan diterima sebagai bagian

persyaratan yang diperlukan untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Program

Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri

(UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta

DEWAN PENGUJI

Pembimbing 1 : Nelly Suryani, Ph.D., Apt ( )

Pembimbing 2 : Supandi M.Si., Apt ( )

Penguji 1 : Umar Mansur, M.Sc., Apt ( )

Penguji 2 : Lina Elfita M.Si., Apt ( )

Ditetapkan di : Jakarta

Tanggal : 8 Juni 2015

vi

ABSTRAK


Program Studi : Farmasi

Judul Skripsi : Uji Stabilitas Obat Spironolakton Terhadap Perubahan PH dengan

Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Spironolakton merupakan obat hipertensi golongan diuretik antagonis aldosteron yang

umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi. Di

Indonesia spironolakton terkadang digabung dengan obat-obat lain terutama untuk pasien geriatrik

yang mengalami komplikasi penyakit yang terkadang sulit untuk menelan obat ataupun pasien

tersebut dalam keadaan koma. Pencampuran obat dan perubahan bentuk sediaan obat sebelum

digunakan dapat mempengaruhi pH akhir sediaan. Sedangkan spironolakton merupakan senyawa

ester yang mengandung gugus lakton yang mudah terhidrolisis pada perubahan pH. Dimana reaksi

ini akan menyebabkan terjadinya degradasi spironolakton. Pada penelitian ini, persentase kadar

spirononlakton dalam sediaan suspensi yang dibuat dengan cara menggerus tablet spironolakton

dan mensuspensikannya dengan air diukur dengan mengunakan metode KCKT. Suspensi

spironolakton yang telah dibuat ditambahkan dapar untuk memberi variasi suasana pH hingga

diperoleh pH 3,5,7 dan 9 dan diujikan pada menit ke 0,15,30,45, dan 60. Persen kadar

spironolakton pada ph 3 adalah 19%, 21%, 22%,27%,dan 40%. Pada pH 5 100%,88%,85%,74%

dan 91%. Pada pH 7 61%,46%,38%,27%,dan 35%. Pada pH 9 54%,50%,41%,38%, dan 38%.

Kadar spironolakton pada pH 3, 7, dan 9 pada semua menit sudah tidak dapat diterima, sesuai

ketentuan kadar spironolakton dalam sediaan. Sedangkan pada pH 5 pada menit ke-0 saja yang

masih dapat diterima. Spironolakton lebih stabil pada atau mendekati pH optimum yaitu 4.5.

Kata Kunci : Suspensi spironolakton, spironolakton, stabilitas, kadar, pH, persen degradasi

vii

ABSTRACT

Name : Ririn Astri Sabdowati

Study program : Pharmacy

Thesis title : Stability Test on Spironolactone towards pH changes using High

Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Spironolactone is an aldosterone antagonist diuretic drug for hypertension which is

generally made in form of film-coated tablets not liquid nor suspension. In Indonesia,

spironolactone is sometimes combined with other medicines especially for geriatric patients who

suffer complications and sometimes have difficulty in swallowing medicine or those patients who

are in a comma-state. Mixture of drug and the changes of drug form before being used can affect

the final pH, while spironolactone is an ester containing lactone group which is easily hydrolyzed

towards change of pH. This reaction will cause degradation of spironolactone. In this research, the

spironolactone percentage in suspension was created by grinding the spironolactone tablet and

suspended it with water measured by using HPLC method. Buffer was added to the spironolactone

suspension to give variation to pH solution until pH 3, 5, 7, and 9 were obtained which then tested

on minute 0, 15, 30, 45, and 60. The percentages of spironolactone at pH 3 were 19%, 21%, 22%,

27%, and 40%. At pH 5 the percentages were 100%, 88%, 85%, 74% and 91%, while at pH 7 were

61%, 46%, 38%, 27%, and 35%. At ph 9, the percentages were 54%, 50%, 41%, 38%, and 38%.

The spironolactone at pH 3, 7, and 9 at all minutes could not be accepted in accordance to the

spironolactone in the formulation. Meanwhile, at ph 5, the only one that could be accepted was at

minute 0. Spironolactone was more stabilized at or near optimum pH which was 4.5.

Keywords: Suspension spironolactone, spironolactone, stability, concentration, pH, percent

degradation

xi

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................................ ii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINILITAS ............................................................. iii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................. iv

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI.............................................................................. v

ABSTRAK ...................................................................................................................... vi

ABSTRACT ................................................................................................................... vii

KATA PENGANTAR .................................................................................................. viii

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .................................... x

DAFTAR ISI ................................................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... xiii

DAFTAR TABEL ......................................................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................. xv

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................................... 1 I.1. Latar Belakang ....................................................................................................... 1

I.2. Rumusan Masalah .................................................................................................. 3

I.3. Tujuan Penelitian ................................................................................................... 3

I.4. Manfaat Penelitian ................................................................................................. 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................................... 4 2.1. Stabilitas Obat ....................................................................................................... 4

2.2. Stabilitas Obat Terhadap pH ................................................................................. 6

2.3. Degradasi Obat ..................................................................................................... 7

2.4. Tablet Salut .......................................................................................................... 10

2.5. Spironolakton ...................................................................................................... 10

2.6. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ....................................................... 14

BAB III METODE PENELITIAN ............................................................................. 18

3.1. Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................................. 18

3.2. Alat dan Bahan .................................................................................................... 18

3.3. Prosedur Kerja ..................................................................................................... 18

3.3.1 Pembuatan Fase Gerak ............................................................................. 18

3.3.2 Preparasi Standar ...................................................................................... 18

3.3.3 Optimasi dan Validasi ............................................................................... 19

3.3.4 Preparasi dan Pengujian Sampel .............................................................. 20

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN...................................................................... 22

4.1. Penentuan Panjang Gelombang Optimum ........................................................... 22

4.2. Pemilihan Fase Gerak .......................................................................................... 22

4.3. Uji Kesesuaian Sistem ......................................................................................... 22

4.4. Pembuatan Kurva Kalibrasi ................................................................................. 23

4.5. Uji Akurasi dan Perolehan Kembali .................................................................... 24

4.6. Uji Presisi ............................................................................................................ 25

xii

4.7. Pengukuran Kadar Spironolakton dalam Sampel ................................................ 26

4.8. Uji Statistik Nilai Normalitas .............................................................................. 29

4.9. Uji Statistik Nilai Homogenitas dan ANOVA .................................................... 29

4.10. Pembahasan Pengukuran Kadar Spironolakton dalam Sampel ......................... 30

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................................... 34

5.1. Kesimpulan .......................................................................................................... 34

5.2. Saran .................................................................................................................... 34

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................... 35

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Contoh hidrolisis dengan katalis asam ...................................................... 8

Gambar 2.2. Contoh hidrolisis dengan katalis basa ...................................................... 8

Gambar 2.3. Struktur Spironolakton............................................................................. 10

Gambar 2.4. Struktur Lakton ....................................................................................... 12

Gambar 2.5. Instrumen KCKT .................................................................................... 15

Gambar 4.1. Kurva Kalibrasi ....................................................................................... 23

Gambar 4.2. Grafik perbandingan pH akhir sediaan terhadap Waktu ......................... 30

Gambar 4.3. Spironolakton .......................................................................................... 31

Gambar 4.4 Hidrolisis Gugus Ester Dalam Suasana Asam ......................................... 32

Gambar 4.5. Hidrolisis Gugus Ester Dalam Suasana Basa ......................................... 32

Gambar 4.6. Proses Pembentukan Canrenone Secara Kimiawi ................................... 33

xiv

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1. Uji kesesuaian Sistem .................................................................................. 23

Tabel 4.2. Kurva Kalibrasi ............................................................................................ 23

Tabel 4.3. Uji Akurasi ................................................................................................... 24

Tabel 4.4. Uji Presisi .................................................................................................... 25

Tabel 4.5. Persentase Kadar Spironolakton pada pH 3 ................................................. 26




Tabel 4.9. Uji Statistik ANOVA .................................................................................. 29

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Alur Kerja ............................................................................................... 36

Lampiran 2. Sertifikat Spironolakton Standar Sigma .................................................. 37

Lampiran 3. Panjang Gelombang Maksimum Spironolakton ...................................... 38

Lampiran 4. Perhitungan Persiapan Kurva Kalibrasi .................................................. 39

Lampiran 5. Kromatogram Larutan Standar dan Tablet ............................................. 41

Lampiran 6. Kromatogram Kalibrasi .......................................................................... 42

Lampiran 7. Kurva Dan Tabel Kalibrasi ..................................................................... 43

Lampiran 8. Hasil Kromatogram Uji Kesesuaian Sistem ........................................... 44

Lampiran 9. Hasil Uji Kesesuaian Sistem ................................................................... 45

Lampiran 10. Hasil Uji Akurasi .................................................................................. 46

Lampiran 11. Hasil Uji Presisi .................................................................................... 47

Lampiran 12. Perhitungan Preparasi Sampel dan Luas Area secara Manual .............. 49

Lampiran 13. Hasil Kromatogram pH 3 ....................................................................... 50

Lampiran 14. Hasil dan Kurva pH 3 ............................................................................ 51

Lampiran 15. Hasil Kromatogram pH 5 ...................................................................... 52





Lampiran 20. Hasil dan Kurva pH 9 ........................................................................... 57

Lampiran 21. Kurva Perbandingan Konsentrasi terhadap Waktu ............................... 58

Lampiran 22. Hasil Uji Statistik ANOVA, Normalitas dan Homogenitas ................. 59

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Stabilitas dalam arti luas dapat didefinisikan sebagai ketahanan suatu produk

sesuai dengan batas-batas tertentu selama penyimpanan dan penggunaanya atau

umur simpan suatu produk dimana produk tersebut masih mempunyai sifat dan

karakteristik yang sama seperti pada waktu pembuatan. (David B. Troy, 2006;

USP 30)

Obat dibuat dalam berbagai bentuk sediaan disesuaikan dengan cara dan

tujuan pemakaian, pertimbangan sifat bahan obat dan sebagainya. Bila bentuk

suatu sediaan obat diubah seperti dilarutkan, diserbuk, ditambahkan bahan

tambahan lain atau dilakukan modifikasi faktor lingkungan seperti pada kondisi

penyimpanan, kemungkinan dapat terjadi perubahan pada stabilitas obat tersebut.

(Connors et al, 1992)

Ada beberapa parameter yang perlu dipertimbangkan dalam memformulasi

suatu sediaan obat yang stabil. Diantaranya sifat kimia, sifat fisik, mikrobiologi,

efek terapi, efek toksik. Evaluasi stabilitas sediaan tidak hanya memperhitungkan

zat aktif farmasi, tetapi juga eksipien dan kemasan produk obat. Selanjutnya,

karena kemudahan dan ketersediaan bahan, pada praktek umum dilakukan

pembuatan cairan suspensi oral yang disiapkan dari bentuk sediaan padat seperti

tablet atau kapsul yang tersedia. Oleh karena itu potensi interaksi tambahan dapat

terjadi antara obat. (Niazi, Sarfaraz, 2006)

Beberapa hal yang dapat mempengaruhi stabilitas dari sediaan farmasi salah

satunya adalah interaksi bahan aktif dengan bahan aktif lain dalam

penggunaannya, faktor lingkungan seperti temperatur juga mempengaruhi

stabilitas obat. Demikian pula faktor formulasi seperti pH, sifat dalam air dan sifat

pelarutnya dapat mempengaruhi stabilitas obat (David B. Troy, 2006; USP. 30)

Secara fisiologis, larutan obat harus diformulasikan sedekat mungkin ke pH

stabilitas optimumnya karena besarnya laju reaksi hidrolitik yang dipengaruhi atau

dikatalisis oleh gugus hidroksi. (Ansel, 1994; Lachman et al,2007)

2


Kebanyakan molekul obat baik asam atau basa lemah akan terionisasi

yang ditentukan oleh pKa senyawa dan pH cairan biologis dimana obat itu akan

terlarut. pH dari larutan obat mungkin memiliki efek yang besar pada stabilitas,

bergantung pada mekanisme reaksinya. Ketika obat diformulasikan dalam bentuk

larutan, penting untuk mengetahui pH optimum sediaan. Kebanyakan obat akan

berkontak dengan air dan bahkan obat berbentuk solid dapat kontak dengan air.

Oleh karena itu, hidrolisis menjadi reaksi yang paling banyak ditemukan.

Hidrolisis sering menjadi jalur degradasi dari obat-obat yang memiliki gugus ester

dan amida. (Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002; Min Li, 2012)

Spironolakton umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film dengan

kekuatan dosis 25, 50 dan 100 mg tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi.

Spironolakton praktis tidak larut dalam air dan larut dalam alkohol. Sedikit larut

dalam kondisi basa. Sediaan larutan oral yang dibuat dengan spironolakton stabil

setidaknya selama 30 hari dan biasanya memiliki nilai pH akhir 3.5 – 6.5.

(Mahmoud, Ismail M et al, 2014)

Spironolakton merupakan senyawa ester yang memiliki struktur lakton yang

mudah terhidrolisis. Struktur lakton merupakan salah satu dari senyawa karbonil

labil yang memiliki pusat elektropositif yang mudah bereaksi dengan nukleofil.

(Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002)

Lakton merupakan ester siklik. Menurut studi oleh Kaufman, antara

hidrolisis menghasilkan reaksi campuran yang sama dibawah katalis asam.

Lovastatin dan simvastatin, dua anggota dalam golongan obat untuk

hyperlipidemia yang mengandung lakton yang mudah terhidrolisis. Kaufman

mempelajari kinetika hidrolisis dan termodinamika kedua obat. Karena struktur

dari dua obat hanya berbeda oleh kelompok metilen yang jauh dari bagian lakton,

dua obat ini ditemukan memiliki parameter kinetik dan termodinamika yang

sangat mirip. Energi aktivasi untuk hidrolisis kedua obat harus berada di

lingkungan di ph 2. Sedangkan daptomycin adalah antibiotik lipopeptida yang

mengandung cincin makrosiklik ester dihubungkan dengan sembilan ikatan amida

dan satu ikatan ester. Energi aktivasi untuk hidrolisis ikatan ester terjadi pada pH

10. (Min Li, 2012)

3


Di Indonesia spironolakton terkadang digabung dengan obat-obat lain terutama

untuk pasien geriatrik yang mengalami komplikasi penyakit yang terkadang sulit

untuk menelan obat ataupun pasien tersebut dalam keadaan koma sehingga sulit

untuk diberikan obat berbentuk tablet. Pencampuran obat dan perubahan bentuk

sediaan obat sebelum digunakan terkadang dapat mempengaruhi pH akhir sediaan.

Sedangkan spironolakton merupakan senyawa ester yang mengandung gugus lakton

yang mudah terhidrolisis pada perubahan pH.

Oleh karena itu perlu dilakukan uji stabilitas obat dalam pemberian obat

antihipertensi Spironolakton terhadap pengaruh perubahan variasi pH yaitu 3, 5, 7

dan 9 dalam sediaan suspensi sederharna menggunakan KCKT.

1.2. Rumusan Masalah

Masalah yang diangkat dalam penelitian ini adalah di Indonesia spironolakton

terkadang digabung dengan obat-obat lain sehingga dapat mempengaruhi pH akhir

sediaan. Oleh karena itu perlu dilakukan uji stabilitas obat Spironolakton terhadap

pengaruh perubahan variasi pH yaitu 3, 5, 7 dan 9 dalam sediaan suspensi

sederharna menggunakan KCKT. Adakah penurunan kadar dari spironolakton yang

disebabkan oleh pengaruh perubahan pH.

1.3. Tujuan Penelitian

Melakuan analisa kandungan kadar dari spironolakton dalam variasi suasana

pH asam dan basa 3, 5, 7, dan 9.

I.4. Manfaat Penelitian

Memberikan informasi kondisi kestabilan spironolakton dalam variasi

suasana pH asam dan basa.

Sebagai informasi bagi dokter, farmasis darn tenaga kesehatan lain di rumah

sakit dalam memberikan obat yang rasional dan tepat.


BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Stabilitas Obat

Stabilitas dalam arti luas dapat didefinisikan sebagai ketahanan suatu

produk sesuai dengan batas-batas tertentu selama penyimpanan dan penggunaanya

atau umur simpan suatu produk dimana produk tersebut masih mempunyai sifat

dan karakteristik yang sama seperti pada waktu pembuatan. Banyak faktor yang

mempengaruhi stabilitas dari sediaan farmasi, antara lain stabilitas bahan aktif,

interaksi antara bahan aktif dengan bahan tambahan, proses pembuatan bentuk

sediaan, kemasan, cara pengemasan dan kondisi lingkungan yang dialami selama

pengiriman, penyimpanan, penanganan dan jarak waktu antara pembuatan dan

penggunaan. Faktor lingkungan seperti temperatur, radiasi cahaya dan udara

(khususnya oksigen, karbon dioksida dan uap air) juga mempengaruhi stabilitas.

Demikian pula faktor formulasi seperti ukuran partikel, pH, sifat dari air dan sifat

pelarutnya dapat mempengaruhi stabilitas. (David B. Troy,Paul Beringer, 2006;

USP 30)

Stabilitas produk obat dibagi menjadi stabilitas secara kimia dan stabilitas

secara fisika. Faktor-faktor fisika seperti panas, cahaya, dan kelembapan, mungkin

akan menyebabkan atau mempercepat reaksi kimia, maka setiap menentukan

stabilitas kimia, stabilitas fisika juga harus ditentukan (Attwood dan Florence,

2011).

Stabilitas fisika didasari pada perubahan sifat fisika dari suatu produk yang

tergantung waktu (periode penyimpanan). Contoh dari perubahan fisika antara

lain migrasi (perubahan) warna, perubahan rasa, perubahan bau, perubahan tekstur

atau penampilan. Evaluasi dari uji stabilitas fisika meliputi: pemeriksaan

organoleptis, homogenitas, pH, bobot jenis (Attwood dan Florence, 2011).

Stabilitas kimia suatu obat merupakan faktor yang menentukan lamanya

waktu suatu obat untuk mempertahankan integritas kimia dan potensinya seperti

yang tercantum pada etiket dalam batas waktu yang ditentukan. Pengumpulan dan

pengolahan data merupakan langkah menentukan baik buruknya sediaan yang

dihasilkan (Attwood dan Florence, 2011).

5


Secara reaksi kimia, zat aktif dapat terurai karena beberapa faktor

diantaranya ialah oksigen (oksidasi), air (hidrolisa), suhu (oksidasi), cahaya

(fotolisis), karbondioksida (turunnya pH larutan), sesepora ion logam sebagai

katalisator reaksi oksidasi. Jadi jelasnya faktor luar juga mempengaruhi

ketidakstabilan kimia seperti, suhu, kelembaban udara dan cahaya (Attwood dan

Florence, 2011).

Stabilitas mikrobiologi suatu sediaan adalah keadaan tetap di mana sediaan

bebas dari mikroorganisme atau memenuhi syarat batas miroorganisme hingga

batas waktu tertentu. Stabilitas mikrobiologi diperlukan oleh suatu sediaan

farmasi untuk menjaga atau mempertahankan jumlah dan menekan pertumbuhan

mikroorgansme yang terdapat dalam sediaan tersebut hingga jangka waktu

tertentu yang diinginkan (Attwood dan Florence, 2011).

Stabilitas sediaan farmasi merupakan salah satu kriteria yang amat penting

untuk suatu hasil produksi yang baik. Ketidakstabilan produk obat dapat

mengakibatkan terjadinya penurunan sampai dengan hilangnya khasiat, obat dapat

berubah menjadi toksik atau terjadinya perubahan penampilan sediaan (warna,

bau, rasa, konsistensi dan lain - lain) yang akibatnya merugikan bagi pemakai.


Obat dibuat dalam berbagai bentuk sediaan disesuaikan dengan cara dan

tujuan pemakaian, pertimbangan sifat bahan obat dan sebagainya. Bila bentuk

suatu sediaan obat diubah seperti dilarutkan, diserbuk, ditambahkan bahan

tambahan lain atau dilakukan modifikasi faktor lingkungan seperti pada kondisi

penyimpanan, kemungkinan dapat terjadi perubahan pada stabilitas obat tersebut.


Ketidakstabilan suatu sediaan farmasi dapat dideteksi melalui perubahan

sifat fisika, kimia serta penampilan dari suatu sediaan farmasi. Besarnya

perubahan kimia sediaan farmasi ditentukan dari laju penguraian obat melalui

hubungan antara kadar obat dengan waktu, atau berdasarkan derajat degradasi dari

suatu obat yang jika dipandang dari segi kimia, stabilitas obat dapat diketahui dari

ada atau tidaknya penurunan kadar selama penyimpanan.

6


Secara fisiologis, larutan obat harus diformulasikan sedekat mungkin ke

pH stabilitas optimumnya karena besarnya laju reaksi hidrolitik dipengaruhi /

dikatalisis oleh gugus hidroksi. (Ansel, 1994; Lachman et al, 2007)

2.2 Stabilitas Obat Terhadap pH

Kebanyakan molekul obat baik asam atau basa lemah akan terionisasi

yang ditentukan oleh pKa senyawa dan pH cairan biologis dimana obat itu akan

terlarut. pH dari larutan obat mungkin memiliki efek yang besar pada stabilitas,

bergantung pada mekanisme reaksinya. Ketika obat diformulasikan dalam bentuk

larutan, penting untuk mengetahui pH optimum sediaan. (Banker, Gilbert S and C

T Rhodes, 2002)

Kebanyakan obat parenteral, obat akan berkontak dengan air dan bahkan

obat berbentuk solid dapat kontak dengan air. Oleh karena itu, hidrolisis menjadi

reaksi yang paling banyak ditemukan. Hidrolisis sering menjadi jalur degradasi

dari obat-obat yang memiliki gugus ester dan amida. Ketika obat tidak terion

dalam air, maka akan ada tiga kemungkinan reaksi hidrolitik. Degradasi dapat

terjadi akibat katalis asam tertentu yang disebabkan oleh kinetik pada tahap

pertama, hidrolisis air (tahap kedua) dan katalisis basa spesifik (tahap ketiga).

(Min Li, 2012; Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002)

Lakton merupakan cincin ester. Laktonisasi yang merupakan reforming

cincin ester meningkat pada lakton dengan ukuran cincin kecil dan sedang.

Menurut studi oleh Kaufman, antara hidrolisis dan laktonisasi menghasilkan

reaksi campuran yang sama dibawah katalis asam. Katalisasi oleh asam pada

hidrolisis dari lakton bersifat reversible. (Min Li, 2012)

Degradasi dari banyak senyawa obat dalam larutan dapat dipercepat atau

diperlambat secara ekponensial oleh nilai pH yg naik atau turun dari rentang pH

nya. Nilai pH yang di luar rentang dan paparan terhadap temperatur yang tinggi

adalah faktor yang mudah mengkibatkan efek klinik dari obat secara signifikan,

akibat dari reaksi hidrolisis dan oksidasi. Larutan obat atau suspensi obat dapat

stabil dalam beberapa hari, beberapa minggu, atau bertahun-tahun pada formulasi

aslinya, tetapi ketika dicampurkan dengan larutan lain yg dapat mempengaruhi

nilai pH nya, senyawa aktif dapat terdegradasi dalam hitungan menit.

7


Sistem pH dapar yang biasanya terdegradasi dari asam atau basa lemah

dan garamnya biasanya ditambahkan ke dalam sediaan cair ditambahkan untuk

mempertahankan pHnya pada rentang dimana terjadinya degradasi obat minimum.

(Min Li, 2012)

2.3 Degradasi Obat

Substansi obat yang digunakan dalam farmasetikal memiliki struktur

molekul yang berbeda-beda. Oleh karena itu rentan terdegradasi oleh banyak dan

berbagai macam jalur degradasi. Jalur degradasi antara lain adalah hidrolisis,

dehidrasi, isomerisasi dan rasemisasi, eliminasi, oksidasi, photodegradasi dan

interaksi kompleks dengan eksipien ataupun dengan obat lain. Ini sangat berguna

untuk memperkirakan ketidakstabilan kimia yang terjadi berdasarkan struktur

melekulnya. Banyak obat yang cukup stabil, tetapi kelompok dengan gugus

fungsional seperti ester dan cincin laktam yang terdapat pada beberapa obat rentan

terhadap hidrolisis dan gugus fungsional seperti katekol dan fenol cukup mudah

teroksidasi. (Min Li, 2012; Lee, David C, M L Webb, 2009)

a. Hidrolisis

Hidrolisis merupakan salah satu dari reaksi utama dari degradasi obat

terutama dalam bentuk larutan. Hidrolisis adalah proses dua tahap, dimana

nukleofil, seperti air dan ion hidroksi yang ditambahkan yang kemudian akan

membentuk senayawa intermediet dari leaving group yang terlepas pada tahap

kedua. Struktur senyawa mempengaruhi tingkat hidrolisis, dimana semakin

kuat asam konjugasi yang terlepas maka reaksi yang terjadi semakin cepat.

Banyak obat yang mengandung gugus fungsional yang sangat rentan terhadap

hidrolisis.

Contoh dari dua tipe reaksi hidrolisis (Niazi, Sarfaraz, 2006):

Hidrolisis tipe satu dapat dikatalisasi baik oleh asam dan basa, oleh karena

itu kontrol pH formulasi merupakan salah satu hal yang mempengaruhi tingkat

dekomposisi (Niazi, Sarfaraz, 2006):.

X = OR (ester), NR1R2 (amida) (Tipe I)

X = Halogen atau Leaving Group (tipe II)

8


Gambar 2.1. Contoh hidrolisis dengan katalis asam

Gambar 2.2. Contoh hidrolisis dengan katalis basa

Beberapa obat-obat yang memiliki gugus fungsi yang rentan terhadap

hidrolisis antara lain aspirin (ester), spironolakton (tiol ester, lakton),

kloramfenikol (amida), sulfonamide, fenobarbitak (imida), methicillin

(lactam) dan klorambusil (alifatik terhalogenasi) (Niazi, Sarfaraz, 2006):.

Degradasi melalui reaksi hidrolisis dipengaruhi oleh sejumlah factor

seperti pH larutan, garam penyangga, dan kekuatan ion. Faktor yang paling

penting adalah pH larutan. Oleh karena itu penyesuaian pH dan penggunaan

dapar yang tepat dan jika memungkinkan dalam jumlah sangat kecil (Niazi,

Sarfaraz, 2006)

9


b. Oksidasi

Reaksi penguraian kedua yang paling umum adalah melalui reaksi

oksidasi. Penguranga/ oksidasi (redoks) merupakan reaksi yang melibatkan

baik transfer oksigen atau hidrogen ataupun elektron. Oksidasi disebabkan

oleh adanya oksigen dan reaksi yang dapat diinisasi oleh pemanasan, cahaya,

dan paparan logam yang menghasilkan radikal bebas organic. Radikal ini

menyebarkan reaksi oksidasi yang berlangsung hingga inhibitor

menghancurkan radikal atau sampai terbentuknya reaksi samping yang

memutuskan rantai. Sensitivitas masing-masing entisitas obat baru terhadap

oksigen atmosfir harus dievaluasi untuk mententukan apakah produk akhir

perlu dikemas dalam kondisi kedap udara dan jika harus mengandung

antioksidan (Niazi, Sarfaraz, 2006).

Obat mungkin akan terdegradasi menjadi substansi toksik. Oleh karenanya

penting untuk mengetahui tidak hanya berapa banyak obat tersebut berkurang tapi

juga apa yang menyebabkannya terdegradasi. Beberapa kasus, zat pendegradasi

mungkin berupa zat toksik. Contohnya obat pralidoxine yang terdegradasi melalui

dua jalur pH. Di kondisi pH basa, produk toksik cyanid terbentuk, pada obat lain,

Contohnya zat pendegradasi dari tetrasiklin adalah epianhydrotetrasiklin diketahui

dapat menyebabkan sindrom fanconi. Terkadang, hasil reaksi intermediet yang

terbentuk diketahui atau dicurigai memiliki efek toksik. Contohnya adalah

penisilin pada pH asam akan berubah menjadi asam penicilenik yang dicurigai

berkontribusi dalam efek alergi terhadap penisilin. (Yoshioka, Sumie and Stella,

Valentino J, 2000)

Degradasi obat mungkin akan membuat obat berubah bentuk secara

estetika sehingga tidak dapat digunakan. Produk yang diduga dapat

mengkontaminasi jika didapati perubahan yang signifikan, seperti perubahan

warna dan bau. Contohnya adalah epinephrine yang teroksidasi menjadi

adrenochrome akan berubah warna menjadi warna merah pekat. Produk

epinephrine yang berubah warna menjadi pink sudah dianggap tercemar.

Meskipun obat mungkin akan stabil dalam formulasinya, formulator harus juga

membuat obat dapat stabil di kondisi pH dalam saluran GI dan pada usus halus.

(Yoshioka, Sumie and Stella, Valentino J, 2000)

10


2.4 Tablet Salut

Tablet salut merupakan tablet yang ditutupi dengan satu atau lebih lapisan

dari campuran zat seperti gula, polimer, dan bahan- bahan lain yang terkadang

juga aktif. Tablet dilapisi kerena berbagai alasan. Beberapa alasannya seperti

melindungi zat aktif dari udara, kelembaban, cahaya, bau, rasa atau bahan- bahan

yang dapat merusak zat aktif. (WH0, 2006)

Tablet salut dibagi menjadi (International Pharmacopoeia,2006) :

a. Tablet salut gula

Tablet yang dilapisi oleh gula untuk memperbaiki/ menutup rasa dari zat

aktif.

b. Tablet salut film

Tablet yang disalut dengan lapisan tipis resin, polimer dan atau platicizer

yang mampu membentuk film yang bertujuan untuk memperbaiki sifat

fisika kimia zat aktif.

c. Tablet modified release

Tablet yang disalut oleh matriks yang mengandung bahan pengisi yang

dibuat secara terpisah atau bersama dengan zat aktif yang berguna untuk

memodifikasi laju pelepasan obat dalam tubuh.

2.5 Spironolakton

o Bentuk sediaan : Letonal tablet 100 mg

o Nama IUPAC : 7α-acetylthio-3-oxo-17α-pregn-4-ene-21,17-carbolactone

o Berat molekul : 416.57

o Struktur kimia : C24H32O4S

Gambar 2.3. Struktur Spironolakton

(Sumber : USP 30)

11


o Fisikokimia :

Pemerian : hablur krem muda hingga coklat muda, bau lemah seperti

merkaptan dan stabil di udara.

Kelarutan : praktis tidak larut dalam air, mudah larut dalam benzene

dan kloroform, larut dalam etil asetat dan alkohol, sukar larut dalam

minyak lemah.

o Stabilitas :

Spironolakton tersedia secara komersial dalam beberapa kekuatan tablet

untuk pemberian oral untuk orang dewasa dan anak-anak. Namun, ada kalanya

digunakan untuk mengobati pasien lansia atau koma yang memerlukan persiapan

dan penggunaan suspensi oral. The United States Pharmacopeia (USP) telah

menetapkan beyond use dating (BUD) untuk sediaan oral dan topikal dalam

berbagai kegunaan. Tujuan BUD adalah untuk memastikan pasien menyadari

manfaat terapeutik produk suspensi oral yang disiapkan. Studi telah dilakukan

untuk menentukan stabilitas spironolakton ketika disiapkan dalam suspensi di

masa lalu.

Satu studi yang dilakukan oleh Nahata et al mengemukakan stabilitas

suspensi spironolakton selama setidaknya 90 hari ketika suspensi disimpan di

bawah pendinginan dan pada suhu kamar. Sebuah studi serupa yang dilakukan

oleh Mathur et al meneliti tiga konsentrasi suspensi spironolakton (2,5, 5, dan 10

mg mL -1) pada tiga suhu yang berbeda (5°C, suhu kamar lingkungan, dan 30°C)

untuk jangka waktu empat minggu. Hasil ini menunjukkan bahwa suspensi yang

stabil untuk masa studi empat minggu. Sebuah studi oleh Allen dan Erickson

(1996) mengevaluasi 25 mg mL -1 suspensi spironolakton disimpan pada suhu 5 °

C dan 25 ° C selama periode enam puluh hari dan menemukan stabilitas kimia

spironolakton dapat diterima sesuai standar USP. (Basusarkar et al, 2013)

Spironolakton merupakan senyawa ester yang memiliki struktur lakton yang

mudah terhidrolisis. Struktur lakton merupakan salah satu dari senyawa karbonil

labil yang memiliki pusat elektropositif yang mudah bereaksi dengan nukleofil.

(Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002s 4th Ed)

12


Gambar 2.4. Struktur Lakton

(Sumber: Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002s 4th Ed)

Spironolakton umumnya dibuat dalam bentuk tablet salut film dengan

kekuatan dosis 25, 50 dan 100 mg tidak dalam bentuk larutan ataupun suspensi.

Spironolakton praktis tidak larut dalam air dan larut dalam alkohol. Sedikit larut

dalam kondisi basa dengan stabilitas maksimum pada pH 4.5. Sediaan larutan oral

yang dibuat dengan spironolakton stabil setidaknya selama 30 hari dan biasanya

memiliki nilai pH akhir 3.5 – 6.5. (Mahmoud, Ismail M et al, 2014)

Dekomposisi spironolakton terhadap pengaruh pH menunjukkan bahwa

nilai pH optimum stabilitas untuk spironolakton adalah 4.5 pada suhu 40oC.

sedangkan pengaruh kekuatan ionik dari dapar tidak memengaruhi secara konstan

dekomposisi dari spironolakton.Sehingga dapat diasumsikan bawha spironolakton

yang tidak terionisasi bereaksi dengan ion H+ dan OH

- Pada penelitian ini diteliti

nilai dekomposisi spironolakton terhadap pengaruh pH menurut orde satu. Pada

pH 4.5 efek pH menunjukkan nilai dekomposisi minimum dengan nilai K

0.00095. sedangkan pada suasana asam pH 2.3 nilai K adalah 0.0079. pada pH 7.3

nilai K yang diperoleh adalah 0.025 dan pada ph 8.3 nilai K= 0.126. (Pramar,et al,

1991)

Pembentukan metabolit dari spironolakton menjadi canrennone juga telah

dilakukan dengan menggunakan reaksi kimia menggunakan medium air pada pH

13 melalui mekanisme deasetilasi. Pada tahap pertama terjadi hidrolisis cepat pada

pH 13, spironolakton berubah menjadi metabolitnya yaitu 7α-thiol. Tahap kedua

adalah eliminasi H2S secara perlahan dan membentuk canrenone. (W. Sadée, et al,

1974)

o Indikasi :

Spironolakton bekerja di tubulus distal ginjal untuk meningkatkan ekskresi

natrium dan air dan mengurangi eliminasi kalium. Spironolakton merupakan

antagonis kompetitif untuk mineralokortikoid, seperti aldosteron. reseptor

13


mineralokortikoid adalah protein intraseluler yang dapat mengikat aldosteron.

spironolakton mengikat reseptor dan kompetitif menghambat aldosteron mengikat

reseptor. ketidakmampuan aldosteron untuk mengikat reseptor mencegah

reabsorpsi natrium dan klorida ion dan air yang terkait. situs yang paling penting

dari reseptor ini adalah pada akhir distal rumit tubulus dan mengumpulkan sistem.

(Bernal et al, 2014; Lemke, Thomas L et al)

Spironolakton menghambat efek aldosteron dengan bersaing menuju reseptor

aldosteron intraseluler dalam sel tubulus distal (benar-benar bekerja pada reseptor

aldosteron di saluran pengumpul). Hal ini meningkatkan ekskresi air dan natrium,

sekaligus mengurangi ekskresi kalium. Spironolakton memiliki onset cukup

lambat. Spironolakton memiliki aktivitas anti-androgen dengan cara mengikat

reseptor androgen dan mencegah dari berinteraksi dengan dihidrotestosteron.

(Kher et al, 2013)

Pada pemberian oral, sekitar 90% dari dosis spironolakton diserap dan

dimetabolisme secara signifikan selama first pass metabolism oleh hati akan

membentuk metabolit aktif, yaitu canrenone. Canrenone merupakan antagonis

aldosteron. Anion canrenoate tidak aktif sebagai antagonis aldosteron berbeda

dengan canrenone, yang ada dalam bentuk lakton. canrenone telah diusulkan

untuk menjadi bentuk aktif dari spironolakton sebagai antagonis aldosteron.

pembentukan canrenone, bagaimanapun, tidak bisa sepenuhnya menjelaskan

aktivitas total spironolakton. Baik canrenone dan kalium canrenoate digunakan

sebagai diuretik di negara lain, namun belum tersedia di AS. (Lemke, Thomas L

et al)

Pengujian kadar dengan KCKT menurut USP :

Fase gerak : Campuran methanol : air (60:40)

Larutan standar : dilarutkan dengan asetonitril:air (50:50) secara

kuantitatif hingga didapat 0,5 mg/ml

Detektor : 250 nm

Laju alir : 1 ml/ menit

Tailing factor : Tidak lebih dari 20

Standart Deviation : Tidak lebih dari 1,5%

14


2.6 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis

dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah bidang antara

lain; farmasi, lingkungan dan industri-industri makanan. Kegunaan umum KCKT

adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa

biologis, analisis ketidakmurnian (impurities) dan analisis senyawa-senyawa

yang tidak mudah menguap (non volatil).

KCKT paling sering digunakan untuk: menetapkan kadar senyawa-senyawa

tertentu seperti asam-asam amino, asam-asam nukleat dan protein- protein dalam

cairan fisiologis, menentukan kadar senyawa -senyawa aktif obat dan lain-lain.

Kelebihan KCKT antara lain:

Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran

Resolusinya baik

Mudah melaksanakannya

Kecepatan analisis dan kepekaannya tinggi

Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang

dianalisis

Dapat digunakan bermacam-macam detector

Kolom dapat digunakan kembali

Mudah melakukan rekoveri cuplikan

Tekniknya tidak begitu tergantung pada keahlian operator dan

reprodusibilitasnya lebih baik

Instrumennya memungkinan untuk bekerja secara otomatis dan

kuantitatif

Waktu analisis umumnya singkat

Kromatografi cair preparatif memungkinkan dalam skala besar

Ideal untuk molekul besar dan ion.

Keterbatasan metode KCKT adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali

jika KCKT dihubungkan dengan spektrometer massa (MS). Keterbatasan lainnya

adalah jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit diperoleh.

(Munson, 2000)

15


A. Cara Kerja KCKT

Kromatografi merupakan teknik yang mana solut atau zat-zat terlarut terpisah

oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan solut-solut ini melewati suatu kolom

kromatografi. Pemisahan solut-solut ini diatur oleh distribusi dalam fase gerak

dan fase diam. Penggunaan kromatografi cair membutuhkan penggabungan

secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis kolom, fase

gerak, panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fase gerak, suhu kolom, dan

ukuran sampel. (Rohman, 2007)

B. Komponen KCKT

Gambar 2.5. Instrumen KCKT

a. Wadah Fase Gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong

ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak.

Wadah ini biasanya dapat meampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter

pelarut. Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing

(penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan

berkumpul dengan komponen lain terutama dipompa dan detektor

sehingga akan mengacaukan analisis. (Rohman, 2007)

b. Pompa

Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang

mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni : pompa harus

inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah

gelas, baja tahan karat, teflon, dan batu nilam. Pompa yang digunakan

sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu

16


mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 ml/menit. Untuk tujuan

preparatif, pompa yang digunakan harus mampu mengalirkan fase gerak

dengan kecepatan 20 mL/ menit. (Rohman, 2007)

c. Injektor

Ada 3 jenis injektor, yakni syringe injector, loop valve dan automatic

injector (autosampler). Syringe injector merupakan bentuk injektor yang

paling sederhana. Pada waktu sampel diinjeksikan ke dalam kolom,

diharapkan agar aliran pelarut tidak mengganggu masuknya keseluruhan

sampel ke dalam kolom. Sampel dapat langsung diinjeksikan ke dalam

kolom (on column injection) atau digunakan katup injeksi. (Adnan, 1997;

Meyer, 2004)

d. Kolom

Kolom merupakan jantung kromatografi. Keberhasilan atau kegagalan

analisis bergantung pada pemilihan kolom dan kondisi kerja yang tepat.

Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok :

Kolom analitik : garis tengah dalam 2 – 6 nm. Panjang bergantung

pada jenis kemasan,untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50

– 100 cm. Untuk kemasan mikropartikel berpori, biasanya 10 – 30cm;

Kolom preparatif : umumnya bergaris tengah 6 mm atau lebih besar

dan panjang kolom 25 – 100 cm. Kolom umumnya dibuat dari

stainless steel dan biasanya dioperasikan pada temperatur kamar,

tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi, terutama untuk

kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Kemasan kolom

tergantung pada mode KCKT yang digunakan. (Johnson, 1991)

e. Detektor

Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen cuplikan

dalam aliran yang keluar dari kolom. Detektor-detektor yang baik

memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar

respons linier yang luas, dan memberi tanggapan/respon untuk semua tipe

senyawa. Suatu kepekaan yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi

temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh.

17


f. Fase Gerak

Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat

bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan

resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan

pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel Dalam

kromatografi cair komposisi pelarut atau fase gerak adalah satu variabel

yang mempengaruhi pemisahan.(Johnson, 1991).

Gelembung udara (degassing) yang ada harus dihilangkan dari pelarut,

karena udara yang terlarut keluar melewati detektor dapat menghasilkan

banyak noise sehingga data tidak dapat digunakan (Johnson, 1991).

C. Validasi

Validasi adalah suatu tindakan terhadap parameter tertentu pada prosedur

penetapan yang dipakai untuk membuktikan bahwa parameter tersebut

memenuhi persyaratan untuk penggunaannya. Parameter analisis yang

ditentukan pada uji kesesuaian system adalah akurasi, presisi, batas

deteksi, batas kuantitasi, spesifikasi, linieritas dan rentang, kekasaran

(Ruggedness) dan ketahanan (Robutness). (WHO, 1992)

a. Presisi

Merupakan ukuran keterulangan metode analisis dan biasanya

diekspresikan sebagai relatif standar deviasi (RSD) dari sejumlah

sampel yang berbeda secara signifikan secara statistik.

b. Batas deteksi (limit of detection, LOD)

Didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang

masih dapat terdeteksi.

c. Batas kuantitasi (limit of quantitation, LOQ)

Didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang

dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada

kondisi operasional metode yang digunakan.

d. Linieritas

Merupakan kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil hasil

uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada

kisaran yang diberikan (Rohman, 2007).


BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Tempat dan Waktu Penelitian

Tempat Penelitian :

Penelitian dilakukan di laboratorium Pharmacy Natural Analysis Kampus

FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

Waktu Penelitian :

Waktu Penelitian yaitu sekitar bulan November 2014 – April 2015

3.2. Alat dan Bahan

Alat yang diperlukan meliputi KCKT (Dionex Ultimate 3000) yang terdiri

dari pompa, autosampler, kolom, detector DAD (Diode Array Detector) dan

program komputer PC (Chromaleon) sebagai instrumental uji utama.

Spektrofotometer Uv-Visible (Hitachi u-2910), Ultrasonikator (Branson 5510),

pH Meter (Horiba), dan magnetic Stirer. Neraca digital, mikropipet, syringe filter,

peralatan gelas dan spuit.

Bahan yang diperlukan meliputi bahan Uji utama yaitu tablet spironolakton

dengan merek letonal (mengandung Spironolakton 25 mg). spironolakton standar

(Sigma-Aldirch) Aquabidest (Wida) Dan metanol Grade KCKT (Merck) Untuk

pengujian pH menggunakan larutan dapar yang dibuat dari KH2PO4 dan K2HPO4.

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1. Pembuatan Fase Gerak

Fase gerak digunakan dari campuran methanol : Air 60: 40 yang

merupakan fase gerak untuk pengujian spironolakton menurut USP.

Pembuatan fase gerak ini adalah dengan cara mencampurkan methanol

Grade KCKT dan Aquabidest dengan perbandingan 60:40 secara

kuantitatif. Kemudian disaring dan dilakukan proses penghilangan

gelembung dengan cara sonikasi.

3.3.2. Preparasi Standar

Serbuk murni spironolakton ditimbang dengan seksama 50 mg lalu

dilarutkan dengan 50 ml methanol hingga larut sempurna hingga

diperoleh konsentrasi 1000 ppm.

19


3.3.3. Optimasi dan Validasi

Optimasi dan validasi yang dilakukan yaitu meliputi penentuan panjang

gelombang maksimum, uji presisi, akurasi, LOD, LOQ dan kurva

kalibrasi larutan standar.

A. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

Penentuan panjang gelombang maksimum untuk spironolakton

menggunakan spetrofotometer UV-Vis. Pengujian ini dengan

mengencerkan larutan induk standar hingga konsentrasi 10 ppm. Larutan

tersebut kemudian diuji serapannya dengan rentang panjang gelombang

200- 400 nm. dan dicatat nilai serapan dan panjang gelombang

maksimumnya.

B. Uji Kesesuaian Sistem

Optimasi alat dilakukan sesuai dengan Farmakope Indonesia yatu dengan

menggunakan 1 konsentrasi larutan standar yang diencerkan hingga

diperoleh konsentrasi 100 ppm yang diinjeksikan sebanyak 6 kali yang

dideteksi dengan menggunakan panjang gelombang maksimum.

C. Pembuatan kurva kalibrasi

Kurva kalibrasi spironolakton dibuat dengan menggunakan rentang

konsentrasi spironolakton 25, 50, 75, 100, 125 dan 150 ppm yang dibuat

dengan cara mengencerkan larutan standar. Masing-masing konsentrasi

diinjeksikan sebanyak 50µl duplo dengan pengujian menggunakan

panjang gelombang maksimum. Dan akan didapatkan nilai absorbansi dan

dibuat dalam bentuk kurva yang linear. Serta dapat dihitung nilai LOD dan

LOQ.

D. Uji Akurasi

Pengujian akurasi dengan menggunakan 3 konsentrasi larutan standar yang

dapat mewakili konsentrasi sampel uji. Konsentrasi sampel uji adalah 100

ppm sehingga konsentrasi 100 ppm ini dianggap sebagai nilai persentanse

100%. maka konsentrasi yang digunakan pada pengujian ini adalah 120,

100 ppm dan 80 ppm yang mewakili nilai persentase 120%, 100%, dan

80%. Larutan standar yang diencerkan hingga diperoleh konsentrasi

tersebut tiap seri konsentrasi diinjeksikan sebanyak 3 kali yang dideteksi

20


dengan menggunakan panjang gelombang maksimum dan dibandingkan

hasil pembacaan nilai konsentrasi oleh KCKT dengan nilai konsentrasi

yang dibuat. Pada pengujian ini akan didapatkan nilai persentase perolehan

kembali (recovery) dengan range 95%-105%, dan persentase differensiasi.

E. Uji Presisi

Uji presisi dilakukan dengan menginjeksikan larutan standar yang dibuat

hingga diperoleh konsentrasi 120, 100 dan 80 ppm sebanyak 3 kali.

Pengujian ini dilakukan secara intraday dalam saat 0 jam, 9 jam dan 24

jam. Dan pengujian interday yaitu hari pertama (0 jam) dan hari kedua (48

jam). Lalu dihitung nilai SD dan Persentase RSD dengan batasan nilai

RSD ≤ 2.

3.3.4. Preparasi dan Pengujian Sampel

a. Pembuatan Dapar (Europe Pharmacopeia)

1. Dapar pH 3 dibuat dengan KH2PO4 0,34 gr yang dilarutkan ke dalam

40 ml aquabiset. Kemudian di cek dengan pH meter, kemudian

diadjust dengan menggunakan asam ortofosfat hingga ph 3.

Kemudian dicukupkan dengan aquabidest hingga 50 ml.

2. Dapar pH 9 dibuat dengan K2HPO4 0,34 gr yang dilarutkan ke dalam

40 ml aquabiset. Kemudian di cek dengan pH meter, kemudian

diadjust dengan menggunakan NaOH hingga ph 9. Kemudian

dicukupkan dengan aquabidest hingga 50 ml.

b. Penyiapan Sampel

Tablet uji sebanyak 20 tablet digerus dan kemudian ditimbang setara.

Kemudian masing- masing dilarutkan dalam 30 ml aquadest. Lalu

ditambahkan larutan dapar hingga pH sediaan diperoleh masing-masing

sampel adalah 3, 5, 7 dan 9. Kemudian masing-masing dicukupkan

dengan aquadest hingga volume 50 ml. masing-masing sampel kemudian

diberi perlakuan yaitu didiamkan dalam rentang waktu yang dibedakan

yaitu 0 menit, 15 menit, 30 menit, 45 menit dan 60 menit dan disonikasi

selama 1 menit pada setiap rentang waktu pengambilan cuplikan.

21


c. Pengujian Sampel

Cuplikan yang telah diambil diencerkan dengan metanol dan diajust

dengan dapar fosfat untuk menyamakan pH sampel dengan pH optimum

spironolakton yaitu pH 4.5. Sampel diencerkan hingga diperoleh

konsentrasi 100 ppm. Sampel uji divortex selama 5 menit. Kemudian

disentrifuge selama 5 menit dengan kecepatan 5000 rpm dengan suhu

25oC untuk mengendapkan eksipien tablet. Supernatant yang didapatkan

kemudian diambil dan disaring dengan menggunakan srynge filter

dengan bantuan spuit lalu dimasukkan kedalam tabung sampel uji

KCKT. Sampel uji lalu diinjeksikan sebanyak 50µl dengan waktu

running sampel selama 15 menit dengan kondisi maksimum

spironolakton.


BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

1. Persen kadar spironolakton dalam rentang waktu 0-60 menit pada pH 3

adalah 19%, 21%, 22%,27%,dan 40%. Pada pH 5 100%,88%,85%,74% dan

91%. Pada pH 7 61%,46%,38%,27%,dan 35%. Pada pH 9

54%,50%,41%,38%, dan 38%.

2. Kadar spironolakton pada pH 3, 7, dan 9 pada semua menit sudah tidak

dapat memenuhi syarat sesuai ketentuan kadar spironolakton dalam sediaan.

Sedangkan pada pH 5 pada menit ke-0 saja yang masih memenuhi syarat.

3. Dengan perubahan suasana pH semakin jauh dari pH optimum yaitu 4.5

baik asam maupun basa, semakin besar penurunan persentase kadar

spironolakton dalam sediaan suspensi sederhana.

5.2. Saran

1. Diperlukan pengujian dengan fase gerak yang berbeda agar dapat

memisahkan peak kromatogram yang berdempetan dengan peak

kromatogram sampel

2. Diperlukan pengujian mengenai hasil samping dari degradasi

spironolakton terhadap perubahan pH

35


DAFTAR PUSTAKA

Adnan, M, 1997, Teknik Kromatografi untuk Analisis Makanan, Penerbit Andi Alim,

Yogyakarta

Anonim, World Health Organizations, 1992

Anonim. Europe Pharmacopeia

Ansel H.C, 1994., Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, ed 4, Penerjemah Farida

Ibrahim, Universitas Indonesia Press, Jakarta, 155-164

Attwood D dam Florence, 2011, Physicochemical Principles of Pharmacy Ed.5,

Chapman and Hall Inc

Banker, Gilbert S and C T Rhodes, 2002, Modern Pharmaceutics: Fourth Edition,

Revised, and Expanded, Marcel Dekker, Inc, New York

Basusarkar, Arindam et al,2013, Chemical Stability of Compounded Spironolactone

Suspension in Proprietary Oral Mix Over a 90-day Period at Two Controlled

Temperatures in Different Storage Containers, Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res.,

23(1), Nov-Dec 2013, ISSN 0976044X

Bernal, Nora Provenza et al, 2014, Development, Physical-Chemical Stability, and

Release Studies of Four Alcohol-Free Spironolactone Suspensions for Use in

Pediatrics, dx.doi.org/10.14227/DT210114P19

Connor K.A, Amidan, Kennon L, 1994., Chemical Stability of Pharmaceuticals, John

Willey and Sons, New York, 8-17

David B. Troy,Paul Beringer, 2006, Remington's Pharmaceutical Sciences, 21th ed,

Lippincott Williams & Wilkins,

Departemen Kesehatan, 1995., Farmakope Indonesia, edisi IV, Direktorat Jenderal

Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta

Haywood, Alison and Beverley, Glass, 2013, Liquid Dosage Forms Extemporaneously

Prepared from Commercially Available Products- Considering New Evidence

on Stability, J Pharm Sci 441- 455

Johnson, E L dan Stevenson, 1991, DASAR KROMATOGRAFI CAIR, Penerjemah:

Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB

Kher, Govind et al, 2013, Development and Validation of a HPTLC Method for

Simultaneous Determination of Furosemide and Spironolactons in Its Tablets

Formulation, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical

Sciences, ISSN: 0975-8585

35


Lachman, L., Lieberman, H. A., Kanig, J. L., 2007, Teori dan Praktek Farmasi Industri,

Edisi ketiga, diterjemahkan oleh: Suyatmi, S., Penerbit Universitas Indonesia,

Jakarta, 760-779, 1514 – 1587

Lee, David C, M L Webb, 2009, Pharmaceutical Analysis, Wiley

Lemke, Thomas L et al, Foye’s Principles of Medical Chemistry Sixth Edition, Wolters

Kluwer Health Lippincott Williams & Wilkins

Mahmoud, Ismail M et al, 2014, Extemporaneous Preparations of Pediatric Oral

Formulations: Stability Studies Conducted In Spironolactone Suspensions,

Powders and Capsules in Saudi Hospital Pharmacies, Journal of Global Trends

in Pharmaceutical Sciences Vol. 5 Issue-2, ISSN: 2230-7346

Meyer. V R, 2004, Practical High-Performance Liquid Chromatography, Chichester:

John Wiley and Sons Inc

Min Li, 2012, Organic Chemistry of Drug Degradation, The Royal Society of

Chemistry, Cambridge

Munson J W, 2000, Analisa Farmasi Metode Modern, The Upjohn Company

Kalamazoo, Michigan

Niazi, Sarfaraz, 2006, Handbook of Preformulation: Chemical, Biological, and

Botanical Drugs, Informa Healthcare USA Inc, New York

Pramar, Yasoda and V, D. Gupta, 1990, Preformulation Studies of Spironolactone :

Effect of pH, Two Buffer Species, Ionic Strength, and Temperature on Stability,

Departemen of Pharmaceutics, University of Houston, TX 77030

Rohman, Abdul, 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogjakarta

The United States pharmacopoeia, 1990, 22nd., United States Pharmacopoeia

Convention, Twin Brook Parkway, Rockville, 1226-1228, 1703

W. Sadee,U.Abshagen, C. Finn, and N. Rietbrock, 1974, Conversion of Spironolactone

to Canrenone and Disposition Kinetics of Spironolactone and Canrenoate-

Potassium in Rats, Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol. 283, 303-318

Yoshioka, Sumie and Stella, Valentino J, 2000, Stability of Drugs and Dosage Forms,

Library of Congress Cataloging in Publication Data

LAMPIRAN

37


Lampiran 1. Alur Kerja

Optimasi HPLC

Penentuan

fase gerak

Penentuan

ʎmax

Uji

Kesesuaian

sistem

Pembuatan

Kurva

kalibrasi

Optimasi , uji

akurasi dan

presisi

Persiapan Sampel Spironolakton

tablet yang disuspensikan

Diberi dapar

hingga pH 3

Diberi dapar

hingga pH 5

Diberi dapar

hingga pH 7

Diberi dapar

hingga pH 9

didiamkan dalam rentang waktu yang dibedakan yaitu 0

menit, 15 menit, 30 menit, 45 menit dan 60 menit dan

disonikasi selama 1 menit pada setiap rentang waktu.

Analisa

degradasi kadar

dengan KCKT

Presentase

Degradasi

38


Lampiran 2. Sertifikat Spironolakton Standar Sigma

39


Lampiran 3. Scanning Panjang Gelombang Maksimum Spironolakton

40


Lampiran 4. Perhitungan Persiapan Kurva Kalibrasi

Massa Spironolakton standar : 50 mg

Dilarutkan dalam 50 ml methanol

= 1000µg/ml~ 1000 ppm

Diencerkan dalam labu ukur 5 ml

Seri Konsentrasi 25, 50, 75, 100, 125, 150 ppm

Pembuatan larutan konsentrasi 25 ppm

M1V1 = M2V2

1000V1 = 25.5

V1 = 0,125ml ~ 125µl


M1V1 = M2V2

1000V1 = 50.5

V1 = 0,25ml ~ 250µl


M1V1 = M2V2

1000V1 = 75.5

V1 = 0,375ml ~ 375µl


M1V1 = M2V2

1000V1 = 100.5

V1 = 0,5ml ~ 500µl

41



M1V1 = M2V2

1000V1 = 125.5

V1 = 0,625ml ~ 625µl


M1V1 = M2V2

1000V1 = 150.5

V1 = 0,750ml ~ 750µl

42


Lampiran 5. Kromatogram Larutan Standar dan Tablet

Kromatogram Larutan Standar

Kromatogram Tablet

43


Lampiran 6. Kromatogram Kalibrasi

44


Lampiran 7. Kurva Dan Tabel Kalibrasi

Keterangan :

a = 2,5175

b = 1,7856

R2 = 0.9998

konsentrasi (ppm)

x

Luas Area (MaU)

y

25 47.2483

50 91.3069

75 138.0929

100 179.1573

125 226.1239

150 270.6301

LOD 1.542

LOQ 4.672

y = 1.7856x + 2.5175 R² = 0.9998

0

50

100

150

200

250

300

0 50 100 150 200

Luas

Are

a (M

aU)

Konsentrasi

KURVA KALIBRASI

45


Lampiran 8. Hasil Kromatogram Uji Kesesuaian Sistem

46


Lampiran 9. Hasil Uji Kesesuaian Sistem

Parameter Syarat Hasil Rata-rata Keterangan

RSD Peak Waktu retensi <2

0.039

0.032

0.069

0.118

0.126

0

0.064 √

Theoritical plates (USP) ≥2500

2729

2456

2785

2724

2455

2456

2560 √

Peak Asymetry ≤5

0.948

0.915

0.952

0.913

0.841

0.799

0.871 √

RSD Peak Area ≤2

0.39

0.278

0.228

0.198

0.208

0.372

0.279 √

47


Lampiran 10. Hasil Uji Akurasi

konsentrasi

(ppm) absorbansi

hasil analisis

absorbansi hasil

sesungguhnya

No x A B %diff %recovery

1 80 137.7063 145 -5.2689 94.7311

2 80 137.0563 145 -5.7161 94.2839

3 80 135.9134 145 -6.5023 93.4977

4 80 141.6781 145 -2.5366 97.4634

5 80 137.9539 145 -5.0986 94.9014

rata-rata 138.0616 145.3655 -5.0245 94.9755


1 100 188.6883 181.0775 4.2031 104.2031

2 100 183.0111 181.0775 1.0678 101.0678

3 100 188.0929 181.0775 3.8743 103.8743

4 100 188.8325 181.0775 4.2827 104.2827

5 100 189.8036 181.0775 4.8190 104.8190

rata-rata 187.68568 181.0775 3.6494 103.6494


1 120 217.489 216.7895 0.3227 100.3227

2 120 218.6431 216.7895 0.8550 100.8550

3 120 215.5631 216.7895 -0.5657 99.4343

4 120 217.9314 216.7895 0.5267 100.5267

5 120 215.6712 216.7895 -0.5158 99.4842

rata-rata 217.05956 216.7895 0.1246 100.1246

48


Lampiran 11. Hasil Uji Presisi

Kons Jam ke- Hasil

Abs

(x-x)2

Rata-Rata

Abs SD RSD

80

0

137.7063

137.0563

135.9134

141.6781

137.9539

0.1262

1.0106

4.6148

13.0791

0.0116

138.0616 2.5052 1.8145

9

137.9379

137.2315

141.4005

141.5838

139.4135

2.4823

5.2073

3.5610

4.2864

0.0100

139.51344 2.2756 1.6308

24

138.4703

142.7564

141.6631

143.8523

146.8282

18.0095

0.0018

1.1045

1.2956

16.9261

142.71406 2.3223 1.6391

48

138.7054

143.2192

139.2323

141.2514

144.1854

6.8295

3.6117

4.3532

0.0045

8.2177

141.31874 2.0611 1.4659

100

0

188.6883

183.0111

188.0929

188.8325

189.8036

1.0052

21.8517

0.1658

1.3152

4.4856

187.68568 2.7819 1.4822

9

190.3298

188.5502

187.6504

188.3746

191.7323

1.0047

0.6041

2.8125

0.9079

5.7833

189.32746 1.1378 0.6029

24

190.3298

188.5502

187.6504

188.3746

205.5035

3.0692

12.4715

19.6364

13.7426

180.1447

192.0817 1.1378 0.6029

48

190.0256

190.8484

190.5707

189.3587

235.3967

84.9055

70.4193

75.1571

97.6405

1307.3055

199.24002 0.6573 0.3456

49


120

0

217.489

218.6431

215.5631

217.9314

215.6712

0.1844

2.5076

2.2394

0.7601

1.9275

217.05956 1.3178 0.6061

9

217.9159

218.9111

216.7765

217.4779

216.0077

0.2481

2.2299

0.4113

0.0036

1.9884

217.41782 0.8936 0.4104

24

217.593

218.11

217.2847

220.2309

216.2503

0.0905

0.0468

0.3710

5.4621

2.7010

217.89378 1.3285 0.6086

48

217.7155

216.1244

216.9025

216.8165

221.8138

0.0253

3.0630

0.9449

1.1194

15.5178

217.87454 0.6514 0.3004

50


Lampiran 12. Perhitungan Preparasi Sampel dan Perhitungan Luas Area secara

Manual

Berat total sampel : 25 mg Spironolakton

Volume Suspensi : 50 ml aquadest

= 500µg/ml~ 500 ppm

Pengenceran 100 ppm, konsentrasi yang diinjekkan ke dalam KCKT

Diambil cuplikan 300 µl dan dicukupkan dengan methanol-dapar hingga 1500 µl

M1V1 = M2V2

500V1 = 100.1500

V1 = 300 µl

Rumus perhitungan Luas Area (mAu) secara manual

x

= mAu

Rumus Perhitungan Konsentrasi Akhir Spironolakton

y = 1.7856x + 2.5175

diketahui :

y = Luas Area

x = Konsentrasi Spironolakton

Rumus Perhitungan Persentase Kadar

x 100%

51


Lampiran 13. Hasil Kromatogram pH 3

52


Lampiran 14. Hasil dan Kurva pH 3

Waktu Area / SD

Konsentrasi

Awal (ppm)

Konsentrasi

Akhir (ppm)

Persen Kadar (%)

0 36.30697 / 2.76 100 18.92331 19

15 40.24055 / 2.04 100 21.12626 21

30 42.4618 / 2.32 100 22.37024 22

45 50.07035 / 0.033 100 26.6313 27

60 73.4604 / 1.81 100 39.73057 40

PH 3

53



54



Waktu Area / SD

Konsentrasi

Awal (ppm)

Konsentrasi Akhir

(ppm)

Persen Kadar

(%)

0 181.6558 / 3.23 100 100.3284 100

15 159.02 / 2.22 100 87.647 88

30 154.596 / 2.49 100 85.16941 85

45 135.2707 / 0.90 100 74.34653 74

60 164.145 / 0.58 100 90.51719 91

PH 5

55



56



Waktu Area / SD

Konsentrasi

Awal (ppm)

Konsentrasi Akhir

(ppm)

Persen Kadar

(%)

0 110.9063 / 4.46 100 60.70258 61

15 83.81825 / 2.02 100 45.53133 46

30 115.9023 / 0.62 100 38.46485 38

45 202.6765 / 0.17 100 26.96664 27

60 262.6525 / 1.17 100 35.36381 35

PH 7

57



58



Waktu Area / SD

Konsentrasi

Awal (ppm)

Konsentrasi

Akhir (ppm)

Persen Kadar

(%)

0 98.4725 / 1.12 100 53.73824 54

15 90.92292 / 0.21 100 49.5102 50

30 76.1625 / 0.22 100 41.24384 41

45 70.68675 / 1.11 100 38.17722 38

60 70.305 / 1.28 100 37.96343 38

Ph 9

59


0.0000

20.0000

40.0000

60.0000

80.0000

100.0000

120.0000

0 10 20 30 40 50 60 70

kon

sen

tras

i

Waktu

ph 3

ph 5

ph 7

ph 9

Lampiran 21. Kurva Perbandingan Konsentrasi dengan perbedaan pH akhir

sediaan terhadap Waktu

60


Lampiran 22. Hasil Uji Statistik ANOVA, Normalitas dan Homogenitas

Tabel Analisa Statistik Uji Normalitas

PH

Shapiro-Wilk

Statistic df Sig.

KONSENTRASI PH 3 .834 5 .148

PH 5 .978 5 .925

PH 7 .962 5 .824

PH 9 .861 5 .231

Tabel Analisa Statistik Uji Homogenitas

Levene Statistic df1 df2 Sig.

.455 3 16 .717

Tabel Uji Statistik ANOVA

Between Groups 10548.462 3 3516.154 38.172 .000

Within Groups 1473.812 16 92.113

Total 12022.273 19

Tabel Uji Statistik LSD

(I) PH (J) PH Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

PH 3 PH 5 -6.184537000E1

*

6.070032161E0

.000 -7.47132633E1 -4.89774767E1

PH 7 -1.564950600E1

*

6.070032161E0

.020 -2.85173993E1 -2.78161265

PH 9 -1.837025000E1

*

6.070032161E0

.008 -3.12381433E1 -5.50235665

PH 5 PH 3 6.184537000E1

*

6.070032161E0

.000 48.97747665 74.71326335

PH 7 4.619586400E1

*

6.070032161E0

.000 33.32797065 59.06375735

PH 9 4.347512000E1

*

6.070032161E0

.000 30.60722665 56.34301335

PH 7 PH 3 1.564950600E1

*

6.070032161E0

.020 2.78161265 28.51739935

PH 5 -4.619586400E1

*

6.070032161E0

.000 -5.90637573E1 -3.33279707E1

PH 9 -2.720744000

6.070032161E0

.660 -1.55886373E1 10.14714935

PH 9 PH 3 1.837025000E1

*

6.070032161E0

.008 5.50235665 31.23814335

PH 5 -4.347512000E1

*

6.070032161E0

.000 -5.63430133E1 -3.06072267E1

PH 7 2.720744000

6.070032161E0

.660 -1.01471493E1 15.58863735

UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP …

Documents

Transcript of UJI STABILITAS OBAT SPIRONOLAKTON TERHADAP …