STUDI IN-VITRO -...
Transcript of STUDI IN-VITRO -...
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
STUDI IN-VITRO : EFEK ANTIKOLESTEROL DARI
EKSTRAK METANOL BUAH PARIJOTO (Medinilla speciosa
Blume) TERHADAP KOLESTEROL TOTAL
SKRIPSI
MUHAMMAD SAIFUL AMIN
1111102000043
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
OKTOBER 2015
ii
UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
STUDI IN-VITRO : EFEK ANTIKOLESTEROL DARI
EKSTRAK METANOL BUAH PARIJOTO (Medinilla speciosa
Blume) TERHADAP KOLESTEROL TOTAL
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
MUHAMMAD SAIFUL AMIN
1111102000043
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
PROGRAM STUDI FARMASI
JAKARTA
OKTOBER 2015
vi
ABSTRAK
Nama : Muhammad Saiful Amin
Program Studi : Farmasi
Judul : Studi in vitro ; Efek Antikolesterol dari Ekstrak Metanol Buah
Parijoto (Medinilla speciosa Blume) Terhadap Kolesterol Total
Parijoto (Medinilla speciosa Blume) merupakan tanaman endemik yang telah
banyak digunakan masyarakat sekitar untuk mengobati penyakit sariawan, diare,
kolesterol serta sebagai nutrisi bagi ibu hamil. Buah parijoto memiliki kandungan
senyawa flavonoid, tanin, dan saponin yang telah diketahui pada penelitian
sebelumnya memiliki efek antikolesterol. Tujuan dari penelitian ini untuk
mengetahui ada atau tidaknya aktivitas ekstrak metanol buah parijoto (Medinilla
speciosa Blume) sebagai antikolesterol dengan melihat kemampuan ekstrak untuk
menurunkan kadar kolesterol dari larutan standar kolesterol yang digunakan
sebagai kontrol pembanding (baku kolesterol 100 ppm). Ekstrak metanol buah
parijoto dibuat seri konsentrasi 50, 75, 100, 125 dan 150 ppm. Analisis
konsentrasi kolesterol dilakukan dengan menggunakan metode fotometri
kolesterol yaitu dengan mereaksikan kolesterol dengan asam asetat anhidrat dan
asam sulfat pekat yang kemudian dibaca absorbansinya menggunakan
spektrofotometer UV-Vis. Hasil dari penelitian ini menunjukkan bahwa tiap
konsentrasi ekstrak metanol buah parijoto memiliki aktivitas antikoleserol secara
in vitro, ekstrak dengan konsentrasi 150 ppm memiliki aktivitas antikolesterol
yang paling signifikan karena memberikan persen penurunan kolesterol sebesar
30,396 % dibandingkan larutan kontrol pembanding.
Kata Kunci : Medinilla speciosa Blume, aktivitas antikolesterol, fotometri
kolesterol, Lieberman-Burchard
vii
ABSTRACT
Name : Muhammad Saiful Amin
Program Study : Pharmacy
Title : In vitro studies; Anti-Cholesterol Effects of Methanol Extracts
of Parijoto Fruit (Medinilla speciosa Blume) Against
Cholesterol Total
Parijoto (Medinilla speciosa Blume) is an endemic plant that has been widely used
in Indonesian society to treat mouth sores, diarrhea, cholesterol, and as a nutrient
for pregnant women. Parijoto fruit contains flavonoids, tannins and saponins
which have been known in previous studies had anti-cholesterol effect. The
purpose of this study to determine the activity of the methanol extract of the fruit
parijoto (Medinilla speciosa Blume) as anti-cholesterol. Anti-cholesterol activity
of methanol extract of parijoto fruit was measured based on the extract's ability to
lower cholesterol levels from the cholesterol standard solution that was used as a
control comparison (cholesterol standard was 100 ppm). The methanol extract of
parijoto fruits was made in serial concentration of 50 ppm, 75 ppm, 100 ppm, 125
ppm, and 150 ppm. Analysis cholesterol concentrations were measured using
cholesterol photometry which was a method by reacting cholesterol with acetic
acid anhydride and sulfuric acid, and then the absorbance of the compound was
measured using UV-Vis spectrophotometer. The Results of this study showed that
each concentration of the methanol extract of fruit parijoto has anti-cholesterol
activity in vitro. The best anti-cholesterol activity was showed at concentration of
150 ppm with the ability to lower cholesterol by 30.396% compared to control
cholesterol solution comparison.
Key Word : Medinilla speciosa Blume, cholesterol photometry, anti-cholesterol
activity, Lieberman-Burchard,
viii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, pujji syukur saya panjatkan kepada Allah azza wa jalla
yang telah melimpahkan rahmat dan karuniaNya kepada saya. Sholawat serta
salam semoga selalu tercurah kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW.
Berkat rahmat dan pertolongan Allah, saya dapat menyelesaikan penelitian dan
penulisan skripsi yang berjudul “Studi In Vitro Efek Antikolesterol dari Ekstrak
Metanol Buah Parijoto (Medinilla speciosa Blume) Terhadap Kolesterol Total.”
Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana
Farmasi dari Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai
pihak mulai dari masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi, sangatlah sulit
untuk menyelesaikan skripsi ini. Dalam kesempatan ini, penulis menyampaikan
terimakasih kepada :
1. Bpk Yardi, Ph.D., M.Si., Apt dan Ibu Lina Elfita, M.Si., Apt selaku dosen
pembimbing yang dengan penuh kesabaran telah banyak memberikan
bimbingan, arahan, ilmu, waktu, tenaga, dan semangat selama proses
penyelesaiian penelitian ini.
2. Prof. Dr. Arief Sumantri S.KM, M.KM selaku Dekan Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Bapak Yardi, Ph.D., Apt selaku ketua Program Studi Farmasi Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta yang telah memberikan motivasi dan dukungan.
4. Bapak dan Ibu dosen pengajar Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
yang telah banyak memberikan ilmu dan teladan selama masa perkuliahan.
5. Kedua orang tua terkasih, Bpk Dr.Hasan Mukmin serta Ibu Kun Hanifah
atas kasih sayang, dukungan, semangat, doa yang tiada henti, serta
bimbingan dan teladan yang baik. Semoga selalu dalam lindungan Allah.
xi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL ................................................................................. i
HALAMAN JUDUL .................................................................................... ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ....................................... iii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................ iv
HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ..................................................... v
ABSTRAK .................................................................................................... vi
ABSTRACT ................................................................................................... vii
KATA PENGANTAR .................................................................................. viii
HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI................. x
DAFTAR ISI ................................................................................................. xi
DAFTRAR GAMBAR ................................................................................. xiv
DAFTAR TABEL ........................................................................................ xv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xvi
BAB 1 PENDAHULUAN ............................................................................ 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................. 1
1.2 Perumusan Masalah ...................................................................... 3
1.3 Hipotesis ....................................................................................... 3
1.4 Tujuan Penelitian .......................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian ........................................................................ 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 5
2.1 Tanaman Medinilla speciosa Blume ............................................ 5
2.1.1 Klasifikasi........................................................................... 5
2.1.2 Morfologi ........................................................................... 5
2.1.3 Tempat Tumbuh ................................................................. 6
2.1.4 Kandungan Kimia .............................................................. 6
2.2 Ekstraksi ....................................................................................... 7
2.2.1 Pengertian Ekstraksi ........................................................... 7
2.2.2 Cairan Penyari .................................................................... 9
2.3 Kandungan Kimia ........................................................................ 10
2.3.1 Flavonoid ............................................................................ 10
xii
2.3.2 Saponin ............................................................................... 10
2.3.3 Tanin................................................................................... 10
2.4 Kolesterol ..................................................................................... 11
2.4.1 Monografi Kolesterol ......................................................... 13
2.4.2 Manfaat Kolesterol ............................................................. 13
2.4.3 Biosintesis, Sekresi dan Eskresi Kolesterol Dalam Tubuh 14
2.4.4 Bahaya Kolesterol .............................................................. 15
2.4.5 Pengukuran Kadar Kolesterol ............................................ 16
2.5 Spektrofotometri UV-Vis ............................................................. 17
2.5.1 Instrumen Spektrofotometri UV-Vis .................................. 20
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ..................................................... 23
3.1 Alur Penelitian .............................................................................. 23
3.2 Waktu dan Tempat ....................................................................... 25
3.3 Bahan dan Alat ............................................................................. 25
3.3.1 Bahan Uji............................................................................ 25
3.3.2 Bahan Lain yang Digunakan .............................................. 25
3.3.3 Alat ..................................................................................... 25
3.4 Prosedur Kerja .............................................................................. 25
3.4.1 Determinasi Tumbuhan ...................................................... 26
3.4.2 Penyiapan Simplisia ........................................................... 26
3.4.3 Pembuatan Ekstrak ............................................................. 26
3.4.4 Penapisan Fitokimia ........................................................... 27
3.4.5 Uji Kadar Air ...................................................................... 28
3.4.6 Uji Aktifitas Ekstrak Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol
secara in-vitro .................................................................... 29
3.4.6.1 Pembuatan Larutan Baku Kolesterol .......................... 29
3.4.6.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ............... 29
3.4.6.3 Penentuan Operating Time ......................................... 29
3.4.6.4 Pembuatan Kurva Standar .......................................... 29
3.4.6.5 Penentuan Aktivitas Antikolesterol ............................ 30
3.4.6.6 Analisis Data .............................................................. 30
xiii
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 31
4.1 Determinasi Tumbuhan ................................................................ 31
4.2 Penyiapan Simplisia ..................................................................... 31
4.3 Pembuatan Ekstrak ....................................................................... 32
4.4 Uji Penapisan Fitokimia ............................................................... 33
4.5 Uji Kadar Air ................................................................................ 35
4.6 Hasil Uji Aktivitas Antikolesterol ................................................ 36
4.6.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ...................... 37
4.6.2 Penentuan Operating Time ................................................. 38
4.6.3 Pemilihan Konsentrasi Kontrol Negatif ............................. 39
4.6.4 Pembuatan Kurva Standar .................................................. 39
4.6.5 Hasil Uji Aktivitas Antikolesterol ...................................... 40
4.6.6 Aktivitas Farmakologi Kandungan Kimia Ekstrak ............ 43
4.6.7 Analisis Data ...................................................................... 45
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ 46
5.1 Kesimpulan ................................................................................... 46
5.2 Saran ............................................................................................. 46
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 47
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Buah Parijoto ................................................................................ 6
Gambar 2. Instrumen Spektrofotometri UV-Vis ............................................ 20
Gambar 3. Alur Kerja Penelitian .................................................................... 23
Gambar 4. Skema Kerja Uji Penurunan Kolesterol Ekstrak Parijoto ............ 24
Gambar 5. Panjang Gelombang Maksimal Larutan Kolesterol ..................... 37
Gambar 6. Kurva Larutan Standar Kolesterol................................................ 40
Gambar 7. Grafik Rata-rata Persen Penurunan Kadar Kolesterol.................. 43
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Kandungan Buah Parijoto (Leliana, 2013) ...................................... 7
Tabel 2. Indeks Polaritas ................................................................................ 9
Tabel 3. Kadar Kolesterol Total Orang Dewasa ............................................ 13
Tabel 4. Hasil Uji Penapisan Fitokimia ......................................................... 33
Tabel 5. Hasil Penentuan Operating Time ..................................................... 38
Tabel 6. Nilai Absorbansi Kurva Standar Kolesterol..................................... 39
Tabel 7. Nilai Rata-Rata Absorbansi dan Kadar Kolesterol .......................... 41
Tabel 8. Rata-rata Persen Penurunan Kadar Kolesterol ................................. 42
Tabel 9. Data Absorbansi Kurfa Kalibrasi ..................................................... 63
Tabel 10. Data Absorbansi Larutan Uji ......................................................... 63
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Hasil Determinasi Buah Parijoto ............................................... 53
Lampiran 2. Uji Fitokimia.............................................................................. 54
Lampiran 3. Pembuatan Larutan Uji Kolesterol ............................................ 55
Lampiran 4. Sertifikat Analisis Baku Kolesterol ........................................... 56
Lampiran 5. Data Perhitungan Rendemen Ekstrak ........................................ 56
Lampiran 6. Data Uji Kadar Air Ekstrak ....................................................... 57
Lampiran 7. Data Perhitungan Pembuatan Larutan Ekstrak .......................... 57
Lampiran 8. Perhitungan Kadar Kolesterol ................................................... 58
Lampiran 9. Perhitungan Persen Penurunan Kadar Kolesterol ...................... 60
Lampiran 10. Gambar Aktivitas Antikolesterol Ekstrak................................ 61
Lampiran 11. Data Absorbansi Spektrofotometri UV-Vis ............................ 62
Lampiran 12. Analisis Data ........................................................................... 63
1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB I
PENDAHULUAN
I.1. Latar Belakang
Kecenderungan pola makan yang serba praktis dan instan seperti makanan
cepat saji dan makanan yang diawetkan telah berkembang dengan pesat di
masyarakat. Jenis makanan tersebut cukup merugikan tubuh manusia, karena
mengandung asam lemak jenuh dan kolesterol tinggi (Nurcahyo, 2008). Tubuh
membutuhkan kolesterol secara terus-menerus yang disintesis di dalam hati
(liver). Sekitar 70% kolesterol dalam darah merupakan hasil sintesis dalam liver,
sedangkan sisanya merupakan sumbangan asupan makanan. Selama jumlah
kolesterol, baik hasil sintesis maupun yang bersumber dari makanan, masih
seimbang dengan tingkat kebutuhan maka tubuh akan tetap sehat (Tisnadjaja,
2006).
Namun, dengan perkembangan pola hidup masyarakat yang cenderung
banyak mengkonsumsi makanan berlemak maka tingkat asupan kolesterol
menjadi lebih tinggi dari tingkat kebutuhannya (Tisnadjaja, 2006). Asupan
makanan dengan kandungan kolesterol tinggi yang berlangsung secara rutin
berakibat pada peningkatan kadar kolesterol dalam darah. Kadar kolesterol total
yang tinggi akan membentuk aterosklerosis yang dapat menyebabkan hipertensi
dan penyumbatan pada pembuluh darah otak, jantung dan pembuluh darah
tungkai. Penyumbatan pada pembuluh darah otak akan menyebabkan penyakit
serebrovaskular seperti stroke. Penyumbatan pada pembuluh darah jantung dapat
menyebabkan penyakit kardiovaskular seperti jantung koroner. Sedangkan
penyumbatan pembuluh darah tungkai menyebabkan penyakit pembuluh darah
tepi yang sering terjadi pada kaki yang dapat menimbulkan keluhan nyeri, kram,
baal dan bahkan ganren (Garnadi, 2012).
Berdasarkan data WHO (2011) penyakit kardiovaskular merupakan
penyebab kematian terbesar di seluruh dunia. Dari 57 juta kematian penduduk
dunia, 17,3 juta (30%) kematian disebabkan oleh penyakit kardiovaskular,
terutama serangan jantung (7,3 juta) dan stroke (6,2 juta). Diperkirakan tahun
2
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2030 bahwa 23,6 juta orang di dunia akan meninggal karena penyakit
kardiovaskular (Sri Sumarti, 2010). Sedangkan di Indonesia sendiri berdasarkan
riset kesehatan dasar (Riskesdas) 2013 yang dikeluarkan oleh badan penelitian
dan pengembangan kesehatan kementrian kesehatan RI pada 1 Desember 2013,
prevalensi jantung koroner berdasarkan wawancara terdiagnosis dokter di
Indonesia sebesar 0,5 persen, dan berdasarkan terdiagnosis dokter atau gejala
sebesar 1,5 persen.
Pengobatan yang selama ini dilakukan untuk menurunkan kadar kolesterol
adalah dengan menggunakan obat-obat sintetik. Beberapa obat sintetis yang dapat
digunakan untuk menurunkan kadar kolesterol antara lain derivat asam fibrat
(gemfibrozil), pengikat asam empedu (kolesteramin, kolstipol), penghambat
HMG-CoA reduktase (gol. Statin), dan asam nikotinat (Tjay,2007). Namun obat
sintetis memiliki berbagai kekurangan antara lain harganya yang mahal dan efek
samping yang ditimbulkan serta ketidaknyamanan dalam pengobatan. Hal tersebut
mendorong berbagai usaha mencari alternatif penggunaan obat tradisional yang
berasal dari tanaman obat (Sitepoe, 1993).
Salah satu tanaman obat yang diduga memiliki khasiat sebagai
antikolesterol adalah Medinilla speciosa blume yang dikenal di Indonesia dengan
nama daerah buah parijoto. Buah parijoto merupakan tanaman khas dari Desa
Colo Kecamatan Dawe Kabupaten Kudus Jawa Tengah. M. Speciosa tumbuh liar
di lereng-lereng gunung atau di hutan-hutan dan kadang dibudidayakan sebagai
tanaman hias (Wibowo,. dkk 2012). Buah parijoto memiliki berbagai kandungan
kimia yaitu: saponin, glikosida, flavonoid, tannin (Leliana, 2013).
Menurut Baraas (1993), flavonoid dapat mengikis endapan kolesterol pada
dinding pembuluh koroner yang mengalami proses pengapuran. Berdasarkan
beberapa penelitian lain senyawa saponin diketahui memiliki peranan dalam
menurunkan kadar kolesterol dengan cara mengikat kolesterol (Smith and
Adanlawo, 2013). Menurut (Rahayu,2005) tanin mampu mengurangi
penimbunan kolesterol dalam darah dengan cara mempercepat pembuangan
kolesterol melalui feces. Buah parijoto secara empiris telah digunakan masyarakat
3
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
untuk mengobati penyakit sariawan, diare, kolesterol serta sebagai nutrisi bagi ibu
hamil (anonim, 2013).
Ekstraksi perlu dilakukan untuk mengambil senyawa aktif yang
terkandung di dalam buah parijoto. Metode ekstraksi yang digunakan adalah
maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Sedangkan untuk mengukur
efektivitas buah parijoto dalam menurunkan kadar kolesterol digunakan metode
fotometri dengan reaksi Lieberman-Burchard karena metode tersebut sangat
spesifik digunakan untuk mengukur senyawa golongan steroid salah satunya yaitu
kolesterol (Attarde et.al, 2010).
Berdasarkan latar belakang di atas, maka dilakukan penelitian terhadap
pengaruh pemberian ekstrak metanol buah parijoto dalam menurunkan kadar
kolesterol.
I.2. Rumusan Masalah
Buah parijoto secara empiris sering digunakan oleh masyarakat kudus dan
sekitarnya sebagai obat untuk sariawan, diare dan untuk menurunkan kadar
kolesterol. Penelitian yang telah dilakukan pada buah ini adalah efek antibakteri
dan antioksidan (Leliana, 2013 dan Niswah, 2014). Sementara aktivitas terhadap
efek antikolesterol belum pernah dilakukan sehingga peneliti tertarik untuk
menguji efek antikolesterol secara in-vitro.
1.3. Hipotesis
Berdasarkan latar belakang yang telah dipaparkan, hipotesis dalam
penelitian ini adalah :
1. Ekstrak metanol buah parijoto mempunyai aktivitas penurunan kadar
kolesterol secara in vitro.
4
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
1.4. Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui ada tidaknya aktivitas penurunan kadar kolesterol dari
ekstrak metanol buah parijoto secara in vitro.
2. Untuk mengetahui pada konsentrasi berapa ekstrak metanol buah parijoto
mempunyai aktivitas penurunan kadar kolesterol secara in vitro yang
paling besar.
1.5. Manfaat Penelitian
1. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah
kepada masyarakat tentang manfaat buah parijoto sebagai pengobatan
alternatif untuk menurunkan kolesterol.
2. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai acuan peneliti
lain dalam melakukan penelitian tentang efek antikolesterol secara in vitro.
3. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat menambah pemahaman
masyarakat bahwa buah parijoto dapat digunakan sebagai salah satu
pilihan dalam pengobatan penderita hiperkolesterolemia dan penderita
obesitas. Juga dapat digunakan sebagai informasi kepada badan POM
dalam membuat daftar obat tradisional yang memiliki khasiat sebagai obat
penurun kolesterol.
5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Medinilla speciosa Blume
2.1.1. Klasifikasi Tanaman
Kingdom : Plantae (Tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)
Super divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua /dikotil)
Sub Kelas : Rosidae
Ordo : Myrtales
Famili : Melastomataceae
Genus : Medinilla
Spesies : Medinilla specioca Blume
(www.plantamor.com)
2.1.2. Morfologi Tanaman
Parijoto merupakan tanaman perdu dengan tinggi 1-2 m, batang bulat,
kulit dengan lapisan gabus jika tua, bergerigi, kasar, putih kecoklatan; daun
tunggal, bersilang berhadapan, tangkai pendek, bulat, lunak, warna ungu
kemerahan, helaiandaun berbentuk lonjong, pangkal dan ujung runcing, tepi rata,
panjang 10-20 cm, lebar 5-15 cm, pertulangan melengkung, permukaan atas licin,
berwarna hijau, permukaan bawah kasar, warna hijau kelabu; bunga majemuk, di
ketiak daun, sempurna, berkelamin ganda, kelopak 5 helai, ujung runcing, pangkal
berlekatan, panjang 3-8 mm, warna ungu tua, benang sari 2 kali lipat jumlah
mahkota, kepala sari berupa kuncup kembengkok, warna merah keunguan, kepala
putik duduk di atas bakal buah, kepala putik bulat, ungu, mahkota lepas, 5 helai,
bentuk kuku, panjang 5-8 mm, warna merah muda; buah buni, bulat, bagian ujung
6
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
berbenjol bekas pelekatan kelopak, diameter 5-8 mm, warna merah keunguan; biji
bulat, jumlah banyak, kecil, putih; akar serabut, putih kotor.
Gambar 1. Buah Parijoto (Medinilla speciosa Blume)
[Sumber : koleksi pribadi]
2.1.3. Tempat Tumbuh
Merupakan tumbuhan liar di lereng-lereng gunung atau di hutan-hutan dan
kadang dibudidayakan sebagai tanaman hias. Tumbuh baik pada tanah yang
berhumus tinggi dan lembab, pada ketinggian 800 m sampai 2.300 m di atas
permukaan laut. Berbunga pada bulan November – Januari dan waktu panen yang
tepat bulan Maret.
2.1.4. Kandungan Kimia
Dari penelitian yang dilakukan (Leliana, 2013) dan (Niswah, 2014) buah
parijoto diketahui memiliki berbagai kandungan kimia yaitu: saponin, glikosida,
flavonoid, tannin. Data yang dihasilkan dari penelitian tersebut dapat dilihat
dalam tabel 1. dibawah ini:
7
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Tabel 1 : Kandungan Buah Parijoto dari hasil penapisan fitokimia ekstrak kasar,
fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi metanol (Leliana, 2013).
No Metabolit
sekunder
Ekstrak kasar Fraksi n-
heksan
Fraksi etil
asetat
Fraksi metanol
1 Alkaloid - - - -
2 Saponin ++ - + +
3 Glikosida + - + ++
4 Flavonoid ++ - ++ ++
5 Tanin +++ - +++ +++
6 Antrakuinon - - - -
2.2. Ekstraksi
2.2.1. Pengertian Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai,
kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa yang tersisa
diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang ditetapkan (Depkes
RI, 2000:5).
Ekstraksi atau penyarian adalah kegiatan penarikan zat kimia yang dapat
larut dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Simplisia yang
diekstraksi adalah senyawa yang dapat larut dan senyawa yang tidak dapat larut,
seperti serat, karbohidrat, dan protein (Depkes RI, 1986:1). Tujuan dari ekstraksi
adalah untuk pemurnian, pemekatan atau pemisahan untuk tujuan analitik.
Pemilihan ekstraksi tergantung dari bahan tanaman yang akan diekstraksi (Depkes
RI, 2000). Terdapat beberapa metode ekstraksi, yaitu:
1. Cara Dingin
Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian sederhana. Maserasi dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari dengan
beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruang
(kamar). Cairan penyari akan menembus dinding sel atau masuk kedalam
rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif tersebut akan larut karena
adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan
8
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
yang di luar sel. Larutan yang lebih pekat (di dalam sel) didesak keluar sel,
masuk ke dalam larutan di luar sel. Peristiwa tersebut berulang sehingga
terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam
sel. Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan
dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan (Ristiana,
2000).
Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur
kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap
maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan
ekstrak), terus-menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) (Depkes RI,
2000).
2. Cara Panas
Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik
didihnya selama waktu tertentu dan dalam jumlah pelarut terbatas yang
relatif konstan dengan adanya pendinginan balik (Depkes RI, 2000).
Digesti
Digesti adalah maserasi denganpengadukan kontinu pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur kamar yaitu pada 40-50 0C
(Depkes RI, 2000).
Dekok
Dekok adalah ekstraksi menggunakan pelarut air pada temperatur
terukur 90 0C selama 30 menit.
Infus
Infus adalah ekstraksi menggunakan pelarut air pada temperatur
penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih,
temperatur terukur 90 0C selama 15 menit (Depkes RI, 2000)
9
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Sokletasi
Sokletasi adalah metode ekstraksi untuk bahan yang tahan
pemanasan dengan cara meletakkan bahan yang akan diekstraksi dalam
sebuah kantung ekstraksi (kertas saring) di dalam sebuah alat ekstraksi
dari gelas yang bekerja kontinu (Voigt, 1995).
2.2.2. Cairan Penyari
Dalam proses pembuatan ekstrak, cairan pelarut adalah pelarut yang baik
(optimal) untuk kandungan senyawa yang berkhasiat atau yang aktif. Dengan
demikian senyawa tersebut dapat terpisahkan dari bahan dan dari senyawa
kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa
kandungan yang diinginkan. Dalam hal ekstrak total, maka cairan pelarut dipilih
yang melarutkan hampir semua metabolit sekunder yang terkandung (Depkes RI,
2000:9).
Pemilihan cairan pelarut atau penyari harus mempertimbangkan banyak
faktor. Cairan penyari yang baik harus memenuhi kriteria antara lain murah dan
mudah diperoleh, stabil secara fisika dan kimia, tidak mudah menguap dan tidak
mudah terbakar, selektif, tidak mempengaruhi zat berkhasiat, ramah terhadap
lingkungan, ekonomis, aman untuk digunakan, diperbolehkan oleh peraturan yang
berlaku, kemudahan dalam bekerja dengan pelarut tersebut dan (Depkes RI,
1986:5). Cairan penyari dapat dikelompokkan ke dalam indeks polaritas
berdasarkan polaritasnya. Indeks polaritas dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 2. Indeks Polaritas
Pelarut Indeks Polaritas
Heksan (C6H14)
Toluen (C7H8)
Dietileter (C4H10)
Diklorometan (CH2Cl2)
Butanol (C4H9OH)
Kloroform (CHCl3)
Etil asetat (C2H5COOCH3)
Aseton (CH3COCH3)
Methanol (CH3OH)
Etanol (C2H5OH)
Asetonitril (CH3CN)
0
2,4
2,8
3,1
3,9
4,1
4,4
5,1
5,1
5,2
5,8
10
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Asam asetat (CH3COOH)
Air (H2O)
6,2
9,0
Indeks polaritas memberikan informasi mengenai kepolaran suatu pelarut.
Semakin besar indeks polaritasnya, maka pelarut tersebut semakin polar (Stahl,
1985:7). Cairan penyari yang digunakan dalam penelitian ini adalah metanol.
Pemilihan metanol sebagai larutan penyari untuk ekstraksi buah parijoto
dikarenakan metanol banyak digunakan untuk ekstraksi tanaman obat dan dapat
menarik zat aktif yang terkandung di dalamnya sebanyak-banyaknya (Noor, dkk.,
2009).
2.3. Kandungan Kimia
2.3.1. Flavonoid
Di dalam tubuh, flavonoid memiliki banyak peran sebagai antioksidan,
flavonoid bertindak sebagai pereduksi LDL di dalam tubuh (Radhika et al., 2011).
Selain mereduksi LDL, flavonoid juga menaikkan densitas dari reseptor LDL di
liver dan mengikat apolipoprotein B (Baum et al., 1998). Selain mereduksi LDL,
flavonoid juga menaikkan densitas dari reseptor LDL di hati dan mengikat
apolipoprotein B (Baum et al., 1998). Flavonoid juga berperan sebagai senyawa
yang dapat mereduksi trigliserida (TGA) dan meningkatkan HDL. Selain itu,
menurut studi yang dilakukan oleh Casaschi et al., 2004 dan Ogawa et al., 2005
flavonoid bekerja menurunkan kadar kolesterol dari dalam darah dengan
menghambat kerja enzim 3-hidroksi 3-metilglutaril koenzim A reduktase (HMG
Co-A reduktase) (Sekhon, 2012).
2.3.2. Saponin
Dalam beberapa penelitian pada tanaman dengan kandugan saponin,
senyawa ini memiliki peranan mampu menurunkan kadar koleterol dengan cara
mengikat kolesterol (Smith and Adanlawo, 2013).
2.3.3. Tanin
Tanin tergolong senyawa polifenol. Polifenol sebagai antioksidan
mempunyai efek yang menguntungkan pada fungsi endotel yaitu menurunkan
11
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
oksidasi LDL dan meningkatkan produksi nitric oxide (NO). Oksidasi LDL akan
menginduksi respon inflamasi dengan memproduksi leukosit dan sitokin pada
endotel. Senyawa antioksidan (polifenol) menurunkan oksidasi LDL dan
mencegah inflamasi pada endotel. Nitric oxide adalah vasodilator endogenous
yang mempunyai kemampuan anti aterosklerosis. Polifenol akan mencegah
oksidasi LDL. Oksidasi LDL akan menghasilkan Reactive Oxygen Species (ROS)
yang bersifat toksik, dan jika berikatan dengan NO akan membentuk peroksinitrit
oksidan. Oksidasi kolesterol ini dapat memacu terjadinya proses aterosklerosis
(Vita,2005). Selain itu menurut Rahayu (2005), tanin mampu mengurangi
penimbunan kolesterol dalam darah dengan cara mempercepat pembuangan
kolesterol melalui feces.
2.4. Kolesterol
Kolesterol adalah lipid amfipatik dan merupakan komponen struktural
esensial pada membran dan lapisan luar lipoprotein plasma. Senyawa ini disintesis
di banyak jaringan dari Asetil KoA (Botham dan Mayes, 2009). Kolesterol
merupakan komponen utama sel otak dan syaraf. Kolesterol terdapat dalam
konsentrasi tinggi dalam jaringan kelenjar dan di dalam hati di mana kolesterol
disintesis dan disimpan. Kolesterol merupakan bahan antara pembenukan
sejumlah steroid penting, seperti asam empedu, asam folat, hormon-
hormonadrenal korteks, estrogen, androgen dan progesteron (Almatsier, 2009).
Bila asupan kolesterol tidak mencukupi, sel hati akan memproduksinya.
Dari hati, kolesterol diangkut oleh lipoprotein yang bernama LDL (low density
lipoprotein) untuk dibawa ke sel-sel tubuh yang memerlukan termasuk sel otot
jantung, otak, dan lain-lain agar dapat berfungsi sebagaimana mestinya. Kelebihan
kolesterol akan diangkut kembali oleh lipoprotein yang disebut HDL (high density
lipoprotein) untuk dibawa ke hati yang selanjutnya akan diuraikan lalu dibuang ke
dalam kantung empedu sebagai asam (cairan) empedu (Garnadi, 2012)
Sumber kolesterol ada dua, yaitu kolesterol eksogen yang berasal dari
makanan yang kita makan sehari-hari, dan koleterol endogen yang dibuat didalam
sel tubuh terutama hati. Di dalam tubuh, kolesterol bersama dengan fosfolipid
12
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
digunakan untuk membentuk membran sel dan membran organ-organ yang berada
di dalam tubuh (Fatmah, 2010). Sekitar separuh kolesterol tubuh berasal dari
proses sintesis (sekitar 700 mg/hari) dan sisanya diperoleh dari makanan. Hati dan
usus masing-masing menghasilkan sekitar 105 dari sintesis total pada manusia
(Botham dan Mayes, 2009). Bahan makanan yang mengandung tinggi kolesterol
adalah kuning telur, daging merah, otak, dan hati. Kolesterol tidak disintesis oleh
tumbuhan, sayur dan buah-buahan (Manurung, 2004).
Dalam tubuh, kolesterol ditransportasikan melalui plasma darah dengan
cara berikatan dengan protein. Ikatan ini disebut dengan lipoprotein. Terdapat dua
jenis utama dari lipoprotein, yaitu sebagai berikut (Mumpuni dan Wulandari,
2011):
1. Low Density Lipoprotein (LDL). Jenis kolesterol ini sering disebut
sebagai kolesterol jahat. Kolesterol LDL mengangkut kolesterol paling
banyak di dalam darah. Tingginya kadar kolesterol LDL menyebabkan
pengendapan kolesterol dalam arteri. Kolesterol LDL merupakan faktor
resiko utama penyakit jantung koroner (Nurrahmani, 2012).
2. High Density Lipoprotein (HDL). Kolesterol HDL mengangkut kolesterol
lebih sedikit dari pada LDL dan sering disebut kolesterol baik karena
dapat membuang kelebihan kolesterol jahat di pembuluh darah arteri
kembali ke hati, untuk diproses dan dibuang. HDL mencegah kolesterol
mengendap di arteri dan melindungi pembuluh darah dari proses
aterosklerosis (Nurrahmani, 2012). Batasan kadar kolesterol total pada
orang dewasa dapat di lihat pada tabel 3.
Tabel 3. Kadar Kolesterol Total Orang Dewasa
Kriteria Kolestrol total (mg/dl)
Rendah < 200
Normal 200 – 239
Tinggi ≥ 240
13
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Kolesterol yang melebihi batas normal di dalam tubuh, yaitu lebih dari 240
mg/dl dapat menyebabkan arterosklerosis (penyumbatan pada pembuluh darah)
(Roskoski, 1996 : 241).
2.4.1. Monografi Kolesterol
Nama : Kolesterol
Sinonim : Cholesterin, Cholesterolum
RE dan BM : C27H46O 386,67
Pemerian : Serbuk putih atau putih kekuningan, tidak berasa, tidak stabil
terhadap paparan cahaya
Kelarutan : Larut dalam kloroform, aseton, dan minyak nabati, praktis tidak
larut dalam air, kelarutan dalam ethanol, eter, n-heksan dan
methanol meningkat dengan peningkatan suhu.
Melting point : 147-1500C
Boiling point : 3600C (sebagian terdekomposisi)
Kestabilan : Kolesterol stabil bila disimpan dalam wadah tertutup rapat dan
terlindung dari cahaya (Raymond et al).
2.4.2. Manfaat Kolesterol
Kolesterol merupakan senyawa lemak yang kompleks yang dihasilkan
oleh tubuh dan mempunyai berbagai macam manfaat antara lain :
1. Kolesterol berperan sebagai proses pembentukan membran sel.
2. Sebagai bahan dasar pembentuk hormon-honmon steroid.
3. Membuat asam empedu untuk proses emulsi lemak.
4. Berperan sebagai prekusor dalam proses pembentukan Vitamin D
Jumlah kolesterol melimpah di otak dan jaringan saraf lainnya, hal
tersebut mencerminkan bahwa pentingnya fungsi kolesterol pada jaringan-
jaringan tersebut (Soeharto, 2001).
14
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.4.3. Biosintesis, Sekresi dan Eskresi Kolesterol Dalam Tubuh
Pada dasarnya kolesterol disintesis dari asetil koenzim A melalui beberapa
dahapan reaksi. Secara garis besar dapat dikatakan bahwa asetil koenzim A
diubah menjadi isopentil pirofosfat dan dimetalil pirofosfat melalui beberapa
reaksi yang melibatkan beberapa jenis enzim. Selanjutnya isopentil pirofosfat dan
dimetalil pirofosfat bereaksi membentuk kolesterol. Pembentukan kolesterol ini
berlangsung melalui beberapa reaksi yang membentuk senyawa-senyawa antara,
yaitu geranil pirofosfat, skualen, dan lanosterol (Puedjiadi dan Supriyanti, 2005).
Biosintesis kolesterol umumnya terjadi di hati dan usus namun dapat juga
terjadi di hampir semua jaringan yang mengandung inti sel, proses biosintesis
berlangsung didalam retikulum endoplasma dan sitosol (Botham dan Mayes,
2009).
Kecepatan pembentukan kolesterol dipengaruhi oleh konsentrasi kolesterol
yang telah ada dalam tubuh. Apabila dalam tubuh terdapat kolesterol dalam
jumlah yang telah cukup, maka kolesterol akan menghambat sendiri reaksi
pembentukannya. Sebaliknya apabila kolesterol sedikit karena berpuasa maka
kecepatan pembentukan kolesterol akan meningkat (Puedjiadi dan Supriyanti,
2005).
Kolesterol yang disintesis berperan sebagai penyusun membran sel dan
partikel sub selular, pembentukan hormon dan vitamin yang kemudian beredar di
dalam darah. Sebagian kolesterol yang kembali ke hati akan di ubah menjadi asam
empedu, disimpan dalam kandung empedu dan kemudian disekresi ke dalam usus
halus untuk mengemulsifikasi lemak sehingga lebih mudah diserap. Setelah
proses pencernaan lemak, asam empedu hampir seluruhnya direabsorbsi di dalam
usus halus dan kembali ke hati melalui vena porta. Asam empedu dan kolesterol
yang tidak direabsorbsi masuk ke dalam kolon, diubah menjadi steroid normal
(koporostanol dan koprostanos), kemudian keluar bersama tinja (Naber, 1991).
15
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.4.4. Bahaya Kolesterol
Dislipidemia merupakan suatu keadaan dimana terdapat kelainan
metabolisme lipid yang ditandai oleh kelainan fraksi lipid dalam plasma. Kelainan
fraksi lipid yang utama adalah kenaikan kadar kolesterol total, kenaikan kadar
kolesterol LDL, penurunan kadar kolesterol HDL, serta kenaikan kadar
trigliserida (Adam et al., 2004). Kelebihan kolesterol dalam tubuh terutama
berkaitan dengan aterosklerosis, yaitu pengendapan lemak dalam dinding
pembuluh darah sehingga distensibilitas pembuluh darah menurun (Fatmah,
2010).
Proses aterosklerosis menyebabkan pengerasan dinding pembuluh darah
menjadi tidak elastis, memperkecil diameter pembuluh darah shingga
menghambat aliran darah, dan dapat mengakibatkan sumbatan embolus pada
pembuluh darah akibat terlepasnya plak ateroskleros pada dinding pembuluh
darah. Plak dapat menebal di dinding pembuluh darah namun tidak semua plak
menempel kuat. Sebagian plak bersifat rapuh dan mudah terlepas dari dinding
pembuluh darah yang dapat terjadi kapan saja dan menimbulkan suatu serangan
tiba-tiba, seperti serangan jantung dan stroke. Berikut berbagai dampak kronik
dan akut dari kadar kolesterol tinggi (Garnadi, 2012).
a. Aterosklerosis pada pembuluh darah otak
Aterosklerosis pada pembuluh darah otak menyebabkan penyakit
serebrovaskular atau penyakit pembuluh darah otak seperti stroke. Stroke
merupakan serangan otak akibat kelainan pembuluh darah otak yang terjadi
secara tiba-tiba. Serangan stroke berdasarkan penyebabnya terdiri dari dua
jenis, yaitu stroke perdarahan dan stroke infark. Stroke infark berkaitan erat
dengan kadar kolesterol darah yang tinggi.
b. Aterosklerosis pada pembuluh jantung koroner
Aterosklerosis pada pembuluh jantung menyebabkan penyakit
kardiovaskular, salah satunya yaitu penyakit jantung koroner. Sumbatan aliran
darah pada pembuluh jantung koroner menyebabkan ketidakcukupan
16
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
pembuluh darah dan oksigen ke jantung. Pada keadaan inilah penderita
jantung koroner mengeluhkan nyeri pada dada. Gejala ini sering disebut
angina pektoris.
c. Aterosklerosis pada pembuluh darah tungkai
Aterosklerosis pada pembuluh darah tungkai menyebabkan penyakit arteri
perifer. Keadaan ini paling sering terjadi pada pembuluh darah kaki. Sumbatan
pembuluh darah kaki menyebabkan keluhan nyeri, kram, bahkan dapat
menimbulkan komplikasi berupa gangren pada kaki. Pasien yang mengalami
penyakit arteri perifer beresiko mendapatkan serangan jantung.
2.4.5. Pengukuran Kadar Kolesterol
Untuk mengetahui kandungan kolesterol dalam berbagai sampel dapat
dilakukan dengan menggunakan berbagai metode pengukuran, baik secara
kualitatif maupun kuantitatif dari metode yang sederhana sampai metode yang
kompleks. Tentu saja setiap metode memiliki kelebihaan dan kekurangan. Salah
satu metode yang dapat digunakan untuk mengukur kadar kolesterol yaitu metode
fotometri dengan mereaksikan larutan kolesterol dengan pereaksi Lieberman-
Burchard yang kemudian dideteksi menggunakan alat spesifik berupa
spektrofotometer (Attarde dkk, 2010). Jumlah kolesterol ditentukan kolorimetris
dengan menerapkan reaksi Liebermann-Burchard dan dibandingkan dengan
larutan standard kolesterol yang diketahui (Dawiesah, 1989 : 99).
Reaksi Liebermann-Burchard merupakan dasar penentuan fotometri
kolesterol. Cuplikan kolesterol dilarutkan dalam kloroform direaksikan dengan
asetat anhidrat dan sedikit asam sulfat pekat akan terjadi pewarnaan yang khas
untuk sterol tunggal (Schunack,et al., 1990 : 81). Pada reaksi Liebermann-
Burchard larutan akan berubah warna dengan segera menjadi merah dengan cepat
akan menjadi biru-violet (Kolekalsiterol kolesterol) dan untuk selanjutnya akan
menjadi hijau (ergokalsiferol) yang nilai absorbansinya dapat dideteksi dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis (Schunack, et al., 1990 : 634).
17
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Prinsip uji ini adalah mengukur kadar kolesterol dengan penambahan
asam sulfat dan asam asetat ke dalam larutan kolesterol yang dilarutkan dalam
kloroform (Attarde dkk, 2010). Alasan digunakannya asam asetat anhidrat adalah
untuk membentuk turunan asetil dari steroid. Sedangkan fungsi dari kloroform
adalah untuk melarutkan kolesterol yang bersifat non polar. Sesuai dengan prinsip
“like disolve like” maka senyawa non polar akan larut pada pelarut non polar
(Lehninger 1988). Namun dalam penelitian ini larutan kolesterol dibuat dengan
menggunakan pelarut etanol 96% pada suhu 450C. Hal ini dilakukan karena telah
diketahui bahwa kelarutan kolesterol akan meningkat seiring dengan peningkatan
suhu, dan suhu yang optimum untuk melarutkan kolesterol dalam etanol 96%
adalah pada suhu 450C (Baluja et al., 2009).
2.5. Spektrofotometri Ultra Violet – Visible (UV-Vis)
Prinsip spektrofotometri UV-Vis adalah cahaya yang berasal dari sumber
cahaya diuraikan dengan menggunakan prisma sehingga diperoleh cahaya
monokromatis yang dapat diserap oleh zat yang akan diperiksa. Cahaya
monokromatis merupakan cahaya satu warna yang mempunyai satu panjang
gelombang. Semua molekul dapat mengabsorbsi radiasi dalam daerah UV-tampak
karena mengandung elektron baik campuran maupun menyendiri yang dapat
dieksitasikan ke tingkat energi yang lebih tinggi. Absorbsi molekul pada panjang
gelombang tertentu, tergantung pada berapa kuat elektron itu terikat dalam
molekul itu. Elektron dalam suatu ikatan kovalen tunggal terikat dengan kuat, dan
diperlukan radiasi berenergi tinggi atau panjang gelombang pendek untuk
eksitasinya. Kebanyakan penerapan spektrofotometri ultraviolet dan tampak pada
senyawa organik didasarkan pada transisi dan karenanya memerlukan hadirnya
gugus kromofor dalam molekul itu. Transisi ini terjadi dalam daerah spektrum
sekitar 200-700nm yang praktis untuk digunakan dalam eksperimen (Underwood
dan Day, 2002 : 382-391).
Istilah yang sering digunakan dalam spektroskopi elektronik adalah
kromofor. Kromofor digunakan untuk menyatakan gugus tidak jenuh yang dapat
menyerap radiasi dalam daerah ultraviolet dan tampak. Setiap molekul akan
menyerap energi yang berbeda-beda sehingga spektrum absorbansinya dapat
18
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
digunakan untuk analisa kualitatif. Sedangkan jumlah radiasi yang diabsorbsi
sebanding dengan jumlah molekul sehingga spektra absorbsinya dapat digunakan
untuk analisa kuantitatif (Hardjono, 1991 : 22).
Spektrum serapan kandungan tumbuhan dapat diukur dalam larutan yang
sangat encer dengan pembanding blanko pelarut serta menggunakan
spektrofotometer yang merekam otomatis. Senyawa yang tidak berwarna diukur
pada panjang gelombang 200 sampai 400 nm dan senyawa yang berwarna pada
panjang gelombang 400 sampai 700 nm (Harborne, 1987 : 21).
Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan
spektrofotometri UV-Vis terutama untuk senyawa yang semula tidak berwarna
yang akan dianalisis dengan spektrofotometri visibel karena senyawa tersebut
harus diubah terlebih dahulu menjadi senyawa yang berwarna. Berikut adalah
tahapan-tahapan yang harus diperhatikan :
1. Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis
Hal ini perlu dilakukan jika senyawa yang dianalisis tidak menyerap pada
daerah tersebut. Cara yang digunakan adalah dengan merubah menjadi
senyawa lain atau direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang
digunakan harus memenuhi beberapa persyaratan yaitu :
a. Reaksinya selektif dan sensitif.
b. Reaksinya cepat, kuantitatif, dan reprodusibel.
c. Hasil reaksi stabil dalam jangka waktu yang lama.
Keselektifan dapat dinaikkan dengan mengatur pH, pemakaian masking
agent, atau penggunaan tehnik ekstraksi.
2. Waktu operasional (Operating time)
Cara ini biasa digunakan untuk pengukuran hasil reaksi atau pembentukan
warna. Tujuannya adalah untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil.
Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu
pengukuran dengan absorbsi larutan.
19
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3. Pemilihan panjang gelombang
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisa kuantitatif adalah
panjang gelombang yang mempunyai absorbsi maksimal. Untuk memilih
panjang gelombang maksimal, dilakukan dengan membuat kurva hubungan
antara absorbsi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada
konsentrasi tertentu.
4. Pembuatan kurva baku
Seri larutan baku dibuat dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai
konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi
diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbsi
dengan konsentrasi. Bila hubungan Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku
berupa garis lurus.
5. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan
Absorban yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2-0,8
atau 15-70% jika dibaca sebagai transmitan. Ini berdasarkan anggapan bahwa
kesalahan dalam pembacaan adalah 0,005 atau 0,5% (kesalahan fotometrik)
(Rohman dan Ganjar, 2007 : 251-256).
Spektrofotometri UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel
yang berupa larutan, gas atau uap. Sampel yang berupa larutan perlu
memperhatikan beberapa persyaratan pelarut yang dipakai, antara lain :
a. Pelarut yang dipakai tidak mengandung ikatan rangkap terkonjugasi pada
struktur molekulnya dan tidak berwarna.
b. Tidak berinteraksi dengan molekul yang dianalisis.
c. Kemurniannya harus tinggi/derajat untuk analisis (Mulja dan Suharman,
1995 : 28).
20
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.5.1. Instrumen Spektrofotometri Ultra Violet – Visible
Pada umumnya konfigurasi dasar setiap spektrofotometer UV-Vis berupa
susunan peralatan optik terkonstruksi sebagai berikut :
Gambar 2. Instrumen Spektrofotometer UV-Vis
Keterangan :
SR = Sumber radiasi
M = Monokromator
SK = Sampel kompartemen
D = Detektor
A = Amplifier atau penguat
VP = visual display atau meter (Mulja dan Suharman, 1995).
Bagian-bagian instrumen spektrofotometer UV-Vis, yaitu :
1. Sumber radiasi
Beberapa macam sumber radiasi yang dipakai pada spektrofotometer UV-
Vis yaitu:
a. Lampu deuterium
Lampu deuterium dapat dipakai pada daerah panjang gelombang 190
sampai 380 nm. Berdasarkan rentang panjang gelombang tersebut sumber
radiasinya memberikan spektrum energi yang lurus. Sedangkan pada panjang
gelombang 486 nm sampai 651,1 nm memberikan dua garis spektra yang
dipakai untuk mengecek ketepatan panjang gelombang pada spektro UV-Vis.
b. Lampu tungtsen
Merupakan campuran dari filamen tungtsen dan gas iodine (halogen),
digunakan sebagai sumber radiasi pada daerah pengukuran sinar tampak
dengan rentangan panjang gelombang 380nm sampai 900 nm. Pada daerah
tersebut sumber radiasi tungsten-iodin memberikan energi radiasi sebagai
garis lengkung.
SR D SK M A VD
21
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
c. Lampu merkuri
Lampu merkuri adalah sumber radiasi yang mengandung uap merkuri
bertekanan rendah. Biasanya sumber radiasi merkuri ini dipakai untuk
mengecek atau kalibrasi panjang gelombang pada spektrofotometer UV-Vis
pada daerah ultraviolet khususnya disekitar panjang gelombang 365 nm.
2. Monokromator
Berfungsi untuk mendapatkan radiasi monokromator dari sumber radiasi
yang memancarkan radiasi polikromatis.
3. Sampel kompartemen
Kompartemen ini digunakan sebagai tempat diletakkannya kuvet. Kuvet
merupakan wadah yang digunakan untuk menaruh sampel yang akan dianalisis.
Kuvet yang baik harus memenuhi beberapa syarat sebagai berikut :
a. Permukaannya harus sejajar secara optis
b. Tidak berwarna sehingga semua cahaya dapat di transmisikan
c. Tidak ikut bereaksi terhadap bahan-bahan kimia
d. Tidak rapuh
e. Bentuknya sederhana
4. Detektor
Merupakan salah satu bagian dari spektrofotometer UV-Vis yang
berfungsi mengubah sinyal radiasi yang diterima menjadi sinyal elektronik.
5. Amplifier
Amplifier berfungsi untuk memperkuat hasil pembacaan detektor dalam
hal panjang gelombang. Selanjutnya panjang gelombang tersebut dilanjutkan ke
rekorder untuk mengubah kedalam bentuk sinyal-sinyal listrik dalam bentuk
spekrum.
22
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
6. Visual display
Merupakan sistem baca yang memperagakan besarnya isyarat listrik yang
dinyatakan dalam bentuk % Transmitan maupun Absorbansi (Mulja dan
Suharman, 1995).
23 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 3
METODOLOGI PENELITIAN
3.1. Alur Penelitian
maserasi dengan metanol
(Dievaporasi dengan Rotary Evaprator)
Penapisan fitokimia
Gambar 3. Alur kerja penelitian
Buah segar yang telah disortir
Dicuci dengan air mengalir dan dikering anginkan
Diblender
Ditimbang
Maserat Ampas
Ekstrak Kasar
Uji Kadar Air
Id. Alkaloid Id. Saponin Id. Glikosida
Id. Flavonoid Id. Tannin Id. Antrakuinon
Uji In Vitro aktivitas anti kolesterol
Analisis data
24
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Didiamkan di tempat gelap 15
menit, terbentuk perubahan
warna menjadi hijau
Uji In Vitro Aktivitas Anti Kolesterol
Gambar 4. Skema Kerja Uji
Penurunan Kolesterol Ekstrak Parijoto
Ekstrak metanol parijoto dibuat dengan konsentrasi
50, 75, 100, 125 dan 150 ppm dalam etanol 96%
Masing-masing konsentrasi
dipipet 5 ml
Dibaca absorbansinya dengan spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang maksimumnya
Diambil 5 ml dan ditambah 2 ml asam asetat
anhidrat dan 0,1 ml H2SO4 pekat
ditambahkan dengan 5 ml baku kolesterol 200 ppm
dalam etanol 96%
25
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.2. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan mulai bulan Mei 2015 di Laboratorium Penelitian
II, Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia dan Laboratorium Kimia FKIK
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3.3. Bahan dan Alat
3.3.1 Bahan Uji
Bahan uji yang digunakan adalah buah parijoto (Medinilla speciosa
Blume) yang diperoleh pada tanggal 2 Februari 2015 dengan spesifikasi warna
merah muda keunguan dan rasa asam sepat yang berasal dari Desa Colo,
Kabupaten Kudus, Jawa Tengah
3.3.2 Bahan Lain yang Digunakan
Bahan lain yang digunakan dalam penelitian ini adalah metanol, etanol
96%, kertas saring, alumunium voil, kapas, kloroform, pereaksi Dragendorff,
pereaksi Mayer, HCl pekat, logam magnesium, FeCl3, asam sulfat pekat, asam
asetat anhidrat, dan baku kolesterol dengan merk dagang (TCI) Tokyo Chemical
Industri.
3.3.3 Alat yang Digunakan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah blender, enlemeyer, beker
glass, gelas ukur, cawan porselen, rotary evaporator, botol gelap, timbangan
analitik, tabung reaksi, water bath, oven, pipet, micro pipet, kuvet, vortex, dan
spektrofotometer UV-Vis.
3.4. Prosedur Kerja
Pelaksanaan penelitian meliputi beberapa tahap kegiatan, yaitu proses
determinasi buah parijoto, preparasi buah parijoto, ekstraksi buah parijoto, uji
fitokimia, uji aktivitas ekstrak terhadap penurunan kolesterol secara in vitro, dan
analisis data.
26
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4.1. Determinasi Tumbuhan
Buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) yang diperoleh dari Desa Colo,
Kabupaten Kudus, Jawa Tengah pada tanggal 2 Februari 2015 dengan spesifikasi
buah berwarna merah muda keunguan dan rasa asam sepat dideterminasi di
Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi LIPI, Bogor, Jawa Barat untuk
memastikan keaslian tumbuhan yang digunakan dan menghindari kesalahan
dalam pemilihan tumbuhan.
3.4.2. Penyiapan Simplisia
Buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) yang digunakan pada penelitian
ini dikumpulkan pada tanggal 2 Februari 2015 dari Desa Colo, Kabupaten Kudus,
Jawa Tengah. Selanjutnya dilakukan sortasi untuk dipisahkan dari kotoran-
kotoran atau bahan-bahan asing sehingga dapat mengurangi jumlah pengotor yang
ikut terbawa dalam bahan uji, kemudian dicuci dengan air mengalir dan dikering
anginkan selama 2 jam. Buah segar yang telah didapatkan kemudian dihaluskan
dengan blender dan dilakukan ekstraksi.
3.4.3 Pembuatan Ekstrak
Ekstrak metanol dari buah parijoto disiapkan dengan metode maserasi,
yakni merendam 3,2 kg buah parijoto yang telah dihaluskan dengan 15 L
methanol. Maserasi dilakukan selama 48 jam sambil sesekali diaduk. Maserat
yang diperoleh dipisahkan menggunakan kertas saring dan proses maserasi
diulang hingga beberapa kali dengan menggunakan pelarut yang sama sampai
hasil maserat berwarna bening yang menandakan pelarut yang digunakan sudah
tidak bisa menarik senyawa yang terdapat didalam ampas hasil maserasi.
27
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Semua maserat yang diperoleh dikumpulkan. Maserat kemudian diuapkan
dan dipekatkan menggunakan vacum rotary evaporator dengan suhu 45 0C sampai
diperoleh sampel ekstrak metanol buah parijoto. Ekstrak kental yang diperoleh,
dihitung untuk diketahui hasil rendemennya.
Rendemen ekstrak = Bobot total ekstrak x 100%
Bobot serbuk total
3.4.2. Uji Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia merupakan analisis kualitatif yang dilakukan untuk
mengetahui komponen bioaktif yang terkandung dalam ekstrak buah Medinilla
speciosa Blume.. Uji penapisan fitokimia yang akan dilakukan meliputi uji
alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, polifenol, steroid dan triterpenoid. Berikut
prosedur masing-masing pengujian.
1. Identifikasi Alkaloid
Ekstrak kasar yang telah diperoleh ditimbang sebanyak 10 mg, lalu
ditambahkan 10 mL kloroform, diaduk rata. Campuran disaring kedalam tabung
reaksi. Kemudian ditambahkan 0,5 mL H2SO4 1 M dan dikocok baik-baik,
dibiarkan beberapa saat. Lapisan atas yang jernih dipipet kedalam dua tabung
reaksi kecil. Salah satu tabung ditambahkan pereaksi Dragendorff dan tabung
satunya lagi ditambahkan pereaksi Mayer masing-masing 2-3 tetes. Reaksi positif
apabila menunjukkan endapan kuning jingga (orange) dengan pereaksi
Dragendorff dan endapan putih dengan pereaksi Mayer (Depkes RI, 1995).
2. Identifikasi Flavonoid
Satu gram sampel diekstraksi dengan 5 ml etanol kemudian ditambahkan
beberapa tetes HCl pekat dan 1,5 gram logam magnesium. Adanya flavonoid
diindikasikan dari terbentuknya warna pink atau merah magenta dalam waktu 3
menit (Mojab, dkk., 2003).
28
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3. Identifikasi Saponin
Sebanyak 0,5 gram ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan dan kemudian dikocok vertikal selama
10 detik. Pembentukan busa setinggi 1-10cm yang stabil selama tidak kurang dari
10 menit menunjukkan adanya saponin. Pada penambahan 1 tetes HCl 2N, busa
tidak hilang (Depkes RI, 1995).
4. Identifikasi Tannin dan Polifenol
Larutan ekstrak uji sebanyak 1 ml direaksikan dengan larutan Besi (III)
klorida 10%, jika terbentuk warna biru tua atau hitam kehijauan menunjukkan
adanya senyawa tanin dan polifenol (Robinson, 1991; Jones and Kinghorn, 2006).
5. Identifikasi Golongan Terpenoid dan Steroid
Pemeriksaan steroid dan triterpenoid dilakukan dengan reaksi Lieberman-
Burchard. Sebanyak 1 ml sampel ditambahkan kloroform, kemudian ditambahkan
asam asetat anhidrida dan beberapa tetes asam sulfat pekat. Hasil uji positif untuk
triterpenoid bila terbentuk warna hijau gelap. Hasil uji positif untuk steroid bila
terbentuk warna merah muda atau merah (Ciulei, 1984).
3.4.3. Uji Kadar Air
Pengujian kadar air ekstrak dilakukan dengan metode gravimetri. Krusibel
porselin kosong dikonstankan terlebih dahulu dengan pemanasan pada suhu 100-
1050C selama 2 jam, didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Ekstrak
ditimbang sebanyak 1 gram dalam krusibel porselin yang telah ditara. Kemudian
dikeringkan pada suhu 105oC selama lima jam, didinginkan dalam desikator dan
kemudian ditimbang. Pengeringan dilanjutkan dan ditimbang pada jarak satu jam
sampai beratnya konstan yaitu perbedaan antara dua penimbangan berturut – turut
tidak lebih dari 2,5%. Kadar air dihitung dalam persen terhadap berat sampel awal
(Depkes RI, 2000).
29
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4.5. Uji Aktivitas Antikolesterol Ekstrak Secara In-vitro
3.4.5.1 Pembuatan Larutan Baku Kolesterol
Dibuat larutan induk kolesterol dengan konsentrasi 1000 ppm yaitu
dengan cara melarutkan 100 mg serbuk kolesterol dalam 100 ml etanol 96% pada
suhu ±450C diatas waterbath, sesekali diaduk hingga larut.
3.4.5.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan Kolesterol
Penentuan maksimum dapat ditentukan dengan spektrofotometri UV-Vis
dengan cara dilakukan scaning panjang gelombang dari larutan standar kolesterol
dengan konsentrasi 100 ppm dalam labu 5 ml yang diambil dari larutan induk
1000 ppm sebanyak 0,5 ml lalu dicukupkan dengan etanol 96% sampai volume 5
ml, lapisan luar tabung ditutup dengan alumunium voil untuk melindungi dari
cahaya, kemudian direaksikan dengan asam asetat anhidrat 2,0 ml dan 0,1 ml
H2SO4. Kemudian didiamkan selama 15 menit. Dilakukan pengukuran
menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 400-700 nm
(Karyati, 2013).
3.4.5.3 Penentuan Operating Time
Penentuan operating time dapat ditentukan dengan cara diambil 0,5 ml
larutan induk kolesterol 1000 ppm lalu dicukupkan dengan etanol 96% sampai
volume 5 ml kemudian direaksikan dengan asam asetat anhidrat 2,0 ml dan 0,1 ml
H2SO4. Diukur tiap 2 menit mulai dari menit ke 10 hingga menit ke 30
menggunakan panjang gelombang maksimal untuk deteksi kolesterol. Kemudian
dibuat hubungan antara waktu pengukuran dengan absorbsi larutan, untuk
mengetahui waktu pengukuran yang stabil.
3.4.5.4 Pembuatan Kurva Standar
Dari larutan induk kolesterol konsentrasi 1000 ppm dibuat 7 seri
konsentrasi yaitu diambil dari larutan induk tersebut sebanyak 0,2; 0,25; 0,3; 0,35;
0,4; 0,45; dan 0,5 ml kemudian dicukupkan volumenya masing-masing hingga 5
ml dengan etanol 96% sehingga dihasilkan masing-masing larutan dengan
30
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
konsentrasi 40, 50, 60, 70, 80, 90, dan 100 ppm. Masing-masing larutan tersebut
ditambahkan asam asetat anhidrat 2,0 ml dan 0,1 ml H2SO4 kemudian
dihomogenkan dengan menggunakan vortex, lapisan luar tabung ditutup
menggunakan alumunium voil untuk melindungi dari cahaya dan didiamkan
selama 15 menit dan diukur absorbansinya dengan menggunakan panjang
gelombang maksimumnya. Kemudian dibuat kurva hubungan antara konsentrasi
dengan absorbansi (Karyati, 2013).
3.4.5.5 Penentuan Aktivitas Antikolesterol dari Ekstrak
Dibuat seri konsentrasi 50, 75, 100, 125 dan 150 ppm dari konsentrasi
1000 ppm ekstrak metanol buah parijoto dalam etanol 96%. Dari masing-masing
konsentrasi diambil 5 ml dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian
ditambahkan dengan 5 ml baku kolesterol dengan konsentrasi 200 ppm dalam
etanol 96%. Diambil 5 ml dari campuran tersebut, divortex selama 2 menit
kemudian ditambah 2 ml asam asetat anhidrat dan 0,1 ml H2SO4 pekat. Larutan
didiamkan di tempat gelap selama waktu 15 menit hingga terbentuk perubahan
warna menjadi hijau. Penelitian dilakukan quarto. Hasil warna yang diperoleh,
dibaca dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimumnya
(Hardiningsih dan Novik, 2006).
Dalam penelitian ini yang digunakan sebagai blangko adalah 5ml etanol
96% ditambah 2 ml asam asetat anhidrat dan 0,1 ml H2SO4 pekat. Sedangkan
kontrol negatif yang digunakan berupa 5 ml larutan kolesterol 100 ppm dalam
etanol 96% ditambah 2 ml asam asetat anhidrat dan 0,1 ml H2SO4 pekat.
3.4.5.6 Analisis Data
Data konsentrasi kolesterol dalam larutan uji yang diperoleh diolah
menggunakan SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 16 untuk
windows. Analisa data yang dilakukan meliputi uji normalitas, uji homogenitas
dan uji parametric (one-way ANOVA, Paired sample T-Test, Post Hock).
31
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
31 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Determinasi Tumbuhan
Buah Medinilla speciosa Blume yang digunakan dalam penelitian ini
diperoleh dari Kecamatan Dawe, Kudus, Jawa Tengah pada tanggal 2 Februari
2015. Untuk memastikan keaslian tumbuhan yang digunakan dan menghindari
kesalahan dalam pemilihan tumbuhan maka dilakukan determinasi di Herbarium
Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi LIPI, Bogor, Jawa Barat.
Determinasi dilakukan dengan mengamati bagian dari tanaman parijoto
seperti akar, cuplikan batang, daun, dan buah yang kemudian dicocokkan dengan
literatur (Flora of Java dan Taksonomi Tumbuhan). Hasil determinasi
menunjukkan bahwa benar tanaman yang diperoleh merupakan tanaman
Medinilla speciosa Blume yang berasal dari suku Melastomataceae (Lampiran 1.)
4.2. Penyiapan Simplisia
Bagian tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini ialah buah.
Sebanyak 4 kg buah parijoto segar yang akan digunakan disortasi kering untuk
memisahkan buah dari ranting-ranting dan pengotor yang ikut terbawa pada saat
proses pemanenan. Buah yang sudah disortir dicuci bersih dengan menggunakan
air mengalir untuk menghilangkan debu dan kotoran yang melekat pada buah.
Tahap selanjutnya buah dikeringanginkan selama 2 jam di tempat yang terlindung
dari paparan sinar matahari langsung untuk menurunkan kadar air pada lapisan
luar buah sehingga tidak mudah ditumbuhi kapang dan bakteri, menghilangkan
aktifitas enzim yang bisa menguraikan kandungan zat aktif, memudahkan proses
pengolahan selanjutnya, sehingga dapat lebih ringkas, tahan lama dan mudah
disimpan serta untuk melindungi kandungan zat aktif dari kerusakan akibat radiasi
sinar matahari (Endarsari., dkk. 2008).
Kemudian buah dihaluskan menggunakan blender sehingga diperoleh
simplisia halus sebanyak 3,2 kg dan dilakukan ekstraksi. Penghalusan dengan
blender bertujuan untuk memperkecil ukuran partikel simplisia, sehingga
32
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
memperluas kontak permukaan antara cairan penyari dan bahan aktif yang
terkandung dalam tanaman sehingga proses ekstraksi dapat berjalan dengan lebih
maksimal.
4.3. Pembuatan Ekstrak
Ekstraksi buah parijoto dilakukan dengan metode maserasi atau
perendaman menggunakan pelarut metanol. Maserasi merupakan cara ekstraksi
sederhana yang dilakukan dengan cara merendam sampel dalam pelarut yang
sesuai selama beberapa hari pada temperatur kamar terlindung dari cahaya.
Prinsip maserasi adalah pelarut yang digunakan dalam proses maserasi akan
masuk ke dalam sel tanaman melewati dinding sel, isi sel akan larut karena
adanya perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam dengan di luar sel melalui
proses difusi hingga terjadi keseimbangan antara larutan di dalam sel dan larutan
di luar sel (Ansel, 1989).
Metanol dapat merusak dinding sel pada sampel sehingga senyawa yang
bersifat polar maupun non polar dapat terlarut dalam metanol. Selama proses
maserasi terjadi proses difusi. Proses ini berlangsung hingga terjadi keseimbangan
antara larutan yang ada di dalam sel dan di luar sel. Keuntungan ekstraksi
menggunakan metode maserasi adalah prosedur dan peralatan yang digunakan
relatif sederhana, biaya oprasional relatif rendah serta dilakukan tanpa adanya
proses pemanasan. (Khopkar, 2008).
Buah parijoto sebanyak 3,2 kg diekstraksi menggunakan 15 L metanol
dengan cara direndam selama 3 hari sambil sesekali diaduk. Proses ini diulang
hingga 8 kali untuk mendapatkan hasil ekstraksi yang maksimal. Hasil maserasi
disaring dan dipekatkan dengan menggunakan vaccum rotary evaporator pada
suhu 450C untuk menghindari kerusakan zat aktif akibat pengaruh suhu tinggi
hingga menjadi ekstrak kental. Pemilihan penggunaan vaccum rotary evaporator
dikarenakan proses pemekatan lebih cepat, pelarut yang digunakan dapat
diperoleh kembali serta meminimalkan kontak dengan udara sehingga
meminimalkan kerusakan senyawa dalam ekstrak. Ekstrak kental yang diperoleh
dari penguapan dengan vaccum rotary evaporator kemudian disimpan dalam
33
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
desikator yang berisi silika untuk membantu menyerap kelembaban serta sisa
pelarut yang masih terkandung di dalam ekstrak.
Ekstrak metanol yang diperoleh sebanyak 126,077 gram dengan persen
rendemen 3,94 %. Hasil ini hampir sama dengan penelitian yang dilakukan
Wachidah tahun 2013 yang menggunakan metanol sebagai pelarut dan hanya
menghasilkan rendemen sebanyak 4,60%. Kecilnya nilai rendemen yang
dihasilkan kemungkinan karena sampel yang digunakan merupakan sampel segar.
Selain itu ada beberapa faktor lain yang dapat mempengaruhi proses ekstraksi
yaitu metode ekstraksi yang digunakan, ukuran partikel sampel, kondisi dan
waktu penyimpanan, lama waktu ekstraksi, perbandingan jumlah sampel terhadap
jumlah pelarut dan jenis pelarut yang digunakan. (Salamah et al., 2008).
4.4. Uji Penapisan Fitokimia Ekstrak Metanol
Uji penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui adanya kandungan
metabolit sekunder yaitu alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, steroid dan terpenoid
yang terkandung dalam ekstrak metanol buah parijoto sehingga dapat diketahui
senyawa yang berpotensi sebagai antikolesterol.
Tabel 4. Hasil Uji Penapisan Fitokimia Ekstrak Metanol
Metabolit
Sekunder
Hasil Uji Kesimpulan
Pustaka Pengamatan
Alkaloid Adanya endapan jingga
dengan penambahan
pereaksi Dragendrof,
endapan kuning dengan
pereaksi Mayer
Tidak terbentuk endapan
jingga dengan pereaksi
Dragendrof dan tidak
terbentuk endapan kuning
dengan pereaksi Mayer
(-)
Saponin Ada busa yang bertahan
± 10 menit setinggi 1-10
cm dan busa tidak hilang
setelah penambahan 1
tetes HCl 2N (Depkes RI,
1995)
Terbentuk busa setinggi 3
cm yang stabil dan tidak
hilang setelah penambahan
HCl
(+)
Steroid
dan
terpenoid
Triterpenoid: Cincin
kecoklatan atau violet
(Ciulei, 1984)
Tidak terbentuk cincin
kecoklatan atau violet
(-)
Steroid: Cincin biru
kehijauan (Ciulei, 1984)
Tidak terbentuk cincin biru
kehijauan
(-)
34
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Flavonoid Terbentuknya warna pink
atau merah magenta
setelah 3 menit (Mojab,
dkk., 2003)
Terbentuk warna merah
magenta
(+)
Tanin Terbentuk warna biru tua
atau hijau kehitaman
(Robinson, 1991)
Terbentuk warna hijau
kehitaman
(+)
Keterangan :
(+) = mengandung senyawa yang dimaksud
(-) = tidak mengandung senyawa yang dimaksud
Dari hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa buah parijoto
mengandung flavonoid, tanin, saponin dan tidak mengandung alkaloid, steroid
dan terpenoid. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh (Leliana,
2013). Skrining fitokimia yang dilakukan merupakan jenis analisis kualitatif yang
hanya mengidentifikasi keberadaan suatu senyawa tanpa menentukan kadarnya
(Harvey 2000).
Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang banyak terdapat dalam
tumbuh-tumbuhan. Untuk mengetahui kandungan flavonoid maka dilakukan uji
wilstater sianidin, dimana uji positif apabila terbentuk warna merah pada lapisan
amil alkohol. Dan hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa buah parijoto
memiliki kandungan senyawa flavonoid.
Uji positif saponin dilakukan dengan menggunakan uji Forth. Saponin
merupakan senyawa aktif permukaan yang dapat membentuk busa apabila
dikocok dalam air (Kristanti dkk., 2008). Timbulnya busa pada uji saponin
menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk buih
dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya (Marliana dkk.,
2005). Dari hasil penapisan fitokimia diketahui bahwa buah parijoto memilliki
kandungan senyawa saponin.
Uji positif tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru kehitaman
(tanin terhidrolisis) atau biru kehijauan (tanin terkondensasi) saat direaksikan
dengan FeCl3 (Robinson, 1991). Dari hasil penapisan fitokimia kandungan tanin
terdapat perubahan warna menjadi biru kehitaman sehingga dapat disimpulkan
bahwa kandungan tanin yang terdapat dalam buah parijoto merupakan tanin
35
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
terhidrolisis. Adanya kandungan tanin dalam buah parijoto yang menyebabkan
adanya rasa sepat pada buah ini.
Pada pengujian steroid dan triterpenoid, analisis senyawa didasarkan pada
kemampuan senyawa tersebut membentuk warna dengan asam sulfat pekat dalam
pelarut asam asetat anhidrat (Ciulei, 1984). Hasil yang diperoleh menunjukkan
hasil negatif dengan tidak terbentuknya cincin berwarna kecoklatan yang
menunjukkan kandungan triterpenoid dan tidak terbentuk cincin berwarna biru
kehijauan sehingga negatif mengandung steroid.
Pada skrining alkaloid prinsipnya yaitu reaksi pengendapan yang terjadi
karena adanya penggantian ligan. Atom nitrogen yang mempunyai pasangan
elektron bebas pada alkaloid dapat mengganti ion iod dalam pereaksi dragendroff
dan pereaksi mayer (Marliana dkk.,2005). Pada pengujian ini tidak terbentuk
endapan jingga setelah penambahan pereaksi dragendroff dan tidak terbentuk
endapan kuning setelah penambahan pereaksi mayer. Alkaloid dapat ditemukan
dalam berbagai bagian tanaman, tetapi sering kali kadar alkaloid dalam jaringan
tumbuhan kurang dari 1% (Kristanti dkk., 2008). Hal ini yang dapat menyebabkan
uji skrining alkaloid memberikan hasil yang negatif.
4.5. Uji Kadar Air Ekstrak Metanol
Pada ekstrak metanol buah parijoto dilakukan uji kadar air untuk
mengetahui besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan (Depkes RI,
2000). Kadar air ekstrak yang diperoleh adalah 9,63%. Hal ini sesuai dengan
literatur yang menyatakan bahwa kadar air ekstrak tidak boleh melebihi 10%.
Semakin sedikit kadar air pada ekstrak maka semakin sedikit kemungkinan
ekstrak terkontaminasi oleh pertumbuhan jamur (Saifudin dkk, 2011).
Kadar air merupakan salah satu parameter penting yang menentukan daya
tahan ekstrak dan terkait dengan aktifitas mikroorganisme selama penyimpanan.
Ekstrak yang mempunyai kadar air yang tinggi lebih mudah ditumbuhi oleh
mikroorganisme. Ekstrak dengan kadar air rendah relatif lebih stabil dalam
penyimpanan jangka panjang daripada ekstrak yang berkadar air tinggi (Pardede
dkk, 2013).
36
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4.6. Hasil Uji Aktifitas Antikolesterol Ekstrak Secara In-Vitro
Uji aktifitas antikolesterol dilakukan dengan menggunakan metode
fotometri kolesterol menggunakan reaksi Lieberman-Burchard untuk mengetahui
jumlah kolesterol bebas yang terdapat dalam larutan sampel yang akan bereaksi
menjadi senyawa berwarna hijau yang selanjutnya dapat diukur absorbansinya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Semakin banyak kolesterol bebas yang
terkandung dalam larutan sampel maka akan semakin pekat warna yang terbentuk
dari larutan tersebut. Semakin pekat warna larutan akan menyerap lebih banyak
cahaya dan mentransmisikan lebih sedikit cahaya, sehingga berpengaruh terhadap
absorbansinya ketika diukur dengan spektrofotometer UV-Vis (Rudel dan Moris,
1973).
Aktifitas antikolesterol dapat diketahui dengan cara membandingkan
absorbansi senyawa berwarna hasil reaksi antara kolesterol bebas dengan asam
asetat anhidrat dan H2SO4 pekat dari larutan kontrol (kolesterol 100 ppm+ asam
asetat anhidrat 2 ml + 0,1 ml H2SO4) dengan larutan uji (kolesterol 100 ppm +
ekstrak metanol buah parijoto + asam asetat anhidrat 2 ml + 0,1 ml H2SO4) untuk
kemudian dihitung persen penurunan kolesterolnya. Dalam metode Lieberman-
Burchard ini reaksi yang dilakukan harus bebas dari air, karena reaksi akan sangat
sensitif dan tidak stabil terhadap air.
Konsentrasi kolesterol yang digunakan pada penelitian ini berdasarkan
hasil orientasi yaitu 100 ppm dalam etanol 96%. Pemilihan etanol 96% sebagai
pelarut berdasarkan pertimbangan ketercampuran antara larutan ekstrak dengan
larutan baku kolesterol sehingga larutan baku kolesterol dan ekstrak dibuat
menggunakan pelarut yang sama agar dapat bercampur dan bereaksi (Sutioso.,
2012). Hal ini sesuai dengan penelitian (Baluja., et al. 2009) yang menyatakan
bahwa kelarutan kolesterol akan meningkat seiring dengan peningkatan suhu, dan
suhu yang optimum untuk melarutkan kolesterol dalam etanol 96% adalah pada
suhu 450C. Proses pembuatan larutan kolesterol dalam etanol dilakukan dengan
cara memanaskan etanol pada suhu 450C kemudian memasukkan kolesterol yang
berbentuk kristal putih dan mengaduknya hingga terlarut sempurna.
37
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4.6.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Dalam Analisis spektrofotometri, pengukuran harus dilakukan dalam
panjang gelombang maksimal, yaitu panjang gelombang yang memberikan
serapan optimum. Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan untuk
mendapatkan serapan yang maksimum dengan mengukur absorbansi larutan baku
kolesterol pada rentang panjang gelombang daerah visible. Hasil absorbansi
panjang gelombang maksimal dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 5. Panjang Gelombang Maksimal Larutan Kolesterol
Panjang gelombang maksimal yang diperoleh dari larutan baku kolesterol
yaitu 423 nm, karena pada puncak kurva tersebut membentuk serapan yang
maksimal. Hal ini sesuai dengan literatur yang menyebutkan bahwa panjang
gelombang maksimum dari larutan kolesterol yang direaksikan dengan asam
asetat anhidrat dan asam sulfat pekat adalah 420,40 nm (Hardiningsih dan Novik,
2006).
Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan untuk mengetahui
ketika absorbsi mencapai maksimum sehingga meningkatkan proses absorbsi
larutan terhadap sinar (Rohman., 2007). Pemilihan panjang gelombang
maksimum sangat menentukan dalam percobaan karena apabila terjadi
38
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
penyimpangan yang kecil selama percobaan akan mengakibatkan kesalahan yang
kecil dalam pengukuran. Jika pemilihan panjang gelombang memiliki spektrum
perubahan besar pada nilai absorbansi saat panjang gelombang sempit, maka
apabila terjadi penyimpangan kecil pada cahaya yang masuk akan mengakibatkan
kesalahan besar dalam pengukuran (Underwood., 1990).
4.6.2 Penentuan Operating Time
Penentuan operating time dilakukan untuk menentukan waktu
sempurnanya reaksi dan stabilnya reaksi yang ditunjukkan tidak adanya
penurunan absorbansi. Hasil penentuan operating time dari larutan baku kolesterol
pada menit ke 10 sampai menit ke 30 dapat dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5 Hasil Penentuan Operating Time
Menit ke- Absorbansi
10 0,682
12 0,698
14 0,709
16 0,709
18 0,709
20 0,708
22 0,707
24 0,705
26 0,702
28 0,700
30 0.697
Dari hasil absorbansi diatas dapat diketahui bahwa mulai dari menit ke 14
sampai menit ke 18 larutan baku kolesterol tetap stabil. Sehingga waktu
pembacaan absorbansi yang dipilih dalam penelitian ini adalah 15 menit. Sesuai
dengan penelitian yang dilakukan (Attarde et., al. 2010).
39
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4.6.3 Pemilihan Konsentrasi Kolesterol Sebagai Kontrol Negatif
Setelah didapatkan panjang gelombang maksimum dari larutan kolesterol
selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi awal dari larutan seri konsentrasi
kolesterol. Tujuan dari pengukuran konsentrasi awal larutan kolesterol adalah
untuk mengetahui nilai absorbansi yang diberikan dari masing-masing konsentrasi
sehingga dapat dipilih konsentrasi kolesterol yang akan digunakan sebagai kontrol
negatif dalam penelitian ini. Setelah dilakukan pengukuran absorbansi pada
panjang gelombang maksimalnya didapatkan hasil bahwa yang digunakan sebagai
kontrol negatif adalah baku kolesterol dengan konsentrasi 100 ppm yang
menunjukkan nilai absorbansi sebesar 0,711. Nilai absorbansi tersebut dapat
digunakan sebagai data dalam analisa fotometri menggunakan spektrofotometer
UV-Vis karena berada pada rentang antara 0,2-0,8 atau sering disebut sebagai
daerah berlaku hukum Lambert-Beer. Jika absorbansi yang diperoleh lebih besar
dari 0,8 maka hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi tidak linear lagi.
4.6.4 Pembuatan Kurva Standar
Pembuatan kurva standar dilakukan dengan mereaksikan 7 seri konsentrasi
larutan baku kolesterol dalam etanol 96% dengan 2 ml asam asetat anhidrat dan
0,1 ml H2SO4. Hasilnya dapat dilihat pada tabel 5:
Tabel 6. Nilai Absorbansi Kurva Standar Kolesterol
Sampel Konsentrasi
(µg/mL)
(x)
Absorbansi
(y)
Persamaan Regresi
Kolesterol
0 0,000
y = 0,0069x + 0,0216
R2 = 0,9938
R = 0,9969
40 0,335
50 0,377
60 0,434
70 0,493
80 0,575
90 0,638
100 0,709
40
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Koefisien korelasi (R2) dari kurva kalibrasi larutan baku kolesterol sebesar
0,9938; lebih besar dari 0,98. Hasil linearitas yang baik diperoleh jika nilai
koefisien regresi mendekati 1 (Taylor, 1990).
Gambar 6. Kurva Standar Kolesterol
4.6.5 Uji Aktifitas Antikoleterol Ekstrak Metanol Buah Parijoto
Ekstrak metanol buah parijoto dibuat seri konsentrasi 50, 75, 100, 125, dan
150 ppm dalam etanol 96%. Pemilihan etanol 96% sebagai pelarut dikarenakan
baku kolesterol yang digunakan untuk percobaan juga dilarutkan dalam etanol
96% sehingga sampel ekstrak metanol dapat bercampur dan bereaksi dengan
kolesterol. Dari masing-masing deret konsentrasi ekstrak metanol buah parijoto
diambil 5 ml larutan sampel kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan 5 ml larutan baku kolesterol dengan konsentrasi 200 ppm.
Dari campuran tersebut diambil 5 ml dan kemudian direaksikan dengan 2 ml asam
asetat anhidrat dan 0,1 ml asam sulfat pekat.
Sedangkan untuk pembandingnya digunakan larutan baku kolesterol 100
ppm dalam etanol 96% sebanyak 5 ml kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi
dan ditambahkan dengan 5 ml etanol 96%. Dari campuran tersebut diambil 5 ml
dan kemudian direaksikan dengan 2 ml asam asetat anhidrat dan 0,1 ml asam
sulfat pekat.
y = 0.0069x + 0.0216 R² = 0.9937
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0 20 40 60 80 100 120
Ab
sorb
ansi
Konsentrasi (µg/mL)
Kurva Larutan Standar Kolesterol
41
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Larutan uji dan larutan pembanding setelah direaksikan didiamkan di
tempat gelap terlindung dari cahaya selama 15 menit, hal ini dilakukan karena
larutan kolesterol bersifat fotodegradasi tidak stabil terhadap cahaya dan akan
berubah menjadi kolestenon. Setelah didiamkan selama 15 menit hingga terbentuk
kompleks larutan berwarna hijau kemudian dibaca serapannya dengan
spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 423 nm. Digunakan
spektrofotometer UV-Vis karena hasil dari reaksi antara larutan uji dengan asam
asetat anhidrat dan asam sulfat pekat akan terbentuk reaksi warna yang berwarna
hijau yang dapat diukur serapannya menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Nilai
rata-rata absorbansi dan kadar kolesterol dari larutan kontrol negatif dan larutan
uji dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 7. Nilai rata-rata absorbansi dan kadar kolesterol
No Sampel Absorbansi Kadar
Kolesterol
1. Kontrol negatif (larutan baku kolesterol
100 ppm)
0,7082 ± 0,0041 99, 507 ppm
2. Kontrol negatif + Ekstrak metanol 50
ppm
0,5932 ± 0,0058 82,841 ppm
3. Kontrol negatif + Ekstrak metanol 75
ppm
0,5432 ± 0,0059 75,594 ppm
4. Kontrol negatif + Ekstrak metanol 100
ppm
0,5135 ± 0,0086 71,290 ppm
5. Kontrol negatif + Ekstrak metanol 125
ppm
0,5010 ± 0,0088 69,478 ppm
6. Kontrol negatif + Ekstrak metanol 150
ppm
0,4995 ± 0,0092 69,261 ppm
Setelah serapan larutan uji dibaca kemudian dihitung persen penurunan
kolesterol dengan cara : kadar kolesterol awal sebesar 100 ppm dikurangi dengan
kadar kolesterol yang sudah ditambahkan larutan ekstrak kemudian dibagi dengan
kadar kolesterol awal sebesar 100 ppm dan dikali seratus persen. Rata-rata persen
penurunan kolesterol oleh sampel ekstrak metanol dapat dilihat pada tabel 8.
42
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Tabel 8. Rata-rata Persen Penurunan Kolesterol oleh Ekstrak
Konsentrasi Ekstrak
Metanol Buah Parijoto
(ppm) Persen Penurunan Kadar Kolesterol (%
b/v)
50 16,749
75 24,031
100 28,357
125 30,178
150 30,396
Berdasarkan persen penurunan yang didapat, ekstrak metanol dengan
konsentrasi 150 ppm mampu menurunkan kolesterol sebesar 30,396 % b/v. Hal ini
menunjukkan bahwa ekstrak metanol buah parijoto terbukti mempunyai aktivitas
penurunan kolesterol secara in vitro karena adanya kandungan metabolit sekunder
seperti tanin, saponin dan flavonoid. Penelitian tentang aktivitas antikolesterol
ekstrak etanol 70% dari buah parijoto secara in vivo telah dilakukan oleh
Kurniawati tahun 2015 hasilnya menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol
70% buah parijoto dengan dosis 500 mg/KgBB terhadap tikus yang diinduksi
kolesterol dan lemak memiliki efek antihiperlipidemia yang ditunjukkan dengan
adanya perbedaan yang signifikan antara kelompok hewan uji yang diinduksi
kolesterol dan lemak dengan kelompok hewan uji yang diinduksi ekstrak
(Kurniawati, 2015).
Aktivitas antikolesterol dari buah parijoto tersebut lebih kecil jika
dibandingkan dengan penelitian yang dilakukan oleh Karyati tahun 2013 yang
menyatakan bahwa ekstrak etanol daun murbei (Morrus alba L) dengan
konsentrasi 100 ppm mampu menurunkan kolesterol sebesar 65,92% b/v secara in
vitro, sedangkan pada isolat flavonoid daun murbei pada konsentrasi yang sama
yaitu 100 ppm hanya mampu menurunkan kolesterol sebesar 35,46% b/v.
Grafik rata-rata persen penurunan kolesterol dari ekstrak metanol buah
parijoto ditunjukkan pada gambar 4.2. Dari gambar grafik tersebut menunjukkan
bahwa semakin besar konsentrasi sampel ekstrak metanol buah parijoto maka
aktivitas antikolesterol yang dihasilkan semakin tinggi.
43
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Gambar 7. Grafik Rata-Rata Persentase Penurunan Kolesterol
4.6.6. Aktivitas Farmakologi Kandungan Kimia Ekstrak Parijoto
Aktivitas ekstrak metanol buah parijoto dalam menurunkan kadar
kolesterol diduga disebabkan oleh adanya kandungan senyawa metabolit sekunder
seperti saponin, flavonoid, dan tanin. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh
Smith and Adanlawo (2013) saponin dapat menurunkan level serum kolesterol
dengan kemungkinan adanya pengikatan saponin dengan kolesterol. Sementara
menurut penelitian lain saponin juga bekerja dengan mengendapkan kolesterol
dan ikut campur dalam sirkulasi enterohepatik asam empedu yang membuat
penyerapan kolesterol di usus terganggu (Kamesh dan Tangarajan, 2012).
Aktivitas antikolesterol dari saponin juga dapat melalui penghambatan reaksi
oksidasi kolesterol LDL. Adanya hambatan reaksi oksidasi LDL akan dapat
menurunkan kadar kolesterol dalam darah (Adeneye dan Olaguniu, 2009).
Mekanisme pengikatan saponin dan kolesterol telah dijelaskan dalam
penelitian yang dilakukan oleh Francis et al (2002) kemungkinan juga merupakan
salah satu mekanisme kerja dari ekstrak metanol buah parijoto dalam menurunkan
kadar kolesterol secara in vitro, dimana terlihat adanya penurunan kadar kolesterol
bila dibandingkan kontrol negatif yang tidak ditambahkan ekstrak metanol buah
parijoto.
0
5
10
15
20
25
30
35
50 75 100 125 150
% P
en
uru
nan
Ko
lest
ero
l
Konsentrasi (ppm)
ekstrak metanol
44
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Senyawa metabolit sekunder lain yang diduga ikut berperan dalam
menurunkan kadar kolesterol ialah tanin. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa
tanin yang terkandung dalam buah parijoto merupakan tanin terkondensasi. Asam
galat merupakan salah satu tanin terhidrolisis yang dilaporkan memiliki aktivitas
antioksidan, antikarsinogenik, antimutagenik, antialergik dan antiinflamasi.
Aktivitas antioksidan dari asam galat yang terkandung dalam ekstrak metanol
buah parijoto diduga berperan dalam menurunkan kadar kolesterol. Sesuai dengan
penelitian yang dilakukan oleh Latha dan Daisy (2011) menunjukkan jika
pemberian asam galat dapat menurunkan kadar kolesterol total dan trigliserida
hingga mendekati kelompok normal. Penelitian lain yang menunjukkan aktivitas
asam galat sebagai antikolesterol adalah Jang et al (2008) yang mengatakan
bahwa asam galat merupakan agen penurun lipid yang efektif. Tanin dalam buah
parijoto kemungkinan juga bekerja dengan mengikat lipid sehingga mengganggu
reaksi antara kolesterol dengan pereaksi lieberman burchard seperti yang pernah
diteliti Silankove et al (2006) pada tanaman Ceraonia siliqua.
Flavonoid yang terkandung dalam buah parijoto juga kemungkinan
memiliki efek dalam menurunkan kadar kolesterol, hal ini dibuktikan melalui
penelitian yang dilakukan oleh Amirthaveni dan Vijayalakshmi (2000) yang
menggunakan tepung kedelai sebagai perlakuan yang menunjukkan bahwa bukan
hanya kadar kolesterol yang menurun, tetapi juga trigliserida VLDL (very low
density lipoprotein) dan LDL (low density lipoprotein). Di sisi lain tepung kedelai
dapat meningkatkan HDL (high density lipoprotein) (Amirthaveni dan
Vijayalakshmi., 2000). Selain itu, menurut studi yang dilakukan oleh Casaschi et
al (2004) dan Ogawa et al (2005) dikatakan bahwa flavonoid bekerja menurunkan
kadar kolesterol dengan menghambat kerja enzim 3-hidroksi 3-metilglutaril
koenzim A reduktase (HMG Co-A reduktase) (Sekhon, 2012).
Selain itu berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Leliana tahun 2013,
ekstrak metanol buah parijoto memiliki aktivitas antioksidan yang cukup tinggi,
yaitu memiliki IC50 sebesar 48,24. Aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol
buah parijoto tersebut diduga juga berperan terhadap aktivitas antikolesterol.
Mekanisme kerja senyawa antioksidan dalam menurunkan kadar kolesterol total
45
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
dan trigliserida darah diduga bekerja dengan cara penghambatan terhadap HMG-
CoA reduktase yang berfungsi sebagai pengkatalis dalam pembentukan kolesterol
dan meningkatkan aktivitas Lechitin Cholesterol Acyl. LCAT merupakan enzim
yang dapat mengkonversi kolesterol bebas menjadi ester kolesterol yang lebih
hidrofobik, sehingga ester kolesterol dapat berikatan dengan partikel inti
lipoprotein untuk membentuk HDL baru. Hal ini akan meningkatkan kadar HDL
serum (Lewis, dkk.,2000 dikutip Aprila, 2010). Mekanisme lain yang mungkin
terjadi ialah kemampuan antioksidan dalam mengikat LDL sehingga dapat
mencegah terjadinya stres oksidatif dan mengatasi radikal bebas (Herowati, dkk.,
2008). Oksidasi kolesterol LDL merupakan suatu proses biologi yang diduga
terlibat dalam mekanisme proses inisiasi dan akselerasi lesi arteri. LDL yang
teroksidasi dapat menyebabkan viskositas darah menjadi lebih kental dan peluang
terjadinya menyumbatan pembuluh darah (atheroskelosis) menjadi lebih tinggi
(Sukandar E, dikutip Aprila, 2010).
4.6.7 Analisis Data
Data konsentrasi kolesterol dari uji penurunan kadar kolesterol selanjutnya
dilakukan uji normalitas untuk melihat distribusi data dan diuji homogenitasnya.
Dari uji normalitas (one-Sample Kolmogorov-smirnov Test) menunjukkan kadar
kolesterol pada ekstrak dengan konsentrasi 50, 75, 100, 125 dan 150 ppm
terdistribusi normal (p≥0,05) dan uji homogenitas (Levene) menunjukkan kadar
kolesterol pada ekstrak dengan konsentrasi 50, 75, 100, 125 dan 150 bervariasi
secara homogen (p≥0,05), karena syarat normalitas dan homogenitas sudah
terpenuhi maka dilanjutkan dengan uji ANOVA. Hasil uji ANOVA menunjukkan
adanya perbedaan secara signifikan pada tiap konsentrasi (p≤0,05). Sehingga
dapat disimpulkan bahwa efek penurunan kolesterol sebanding dengan
peningkatan dosis.
46
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
46 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian diperoleh simpulan sebagai berikut:
1. Ekstrak metanol buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) dapat menurunkan
kadar kolesterol secara in vitro.
2. Semakin tinggi konsentrasi sampel menunjukkan aktifitas antikolesterol yang
semakin tinggi pula.
3. Aktivitas antikolesterol tertinggi ditunjukkan pada konsentrasi 150 ppm, yaitu
dapat menurunkan jumlah kolesterol sebesar 30,396 %.
5.2 Saran
Berdasarkan hasil penelitian maka peneliti menyarankan :
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang kandungan kimia dari buah
parijoto yang dapat menurunkan kadar kolesterol.
2. Perlu dilakukan isolasi senyawa aktif yang diduga berperan terhadap aktifitas
antikolesterol ekstrak metanol buah parijoto.
47
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Daftar Pustaka
Adam, J.M., Soegondo, S., Soemiardji, G., Adriansyah, H., 2004. Petunjuk
Praktis Penatalaksanaan Dislipidemia. Jakarta: PB. PERKENI, 2004: 1-
14, 20-26.
Adeneye, A.A., Olaguniu, J.A. 2009. Preliminary hypoglycemic and
hypolipidemic activity of the aqueous seed extract of Carica papaya Linn.
in Wistar rats. Journal Biology and Medicine Volume 1(1): 1-10
Almatsier, Sunita. 2009. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka
Utama
Amirthaveni. S. dan Vijayalakshmi. P. 2000. Role of soyflour supplementation on
lipid profile among cardiovaskular patients. Prosiding “TSPUC-III”
October 15-20. 2000. Tsukuba. Japan. Pp: 185-186
Ansel,H.C., (1989). Pengatar Bentuk sediaan Farmasi. Edisi 4. UI Press. Jakarta.
Halaman 96,147.
Aprila Fajrin, Fifteen. 2010. Aktivitas Ekstrak Etanol Ketan Hitam untuk
Menurunkan Kadar Kolesterol. Jurnal Farmasi Indonesia. Vol. 5 No. 2.
Attarde D, J Pawar, B Chaudhari, S Pal (2010). Estimation of sterols content in
edible oil and ghee samples. Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res.,5: 135 -137.
Baluja, Shipra, Gajera, Ravi, Vekariya, Nayan, Bhatt, Mehul dan Bhalodia,
Rahul. Solubility of Cholesterol in some alcohols from 293,15 to 318,15 K.
Arcives of Applied Science Research 1:2 263 -270, 2009.
Baraas F. 1993. Mencegah Serangan Jantung dengan Menekan Kolesterol.
Jakarta : PT. Gramedia Pustaka Utama
Botham, K.M, dan Mayes, P.A. 2009. Sintesis, Transpor, dan Ekskresi Kolesterol.
In: Murray R.K, Granner D.K, dan Rodwell, V.W. Biokimia Harper. Edisi
27. Jakarta: ECG.
Baum, J.A., et.,al. 1998. Long term intake of soy protein improves blood lipid
profile and increases mononuclear cell lowdensity lipoprotein receptor
mesenger RNA in hypercholestrolemic post menopausal women. AmJ
ClinNut, 58 (1998) 545.
48
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Casaschi, A., et al., 2004. The chalcone xanthohumol inhibit trigliserid and
apolipoprotein B secretion in HepG2 cell. Journal of Nutr, 134: 1340-
1346.
Ciulei, T., 1981. Methodology for Analysis of Vegetables Drugs, Bucharest
Ciulei, T. 1984. Metodology for Analysis of Vegetables and Drugs. Bucharest
Rumania: Faculty of Pharmacy.
Dawiesah, I. S. 1989. Petunjuk Laboratorium Penentuan Nutrien Dalam Jaringan
dan Plasma Tubuh, Yogyakarta : PAU pangandan gizi UGM
Day, R.A & A.L.Underwood. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif, diterjemahkan
oleh iis Sopyan. Erlangga. Jakarta.
Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan Galenik. Jakarta : Departemen
Kesehatan Republik Indonesia
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standart Umum Ekstrak Tumbuhan
Obat. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia
Endarsari, R , Prayudi, B dan Qanytah. 2008. Pengararuh Pengeringan Terhadap
Mutu Simplisia Temulawak di Kecamatan Tembalang Kota Semarang.
Laporan Penelitian.Balai Pengkajian Pertanian Jawa-Tengah
Fatmah. 2010, Gizi Usia Lanjut. Jakarta: Penerbit Erlangga.
Francis, George., Zohar kerem, Harider P.S., and Klaus Becker., 2002. The
ciological action of saponin in animal systems: a review. British Journal of
Nutrition. (88).p.587-605.
Garnadi, Yudi. 2012. Hidup Nyaman Dengan Hiperkolesterol. Jakarta:
Agromedia Pustaka
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia, Edisi ke dua. ITB: Bandung
Hardiningsih, R dan Novik, N. 2006. Pengaruh Pemberian Pakan
Hiperkolesterolemia Terhadap Bobot Badan Tikus Putih Wistar yang
Diberi Bakteri Asam Laktat. Biodiversitas. Volume 7 : 127 – 130
Hardjono Sastrohamidjojo. (1991). Spektroskopi. Yogyakarta : Liberty
Harvey D. 2000. Modern Analytical Chemistry. The McGraw-Hill Companies,
Inc. 2-8
Herowati, dkk. 2008. Aktivitas Antiinflamasi Kuersetin 3-Monoasetat, Hasil Asetil
Selektif Kuersetin. Artocarpus Vol. 8 No. 2 September 2008 : 60-67.
49
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Jang et al., 2008. Comparison of hypolipidemic activity of syntetic gallic acid-
linoleic acid ester with mixture of gallic acid and linoleic acid, gallic acid
and linoleic acid on high-fat diet induced obesity in C57BL/6 Cr Slc mice.
Elsivier: Chemico-Biological Interactions 174. 109-117
Kamesh, Venkatakrishnan and Thangarajan Sumathi. 2012.
Antihypercholestrolemic effect of Bacopa monniera Linn. On high
cholestrol diet induced hypercholestrolemia in rats. Asian Pasific Journal
of Tropical medicine, 949-955
Karyati. H., 2013. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol dan Isolat Flavonoid
Daun Murbei (Morus alba L.) Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol
Secara In Vitro. Skripsi Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi “Yayasan Pharmasi”
Semarang.
Khopkar, S.M. 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press.
Kristanti, A. N., N. S. Aminah, M. Tanjung, dan B. Kurniadi. 2008. Buku Ajar
Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press. Hal. 23, 47.
Kurniawati. A., 2015. Uji Efek Antihiperlipidemia Ekstrak Etanol Buah Parijoto
(Medinilla speciosa Blume) Terhadap Kolesterol Total, Trigliserida, dan
VLDL pada Tikus Putih Jantan. Skripsi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Latha dan P. Daisy. 2011. Insulin-secretagogue, antihyperlipidemic and other
protective effect of gallic acid isolated from Terminalia bellerica Roxb. In
streptozotocin-induced diabetic rats. Elsivier : Chemico-Biological
Interactions 189. 112-118.
Lehninger, Albert L. 1988. Dasar-dasar Biokimia Jilid 1 Terjemahan Dr, Ir.
Maggy Thenawijaya. Jakarta : Erlangga
Leliana. N., 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Serta Penentuan Kandungan Fenolat
dan Flavonoid Total dari Buah Parijoto. Skripsi UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta
Manurung, Elvi, 2004. Hubungan Antara Asupan Asam Lemak Tak Jenuh
Tunggal dengan Kadar Kolesterol HDL Plasma Penderita Penyakit
Jantung Koroner. Tesis, Mahasiswa Magister Sains Ilmu Gizi Klinik, UI,
Jakarta
50
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Marliana, S. D., V. Suryanti, dan Suyono. 2005. Skrining Fitokimia dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium
edule Jacq. Swartz.) dalam Ekstrak Etanol. Biofarmasi, 3 (1). Pp. 26-31.
Mojab, F. Kamalinejad, M. 2003. Phytochemical Screening of Some Species of
Iranian Plant. Iranian Journal
Mulja, M. dan Suharman, 1995. Analisis Instrumental ed. 1. Surabaya : Airlangga
University Press
Mumpuni, Y. Dan Wulandari, A. 2011. Cara Jitu Mengatasi Kolesterol.
Yogyakarta : Penerbit Andi.
Naber E.C. (1991). Cholesterol Content of Eggs : can and should it be changed.
Dalam : Fat and cholesterol reduces foods : Technologies and Strategies.
Haberstoh C, Morris C.E. 261-275. Gulf Publising Company.Houston
Niswah, Luktuatun. 2014. Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak buah parijoto
(Medinilla sepciosa Blume) menggunakan metode difusi cakram. Skripsi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 14-27.
Noor, A. dkk., 2009. Uji Toksisitas Ekstrak Methanol Beberapa Bagian Jaringan
Tumbuhan Bayur (Pterospermum Subpeltatum C.B. Rob). Jurnal Akta
Kimia Indonesia. 2 (2): 17-24
Nurcahyo, H. 2008. Ilmu Kesehatan Jilid I. Jakarta : PT. Gramedia Pustaka
Utama
Nurrahmani, Ulfa. 2012. Stop! Kolesterol Tinggi. Yogyakarta : Falimia (Group
Relasi Intimeda).
Ogawa, H., Ohno, M. And Baba, K. 2005. Hypotensive and lipid regulatory
actions of 4-hydroxyderricin, a chalcone from Angelica keiskei, in stroke-
prone spontaneously hypertensive rats. Clin. Exp. Pharmacol. Physiol
Pardede, Antoni dkk. 2013. Karakteristik Pektin dengan Memanfaatkan Limbah
Kulit Pisang Menggunakan Metode Ekstraksi. Konversi, Volume 2 No.1,
April 2013.
Poedjiadi, A. dan Supriyanti, F.M.T. 2005. Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta : UI
Press.
51
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Radhika, S., K.H. Smila.,R. Muthezhilan. 2011. Antidiabetic andHypolipidemic
Acivity of Punica granatum Linn on Alloxan Induced Rats. World Journal
of Medical Sciences 6 (4); 178-182.
Rahayu T. 2005. Blood Cholestrol Degree Of White Rat (Rattus Norvegicus L)
After Getting Kombucha Fluid Per-Oral. Universitas Muhamdiyah
Surakarta. Jurnal Penelitian Sains dan Teknologi. 6 (2): 85-100
Raymound, C. , Paul, J. Quinn, E. 2009. Handbook of Pharmaceutical Excipients
Sixth Edition
Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas). 2013. Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan Kementrian Kesehatan RI., 115.
Ristiana, Ketut 2000. ParameterStandar Umum EkstrakTumbuhan Obat. Jakarta;
Dirjen BPPOM.hal.10-11
Robinson, T., 1991. The Organic Constituen of Higer Plants. Edisi ke 6.
Departement of Biochemistry University of Massachusetts.
Rohman, A. dan Gandjar. 2007, Kimia Farmasi Analisis, Yogyakarta: Pustaka
Pelajar
Roskoski, R.1996. Biochemistry. United State of America : W.B. Saunders
Company.
Rudel, L.L. and Moris, M.D. 1973. Determination of Cholesterol using o-
phtalaldehyde. Journal of lipid Research Volume 14, 1973
Saifudin, dkk. (2011). Standarisasi Obat Bahan Alam. Edisi pertama. Graha Ilmu
Yogyakarta
Salamah et al. 2008. Penapisan awal komponen bioaktif dari kijing taiwan
(Anadonta woodiana Lea.) sebagai senyawa antioksidan. Buletin
Teknologi Hasil Perikanan
Schunack, Walter, Mayer, Klaus and Haake; Manfred. 1990. Senyawa Obat, Buku
Pelajaran Kimia Farmasi. Edisi kedua. (Terjm. Joke R. Wattimena dan
Sriwoelan Soebito). Yogyakarta : GMU-Press
Sekhon, S.2012. Antioxidant, Anti-inflamatory and Hypolipidemic Properties of
Apple Flavonols. Nova Scotia Agricultural College Truro; Nova Scotia
52
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Silanikove et al., 2006. Analitical approach and effect of condensed tannins in
carob pods (Ceratonia siliqua) on feed intake, digestive and metabolic
responses of kids. Elsivier 99. 29-38.
Sitepoe, M. 1993. Kolesterol Fobia. Jakarta : PT. Gramedia Pustaka Utama
Smith and Adanlawo, 2013, Tissue lipid profile of rats administered saponin
extract from the root of bitter kola, Advances in Biochemistry, 1(1): 1-4
Soeharto, I. 2001. Kolesterol dan Lemak Jahat, Kolesterol dan Lemak Baik, dan
proses Terjadinya Serangan Jantung dan Stroke. Jakarta : PT. Gramedia
Pustaka Utama
Sri Sumarti, 2010, Risk Factors of Coronary Heart Disease (CHD) in Group of
Aged Young Adult in Dr. Kariadi Hospital Semarang Cardiovascular
Instalation.
Sutioso, Hari., 2012. Pemanfaatan Pektin Yang Diisolasi dari Daun Jambu Biji
(Psidium guajava) Dalam uji In Vitro dan In Vivo Penurunan Kadar
Kolesterol, Skripsi. FT Universitas Indonesia
Stahl,E. 1985, Analisis Obat Secara Kromatrografi dan Mikroskopik, terjemahan
K. Radmawinata dan I. Spediso, Bandung ; Penerbit ITB
Taylor, Richard, 1990. Interpretation of the corelation coeffisient: A Basuc
Riview. Journal of Diagnostic Medical Sonography. Vol.1.pp.35-39.
Tisnadjaja, D. 2006. Bebas Kolesterol dan Demam Berdarah Dengan Angkak.
Jakarta : Penebar Swadaya
Underwood and Day, R.A, 2002 Analisa Kimia Kualtitatif Terjemahan Iis
Sopyan, Erlangga, Jakarta
Vita JA. 2005. Polyphenol and cardiovascular disease effect on endothelial and
platelet function. American Journal Clinical Nutrition. 81
WHO. 2011. Global Atlas on Cardiovaskular Diesease Prevention and Control.
Mendis S, Puska P, Morrving B (eds). Geneva. Diakses pada 25 Februari
2015dari http://www.who.int/cardiovascular_disease/publication/atlas.html
Wibowo, H.A., Wasino & Dewi Lisnoor Setyowati. 2012. Kearifan Lokal dalam
Menjaga Lingkungan Hidup (Studi Kasus Masyarkat di Desa Colo
Kecamatan Dawe Kabupaten Kudus). Journal of educational Social
Studies 1 (1) : 25-30
53
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 1. Hasil Determinasi Buah Parijoto (Medinilla speciosa Blume)
54
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 2. (Uji Fitokimia)
Uji Saponin Uji Tanin dan Polifenol
(Terbentuk busa setinggi 3 cm) (Positif)
Uji Terpenoid dan Steroid Uji Flavonoid
(Negatif) (Positif)
Uji Alkaloid
(Negatif)
55
56
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 4. Sertifikat Analisis Baku Kolesterol
Lampiran 5. Data Perhitungan Rendemen Eksrak
Wadah Berat wadah + zat
(gram)
Berat wadah (gram) Berat zat (gram)
I 177,349 91,832 85,517
II 90,012 49,452 40,56
Jumlah 126,077
= 3,94%
57
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 6. Data Uji Kadar Air Ekstrak
Replikasi Bobot awal ekstrak
(mg)
Setelah 3 jam
(mg)
Setelah 4 jam
(mg)
Setelah 5 jam
(mg)
I 200,11 185,3 181,03 180,69
II 199,87 184,8 180,88 180,55
III 200,09 186,2 183,02 181,02
= 9,63 %
Lampiran 7. Data Perhitungan Pembuatan Larutan Ekstrak
Pembuatan larutan induk ekstrak metanol buah parijoto 1000 ppm.
Sebanyak 0,0503 g ekstrak di add 50 ml etanol 96% = 1,006 mg/ml
Dari larutan induk tersebut dibuat seri konsentrasi
Deret konsentrasi :
1. 50 ppm =
= 0,0503 mg/ml
2. 75 ppm =
= 0,0755 mg/ml
3. 100 ppm =
= 0,1006 mg/ml
4. 125 ppm =
= 0,1258 mg/ml
5. 150 ppm =
= 0,1509 mg/ml
58
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 8. Perhitungan Kadar Kolesterol
Didapatkan persamaan regresi linear kolesterol :
y = -0,0069x + 0,0216; R2 = 0,9938
Perhitungan kadar kolesterol :
1. Kontrol negatif (Kolesterol 100 ppm)
y = -0,0069x + 0,0216
0,7082 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,7082 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 99,507 ppm
2. Konsentrasi ekstrak 50 ppm
y = -0,0069x + 0,0216
0,5932 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,5932 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 82,841 ppm
3. Konsentrasi ekstrak 75 ppm
y = -0,0069x + 0,0216
0,5135 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,5135 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 71,290 ppm
59
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4. Konsentrasi ekstrak 100 ppm
y = -0,0069x + 0,0216
0,5135 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,5135 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 71,290 ppm
5. Konsentrasi ekstrak 125 ppm
y = -0,0069x + 0,0216
0,5010 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,5010 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 69,478 ppm
6. Konsentrasi ekstrak 150 ppm
y = -0,0069x + 0,0216
0,4995 = -0,0069x + 0,0216
x = 0,4995 -0,0216
-0,0069
Kadar kolesterol dalam larutan = 69,261 ppm
60
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 9. Perhitungan Persen Penurunan Kadar Kolesterol
Rumus perhitungan % penurunan kadar kolesterol = kadar larutan baku
kolesterol sebesar 100 ppm yang terbaca oleh spektrofotomoter UV-Vis dikurangi
dengan kadar kolesterol yang sudah ditambahkan larutan ekstrak kemudian dibagi
dengan kadar kolesterol awal sebesar 100 ppm dan dikali seratus persen.
1. Ekstrak metanol 50 ppm
% penurunan kadar kolesterol = 99,507-82,841 x 100% = 16,748 %
99,507
2. Ekstrak metanol 75 ppm
% penurunan kadar kolesterol = 99,507-75,594 x 100% = 24,031 %
99,507
3. Ekstrak metanol 100 ppm
% penurunan kadar kolesterol = 99,507-71,290 x 100% = 28,356 %
99,957
4. Ekstrak metanol 125 ppm
% penurunan kadar kolesterol = 99,507-69,478 x 100% = 30,178 %
99,507
5. Ekstrak metanol 150 ppm
% penurunan kadar kolesterol = 99,507-69,261 x 100% = 30,396 %
99,507
Keterangan = Kadar larutan baku kolesterol 100 ppm yang terbaca oleh
spektrofotometer UV-Vis adalam 99,507 ppm
61
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 10. Gambar Aktivitas Antikolesterol Ekstrak Metanol Buah
Parijoto
62
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 11. Data Absorbansi Spektrofotometer UV-Vis
Tabel 9. Data absorbansi kurfa kalibrasi larutan baku kolesterol
No Nama Sampel Absorbansi
1 Blangko 0,000
2 Larutan baku kolesterol 40 ppm 0,335
3 Larutan baku kolesterol 50 ppm 0,337
4 Larutan baku kolesterol 60 ppm 0,434
5 Larutan baku kolesterol 70 ppm 0,493
6 Larutan baku kolesterol 80 ppm 0,575
7 Larutan baku kolesterol 90 ppm 0,638
8 Larutan baku kolesterol 100 ppm 0,709
Tabel 10. Data absorbansi larutan uji
No Nama Sampel Absorbansi
1 Kontrol Negatif 0,712
2 0,707
3 0,711
4 0,703
5 Ekstrak 50 ppm 0,587
6 0,593
7 0,601
8 0,592
9 Ekstrak 75 ppm 0,537
10 0,551
11 0,544
12 0,541
13 Ekstrak 100 ppm 0,519
14 0,521
15 0,502
16 0,512
17 Ekstrak 125 ppm 0,506
18 0,500
19 0,489
20 0,509
21 Ekstrak 150 ppm 0,500
22 0,487
23 0,509
24 0,502
63
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Lampiran 12. Analisis Data
Test of Homogeneity of Variances
Kadar
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.072 5 18 .408
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
kadar
N 24
Normal Parametersa Mean 78.3549
Std. Deviation 1.08552E1
Most Extreme Differences Absolute .263
Positive .263
Negative -.203
Kolmogorov-Smirnov Z 1.288
Asymp. Sig. (2-tailed) .072
a. Test distribution is Normal.
64
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Multiple Comparisons
kadar
LSD
(I) Kelompok (J) Kelompok
Mean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
kontrol negatif 50 ppm 17.13800* .12191 .000 16.8819 17.3941
75 ppm 24.45675* .12191 .000 24.2006 24.7129
100 ppm 27.78975* .12191 .000 27.5336 28.0459
125 ppm 29.71025* .12191 .000 29.4541 29.9664
150 ppm 30.47125* .12191 .000 30.2151 30.7274
50 ppm kontrol negatif -17.13800* .12191 .000 -17.3941 -16.8819
75 ppm 7.31875* .12191 .000 7.0626 7.5749
100 ppm 10.65175* .12191 .000 10.3956 10.9079
125 ppm 12.57225* .12191 .000 12.3161 12.8284
150 ppm 13.33325* .12191 .000 13.0771 13.5894
75 ppm kontrol negatif -24.45675* .12191 .000 -24.7129 -24.2006
50 ppm -7.31875* .12191 .000 -7.5749 -7.0626
100 ppm 3.33300* .12191 .000 3.0769 3.5891
125 ppm 5.25350* .12191 .000 4.9974 5.5096
150 ppm 6.01450* .12191 .000 5.7584 6.2706
100 ppm kontrol negatif -27.78975* .12191 .000 -28.0459 -27.5336
50 ppm -10.65175* .12191 .000 -10.9079 -10.3956
75 ppm -3.33300* .12191 .000 -3.5891 -3.0769
125 ppm 1.92050* .12191 .000 1.6644 2.1766
150 ppm 2.68150* .12191 .000 2.4254 2.9376
125 ppm kontrol negatif -29.71025* .12191 .000 -29.9664 -29.4541
50 ppm -12.57225* .12191 .000 -12.8284 -12.3161
75 ppm -5.25350* .12191 .000 -5.5096 -4.9974
100 ppm -1.92050* .12191 .000 -2.1766 -1.6644
150 ppm .76100* .12191 .000 .5049 1.0171
65
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
150 ppm kontrol negatif -30.47125* .12191 .000 -30.7274 -30.2151
50 ppm -13.33325* .12191 .000 -13.5894 -13.0771
75 ppm -6.01450* .12191 .000 -6.2706 -5.7584
100 ppm -2.68150* .12191 .000 -2.9376 -2.4254
125 ppm -.76100* .12191 .000 -1.0171 -.5049
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.