UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

38
UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA GLUKOSIDASE EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) SKRIPSI Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Katarina Agnes F. B. Langkeru NIM : 168114007 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2021 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Transcript of UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

Page 1: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA GLUKOSIDASE

EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO

(Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.)

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Katarina Agnes F. B. Langkeru

NIM : 168114007

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2021

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 2: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Jiwaku memuliakan Tuhan, dan hatiku bergembira karena Allah,

Juruselamatku, sebab Ia telah memperhatikan

kerendahan hamba-Nya.

Luk. 1:46-48

Skripsi ini saya persembahkan untuk Yesus Sang Sumber Hidup serta Maria

Bunda penolong selalu; Bapak Alexander Langkeru, Mama Anastasia Lazar,

Kakak Yance Langkeru, segenap keluarga besar, teman-teman;

serta almamater tercinta Universitas Sanata Dharma

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 3: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN ...................................................... vi

PRAKATA ............................................................................................................ vii

DAFTAR ISI ........................................................................................................... x

DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiv

ABSTRAK ............................................................................................................ xv

ABSTRACT ......................................................................................................... xvi

PENDAHULUAN .................................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ........................................................................................ 2

Bahan Penelitian .................................................................................................. 2

Alat Penelitian ..................................................................................................... 3

Tata Cara Penelitian ............................................................................................ 3

Pengumpulan bahan dan Identifikasi serbuk simplisia ....................................... 3

Penentuan kadar air serbuk simplisia .................................................................. 3

Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sambiloto ....................................................... 4

Uji kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis .................................................. 4

Uji kualitatif dengan reaksi warna ....................................................................... 5

Uji penghambatan alfa-glukosidase secara in vitro ............................................. 5

Analisis Hasil ...................................................................................................... 8

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 9

Identifikasi serbuk simplisia daun sambiloto ...................................................... 9

Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto ....................................... 10

Ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto ....................................................... 10

Uji kualitatif andrografolid ................................................................................ 11

Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ........................................................ 15

KESIMPULAN ..................................................................................................... 24

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 4: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xi

SARAN ................................................................................................................. 24

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 25

LAMPIRAN .......................................................................................................... 28

BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 29

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 5: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Perhitungan nilai Rf ................................................................................. 13

Tabel II. Perbandingan IC50 acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto .......... 21

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 6: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol daun sambiloto setelah dielusi ................... 12

Gambar 2. Uji reaksi warna senyawa terpenoid.................................................... 15

Gambar 3. Reaksi DNS dengan gula pereduksi .................................................... 16

Gambar 4. Kurva hubungan konsentrasi acarbose dengan persen inhibisi enzim

alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3 ............................................. 18

Gambar 5. Kurva hubungan konsentrasi ekstrak etanol daun sambiloto dengan

persen inhibisi enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3 .......... 19

Gambar 6. Struktur Andrografolid ........................................................................ 20

Gambar 7. Perbandingan % penghambatan acarbose dan ekstrak etanol daun

sambiloto ............................................................................................................... 20

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 7: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Keterangan Identifikasi Serbuk Simplisia Daun Sambiloto.... 26

Lampiran 2. Certificate Of Analysis 3,5- Dinitrosalysilic acid (Sigma Aldrich) . 27

Lampiran 3. Serbuk Simplisia Daun Sambiloto dan Ekstrak Etanol Daun

Sambiloto ................................................................................................................... 28

Lampiran 4. Uji Kadar Air Serbuk Simplisia Daun Sambiloto .............................. 29

Lampiran 5.Data Penimbangan dan Perolehan Rendemen Ekstrak Etanol Daun

Sambiloto ................................................................................................................... 30

Lampiran 6. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum dan Waktu Optimasi ... 31

Lampiran 7. Data perhitungan % Inhibisi dan IC50 Acarbose dan Ekstrak Etanol

Daun Sambiloto ......................................................................................................... 31

Lampiran 8. Uji normalitas Shapiro-wilk ................................................................ 33

Lampiran 9. Uji T tidak berpasangan ....................................................................... 33

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 8: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xv

ABSTRAK

Diabetes melitus adalah sekelompok gangguan metabolik kronis yang

ditandai dengan kondisi hiperglikemia karena kerusakan pada produksi insulin,

kerja insulin, dan atau keduanya. Acarbose merupakan salah satu terapi antidiabetes

yang bekerja dengan cara menghambat aktivitas enzim alfa-glukosidase di dalam

usus sehingga konsentrasi puncak glukosa darah postprandial berkurang dan kadar

gula darah terkendali. Penggunaan obat acarbose dalam jangka waktu panjang dapat

memberikan efek samping gangguan saluran pencernaan, sehingga penggunaan

obat bahan alam sebagai terapi alternatif dapat dipertimbangkan untuk digunakan.

Salah satu jenis obat herbal yang telah diteliti mampu menurunkan kadar glukosa

dalam darah adalah Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.).

Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas penghambatan enzim alfa-

glukosidase dari ekstrak etanol daun sambiloto dengan metode kolorimetri

menggunakan reagen asam 3,5-dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan

spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 536 nm. Berdasarkan data yang

telah diperoleh pada penelitian ini, ekstrak etanol daun sambiloto memiliki aktivitas

penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan nilai IC50 2,293 ± 0,050 mg/mL.

Acarbose sebagai kontrol positif memiliki nilai IC50 sebesar 2,187 ± 0,077 mg/mL.

Hasil uji statistik menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara nilai IC50

acarbose dengan ekstrak etanol daun sambiloto (P > 0,05).

Kata kunci : Sambiloto, alfa-glukosidase, ekstrak etanol, maserasi, IC50

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 9: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

xvi

ABSTRACT

Diabetes mellitus is a group of chronic metabolic disorders characterized by

hyperglycemia due to damage to insulin production, insulin action, or/and both.

Acarbose is an anti-diabetic therapy that works by inhibiting the activity of the en-

zyme alpha-glucosidase in the intestine so that the peak postprandial blood glucose

concentration decreasing and the blood sugar levels being controlled. The use of

long-term acarbose can provide side effects from the digestive tract, so the use of

natural medicines as alternative therapies can be used for substitute. One type of

herbal medicine that has been owned is capable of lowering blood sugar levels is

Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.). Data were obtained from

IC50 values of the ethanol extract of sambiloto against the alpha-glucosidase en-

zyme. This study aims to discuss the inhibitory activity of the alpha-glucosidase

enzyme from the ethanol extract of sambiloto leaves with colorimetry method using

a 3’,5-dinitrosalicylic acid (DNS) and measured by UV-Vis spectrophotometer at

a wavelength of 536 nm. Based on the data obtained in this study, the ethanol extract

of sambiloto leaves had the inhibitory activity of the alpha-glucosidase enzyme with

an IC50 value of 2,293 ± 0,050 mg / mL. Acarbose as a positive control had an

IC50 value of 2,187 ± 0,077 mg / mL. The results of statistical tests showed that

there was no significant difference between the IC50 value of acarbose and the eth-

anol extract of sambiloto leaves (P > 0,05).

Keywords: Sambiloto, alpha-glucosidase, ethanol extract, maceration, IC50

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 10: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

1

PENDAHULUAN

Diabetes merupakan salah satu masalah kesehatan yang cukup serius dan

sering dijumpai di dunia termasuk Indonesia. Berdasarkan data yang dihimpun dari

International Diabetes Federation (IDF) tahun 2017, prevalensi diabetes melitus

secara global terjadi sebanyak 425 juta kasus, terus mengalami peningkatan yang

signifikan hingga 48% dan diprediksi akan mencapai 629 juta kasus pada tahun

2045. Indonesia menempati urutan ke enam dalam sepuluh besar negara dengan

kasus diabetes tertinggi di dunia. Jumlah kasus yang tercatat pada tahun 2017

adalah 10,3 juta kasus dalam rentang usia 20-79 tahun, dan diperkirakan akan naik

hingga 16,7 juta kasus pada tahun 2045 (International Diabetes Federation, 2017).

Diabetes melitus merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan

karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja

insulin atau kedua-duanya. Berdasarkan klasifikasi etiologis, diabetes melitus

dibagi menjadi diabetes melitus tipe I, diabetes melitus tipe II, diabetes gestasional,

dan diabetes tipe lain (PERKENI, 2015). Sebanyak 90% kasus diabetes melitus

yang terjadi adalah diabetes melitus tipe II (DiPiro J.T., Wells B.G., 2015).

Enzim alfa-glukosidase merupakan enzim di saluran pencernaan yang

mempunyai peran dalam penyerapan karbohidrat, yakni memecah polisakarida

menjadi monosakarida yang kemudian diserap oleh usus dan berakibat

meningkatkan glukosa darah setelah makan. Pada orang yang mengalami diabetes

melitus, obat inhibitor alfa-glukosidase bekerja dengan memperlambat absorbsi

glukosa dalam usus halus, sehingga mempunyai efek menurunkan kadar glukosa

darah sesudah makan (PERKENI, 2015).

Penggunaan tanaman herbal untuk tujuan pengobatan ataupun tujuan

lainnya cenderung meningkat didukung dengan era back to nature (Hasanuddin dan

Kusyanti, 2016). Beberapa obat inhibitor alfa-glukosidase seperti acarbose dan

voglibose yang awalnya diperoleh dari sumber alami melalui fermentasi, dapat

secara efektif mengontrol kadar glukosa darah setelah asupan makanan dan telah

digunakan secara klinis dalam pengobatan diabetes melitus (Nyemb et al., 2018;

Pujirahayu et al., 2019). Akan tetapi, obat ini secara klinis dapat memberikan efek

samping gangguan gastrointestinal seperti perut kembung dan nyeri, mual, reaksi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 11: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

2

kulit, abnormalitas fungsi hati, dan kemungkinan diare sehingga penggunaan obat

bahan alam pada saat ini sebagai terapi alternatif lebih dipertimbangkan karena

potensi dan minimalnya efek samping yang diberikan (Yin et al., 2014; Pujirahayu

et al., 2019). Pengobatan DM secara tradisional biasanya dengan memanfaatkan

berbagai jenis tanaman obat yang memiliki kandungan bahan aktif yang dapat

menurunkan kadar gula darah.

Sambiloto (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees.) adalah salah satu jenis

obat herbal yang telah diteliti mampu menurunkan kadar glukosa dalam darah.

Sambiloto memiliki kandungan kimia diterpen lakton dengan komponen utama

andrografolid, neoandrografolid dan deoksiandrografolid (BPOM RI, 2004).

Beberapa pengujian terkait potensi sambiloto dalam aktivitasnya sebagai

antidiabetes telah diteliti, seperti pada penelitian yang dilakukan oleh Hossain et

al. (2007), ekstrak air dan ekstrak etanol herba sambiloto terbukti mampu

menunjukkan efek penurunan gula darah yang signifikan pada tikus diabetes

terinduksi glukosa dan aloksan. Andrografolid dalam ekstrak etanol herba

sambiloto yang diteliti berperan dalam perbaikan sel-sel β-insulin Langerhans dan

meningkatkan sekresi insulin. Sedangkan pada penelitian yang dilakukan oleh

Sukmawati et al. (2016), kombinasi ekstrak etanol daun sambiloto 234 mg/kgBB

dengan acarbose 2,05 mg/kgBB efektif dalam menurunkan kadar glukosa darah

tikus terinduksi aloksan.

Pengujian aktivitas enzim alfa-glukosidase terhadap tanaman sambiloto masih

tergolong sedikit, sehingga dari beberapa uraian di atas peneliti ingin melakukan

penelitian lebih lanjut terkait potensi daun sambiloto terhadap aktivitas

penghambatan enzim alfa-glukosidase. Penelitian dilakukan secara in vitro dengan

sampel serbuk simplisia daun sambiloto yang diperoleh dari PT. HRL Internasional

Jawa Timur dengan metode kolorimetri menggunakan reagen asam 3,5-

dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis.

METODE PENELITIAN

Bahan Penelitian

Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk simplisia daun

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 12: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

3

sambiloto yang diperoleh dari PT. HRL Internasional Gresik, Jawa Timur. Bahan

lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah enzim alfa-glukosidase (Sigma

Aldrich), acarbose (PT. Dexa Medica), Reagen Liebermann-burchard, aquadest,

DMSO, etanol p.a, kloroform p.a, maltosa, metanol p.a., reagen DNS, plat KLT gel

60 F254, toluen p.a.

Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometer UV-Vis

(UVmini-1240 Shimadzu), Vacuum Rotary Evaporator (Buchi), pH meter, neraca

analitik, waterbath, shaker (Innova 2100), vortex, corong pisah, gelas beaker,

erlenmeyer, tabung reaksi, pipet volume, labu alas bulat, pipet tetes, batang

pengaduk, penjepit kayu, cawan porselen.

Tata Cara Penelitian

Pengumpulan bahan dan Identifikasi serbuk simplisia

Bahan uji berupa serbuk simplisia daun sambiloto diperoleh dari PT. HRL

Internasional Gresik, Jawa Timur. Identifikasi serbuk simplisia dilakukan di

Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada,

Yogyakarta.

Penentuan kadar air serbuk simplisia

Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto mengacu pada Farmakope

Herbal Indonesia (2017) menggunakan metode destilasi toluen. Tahap awal

dilakukan dengan membuat pereaksi toluen jenuh air. Pereaksi toluen jenuh air

dibuat dengan cara mencampur toluen P sebanyak 200 mL ke dalam corong pisah

dengan sedikit air, kemudian digojog dan dibiarkan memisah, lapisan air lalu

dibuang. Serbuk simplisia daun sambiloto sebanyak 10 gram ditimbang seksama,

dilarutkan ke dalam 200 mL toluen jenuh air kemudian dimasukkan ke dalam labu

alas bulat. Labu kemudian dipanaskan selama 15 menit sampai mendidih. Setelah

toluen mulai mendidih, penyulingan diatur dengan kecepatan lebih kurang 2 tetes

tiap detik, hingga sebagian besar air tersuling, kemudian kecepatan penyulingan

dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Penyulingan tetap dilanjutkan selama 5 menit.

Setelah selesai, labu dan rangkaian alat didinginkan hingga suhu ruang kemudian

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 13: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

4

dibersihkan. Volume air dibaca setelah air dan toluen memisah sempurna dan

dihitung kadar air dengan menggunakan rumus :

% kadar air = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑎𝑖𝑟 (𝑚𝐿)

𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) x 100 %

Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sambiloto

Pembuatan ekstraksi serbuk simplisia sambiloto dilakukan dengan metode maserasi.

Ekstraksi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut etanol

teknis 95% dengan perbandingan 1:10 w/v. Serbuk simplisia 10 gram ditimbang

seksama, dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian dilarutkan dengan 100 mL

pelarut etanol, lalu diaduk menggunakan shaker dengan kecepatan 200 rpm.

Ekstrak dibiarkan sampai 24 jam. Hasil maserat kemudian dipisahkan dengan cara

divakum menggunakan corong butchner yang sebelumnnya telah dilapisi kertas

saring Whatman no.1. Serbuk simplisia hasil maserasi yang telah terpisah

dimaserasi kembali dengan pelarut etanol yang baru (100 mL) dengan metode yang

sama. Proses maserasi diulangi 2x hingga didapatkan tiga kali hasil maserat. Semua

hasil maserat dikumpulkan dan diuapkan dengan menggunakan vacuum rotary

evaporator dengan suhu 60o C selama 15 menit hingga pekat. Setelah memekat,

ekstrak dikeluarkan dari labu penampung dan dituang ke dalam cawan porselen,

kemudian diuapkan lagi dengan menggunakan waterbath hingga diperoleh ekstrak

kental. Ekstrak yang didapatkan merupakan ekstrak kental dengan bobot tetap dan

sesuai dengan persyaratan (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik

Indonesia, 2010). Rendemen kemudian dihitung dengan menggunakan rumus :

% Rendemen = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑔)

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑖𝑚𝑏𝑎𝑛𝑔 (𝑔) x 100 %

Uji kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis

Pengujian secara kualitatif dengan KLT dilakukan dengan menyiapkan larutan uji

sambiloto 0,1 mg/mL dalam etanol dan pembanding androgafolid standar 0,1

mg/mL dalam etanol. Fase gerak yang digunakan adalah n-heksana : etil asetat

(1:2). Fase diam menggunakan plat KLT gel 60 F254. Volume penotolan larutan uji

sebanyak 20 μL dan larutan pembanding sebanyak 10 μL, kemudian bercak noda

diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Jarak tiap bercak dari

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 14: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

5

titik penotolan diukur, dihitung nilai Rf kemudian dibandingkan nilai Rf sampel

dengan nilai Rf andrografolid standar (Departemen Kesehatan RI, 2017).

Uji kualitatif dengan reaksi warna

Uji kualitatif dengan reaksi warna dilakukan dengan reagen Liebermann-Burchard.

Ekstrak sebanyak 100 mg ditimbang dan dilarutkan, kemudian dimasukkan ke

dalam tabung reaksi dan dilanjutkan dengan penambahan 3 mL reagen Liebermann-

Burchard ke dalam tabung. Terbentuk cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan

larutan menunjukkan adanya kandungan terpenoid (Illing et al., 2017).

Uji penghambatan alfa-glukosidase secara in vitro

Pengujian terhadap penghambatan enzim alfa-glukosidase mengacu pada penelitian

Subramanian et al. (2008) dan Rais et al. (2013) dengan modifikasi.

Preparasi larutan uji

Pembuatan larutan dapar fosfat pH 7 dibuat dengan menimbang sebanyak 3,4 g

KH2PO4 dan dilarutkan dalam 200 mL aquadest, ditambah dengan penambahan

NaOH sebanyak 0,59 g. pH larutan diukur hingga diperoleh pH 7, kemudian dit-

ambah aquadest hingga volume larutan menjadi 250 mL.

Pembuatan larutan enzim alfa-glukosidase dibuat dengan melarutkan 1,0 mg alfa-

glukosidase ke dalam 100 mL dapar fosfat (pH 7).

Pembuatan reagen DNS dilakukan dengan menimbang serbuk DNS sebanyak 500

mg dan dilarutkan dalam 10 mL NaOH 2M (0,8 g/10mL aquadest), ditambahkan

15 g Na K Tartrat sedikit demi sedikit hingga larut, kemudian ditambah aquadest

50 mL sampai larutan bening dan berwarna kuning kemerahan.

Pembuatan larutan stok sampel dilakukan dengan menimbang ekstrak 100 mg,

dilarutkan dalam pelarut DMSO (Dimethyl sulfoxide) hingga 10 mL, dan dilakukan

pembuatan seri konsentrasi hingga mendapatkan konsentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13;

dan 4,16 mg/mL.

Pembuatan larutan stok pembanding acarbose dilakukan dengan menimbang

ekstrak 100 mg, dilarutkan dalam pelarut DMSO (Dimethyl sulfoxide) hingga 10

mL, dan dilakukan pembuatan seri konsentrasi acarbose hingga mendapatkan kon-

sentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 15: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

6

Penentuan panjang gelombang maksimal

Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7

sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak konsentrasi terkecil (0,52 mg/mL) sebanyak

0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5

menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar

fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC.

Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10

menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan

Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm.

Penentuan Operating Time (OT)

Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7

sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak konsentrasi terkecil (0,52 mg/mL) sebanyak

0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5

menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar

fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 5; 10; 15; 20; dan 30 menit

pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanas-

kan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan

menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimal.

Pengujian efek penghambatan larutan blanko

Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan DMSO sejumlah 0,3 mL

dan larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,5 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi

dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kemudian dit-

ambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan

diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS

sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzi-

matik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada pan-

jang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.

Pengujian efek penghambatan larutan kontrol blanko

Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,8 mL dan larutan DMSO sejumlah 0,3 mL

dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit

pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 16: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

7

pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan

penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk

menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektro-

fotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum. Dilakukan 3 kali replikasi

Pengujian efek penghambatan larutan uji

Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7

sejumlah 0,5 mL, dan larutan ekstrak seri 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL

masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan

pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat

maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15

menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan

dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur

dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksi-

mal. Dilakukan 3 kali replikasi.

Pengujian efek penghambatan larutan kontrol uji

Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,8 mL, larutan ekstrak seri konsentrasi 0,52;

1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke

dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC.

Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah

0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan

reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan

reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis

pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.

Pengujian efek penghambatan larutan acarbose

Larutan enzim alfa-glukosidase sejumlah 0,3 mL, larutan dapar fosfat pH 7

sejumlah 0,5 mL, dan larutan pembanding acarbose dengan seri konsentrasi 0,52;

1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak 0,3 mL dimasukkan ke

dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5 menit pada suhu 37oC.

Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar fosfat pH 7) sejumlah

0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC. Dilakukan penambahan

reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10 menit untuk menghentikan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 17: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

8

reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis

pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali replikasi.

Pengujian efek penghambatan larutan kontrol acarbose

Larutan dapar fosfat pH 7 sejumlah 0,5 mL, larutan pembanding acarbose dengan

seri konsentrasi 0,52; 1,04; 2,08; 3,13; dan 4,16 mg/mL masing-masing sebanyak

0,3 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dilakukan pre-inkubasi selama 5

menit pada suhu 37oC. Kemudian ditambahkan substrat maltosa (2 g/100mL dapar

fosfat pH 7) sejumlah 0,3 mL dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu 37oC.

Dilakukan penambahan reagen DNS sejumlah 1 mL dan dipanaskan selama 10

menit untuk menghentikan reaksi enzimatik. Serapan diukur dengan menggunakan

Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimal. Dilakukan 3 kali

replikasi.

Analisis Hasil

Data nilai absorbansi sampel yang diperoleh digunakan untuk menghitung persen

penghambatan enzim alfa-glukosidase, dan dilakukan perhitungan nilai IC50

menggunakan persamaan regresi linear.

Persen penghambatan dihitung dengan rumus:

% penghambatan = Absorbansi kontrol – Absorbansi sampel uji

Absorbansi kontrol X 100

Keterangan :

Absorbansi kontrol (DMSO) = tanpa sampel (kontrol-blanko)

Absorbansi sampel uji = S1-S0

S1 = Absorbansi sampel dengan penambahan enzim

S0 = Absorbansi sampel tanpa penambahan enzim

Nilai IC50 dapat dihitung dari persamaan y = bx + a dengan menggunakan rumus:

IC50 = 𝟓𝟎 – 𝐚

𝐛

Untuk melihat normalitas distribusi data digunakan uji Shapiro-Wilk. Jika data yang

didapatkan terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan uji T tidak berpasangan

dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui apakah ada perbedaan data antara

dua kelompok.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 18: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

9

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk menguji ekstrak etanol daun sambiloto terhadap

aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase. Pengujian terhadap aktivitas

penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan metode kolorimetri menggunakan

reagen asam 3,5-dinitrosalisilat (DNS) dan diukur dengan spektrofotometer UV-

Vis pada panjang gelombang 400-800 nm.

Identifikasi serbuk simplisia daun sambiloto

Dalam penelitian ini, bahan uji yang digunakan adalah serbuk simplisia daun

sambiloto yang diperoleh dari dari PT. HRL Internasional Gresik, Jawa Timur.

Simplisia adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang digunakan untuk

pengobatan dan belum mengalami pengolahan, kecuali dinyatakan lain suhu

pengeringan tidak lebih dari 60oC (BPOM, 2014). Dalam pembuatan simplisia

dilakukan beberapa tahapan seperti pengumpulan bahan baku, sortasi basah,

pencucian, perajangan, pengeringan, sortasi kering, pengepakan, penyimpanan dan

pemeriksaan mutu (Departemen Kesehatan RI, 1985).

Identitas simplisia daun sambiloto dapat diketahui dari pemeriannya berupa

serbuk daun kering, warna hijau, tidak berbau, dan berasa sangat pahit. Batang

tanaman sambiloto tidak berambut, tebal 2-6 mm, persegi empat, batang bagian atas

seringkali dengan sudut agak berusuk. Daun bersilang berhadapan, umumnya

terlepas dari batang, bentuk lanset sampai bentuk lidah tombak, rapuh, tipis, tidak

berambut, pangkal daun runcing, ujung meruncing, tepi daun rata. Permukaan alas

berwarna hijau tua atau hijau kecokelatan, permukaan bawah berwarna hijau pucat.

Tangkai daun pendek. Buah berbentuk jorong, pangkal dan ujung tajam, kadang-

kadang pecah secara membujur. Permukaan luar kulit buah berwarna hijau tua

hingga hijau kecokelatan, permukaan dalam benwarna putih atau putih kelabu. Biji

agak keras, permukaan luar berwarna cokelat muda dengan tonjolan (Departemen

Kesehatan RI, 2017).

Serbuk simplisia yang telah diperoleh kemudian diidentifikasi di Laboratorium

Biologi Farmasi Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Identifikasi serbuk simplisia dilakukan dengan cara pemerian dan dilakukan

pengamatan simplisia baik secara makroskopik maupun secara mikroskopik

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 19: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

10

(Departemen Kesehatan RI, 2017). Hasil identifikasi serbuk simplisia daun

sambiloto yang diperoleh dari Chang (2020) menunjukkan bahwa serbuk simplisia

yang diperoleh benar merupakan daun sambiloto (Lampiran 1).

Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto

Penentuan kadar air serbuk simplisia daun sambiloto pada penelitian ini

menggunakan metode destilasi toluen dan mengacu pada Farmakope Herbal

Indonesia (2017). Pada penentuan kadar air, serbuk simplisia daun sambiloto

ditimbang sebanyak 10 gram dan diperoleh volume air sebesar 0,6 mL, sehingga

diperoleh kadar air simplisia sebesar 6% (Lampiran 4). Dengan demikian, kadar air

serbuk simplisia daun sambiloto telah memenuhi persyaratan kadar air yang telah

ditetapkan (≤ 10%). Tujuan pemeriksaan kadar air adalah untuk memberi batasan

minimal besarnya kandungan air dalam bahan baik ekstrak maupun simplisia.

Makin tinggi kadar air makin mudah untuk ditumbuhi jamur dan kapang sehingga

dapat menurunkan aktivitas biologi simplisia dalam masa penyimpanan (Salim et

al., 2017).

Ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto

Metode yang digunakan untuk ekstraksi serbuk simplisia daun sambiloto adalah

maserasi. Maserasi merupakan salah satu metode ekstraksi dengan tanpa

pemanasan, dimana proses pengekstrakan simplisia dilakukan dengan

menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada

temperatur ruangan (kamar). Dilakukan pengadukan yang kontinyu agar zat aktif

dapat masuk ke dalam rongga sel dan mencegah adanya konsentrasi setempat pada

sekitar sel tersebut. Pada saat perendaman simplisia, cairan penyari akan menembus

dinding sel kemudian masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif

kemudian melarutkannya. Zat aktif yang telah larut dapat keluar karena adanya

proses difusi yang disebabkan perbedaan konsentrasi antara larutan yang ada di

dalam rongga sel dan di luar sel (Anggraini dan Fathrah, 2018). Keuntungan utama

dari metode ini ialah tidak dilakukan dengan pemanasan sehingga dapat mencegah

rusak atau hilangnya zat aktif yang ingin disari (Sa’adah dan Nurhasnawati, 2015).

Etanol dipertimbangkan sebagai cairan penyari karena merupakan pelarut

universal, memiliki polaritas yang tinggi, lebih efektif dan steril karena kapang dan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 20: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

11

kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas. Selain itu, etanol memiliki titik didih

sebesar 78 oC sehingga ketika dilakukan pemisahan senyawa dari pelarutnya

menggunakan vacuum rotary evaporator, senyawa yang terkandung dalam ekstrak

tidak terdegradasi karena suhu yang tinggi.

Pada proses ekstraksi, 10 gram serbuk simplisia dalam 100 mL etanol 96%

dimaserasi selama 3 x 24 jam dalam suhu ruang. Hasil maserat yang diperoleh

diuapkan dengan menggunakan vacuum rotary evaporator dengan suhu 60o C

selama 15 menit hingga memekat dan diuapkan lagi dengan menggunakan

waterbath hingga diperoleh ekstrak kental. Pada pembuatan ekstrak, dilakukan

replikasi sebanyak 3 kali dengan tujuan untuk memperoleh bobot tetap. Dari hasil

diperoleh % rendemen masing-masing sebesar 19,98%; 20,23%; dan 21,41%,

sehingga diperoleh bobot tetap sebesar 20,54%. Pemerian ekstrak untuk

menunjukkan identitas ekstrak daun sambiloto berupa ekstrak kental berwarna hijau

tua, berbau khas, dan rasa sangat pahit.

Uji kualitatif andrografolid

Uji kualitatif andrografolid dilakukan dengan menggunakan metode

kromatografi lapis tipis dan uji reaksi warna terpenoid. Uji kualitatif dilakukan

untuk mengetahui kandungan senyawa yang terdapat dalam ekstrak daun sambiloto.

Kromatografi lapis tipis merupakan teknik analisis yang banyak digunakan untuk

memisahkan campuran senyawa kimia berdasarkan distribusinya di antara dua fase.

Fase diam merupakan bahan pelapis pada lempeng KLT yang biasanya terbuat dari

bubuk silika, alumunium oksida, atau selulosa, sedangkan fase gerak merupakan

pelarut tunggal atau campuran yang menyebabkan ekstrak mengalami pemisahan.

Fase gerak berinteraksi dengan fase diam melalui daya kapilaritas yang

memungkinkan terjadinya pemisahan beragam komponen berdasarkan kelarutan

dan retensinya dalam fase diam dan fase gerak. Setiap senyawa kimia akan bergerak

dengan laju tertentu dan tingkat pergerakannya dinyatakan sebagai faktor retardasi

(Lade et al., 2014).

Rf = 𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑠𝑒𝑛𝑦𝑎𝑤𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑙𝑖𝑡𝑖

𝑗𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 21: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

12

Uji kualitatif dengan kromatografi lapis tipis menggunakan larutan pengem-

bang n-heksana : etil asetat (1:2) sebagai fase gerak dan silika gel 60 F254 sebagai

fase diam (Departemen Kesehatan RI, 2017). Larutan pembanding yang digunakan

adalah baku andrografolid dari Sigma Aldrich.

Sebelum penotolan, plat KLT akan diaktivasi terlebih dahulu untuk

menghilangkan kelembaban air atmosfer yang teradsorbsi dalam lempeng. Aktivasi

dilakukan dengan memanaskan lempeng sampai 105oC selama 30 menit diikuti

dengan pendinginan dalam suhu ruangan. Lempeng KLT yang sudah diaktivasi

kemudian ditotolkan sesuai penandaan dan dimasukkan hati-hati ke dalam chamber

berisi fase gerak yang sudah dijenuhkan. Uap eluen akan memenuhi ruangan dalam

chamber dan terjadi proses penjenuhan chamber kurang lebih selama 15 menit

(Wulandari, 2011). Bercak yang dihasilkan pada plat KLT dideteksi menggunakan

bantuan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366.

Gambar 1. Hasil KLT ekstrak etanol daun sambiloto setelah dielusi (UV 254

nm dan 366 nm)

Keterangan gambar : A = baku andrografolid; B = Ekstrak etanol daun sambiloto

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 22: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

13

Tabel I. Perhitungan nilai Rf

Deteksi UV 254

Baku andrografolid Warna

bercak

Ekstrak etanol

daun sambiloto

Warna bercak

Nilai Rf

0,29 Ungu 0,30 Ungu

0,42 Ungu

0,61 Ungu

0,80 Hijau

Deteksi UV 366

Baku andrografolid Warna

bercak

Ekstrak etanol

daun sambiloto

Warna bercak

Nilai Rf

- - 0,12 Merah muda

0,22 Kebiruan

0,32 Merah muda

0,45 Kebiruan

0,61 Putih

0,72 Putih

0,80 Merah muda

0,88 Ungu

Profil KLT fraksi n-heksana: etil asetat (1:2, v/v) menunjukkan terdapat

beberapa bercak. Bercak pada ekstrak dengan nilai Rf 0,30 pada UV 254 sejajar

dan mendekati nilai Rf pembanding andrografolid yang merupakan senyawa golon-

gan terpenoid (Rf 0,29). Menurut acuan Farmakope Herbal Indonesia (2017), baku

andrografolid di bawah deteksi UV 254 memiliki nilai Rf sebesar 0,45, sedangkan

pada pengujian diperoleh nilai Rf baku andrografolid sebesar 0,29. Selain itu, hasil

KLT pada ekstrak etanol daun sambiloto menunjukkan beberapa bercak dengan

warna yang berbeda. Beberapa bercak yang dihasilkan pada ekstrak di bawah sinar

UV 254 memiliki warna yang sama dengan bercak pada baku andrografolid yakni

berwarna ungu dengan nilai Rf berturut-turut 0,30; 0.42; dan 0,61. Menurut Cai

(2014), jika dua spot berada pada jarak yang sama atau memiliki nilai Rf yang sama,

maka dapat disimpulkan bahwa kedua komponen tersebut adalah senyawa yang

sama. Pada penelitian yang dilakukan oleh Halim et al. (2004), bercak ungu pada

ekstrak sambiloto yang memberikan nilai Rf sebesar 0,28 merupakan senyawa

neoandrografolid (C26H40O8) yang bersifat paling polar dari andrografis lainnya,

sedangkan bercak ungu dengan nilai Rf 0,54 merupakan senyawa andrografolid

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 23: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

14

yang merupakan kandungan utama dari tanaman sambiloto. Salah satu unsur pen-

dukung bahwa ekstrak mengandung andrografolid dapat dilhat dari warna bercak

yang ditampilkan, yaitu berwarna ungu. Namun jika dilihat dari nilai Rf yang

berbeda dengan nilai Rf acuan, belum dapat dipastikan apakah ekstrak yang

digunakan mengandung senyawa target andrografolid.

Sementara itu, hasil elusi pada plat KLT di bawah sinar UV dengan pan-

jang gelombang 366 ditemukan adanya bercak pada ekstrak etanol daun sambiloto,

namun tidak ditemukan adanya bercak pada baku andrografolid. Hal ini dapat

disebabkan karena volume penotolan yang terlalu kecil dan masa penyimpanan

baku andrografolid yang lama. Selain itu, bercak ekstrak pada plat KLT menampil-

kan beberapa warna yang berbeda, menunjukkan bahwa ekstrak yang digunakan

pada penelitian juga mengandung senyawa lain selain senyawa target andrografolid.

Berdasarkan pengujian yang sudah dilakukan, hasil KLT di bawah sinar

UV 254 menunjukkan adanya senyawa yang berfluorosensi. Pada umumnya sen-

yawa aromatik terkonjugasi dan beberapa senyawa tak jenuh dapat menyerap sinar

UV. Senyawa-senyawa ini dapat dianalisis dengan KLT dengan fase diam yang

diimpregnasi indikator fluoresensi dan deteksi dapat dilakukan hanya dengan

pemeriksaan di bawah sinar UV 254 nm. Faktor-faktor yang menyebabkan nilai Rf

bervariasi meliputi dimensi dan jenis ruang, sifat dan ukuran lempeng, arah aliran

fase gerak, volume dan komposisi fase gerak, kondisi kesetimbangan, kelembaban,

dan metode persiapan sampel KLT sebelumnya (Wulandari, 2011).

Uji kualitatif kandungan kimia ekstrak etanol daun sambiloto juga

dilakukan dengan uji reaksi warna senyawa terpenoid. Identifikasi senyawa terpe-

noid dilakukan dengan menggunakan reagen warna Liebermann-Burchard, yakni

didasarkan pada kemampuan suatu senyawa untuk membentuk warna dengan asam

sulfat pekat dalam pelarut asam asetat anhidrat. Pereaksi Liebermann-Burchard

terdiri dari anhidrida asam asetat (p.a), dan asam sulfat (p.a) dengan perbandingan

3:1 (Malec & Pomilio 2003; Siadi, 2012). Identifikasi senyawa terpenoid dengan

reaksi warna dilakukan dengan cara melarutkan 100 mg ekstrak dan dilanjutkan

dengan penambahan reagen Liebermann-Burchard sebanyak 3 mL.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 24: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

15

Gambar 2. Uji reaksi warna senyawa terpenoid

Hasil yang diperoleh menunjukkan hasil positif yakni terbentuknya cincin

kecoklatan pada perbatasan larutan menunjukkan adanya kandungan terpenoid.

Senyawa terpenoid dilaporkan memiliki berbagai aktivitas biologis seperti anti in-

flamasi, antifungi, antioksidan, antibakteri dan antikanker (Warditiani et al. 2014).

Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase

Enzim alfa-glukosidase merupakan enzim di saluran pencernaan yang

mempunyai peran dalam penyerapan karbohidrat (PERKENI, 2015). Aktivitas

enzim alfa-glukosidase seperti maltase dan sukrase dalam menghidrolisis

oligosakarida menjadi glukosa, fruktosa dan monosakarida lain pada dinding usus

halus dapat dihambat oleh senyawa obat inhibitor alfa-glukosidase. Penghambatan

aktivitas enzim ini efektif dalam mengurangi pencernaan karbohidrat dan proses

absorbsinya dalam usus halus sehingga dapat menurunkan kadar gula darah post

prandial penderita diabetes melitus (DepKes RI, 2008).

Aktivitas enzim alfa-glukosidase ditentukan dengan mengukur hasil gula

pereduksi menggunakan 3’,5-dinitrosalicylic acid (DNS). Maltosa merupakan gula

pereduksi yang terdiri dari dua molekul glukosa dan dalam penelitian digunakan

sebagai substrat. Pemberian reagen DNS dalam larutan uji bertujuan untuk

menghentikan reaksi hidrolisis dan dilakukan pemanasan agar terjadi reaksi antara

reagen DNS dan maltosa sebagai gula pereduksi (Aliyah et al., 2017). Semakin

tinggi nilai absorbansi yang dihasilkan, semakin banyak pula gula pereduksi

(glukosa) yang terkandung dalam sampel (Ariandi, 2016).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 25: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

16

Reaksi dengan DNS yang terjadi merupakan reaksi redoks dimana bila ter-

dapat gula reduksi pada sampel, maka larutan DNS yang awalnya berwarna kuning

akan bereaksi dengan gula reduksi dan dengan pemanasan akan menimbulkan

warna jingga kemerahan (Sastrohamidjojo, 2005).

Gambar 3. Reaksi DNS dengan gula pereduksi

(NCBE 2018)

Uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ekstrak etanol daun sambiloto

diawali dengan melakukan optimasi panjang gelombang maksimal dan penentuan

Operating Time (OT) atau waktu inkubasi. Pada penentuan optimasi panjang

gelombang maksimal, digunakan ekstrak dari seri konsentrasi terkecil yaitu 0,52

mg/mL. Serapan dibaca dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan

rentang panjang gelombang 400-800 nm dan diperoleh panjang gelombang

maksimal sebesar 536 nm. Penentuan panjang gelombang maksimal dilakukan

dengan tujuan untuk melihat panjang gelombang yang dapat menghasilkan serapan

paling maksimal. Sementara itu, penentuan waktu inkubasi dilakukan dengan

metode yang sama seperti penentuan panjang gelombang maksimal, yakni dengan

menggunakan esktrak dengan seri konsentrasi terkecil, kemudian dilakukan

inkubasi pada beberapa seri waktu, yaitu 5, 10, 15, 20, dan 30 menit. Pengukuran

serapan akan mengacu pada panjang gelombang maksimal yang sudah diperoleh

sebelumnya. Diperoleh pengukuran waktu inkubasi yakni 15 menit. Penentuan

waktu inkubasi dilakukan dengan tujuan untuk memperoleh waktu yang optimal

bagi larutan uji untuk bereaksi.

Pengujian penghambatan enzim alfa-glukosidase daun sambiloto

dilanjutkan dengan beberapa pengujian. Uji penghambatan larutan blanko dan uji

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 26: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

17

penghambatan larutan kontrol blanko dilakukan dengan tujuan faktor koreksi

pelarut yang digunakan yaitu untuk melihat apakah terjadi aktivitas penghambatan

tanpa melakukan penambahan sampel ekstrak dan enzim. Uji penghambatan larutan

blanko dilakukan tanpa menggunakan sampel ekstrak sedangkan uji penghambatan

larutan kontrol blanko tidak menggunakan sampel ekstrak dan enzim.

Pengujian kontrol positif menggunakan acarbose sebagai pembanding.

Acarbose memiliki mekanisme kerja menghambat kerja alfa-glukosidase yang

mengakibatkan tidak semua oligosakarida atau polisakarida dapat terpecah menjadi

monosakarida sehingga dapat mencegah dan menunda perkembangan diabetes

melitus tipe II (Van De Laar et al., 2005). Efek samping dari penggunaan obat

acarbose yang paling umum terjadi adalah perut kembung, perut tidak nyaman, dan

diare (DiPiro J.T., Wells B.G., 2015). Acarbose teruji klinis dapat menghambat

aktivitas enzim alfa-glukosidase dan merupakan obat oral yang telah umum

digunakan di Indonesia dalam pengobatan diabetes melitus tipe II (noninsulin

dependance). Acarbose juga banyak digunakan sebagai pembanding dalam

berbagai literatur (Sukmawati et al 2016, Elmaniar and Muhtadi 2017, Yuniarto dan

Selifiana 2018, Riyanti et al. 2019). Pengujian larutan pembanding acarbose dibuat

dalam seri larutan konsentrasi 0,52; 1,04; 5; 3,13; dan 4,16 mg/mL. Dari pengujian

diperoleh persen penghambatan larutan pembanding acarbose 3 replikasi. Persen

penghambatan selanjutnya digunakan untuk perhitungan nilai IC50.

0

20

40

60

80

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

y = 12.49x + 23.286

r = 0.8935

IC50 = 2,139

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 27: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

18

Gambar 4. Kurva hubungan konsentrasi acarbose dengan persen inhibisi

enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2, replikasi 3

Dari pengujian larutan pembanding acarbose tiga replikasi diperoleh

persamaan regresi linear y = 12.49x + 23.286 dengan nilai r = 0.8935 untuk

replikasi 1; persamaan regresi linear y = 21.285x + 4.3237 dengan nilai r = 0.9928

untuk replikasi 2; dan persamaan regresi y = 21.228x + 1.6671 dengan nilai r =

0.9793 untuk replikasi 3. Perolehan nilai IC50 pada masing-masing replikasi sebesar

2,139; 2,146; dan 2,277 mg/mL sehingga diperoleh nilai rerata IC50 sebesar 2,187

± 0,077 mg/mL.

Uji aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase dengan menggunakan

bahan uji ekstrak etanol daun sambiloto diawali dengan pembuatan larutan stok

sampel ekstrak kemudian dilakukan uji aktivitas penghambatan dari seri

konsentrasi yang telah dibuat. Persen penghambatan yang diperoleh digunakan

untuk perhitungan nilai IC50 menggunakan regresi linear.

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

y = 21.285x + 4.3237

r = 0.9928

IC50 = 2,146

y = 21.228x + 1.6671

r = 0.9793

IC50 = 2,277

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 28: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

19

Gambar 5. Kurva hubungan konsentrasi ekstrak etanol daun sambiloto

dengan persen inhibisi enzim alfa-glukosidase replikasi 1, replikasi 2,

replikasi 3

Dari pengujian penghambatan ekstrak etanol daun sambiloto dengan tiga

kali replikasi diperoleh persamaan regresi linear y = 11.649x + 22.864 dengan nilai

r = 0.9489 untuk replikasi 1; persamaan regresi linear y = 15.557x + 13.959 dengan

nilai r = 0.9358 untuk replikasi 2; dan persamaan regresi linear y = 13.736x +

19.286 dengan nilai r = 0.8977 untuk replikasi 3. Perolehan nilai IC50 pada masing-

masing replikasi sebesar 2,329; 2,316; dan 2,236 mg/mL sehingga diperoleh nilai

rerata IC50 sebesar 2,293 ± 0,050 mg/mL.

0

20

40

60

80

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6

% in

hib

isi

Konsentrasi (mg/mL)

y = 11.649x + 22.864

r = 0.9489

IC50 = 2,329

y = 15.557x + 13.959

r = 0.9358

IC50 = 2,316

y = 13.736x + 19.286

r = 0.8977

IC50 = 2,293

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 29: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

20

Gambar 6. Struktur Andrografolid

(Pubchem, 2021)

Tanaman sambiloto memiliki kandungan utama andrografolid (C20H30O5)

yang masing-masing mengandung sekitar 4%, 0,8 – 1,2 %, dan 0,5 6% di seluruh

tanaman kering, ekstrak batang dan daun. Selain itu, diterpenoid utama yang lain

adalah deoxyandrographolide, neoandrographolide, 14-deoxy-11,12-

didehydroandrographide dan isoandrographolide. Andrografolid merupakan

komponen mayor dari tananaman sambiloto yang telah dilaporkan memiliki

beragam efek farmakologi (Chao and Lin, 2010) dan paling aktif dibandingkan

yang lainnya (Rais et al, 2013).

Gambar 7. Perbandingan % penghambatan acarbose dan ekstrak etanol

daun sambiloto

0

20

40

60

80

100

0.52 1.04 2.08 3.13 4.16

% in

hib

isi

konsentrasi (mg/mL)

Rata-rata % penghambatan

Akarbose Ekstrak

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 30: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

21

Tabel II. Perbandingan IC50 acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto

Replikasi

Nilai IC50 (mg/mL)

Acarbose Ekstrak Etanol

Daun Sambiloto

I 2,139 2,329

II 2,146 2,316

III 2,277 2,236

Rata-rata 2,187 ± 0,077 2,293 ± 0,050

Perbandingan hubungan konsentrasi dan persen inhibisi penghambatan

antara acarbose dan ekstrak etanol daun sambiloto dapat dilihat pada Gambar 7,

sedangkan perbandingan perolehan IC50 antar dua kelompok uji tersebut (acarbose

dan ekstrak) dapat dilihat pada Tabel II. Perhitungan persen penghambatan

diperoleh dari data absorbansi sampel, dimana hasil pengukuran absorbansi dari

konsentrasi tinggi ke konsentrasi rendah semakin menurun. Maka dapat dikatakan

bahwa semakin tinggi konsentrasi suatu senyawa maka semakin rendah nilai

absorbansinya (konsentrasi berbanding terbalik dengan nilai absorbansi). Selain itu,

data kedua kelompok uji di atas menunjukkan konsentrasi yang makin tinggi

menyebabkan persen penghambatannya juga semakin tinggi, maka dapat dikatakan

bahwa semakin tinggi suatu konsentrasi maka semakin tinggi aktivitasnya dalam

menghambat enzim alfa-glukosidase. Menurut Swinney (2011), IC50 adalah

konsentrasi suatu senyawa yang menyebabkan penghambatan sebesar 50%.

Dengan demikian dapat dikatakan bahwa IC50 merupakan konsentrasi ekstrak yang

dapat menghambat 50% enzim alfa-glukosidase. Semakin kecil nilai IC50 maka

semakin tinggi efektivitasnya dalam menghambat enzim alfa-glukosidase.

Jika dibandingkan dengan penelitian yang sama dan telah dilakukan

sebelumnya, perolehan nilai IC50 pada pembanding acarbose sebesar 6.2 ± 0.33

mg/mL (Subramanian et al., 2008). Pada penelitian tersebut, acarbose yang

digunakan berasal dari Bayer Pharmaceuticals, Leverkusen, Jerman. Sedangkan

pada penelitian yang dilakukan oleh (Rais et al., 2013), perolehan nilai IC50

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 31: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

22

pembanding acarbose sebesar 1,47 mg/mL tanpa menyebutkan secara jelas sumber

acarbose. Adanya perbedaan perolehan nilai IC50 acarbose dalam penelitian ini

dapat disebabkan karena acarbose yang digunakan bukan merupakan acarbose

murni (produksi pabrik PT. Dexa Medica). Selain terdapat kandungan zat aktif

acarbose, tablet acarbose sendiri memiliki bahan tambahan seperti bahan pengikat,

penghancur, pengisi, dan pelicin dimana zat tambahan atau eksipien ini berfungsi

untuk meningkatkan stabilitas dan bioavaibilitas obat serta efektivitas produk. Oleh

karena itu, ketika dilakukan pengujian aktivitas penghambatan dengan

menggunakan tablet acarbose kemungkinan dapat mengganggu hasil penelitian.

Sementara itu, penelitian yang sama mengenai potensi tanaman sambiloto

sebagai inhibitor enzim alfa-glukosidase juga menghasilkan beberapa variasi nilai

IC50. Penelitian yang dilakukan oleh Subramanian et al. (2008), IC50 yang diperoleh

dari hasil uji penghambatan enzim alfa-glukosidase ekstrak etanol daun sambiloto

sebesar 17.2 ± 0.15 mg/mL dan perolehan IC50 andrografolid menunjukkan nilai

11,0 ± 0,28 mg/ml. Sementara itu, Rais et al. (2013) juga meneliti aktivitas

penghambatan enzim alfa-glukosidase terhadap isolat andrografolid dari tanaman

sambiloto dan memperoleh IC50 sebesar 38,86 mg/mL. Perbedaan dalam perolehan

hasil IC50 juga dapat disebabkan karena sumber bahan dan metode yang digunakan

berbeda. Kedua penelitian di atas sama-sama menggunakan Microplate reader

sebagai instrumen uji sedangkan substrat yang digunakan adalah paranitrophenyl-

α-d-glucopyranoside (p-NPG), dimana substrat ini secara umum lebih banyak

digunakan dalam berbagai pengujian penghambatan enzim alfa-glukosidase.

Data yang diperoleh dari persen penghambatan acarbose dan ekstrak etanol

daun sambiloto memberikan hasil IC50 yang tidak jauh berbeda. Dari perbandingan

kedua data ini selanjutnya diuji secara statistik. Uji normalitas dilakukan untuk

mengetahui apakah data penelitian yang diperoleh terdistribusi normal atau tidak.

Dari hasil uji normalitas dengan metode Shapiro-wilk diperoleh nilai P > 0.05

sehingga dapat disimpulkan data terdistribusi normal (Lampiran 8). Uji statistik

dilanjutkan dengan Uji T tidak berpasangan (Independent sample T-test) untuk

membandingkan dua kelompok sampel tidak berpasangan. Diperoleh nilai

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 32: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

23

signifikansi > 0,05 menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara dua

kelompok uji (Lampiran 9).

Di luar dari pengujian aktivitas penghambatan alfa-glukosidase tanaman

sambiloto, beberapa pengujian mengenai potensi tanaman sambiloto dalam

aktivitasnya sebagai antidiabetik telah banyak diteliti. Pada penelitian yang telah

dilakukan oleh Hossain et al. (2007), ekstrak air dan ekstrak etanol herba sambiloto

terbukti mampu menunjukkan efek penurunan gula darah yang signifikan pada

tikus diabetes terinduksi glukosa dan aloksan. Yu et al. (2008) juga meneliti

kandungan andrografolid dalam herba sambiloto yang meningkatkan penggunaan

glukosa otot pada tikus diabetes melalui stimulasi transporter GLUT-4 sehingga

dapat menurunkan kadar glukosa dalam plasma pada tikus. Selain itu, penelitian

yang sama dilakukan oleh Paramitha dan Rahamanisa (2016) dimana pemberian

ekstrak etanol herba sambiloto dengan dosis berturut-turut 2,1 g/kg BB dan 3,2 g/kg

BB terhadap mencit wistar yang telah diinduksi aloksan dengan dosis berturut-turut

64 mg/kg BB dan 70 mg/kg BB dapat menurunkan kadar glukosa darah. Sedangkan

dari penelitian yang dilakukan oleh Sukmawati et al. (2016), kombinasi ekstrak

etanol daun sambiloto 234 mg/kgBB dengan acarbose 2,05 mg/kgBB efektif dalam

menurunkan kadar glukosa darah tikus terinduksi aloksan. Andrografolid dalam

ekstrak etanol herba sambiloto berperan dalam perbaikan sel-sel β-insulin

Langerhans dan meningkatkan sekresi insulin (Hossain et al., 2007).

Dari hasil uji statistik yang sudah diperoleh, tidak bisa dipastikan kelompok

uji mana yang memiliki potensi penghambatan enzim alfa-glukosidase lebih baik,

namun dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol daun sambiloto menunjukkan

aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase yang tidak jauh berbeda dengan

acarbose (Nilai IC50 acarbose : ekstrak etanol daun sambiloto = 2,187 ± 0,077

mg/mL : 2,293 ± 0,050 mg/mL). Selain itu, pengujian aktivitas penghambatan

enzim alfa-glukosidase terhadap tanaman sambiloto secara in vitro sampai saat ini

masih tergolong sedikit, sementara pengujian secara in vitro sendiri memiliki peran

penting dalam tahap skrining awal untuk melihat aktivitas farmokologi dalam suatu

tumbuhan. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian-penelitian lebih lanjut

mengenai potensi tanaman sambiloto dalam menghambat enzim alfa-glukosidase.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 33: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

24

Ekstrak etanol daun sambiloto memiliki potensi yang baik untuk dapat

dikembangkan dan dipertimbangkan lebih lanjut sebagai alternatif pengobatan

diabetes melitus tipe 2.

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan

ekstrak etanol daun sambiloto memiliki aktivitas penghambatan enzim alfa-

glukosidase dengan nilai IC50 2,293 ± 0,050 mg/mL dengan acarbose sebagai

kontrol positif memiliki nilai IC50 sebesar 2,187 ± 0,077 mg/mL. Hasil uji statistik

menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antara nilai IC50 acarbose dengan

ekstrak etanol daun sambiloto (P > 0,05).

SARAN

Penulis menyarankan untuk melakukan penelitian lebih lanjut mengenai

pengujian kadar andrografolid dalan ekstrak etanol daun sambiloto dan pengujian

kontrol positif dengan menggunakan acarbose murni.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 34: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

25

DAFTAR PUSTAKA

Aliyah, A., Alamsyah, G., Ramadhani, R., and Hermansyah, H., 2017. Production

of α-Amylase and β-Glucosidase from Aspergillus Niger by Solid State

Fermentation Method on Biomass Waste Substrates from Rice Husk, Bagasse

and Corn Cob. Energy Procedia, 136, 418–423.

Anggraini, D. and Fathrah, L., 2018. Activity Test of Suji Leaf Extract (Dracaena

angustifolia Roxb.) on In Vitro Cholesterol Lowering. Jurnal Kimia Sains dan

Aplikasi, 21 (2), 54–58.

Ariandi, 2016. Pengenalan Enzim Amilase (Alpha-Amlylase) dan Reaksi

Enzimatisnya Menghidrolisis Amilosa Pati Menjadi Glukosa. Jurnal

Dinamika, 07 (1), 74–82.

Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat

Indonesia. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.

Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010. Monografi Ekstrak

Tumbuhan Obat Indonesia. Volume 1. Jakarta: Direktorat Standarisasi Obat

Tradisional, Kosmetik, dan Produk Komplemen, Badan Pengawas Obat dan

Makanan RI.

BPOM, 2014. Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik

Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.

Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.

Cai, L., 2014. Thin Layer Chromatography. Current Protocols in Essential

Laboratory Techniques, 2014, 6.3.1-6.3.18.

Chang, M.J.V., 2020. Uji Aktivitas penghambatan Enzim Alfa-Amilase oleh

Ekstrak Air Daun Sambiloto (Andrographis paniculata Nees.) Secara In Vitro.

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Chao, W.W. and Lin, B.F., 2010. Isolation and identification of Bioactive

Compounds in Andrographis paniculata (Chuanxinlian). Chinese Medicine, 5,

1–15.

Departemen Kesehatan RI, 1985. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia.

Departemen Kesehatan RI, 2008. Pedoman Pengendalian Diabetes Melitus dan

Penyakit Metabolik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.

Departemen Kesehatan RI, 2017. Farmakope Herbal Indonesia Edisi II.

Departemen Kesehatan RI.

DiPiro J.T., Wells B.G., S.T.L. and D.C. V., 2015. Pharmacotherapy Handbook,

Ninth Edition. McGraw-Hill Education Companies, Inggris.

Elmaniar, R. and Muhtadi, 2017. Aktivitas Penghambatan Enzim α- Glukosidase

oleh Ekstrak Etanol Ubi Jalar Ungu (Ipomoea batatas L .). The 5th Urecol

Proceeding, (18 February), 825–831.

Halim, V.S., Soegihardjo, C.J., and Rizal, D.M., 2004. Pengaruh ekstrak etanol

herba sambiloto ( Andrographis paniculata ( Burm . f .) Nees ) terhadap

spermatogenesis mencit jantan dewasa dan uji kualitatif kromatografi lapis

tipis. Majalah Farmasi Indonesia, 15 (3), 136–143.

Hossain, M.A., Roy, B.K., Ahmed, K., Sarwaruddin Chowdhury, A.M., and Rashid,

M.A., 2007. Antidiabetic activity of Andrographis paniculata. Dhaka

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 35: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

26

University Journal of Pharmaceutical Sciences, 6 (1), 15–20.

Ilmiati Illing, W.S. dan E., 2017. Uji Fitokimia Ekstrak Buah Dengen. Jurnal

Dinamika, 8 (1), 66–84.

International Diabetes Federation, 2017. IDF Diabetes Atlas, 8th edition.

International Diabetes Federation.

Kusyanti, H. dan, 2016. Jenis Tumbuhan Sebagai Obat Penyakit Diabetes Mellitus

Pada Masyarakat Rundeng Kota Subulussalam. Prosiding Seminar Nasional

Biotik 2016, Prosiding Seminar Nasional Biotik.

Van De Laar, Floris A., Peter L. Lucassen Akkermans, Reinier P. Lisdonk, Eloy H.

Van De Rutten, Guy E. Weel, C. Van, 2005. Alfa-Glucosidase Inhibitors for

Patients With Type 2 Diabetes. Diabetes care, 28 (1), 154–163.

Lade, B.D., Patil, A.S., Paikrao, H.M., Kale, A.S., and Hire, K.K., 2014. A

Comprehensive Working, Principles and Applications of Thin Layer

Chromatography. Research Journal of Pharmaceutical, Biological and

Chemical Sciences, 5 (4), 486–503.

NCBE, 2018. DNSA Reagen Base. National Centre for Biotechnology Education.

http://www.ncbe.reading.ac.uk/MATERIALS/Enzymes/dnsareagent.html,

diakses tanggal 16 November 2020.

Nyemb, J.N., Tchinda, A.T., Talla, E., Nanga, E.B., Ngoudjou, D.T., Henoumont,

C., Laurent, S., Iqbal, J., and Mbafor, J.T., 2018. Vitellaroside, A New

Cerebroside from Vitellaria paradoxa (Sapotaceae) and its Bioactivities.

Advances in Recycling & Waste Management, 06 (01).

Paramitha, M.D. and Rahamanisa, S., 2016. Ekstrak Etanol Herba Sambiloto

(Andrographis paniculata) Sebagai Antidiabetik Terhadap Mencit Wistar

Terinduksi Aloksan. Majority, 5 (5), 75–79.

Perkumpulan Endokrinologi Indonesia, 2015. Konsensus Pengelolaan Dan

Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2 Di Indonesia. Jakarta: Perkumpilan

Endokrinologi Indonesia.

Pubchem, 2021. Andrographolide Compound [online].

https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Andrographolide, diakses

tanggal 6 Januari 2021.

Pujirahayu, N., Bhattacharjya, D.K., Suzuki, T., and Katayama, T., 2019. α-

Glucosidase Inhibitory Activity of Cycloartane-type Triterpenes Isolated from

Indonesian Stingless Bee Propolis and Their Structure-activity Relationship.

Pharmaceuticals, 12 (3).

Rais et al, 2013. Determination of Andrographolide Isolate Activity To Α-Amylase

and Α-Glucosidase Using Apostolidis and Mayur Method. Traditiona, Vol.

18(3), p 162–166.

Riyanti, S., Ratnawati, J., and Aprilianti, S., 2019. Potensi buah okra (Abelmoschus

esculentus (L.) Moench) Sebagai Inhibitor Alfa-glukosidase. Kartika : Jurnal

Ilmiah Farmasi, 6 (1), 6.

Sa’adah, H. and Nurhasnawati, H., 2015. Perbandingan Pelarut Etanol dan Air pada

Pembuatan Ekstrak Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine americana Merr)

Menggunakan Metode Maserasi. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1 (2), 149–153.

Salim, M., Sulistyaningrum, N., Isnawati, A., Sitorus, H., Yahya, Y., and Ni’mah,

T., 2017. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Kulit Buah Duku (Lansium

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 36: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

27

domesticum Corr) dari Provinsi Sumatera Selatan dan Jambi. Jurnal

Kefarmasian Indonesia, 6 (2), 117–128.

Sastrohamidjojo, H., 2005. Kimia Organik, Sterokimia, Lemak, dan Protein.

Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.

Siadi, K., 2012. Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropha Curcas) Sebagai

Biopestisida Yang Efektif Dengan Penambahan Larutan Nacl. Jurnal MIPA,

35 (1).

Subramanian, R., Asmawi, M.Z., and Sadikun, A., 2008. In vitro α-glucosidase and

α-amylase Enzyme Inhibitory Effects of Andrographis paniculata Extract and

Andrographolide. Acta Biochimica Polonica, 55 (2), 391–398.

Sukmawati et al, 2016. Uji Efek Hipoglikemik Kombinasi Ekstrak Etanol Daun

Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) Dengan Acarbose Pada Tikus

Putih (Rattus norvegicus) Terinduksi Aloksan. Journal of Chemical

Information and Modeling, As-Syifaa (ISSN : 2085-4714), Hal. 75-82.

Swinney, D.C., 2011. Molecular Mechanism of Action (MMoA) in Drug Discovery.

1st ed. Annual Reports in Medicinal Chemistry. Elsevier Inc.

Warditiani, N.K., Larasanty, L.P.., Widjaja, I.N.K.., Juniari, N.P.M., Nugroho, A.E.,

and Pramono, S., 2014. Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak Terpurifikasi

Herba Sambiloto. Jurnal Farmasi Udayana, 1–9.

Wulandari, L., 2011. Kromatografi Lapis Tipis. PT. Taman Kampus Presindo,

Jember. Penerbit Taman Kampus Presindo.

Yin, Z., Zhang, W., Feng, F., Zhang, Y., and Kang, W., 2014. α-Glucosidase

inhibitors isolated from medicinal plants. Food Science and Human Wellness,

3 (3–4), 136–174.

Yu, B.C., Chang, C.K., Su, C.F., and Cheng, J.T., 2008. Mediation of β-endorphin

in Andrographolide-induced Plasma Glucose-lowering Action in Type I

Diabetes-like Animals. Naunyn-Schmiedeberg’s Archives of Pharmacology,

377 (4–6), 529–540.

Yuniarto, A. and Selifiana, N., 2018. Aktivitas Inhibisi Enzim Alfa-glukosidase

dari Ekstrak Rimpang Bangle (Zingiber cassumunar Roxb.) secara In vitro.

Media Pharmaceutica Indonesiana (MPI), 2 (1), 22.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 37: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

28

LAMPIRAN

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 38: UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA …

29

BIOGRAFI PENULIS

Penulis dengan nama lengkap Katarina Agnes F. B.

Langkeru, lahir di Dili pada tanggal 24 Januari 1998.

Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara dari

pasangan Bapak Alexander Kapitan Langkeru dan Ibu

Anastasia Benedikta Lazar. Penulis menempuh

pendidikan formal di TKK Sta.Theresia KKY Penfui

(2002-2003), SDK St. Arnoldus Janssen Penfui (2003-

2009), SMPK Sta. Theresia Kupang (2009-2012), dan

SMAN 3 Kupang (2012-2015). Pada tahun 2016 penulis

melanjutkan pendidikan ke jenjang perguruan tinggi di

Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta. Penulis pernah mengikuti kegiatan

kepanitian JMKI Osteoporosis Day sebagai anggota

divisi perlengkapan (2016), menjadi volunteer dalam

kegiatan Mental Health Issues Campaign (2018), meraih juara 3 dalam lomba lukis

Mental Health Day Competition (2019) dan masuk dalam karya terpilih lomba

fotografi Awareness Psychotrait (2020) yang diadakan oleh Psychofest Fakultas

Psikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI