Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

65
IMUNOASAI (PEMERIKSAAN SEROLOGI) Departemen Patologi Klinik Univ. Wijaya Kusuma Surabaya dr. Febtarini R, Sp.PK

description

lllll

Transcript of Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Page 1: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

IMUNOASAI (PEMERIKSAAN SEROLOGI)

Departemen Patologi Klinik

Univ. Wijaya Kusuma Surabaya

dr. Febtarini R, Sp.PK

Page 2: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Serologi

• Suatu ilmu yang mempelajari cara mendeteksi suatu infeksi di dalam serum pasien, misalnya adanya antibodi (Ab) spesifik terhadap mikroba tertentu

• Uji serologi didasarkan atas ikatan spesifik antara antigen (Ag) dan antibodi (Ab)

Ag yang telah diketahui akan bereaksi/berikatan dengan Ab yang belum diketahui di dalam serum

Sebaliknya Ab yang telah diketahui dapat digunakan untuk mendeteksi Ag dalam serum pasien

• Reaksi Ag-Ab dapat diamati atas terbentuknya presipitasi, aglutinasi atau dengan bantuan label tertentu, misalnya label radioaktif, label enzims dll

Page 3: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 4: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 5: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 6: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

-S-S--S-S--S-S-

Regio variabel

L H L H

Fc

Fab

Gambar 1. Struktur dasar dari molekul antibodi L = Light Chain H = Heavy chain

2. Komponen yg terpenting dalam serologi yaitu ANTIBODIANTIBODI

Page 7: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Beberapa Istilah penting dlm Imunoasai

Ikatan Ab-Ag adalah spesifik seperti kunci-anak kunci. Reaksi silang dapat terjadi dengan struktur mol Ag lain yang mirip dengan Ag pasangannya tergantung dari :

- profil spesifitas Ab-nya &- kemurnian Ag-nya

Ab yang amat spesifik = Ab dengan binding sites yang hanya dapat mengikat Ag dengan struktur molekul yang unik/tertentu saja.

a. Spesifitas dari Ab

Page 8: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

x

y

z

x

y

z

Antigen I Antibodi I

Antigen II

v

w

x v

w

x

X

Y

Z

X

Y

Z

V

W

X

X

Y

Z

Gambar 2. Kompleks dua antigen yang memiliki satu epitop yang sama (X) dan berbagai macam antibodi

yang mungkin terbentuk

Antibodi II

Page 9: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

b. Ukuran kuantitas Ab

Ada beberapa cara tentukan konsentrasi Ab dalam serum.

- Kualitatif pos. /neg. adanya perubahan fisik dari bahan pemeriksaan. (+/-)

- Semi kuantitatif ; ditentukan dengan pengenceran serum secara progresif Titer (1/10, 1/100, 1/640)

- Kuantitatif ; ditentukan dengan menggunakan beberapa sera baku kurva baku. Akurasi dicek dengan serum kontrol. (100 pg/mL, 2 μL/mL) Hasilnya diinterpolasi ke dalam kurva baku.

Page 10: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 3. Kurva baku uji ELISA

0Kadar Bahan

X

OD

5 g/dl

Page 11: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

FAKTOR-2 DASAR YG MEMPENGARUHI IMUNOASAI

Sifat dari Ag. Ab diberi nama sesuai dengan cara penentuan yang paling sens. Mis : aglutinin, presipitin dll

Elektrolit dan pH2

1

Waktu dan suhu. Reaksi Ag-Ab terjadi dalam 2 tahapa. Ikatan spesifik Ab dg Ag/Hapten yang sesuaib. Terjadi reaksi yg dapat dilihat (presipitasi dll)

3

Mekanisme Daya Tahan NonspesifikBahan yg normal/abnormal terdapat dalam sekret/cairan tubuh.

4

Rasio Ag dan Ab5

Page 12: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 13: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

prozone postzone

Page 14: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Prozone,Tak ada presipitasi

Equivalent zone,Presipitasi

Post zone,Tak ada presipitasi

Gambar 4. Berbagai macam rasio Ag – Ab dan implikasinya

= ANTIBODI

= ANTIGEN

Page 15: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

BAHAN PEMERIKSAAN UTK IMUNOASAI

MACAM BAHAN : serum , plasma, css Usahakan jangan hemolisis

Inaktivasi C 56°C, 30 menit

Ag untuk Imunoasai. Sebaiknya dibuat sendiri dari strain lokal, lebih baik yang multistrains.

Page 16: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

IMUNOASAI

KADAR BAHANKADAR BAHAN

RENDAH ( ng/ml, pg/ml ) TINGGI (mg/ml,ug/ml)

Hasil reaksi tak tampak

FAKTOR PENGUAT (LABEL)

IF RIA EIA

Homogen Heterogen = ELISA

Hasil reaksi DAPAT DILIHAT

Presipitasi/RID

UJI AGLUTINASI

ICA

Page 17: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

UJI PRESIPTASI UJI AGLUTINASI UJI FIKSASI KOMPLEMEN UJI NETRALISASI TOKSIN

I. IMUNOASAI TAK BERLABEL

Ada 2 jenis imunoasai.I. IMUNOASAI TAK BERLABELII. IMUNOASAI BERLABEL

JENIS IMUNOASAI

Page 18: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Ag yang larut Antibodi

PRESIPITASI

Gambar 5. Prinsip dasar uji presipitasi

UJI PRESIPITASI

Presipitasi adalah bila Ag + Ab dalam bentuk larutan menghasilkan suatu agregasi yang terlihat dengan mata

Page 19: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Ag.

Serum dengan Ab

Inkubasi

Presipitasi

Gambar 6. Uji presipitasi tabung

Page 20: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 21: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 22: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Antisera dalam agar

GAMBAR 10. R.I.D

1

3

4

5

6

7

8 2

Sera baku

Tes serum

Tes serum

Tes serum

Tes serum

Tes serum

Page 23: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

APLIKASI KLINIS UJI PRESIPITASI

Uji Tabung : VDRL - Makro

Uji Slide : VDRL - Mikro

Uji Tabung Kapiler : Penentuan CRP

RID : Penentuan kelas Ig

Page 24: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Imunoelektroforesis

• Migrasi protein serum di dalam gel dan apabila bertemu dengan antigen yang sesuai akan terjadi presipitasi

Page 25: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 26: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Ag. pada permukaan sel

Ab.Aglutinasi

Gambar 11. Prinsip dasar reaksi aglutinasi

UJI AGLUTINASI

Tak larut

Page 27: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

+ -Gambar 12. Uji Aglutinasi Slide

Page 28: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 13. Uji Aglutinasi tabung

Serum ( Ab )

Susp. Ag

Inkubasi

Aglutinasi

Page 29: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 30: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 31: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

AGLUTINASI TAK LANGSUNG

A. AGLUTINASI PASIF

B. Ab TAK LENGKAP

a. Ab Monovalen

b. Lokasi Tersembunyi / Ukuran Terlalu Kecil ( Ig. G )

Page 32: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

+ +Ag Larut

PartikelPartikel disalut Ag

Ab dalam serum

AglutinasiGambar 14. Uji aglutinasi pasif

Partikel:

Seldarah merah

Lateks

Carbo adsorben

(Ko-aglutinasi)

Page 33: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

APLIKASI KLINIS UJI AGLUTINASI

Uji Slide (lempeng): uji Widal slide

Uji Tabung : uji Widal tabung

Aglutinasi Tak Langsung: uji Rose-Waaler

III. UJI HEMAGLUTINASI : KULIAH Bank Drh

IV. UJI LISIS IMUN & FIKSASI KOMPLEMEN

Hampir sama dengan uji aglut. tak langsung,

Hanya Anti – Ig diganti C Lisis Imun

Page 34: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

UJI LISIS IMUN & FIKSASI KOMPLEMEN

• Komplemen di dalam plasma sebanyak 3 mg/ml dalam bentuk inaktif

• Jika bertemu dengan kompleks Ag-Ab komplemen menjadi aktif (melalui jalur klasik), dan menghasilkan berbagai kaskade aktivasi, misalnya lisis dari sel target

Page 35: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Prinsip Uji Komplemen

Page 36: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Komplemen

Sensitized cell

AbAg pada permukaan sel

= Komplemen

Gambar 15 . Prinsip dasar uji lisis imun

Uji Lisis Imun

Page 37: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 16 . Uji Fiksasi Komplemen

A.

C CTak ada

Lisis

Komplemen Komplemen

Terikat

Sensitized SDM

B.

C C Lisis

Komplemen Komplemen

Bebas

Serum dgn. Ab

Serum tanpa Ab

Uji Positif

Uji Negatif

Page 38: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

An example of the complement fixation test.

Fig. 17.14 Complement fixation test.

Page 39: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

II. IMUNOASAI BERLABEL

1. CAT FLUORESENS: IF

2. RADIOISOTOP: RIA

3. ENZIM: IMUNOASAI ENZIM ( EIA )

A. EIA HOMOGEN

B. EIA HETEROGEN (ELISA)

C. UJI IMUNO-PEROKSIDASE

4. EMAS KOLOIDAL:ASAI IMUNOKROMATOGRAFIK (ICA)

Page 40: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

CUCI

Mikroskop Fluoresens

Ab diket berlabel cat fluoresensAg tak diket.

Fiksasi pada slide

Kompleks Ag-Ab Berfluoresensi

Gambar 18. Prinsip dasar uji imunofluoresens langsung (direct).

1. IMUNOASAI FLUORESENS (IF)

Page 41: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

CuciAg diket.

Ab tak diket

Cuci

Mikroskop Fluoresens

Kompleks Ag – Ab tak tampak

AHG dilabel Fluorescein

Kompleks Ag – Ab – AHG berfluoresensi

Gambar 19. Prinsip dasar uji imunofluoresens tak langsung (indirect).

Page 42: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

An example of direct and indirect immunofluorescence testing.

Fig. 17.15 Immunofluorescence testing

Page 43: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

KELEMAHAN UJI IF

Peralatan canggih dan mahal

Perlu tenaga terlatih

Per hari maks 25 slide / analis

Sukar dibuat otomatis

Pelaksanaan agak kompleks & membosankan

Page 44: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 20. Prinsip dasar Uji RIA R = label radioisotop

R

RRR

RR

R

R

R

Radiation Counter

2. Uji RIA

Radioisotop : 3H Thymidin, 131 I

Page 45: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 21. Prinsip dasar Uji RIA kompetitif

R

R

R

R

R

R R

RADIATION COUNTER

Cuci

Page 46: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

KELEMAHAN UJI RIA

Butuh alat mahal & tenaga terlatih

Waktu paruh reagens amat pendek ( 1,5 – 2 bln )

Perlu perlindungan khusus pd petugas lab.

Perlu tempat pembuangan reagens yang khusus

Page 47: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

• Prinsip dasar Elisa adalah pemakaian enzim untuk mendeteksi adanya ikatan Antigen-Antibodi (Ag:Ab)

• Enzim akan merubah (mengkonversi) substrate yang tidak berwarna (kromogen) menjadi produk berwarna yang mengindikasikan adanya ikatan Ag:Ab

Page 48: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Gambar 24. Prinsip dasar uji ELISA langsung

Ab

PRODUK berwarna

SUBSTRAT berkromogen

Ag pada Fase padat

Anti –Ig berlabel enzim

Page 49: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Direct ELISA

• Untuk mendeteksi Ab

Enzim: AK (Alkalin fosfatase) atau HRPO (Horse Raddish Peroxidase)

Substrate : TMB (Tetra methyl benzidine) atau NPP (p-nitrophenyl phosphate)

Page 50: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

SUBSTRAT berkromogen

PRODUK berwarna

Ag

Ab I pada Fase padat

Ab II berlabel enzim

Gambar 23. Prinsip dasar (tak langsung)

double antibody sandwich ELISA

Page 51: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Indirect ELISA (Sandwich ELISA)

• Untuk mendeteksi adanya antigen (Ag)

Page 52: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 53: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Antibodi dilapiskan pada dasar sumuran

Bahan yg diperiksa ditambahkan → terjadi reaksi Ag-Ab

Ditambahkan anti-antibodi ( Mo anti-Ab) berlabel BIOTIN (biotinylated)

Ditambahkan streptavidin berlabel enzim

Ditambah kromogen → Warna, diukur secara kolorimetri memakai Elisa-reader

ELISA

Page 54: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

SUBSTRAT BERKROMOGEN

PRODUK berwarna

Ab pada Fase padat

Ag berlabel enzim

Gambar 22. Prinsip dasar uji ELISA kompetitif

Uji ELISA

Ag dlm serum

Page 55: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

An example of the indirect and capture ELISA methods.

Fig. 17.16 Methods of ELISA testing.

Page 56: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk
Page 57: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

CONTOH APLIKASI KLINIS SEROLOGI TEST

1. Sifilis

2. Demam tifoid

3. Tuberkulosis

Page 58: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

SIFILIS

Paling Ideal ; Ig. M- ELISA ( Dx, keaktivan, mengikuti hasil Rx )

Di Indonesia ; TPHA Dx VDRL Aktivitas &

mengikuti hasil Rx

Neurosyphilis : VDRL Dx Jumlah sel Protein Total

Keaktivan & mengikuti hasil Rx

Page 59: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

UJI SEROLOGI DEMAM UJI SEROLOGI DEMAM TIFOIDTIFOID

1.1. TES WIDALTES WIDAL

2.2. TES IgM SalmonellaTES IgM Salmonella

3.3. ELISAELISA

4.4. BIAKAN / KULTUR DARAHBIAKAN / KULTUR DARAH

Page 60: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

UJI WIDAL (AGLUTINASI)

Dari hasil 1X tes belum dapat ditarik kesimpulan yang berarti. Perlu ulangan setelah 5-7 hari

Harga normal tes Widal tabung.

Aglutinin O : 1/160

Aglutinin H : 1/160

Aglutinin PA : 1/80

Aglutinin PB : 1/320

Vaksinasi; aglutinin H dapat dipertahankan beberapa tahun,

Antibiotika ; dapat memperlambat kenaikan titer

Page 61: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

INDIKASI SEROLOGI TBINDIKASI SEROLOGI TB• INDIKASI:INDIKASI:

1.1. BTA DAHAK NEGATIFBTA DAHAK NEGATIF

2.2. TB EKSTRAPULMONUMTB EKSTRAPULMONUM

3.3. TB ANAKTB ANAK

4.4. SPESIFISITAS:SPESIFISITAS:– TGT JENIS ANTIGEN (REAKSI SILANG)TGT JENIS ANTIGEN (REAKSI SILANG)

5.5. KONTROVERSI KARENA:KONTROVERSI KARENA:– Kurang pemahaman patogenesisKurang pemahaman patogenesis

– Bersikukuh pada Postulat KochBersikukuh pada Postulat Koch

Page 62: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

Lateral flow immuno assay

62

LATERAL FLOW IMMUNOASSAY

Page 63: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

CONTOH PARAMETERPEMERIKSAAN SEROLOGI

CRP = Protein C reaktif

- Suatu alfa globulin yg ada di serum pd inflamasi

- Suatu reaktan fase akut, indikator non spesifik inflamasi yg berhbgn dg imunologi

- Tidak dipengaruhi oleh anemia, kehamilan, hiperglobulinemia

- serial, utk indeks aktivitas penyakit dan monitoring terapi

Page 64: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

64

•Poliklonal antibodi•Antibodi IgG dalam kelas IgM

•Kadar IgM terbesar, bisa dideteksi oleh alat•Antibodi terhadap determinan antigenik pada fragmen Fc immunoglobulin

Sumber: PKB PK,2002

AntibodiRheumatoid

factor

FAKTORREMATOID

Page 65: Tes Serologi Dr Febtarini, Sp.pk

TERIMA KASIH ATAS PERHATIAN ANDA