Skripsi Wahyu Eka Sari g34061708 13 Juni11

AKTIVITAS ANTIHIPERTENSI AKTINOMISET

ENDOFIT ASAL TANAMAN PEGAGAN DAN

BELIMBING WULUH

WAHYU EKA SARI

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2011

ABSTRAK

WAHYU EKA SARI. Aktivitas Antihipertensi Aktinomiset Endofit Asal Tanaman Pegagan dan

Belimbing Wuluh. Dibimbing oleh YULIN LESTARI dan MIN RAHMINIWATI.

Aktinomiset endofit hidup di dalam jaringan tanaman tanpa menimbulkan efek negatif.

Beberapa tanaman obat berasosiasi dengan mikrob endofit yang dapat menghasilkan senyawa

bioaktif yang sama dengan tanaman inangnya. Inhibisi Angiotensin Converting Enzyme (ACE)

merupakan salah satu mekanisme antihipertensi yang efektif. Potensi aktinomiset endofit

tanaman obat sebagai penghasil inhibitor ACE perlu dikaji. Tujuan penelitian ini adalah

mengisolasi aktinomiset endofit dari akar, batang, daun pegagan (Centella asiatica), dan buah

belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi), serta mengkaji aktivitasnya sebagai antihipertensi melalui

aktivitas inhibitor ACE. Aktinomiset endofit diisolasi dari permukaan tanaman yang telah

disterilisasi, serta ditumbuhkan dan disebar dalam media Humic-acid Vitamin-B agar (HV).

Purifikasi isolat ditumbuhkan pada media International Streptomyces Project No.2 agar (ISP2),

dan ekstrak kasar aktinomiset endofit digunakan untuk uji aktivitas inhibitor ACE secara in

vitro. Sebanyak 12 isolat aktinomiset endofit berhasil diisolasi dari bagian daun pegagan (tiga

isolat) dan buah belimbing wuluh (sembilan isolat). Data yang diperoleh menunjukkan bahwa

sembilan isolat (AEP-1, AEP-2, AEP-3, AEB-1, AEB-3, AEB-5, AEB-6, AEB-7, dan AEB-8)

menunjukkan keragaman aktivitas ACE inhibitor dan tergolong ke dalam Streptomyces spp..

Tiga isolat lainnya (AEB-2, AEB-4, dan AEB-9) tergolong ke dalam non-Streptomyces, dan

juga menunjukkan keragaman aktivitas inhibitor ACE. Sementara itu, tanaman kultur jaringan

pegagan yang bebas dari mikrob endofit tidak menunjukkan adanya aktivitas inhibisi ACE.

Isolat AEP-1 memiliki persentase aktivitas inhibitor ACE tertinggi (279,2%), diikuti oleh isolat

AEB-5 juga memiliki persentase aktivitas inhibitor ACE tertinggi (222,92%), melebihi aktivitas

penghambatan ACE oleh captopril (0,01 mg/mL) sebesar 61,5%, dan captopril (0,02 mg/mL)

sebesar 66,7%. Data tersebut mengindikasikan bahwa isolat aktinomiset endofit asal daun

pegagan dan buah belimbing wuluh mampu memproduksi senyawa inhibitor ACE.

ABSTRACT

WAHYU EKA SARI. Antihypertension Activity of Endophytic Actinomycetes Isolated from

Plants of Pegagan and Belimbing Wuluh. Under direction of YULIN LESTARI and MIN

RAHMINIWATI.

Endophytic actinomycetes lives in the plant tissue without causing a negative impact.

Several medicinal associates with endophytic microbe which may produce similar bioactive

compounds to their host plant. Inhibition of Angiotensin Converting Enzyme (ACE) is one of the

effective antihypertension mechanism. The potency of endophytic actinomycetes from the

medicinal plant used as ACE inhibitor needs to be elucidated. The research aimed to isolate

endophytic actinomycetes from rhizome, stem, leaf of pegagan (Centella asiatica) and also from

fruit of belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi), and assess their capability to produce bioactive

compound which can function as ACE inhibitor. The endophytic actinomycetes were isolated from

surface sterilized plant parts, grounded and plated in Humic-acid Vitamin-B agar (HV) medium.

The purified isolates were grown on International Streptomyces Project No.2 (ISP2) medium, and

the crude extract which consisted of extracellular bioactive compound, was used for in vitro assay

of ACE inhibitor activity. Twelve isolates of endophytic actinomycetes were successfully isolated

from pegagan leaves (three isolates) and belimbing wuluh fruits (nine isolates). The data showed

that nine isolates (AEP-1, AEP-2, AEP-3, AEB-1, AEB-3, AEB-5, AEB-6, AEB-7, and AEB-8),

had various ACE inhibitor activities, and belonged to Streptomyces spp.. Three other isolates

(AEB-2, AEB-4, and AEB-9) belonged to non-Streptomyces, and also showed various ACE

inhibitor activities,. Meanwhile, free endophytic microbes of tissue culture seedling of pegagan did

not show any ACE inhibitor activity. The AEP-1 isolated from pegagan had the highest percentage

(279.2%) followed by AEB-5 isolated from belimbing wuluh (222,92%) of ACE inhibitor activity,

exceeding the ACE inhibition activity of captopril (0.01 mg/mL) which was 61.5% and captopril

(0.02 mg/mL) was 66.7%. The data indicate that endophytic actinomycetes isolated from leaf of

pegagan and fruit of belimbing wuluh capable of producing ACE inhibitory compound.

AKTIVITAS ANTIHIPERTENSI AKTINOMISET

ENDOFIT ASAL TANAMAN PEGAGAN DAN

BELIMBING WULUH

WAHYU EKA SARI

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada

Departemen Biologi

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2011

Judul : Aktivitas Antihipertensi Aktinomiset Endofit Asal Tanaman Pegagan dan

Belimbing Wuluh

Nama : Wahyu Eka Sari

NRP : G34061708

Disetujui

Dr. Ir. Yulin Lestari drh. Min Rahminiwati, Ph.D.

NIP 19620710 198803 2 002 NIP 19610528 198503 2 004

Diketahui

Ketua Departemen Biologi

Dr. Ir. Ence Darmo Jaya Supena, M.Si.

NIP 19641002 198903 1 002

Tanggal Lulus :

Pembimbing I, Pembimbing II,

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya,

sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Tema yang dipilih dalam penelitian yang

dilaksanakan sejak bulan Februari 2010 sampai Oktober 2010 ini ialah aktinomiset endofit pada

tanaman obat. Penelitian ini bertujuan mengisolasi dan menapis aktinomiset endofit asal tanaman

pegagan dan buah belimbing wuluh sebagai penghasil senyawa antihipertensi melalui aktivitas

inhibitor ACE.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Ir. Yulin Lestari dan Ibu drh. Min

Rahminiwati, Ph.D. selaku pembimbing yang telah banyak memberikan nasehat, saran, motivasi,

dan waktu konsultasi, serta solusi dari setiap permasalahan yang dihadapi penulis selama

melaksanakan penelitian dan penyusunan karya ilmiah ini. Terima kasih pula penulis ucapkan

kepada Ibu Ir. Agustin Wydia Gunawan, M.S. selaku dosen penguji komisi pendidikan

Departemen Biologi FMIPA IPB, atas koreksi dan sumbang sarannya terhadap perbaikan karya

ilmiah ini. Disamping itu, penulis juga ingin menyampaikan terima kasih kepada Ibu Heni dan

Bapak Jaka selaku staf Laboratorium Mikrobiologi IPB, Mbak Wiwi dan Mas Endi selaku staf

Laboratorium Uji Biofarmaka LPPM-IPB, Bapak Ir. Edi Sandra M.Si. selaku dosen kultur jaringan

Departemen KSHE IPB, dan Mas Eko selaku staf Laboratorium Bersama Kimia IPB, yang telah

membantu selama penelitian berlangsung. Ungkapan terima kasih juga disampaikan kepada Ayah

Sumarsono, Ibu Sumiyati, dan Adik Tian, serta keluarga, atas segala doa dan kasih sayangnya.

Terima kasih pula atas dukungan, motivasi, dan bantuan yang diberikan oleh sahabat-sahabat,

kakak-kakak, dan adik-adik di Biologi IPB, FORCES IPB, dan wisma bintang, serta seluruh pihak

yang telah memberikan doa dan dukungannya.

Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat. Amin.

Bogor, Maret 2011

Wahyu Eka Sari

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Cilacap pada tanggal 23 Desember 1988 dari ayah Turyadi dan ibu

Sumiyati,S.Ag. Penulis merupakan putri pertama dari dua bersaudara. Tahun 2006 penulis lulus

dari SMA Negeri 3 Cilacap dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur

Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Penulis memilih mayor Biologi, Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, serta minor Gizi Masyarakat, Fakultas Ekologi Manusia.

Selama mengikuti perkuliahan, penulis menjadi asisten praktikum Perkembangan Hewan

dan Biologi Dasar TPB pada tahun ajaran 2008/2009, praktikum Fisiologi Tumbuhan dan Biologi

Dasar TPB pada tahun ajaran 2009/2010, serta praktikum Fisiologi Prokariot dan Biologi Dasar

TPB pada tahun ajaran 2010/2011. Penulis pernah menjadi delegasi IPB dalam kongres pelajar

internasional Asian Science Camp di Bali pada tahun 2008, dan pada tahun 2009 penulis menerima

penghargaan dari Departemen Biologi sebagai mahasiswa berprestasi bidang non-akademik 2009.

Penulis juga pernah menjuarai berbagai lomba diantaranya ialah Juara I lomba essay ilmiah tingkat

IPB (2007), Juara III lomba musabaqah tilawatil quran cabang MSQ tingkat IPB (2007), Penerima hibah DIKTI tingkat nasional untuk Program Kreativitas Mahasiswa (PKM-Artikel

Ilmiah tahun 2008, PKM-Penelitian dan PKM-Pengabdian Masyarakat tahun 2009, serta PKM-

Penelitian tahun 2010). Selain itu, penulis pernah menjadi finalis dari lomba karya tulis tingkat

nasional bidang kesehatan di Universitas Airlangga Surabaya, dan bidang ekologi manusia di

Institut Pertanian Bogor pada tahun 2009.

Penulis juga aktif dalam kegiatan organisasi unit kegiatan mahasiswa Forum for Scientific

Studies (FORCES) sejak tahun ajaran 2006/2007 hingga 2009/2010, dan jabatan tertinggi sebagai

wakil direktur FORCES pada tahun ajaran 2008/2009. Di samping itu, penulis juga pernah aktif

dalam kegiatan organisasi LDK-DKM Al-Hurriyah IPB (tahun ajaran 2007/2008), Himpunan

Mahasiswa Biologi (HIMABIO) IPB (tahun ajaran 2007/2008), dan Rohis Biologi 43 (tahun

ajaran 2007/2008 hingga 2009/2010). Penulis berkesempatan menjalani Praktik Lapangan dengan

judul Biodegradasi Pestisida Carbaryl pada Kondisi Anaerobik oleh Mikroba Denitrifikasi dari Tanah Pertanian Intensif Lembang dan Dieng di Laboratorium Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Cibinong pada tahun 2009.

Beasiswa yang pernah penulis peroleh selama masa perkuliahan antara lain beasiswa

Peningkatan Prestasi Akademik (PPA) pada tahun ajaran 2006/2007 hingga tahun 2007/2008,

beasiswa Bantuan Belajar Mahasiswa (BBM) pada tahun ajaran 2008/2009, dan beasiswa Yayasan

Karya Salemba Empat (KSE) pada tahun ajaran 2009/2010.

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... .... vi

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................................... vi

PENDAHULUAN ...................... ....................................................................................... 1

BAHAN DAN METODE

Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................................. 2

Isolasi dan Kultivasi Mikrob Endofit dari Akar, Batang, dan Daun

Pegagan, serta Buah Belimbing wuluh .................................................................... 2

Purifikasi Aktinomiset Endofit dan Pengamatan Mikroskopis ................................ 2

Produksi Filtrat Kultur Aktinomiset Endofit Asal Daun Pegagan

dan Buah Belimbing Wuluh, serta Pengukuran Biomassa....................................... 2

Uji in vitro Inhibisi Ekstrak Aktinomiset Endofit terhadap

Aktivitas ACE .......................................................................................................... 3

HASIL

Isolasi dan Kultivasi Mikrob Endofit dari Akar, Batang, dan Daun Pegagan,

serta Buah Belimbing wuluh.................................................................................... 3

Purifikasi Aktinomiset Endofit dan Pengamatan Mikroskopis ................................ 4

Produksi Filtrat Kultur Aktinomiset Endofit Asal Daun Pegagan

dan Buah Belimbing Wuluh, serta Pengukuran Biomassa....................................... 5

Uji in vitro Inhibisi Ekstrak Aktinomiset Endofit terhadap

Aktivitas ACE ......................................................................................................... 5

PEMBAHASAN............................................................................................................. ..... 7

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan................................................................................................................... 10

Saran......................................................................................................................... 10

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................................... 11

LAMPIRAN ....................................................................................................................... 13

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Tanaman kultur jaringan pegagan steril mikrob endofit umur 55 hari..... 3

2 Koloni aktinomiset endofit pada media HV umur 3 minggu......... 4

3 Keragaman morfologi koloni aktinomiset endofit umur 10 hari pada media ISP2.

Streptomyces spp. asal daun pegagan (a) AEP-1, (b) AEP-2, (c) AEP-3,

asal buah belimbing wuluh (d) AEB-1, (e) AEB-3, (f) AEB-5, (g) AEB-6,

(h) AEB-7, (i) AEB-8; non-Streptomyces asal buah belimbing wuluh

(j) AEB-2, (k) AEB-4, (l) AEB-9................................................................................... 4

4 Morfologi rantai spora (a) Streptomyces spp. dan (b) non-Streptomyces,

pada perbesaran 400x..................................................................................................... 5

5 Pertumbuhan aktinomiset endofit pada media cair ISP2 selama 10 hari (a) isolat

potensi asal daun pegagan (AEP-1), (b) isolat potensi asal buah belimbing

wuluh (AEB-5)............................................................................................................... 5

6 Persentase aktivitas penghambatan ACE ekstrak kasar isolat aktinomiset endofit

asal daun pegagan (AEP-1, AEP-2, dan AEP-3), ekstrak kultur jaringan tanaman

pegagan (EP1), ekstrak daun pegagan (EP2), captopril (C1 dan C2), dan media

cair ISP2 (M)................................................................................................................. 6

7 Persentase aktivitas penghambatan ACE ekstrak kasar isolat aktinomiset endofit

asal buah belimbing wuluh (AEB-1, AEB-2, AEB-3, AEB-4, AEB-5, AEB-6, AEB-7,

AEB-8, dan AEB-9), ekstrak buah belimbing wuluh (EBW), captopril (C1 dan C2),

dan media cair ISP2 (M)................................................................................................ 6

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1 Komposisi media agar-agar asam humat mengandung vitamin B (HV)........................ 14

2 Komposisi media agar-agar International Streptomyces Project No.2 (ISP2)................ 14

3 Komposisi media Murashige & Skoog (MS).................................................................. 14

4 Nilai absorbansi hasil pengukuran spektrofotometri 228 nm....................................... 15

5 Contoh perhitungan penentuan persentase aktivitas penghambatan ACE...................... 16

1

PENDAHULUAN

Mikrob endofit hidup di dalam jaringan

tanaman pada periode tertentu tanpa

menimbulkan bahaya, serta dapat diisolasi

dari jaringan tanaman yang sudah disterilisasi

permukaannya atau diekstrak dari jaringan

tanaman bagian dalam (Hallman et al. 1997).

Mikrob ini merupakan sumber alamiah yang

potensial dari dalam jaringan tanaman yang

dapat dikaji manfaatnya dalam bidang obat-

obatan, pertanian, dan industri (Strobel &

Daisy 2003). Berdasarkan penelitian

Hasegawa et al. (2006) mikrob endofit akan

mengkolonisasi jaringan tanaman, serta

memperoleh nutrisi dan perlindungan dari

tanaman inangnya. Populasi mikrob yang

melimpah di alam, baik di tanah, air, maupun

yang bersifat endofit, memiliki potensi untuk

dikaji kemampuannya sebagai penghasil

senyawa antihipertensi.

Hipertensi merupakan suatu keadaan

seseorang ketika terjadi peningkatan tekanan

darah sistolik 140 mmHg atau tekanan darah diastolik 90 mmHg, penderita memiliki resiko penyakit jantung, stroke, dan gagal

ginjal (Iskandar 2007; Yusuf 2008).

Beberapa penyebab munculnya hipertensi

antara lain penyakit gagal ginjal, kelainan

endokrin, asupan garam terlalu tinggi, stres

atau salah pemakaian obat (Iskandar 2007).

Selain itu, tinggi rendahnya tekanan darah

juga dipengaruhi oleh faktor Renin

Angiotensin System (RAS), yang melibatkan

pengubahan zat angiotensin I menjadi

angiotensin II (Yusuf 2008). Angiotensin II

berfungsi untuk sekresi aldosteron penyebab

retensi sodium yang dapat meningkatkan

volume cairan ekstraseluler, sehingga

mengakibatkan terjadinya hipertensi. Dengan

menghambat aktivitas angiotensin converting

enzyme (ACE), maka angiotensin I tidak

diubah menjadi angiotensin II, sehingga

hipertensi dapat dicegah. Metode inhibitor

ACE merupakan metode skrining

antihipertensi yang efektif (Wagner et al.

1991; Hansen et al. 1995; Somanadhan et al.

1996).

Beberapa tanaman obat secara empiris

digunakan sebagai obat tradisional untuk

mengendalikan hipertensi. Salah satunya

adalah ekstrak tanaman pegagan (Centella

asiatica) dan buah belimbing wuluh

(Averrhoa bilimbi) (Wijayakusuma &

Dalimartha 2005). Akan tetapi, pengobatan

menggunakan tanaman obat membutuhkan

banyak biomassa dan waktu tumbuh yang

lama, serta dapat mengganggu kelestarian

alam jika dieksploitasi secara berlebihan,

sehingga diperlukan inovasi yang efektif dan

efisien sebagai solusi permasalahan tersebut.

Cara inovatif untuk mengefisienkan

sumber senyawa bioaktif adalah dengan

memanfaatkan mikrob endofit yang

berasosiasi dengan tanaman obat tersebut.

Menurut Strobel & Daisy (2003) berbagai

jenis senyawa bioaktif dengan beragam fungsi

yang terkandung di dalam tumbuhan, diduga

dapat pula dihasilkan oleh mikrob endofit

pada tumbuhan tersebut. Adanya kemampuan

mikrob endofit menghasilkan senyawa

metabolit sekunder sesuai dengan tanaman

inangnya, merupakan peluang yang dapat

dioptimalkan untuk memproduksi metabolit

sekunder secara efisien dan cepat.

Penelitian sebelumnya terhadap ekstrak

tanaman pegagan menunjukkan bahwa

tanaman tersebut mengandung senyawa

bioaktif Triterpenoid (Wijayakusuma &

Dalimartha 2005). Triterpenoid merupakan

senyawa bioaktif yang dapat berfungsi sebagai

antioksidan, sehingga dapat menangkap

radikal bebas sebagai salah satu penyebab

timbulnya penyakit hipertensi. Selain itu,

secara tradisional, buah belimbing wuluh pada

umumnya juga digunakan oleh masyarakat

untuk mengobati penyakit hipertensi. Menurut

Wijayakusuma & Dalimartha (2005) dan

Iskandar (2007) bagian yang sering digunakan

dari tanaman belimbing wuluh untuk

mengobati hipertensi adalah buahnya. Buah

belimbing wuluh mengandung zat kalium

yang dapat melancarkan keluarnya air seni,

sehingga dapat menurunkan tekanan darah

tinggi (Hariana 2004).

Aktinomiset merupakan bakteri Gram

positif berfilamen dan dapat berperan sebagai

penghasil beragam senyawa bioaktif yang

dapat berfungsi antara lain sebagai antibiotik,

enzim inhibitor, dan senyawa bioaktif lainnya

(Lestari 2006). Mikrob ini juga dikenal

sebagai penghasil antibiotik terbesar.

Penelitian mengenai inhibitor ACE

menggunakan mikrob endofit dari suatu

tanaman obat masih jarang dilakukan. Sejauh

ini di Indonesia, obat komersial antihipertensi

hanya terbatas pada sintesis secara kimiawi

contohnya captopril, sedangkan sintesis obat

antihipertensi dengan bantuan mikrob endofit

dari suatu tanaman obat belum dikembangkan.

Oleh karena itu, tujuan penelitian ini adalah

mengisolasi dan menapis aktinomiset endofit

asal tanaman pegagan dan buah belimbing

wuluh sebagai penghasil senyawa

antihipertensi melalui aktivitas inhibitor ACE.

2

BAHAN DAN METODE

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan

Februari hingga Oktober 2010 di

Laboratorium Mikrobiologi, Departemen

Biologi, FMIPA-IPB, Laboratorium Bersama

Kimia, Departemen Kimia, FMIPA-IPB, dan

Laboratorium Uji Biofarmaka, Pusat Studi

Biofarmaka-LPPM-IPB.

Isolasi dan Kultivasi Mikrob Endofit dari

Akar, Batang, dan Daun Pegagan, serta

Buah Belimbing Wuluh Tanaman pegagan yang digunakan

sebagai sumber mikrob endofit berasal dari

kebun koleksi tanaman obat Biofarmaka IPB

dan Desa lingkar Kampus IPB Dramaga,

sedangkan buah belimbing wuluh berasal dari

perumahan dosen Kampus IPB Dramaga.

Bagian tanaman seperti akar, batang, dan daun

pegagan umum digunakan untuk obat

antihipertensi, sedangkan pada belimbing

wuluh adalah buahnya. Isolasi mikrob endofit

mengacu pada Coombs dan Franco (2003)

yang dimodifikasi dalam hal konsentrasi

NaOCl yang digunakan untuk sterilisasi

permukaan. Sampel akar, batang, dan daun

pegagan serta buah belimbing wuluh yang

telah dipotong, disterilisasi permukaannya

secara bertahap yaitu direndam dalam alkohol

70% selama 1 menit, kemudian direndam

dalam natrium hipoklorit (NaOCl) 1% selama

5 menit, dan selanjutnya direndam kembali

dalam alkohol 70% selama 1 menit. Langkah

terakhir dibilas sebanyak 3 kali dengan

akuades steril. Potongan bagian tanaman yang

telah steril permukaannya digerus

menggunakan mortar secara aseptik, lalu

dilarutkan dalam 12.5 mM bufer fosfat (pH

7.1). Ekstrak yang diperoleh disentrifugasi

pada kecepatan 3000 rpm selama 10 menit

pada suhu ruang. Supernatan hasil sentrifugasi

diambil sebanyak 0,1 ml, lalu disebar secara

merata pada cawan Petri berisi media agar-

agar asam humat yang mengandung vitamin B

(media HV) (Lampiran 1). Media tersebut

mengandung antibiotik sikloheksamida (50

mg/L media), dan asam nalidiksat (20 mg/L

media). Selanjutnya cawan berisi media dan

supernatan tersebut diinkubasi pada suhu

ruang (28C) selama 3 minggu agar

pertumbuhan koloni aktinomiset endofit dapat

diamati dengan baik. Isolasi aktinomiset

endofit dilakukan dua kali pengulangan.

Untuk membuktikan bahwa koloni

aktinomiset endofit yang tumbuh hanya

berasal dari dalam jaringan kedua tanaman

tersebut, maka dilakukan uji kontrol negatif

terhadap air sisa hasil rendaman terakhir

ketika proses sterilisasi permukaan selesai,

dengan cara menyebar 0,1 mL air sisa

rendaman tersebut ke atas media uji, dan

dilakukan tiga kali pengulangan.

Purifikasi Aktinomiset Endofit dan

Pengamatan Mikroskopis Mikrob endofit hasil isolasi yang telah

tumbuh pada media HV, selanjutnya

dimurnikan pada media agar-agar

International Streptomyces Project 2 (ISP2)

(Lampiran 2). Purifikasi aktinomiset endofit

dilakukan dua kali pengulangan. Langkah

berikutnya adalah inkubasi isolat yang

dilakukan selama 7 hari pada suhu ruang.

Setelah itu, morfologi keragaman rantai spora

diamati secara mikroskopis. Isolat aktinomiset

endofit yang telah diperoleh, diletakkan di

atas kaca preparat dengan ditetesi sedikit air di

atasnya, selanjutnya diamati pada perbesaran

400x menggunakan mikroskop cahaya,

sampai tampak jelas morfologi rantai spora

yang terbentuk pada masing-masing isolat.

Produksi Filtrat Kultur Aktinomiset

Endofit Asal Daun Pegagan dan Buah

Belimbing Wuluh, serta Pengukuran

Biomassa Produksi filtrat kultur dilakukan untuk

semua isolat aktinomiset endofit yang akan

diuji. Koloni aktinomiset endofit pada media

agar-agar ISP2 diambil dengan sedotan steril

berdiameter 0.5 cm, lalu diinokulasikan pada

media cair ISP2 dengan perbandingan

komposisi koloni : media adalah 1:30, artinya

dalam 30 mL media dimasukkan sebanyak 1

koloni yang diambil dengan sedotan steril.

Produksi filtrat dilakukan dengan dua kali

pengulangan. Selanjutnya kultur diinkubasi

pada suhu ruang pada inkubator bergoyang

dengan kecepatan 120 rpm selama 10 hari.

Selanjutnya, kultur aktinomiset endofit

disentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm

selama 15 menit pada suhu ruang. Filtrat

kultur diambil dan disaring dengan kertas

saring untuk memisahkan pelet dan

supernatan. Supernatan hasil saringan

selanjutnya diambil 80 L untuk uji inhibisi

ACE, sedangkan pelet diambil dan diletakkan

di atas kertas saring yang sebelumnya sudah

ditimbang bobot keringnya,. Selanjutnya

kertas saring yang sudah berisi pelet tersebut

dikeringkan dengan cara didiamkan selama 3

hari pada suhu ruang dan pada hari ketiga

dimasukkan ke dalam oven suhu 60C selama

3 jam. Setelah pelet kering, langkah terakhir

3

Aktivitas inhibitor ACE (%) = 100[100 x (CD)/(AB)

adalah melakukan pengukuran biomassa

menggunakan neraca analitik.

Uji in vitro Inhibisi Ekstrak

Aktinomiset Endofit terhadap

Aktivitas ACE

Pengukuran aktivitas inhibitor ACE

pada penelitian ini mengacu pada metode

Hayes et al. (2007) yang telah dimodifikasi

dalam hal konsentrasi enzim, substrat, dan

bahan pelarut lainnya yang digunakan untuk

uji in vitro. Substrat enzim yang digunakan

untuk uji in vitro penghambatan ACE adalah

Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine (HHL) dari

Sigma Co. Sebanyak 200 l bufer HHL (2,5

mM HHL dalam 0,05 M bufer natrium borat,

mengandung 0,15 M NaCl, pada pH 8.3)

dicampur dengan 80 l filtrat aktinomiset

endofit (sampel), selanjutnya diinkubasi pada

inkubator bergoyang selama 3 menit pada

suhu 37C. Campuran antara bufer HHL

dengan sampel akan mulai bereaksi setelah

dilakukan penambahan 20 l (ACE-A6778,

Sigma Aldrich Co.) (0,03745 unit/mL).

Selanjutnya campuran tersebut diinkubasi

pada inkubator bergoyang selama 1 jam pada

suhu 37C. Reaksi dihentikan dengan

penambahan 250 l 0,5 M HCl, dan

selanjutnya ditambahkan 1,7 ml etil asetat

sebagai pelarut untuk evaporasi. Evaporasi

dilakukan menggunakan alat rotavapor R-205

BUCHI, heating bath B-490 BUCHI, untuk

menghilangkan pelarut etil asetat dari fraksi

yang dilarutkan serta untuk menghilangkan

pengotor dari campuran reaksi. Fraksi sampel

yang telah terpisah dari pelarut etil asetat

setelah evaporasi, kemudian dilarutkan

kembali dengan penambahan 1 ml air

destilata. Langkah terakhir adalah pengukuran

absorbansi aktivitas inhibisi ACE

menggunakan spektrofotometer UV-1700

PharmaSpec SHIMADZU pada panjang

gelombang () 228 nm, dengan pengenceran sebanyak 15x. Pengukuran aktivitas inhibitor

ACE ini dilakukan dengan dua kali ulangan.

Hasil absorbansi yang diperoleh

selanjutnya dihitung menggunakan rumus:

Keterangan: A merupakan hasil

absorbansi dengan ACE dan tanpa inhibitor

ACE, B merupakan hasil absorbansi tanpa

ACE dan tanpa inhibitor ACE, C merupakan

hasil absorbansi dengan ACE dan inhibitor

ACE, sedangkan D merupakan hasil

absorbansi dengan inhibitor ACE dan tanpa

ACE (Hayes et al. 2007). Sampel inhibitor

ACE yang diuji aktivitas penghambatannya

terdiri atas captopril 0,01 mg/mL (C1) dan

0,02 mg/mL (C2) sebagai kontrol positif,

media cair ISP2 (M) sebagai kontrol negatif,

ekstrak kultur jaringan tanaman pegagan

(EP1) asal Departemen Konservasi Sumber

Daya Hutan dan Ekowisata, Fakultas

Kehutanan IPB (Gambar 1), ekstrak daun

pegagan (EP2), ekstrak buah belimbing wuluh

(EBW), dan isolat aktinomiset endofit asal

akar, batang, dan daun pegagan (AEP), serta

aktinomiset endofit asal buah belimbing

wuluh (AEB).

Semua sampel diberikan perlakuan

yang sama sesuai dengan prosedur di atas.

Contoh perhitungan persentase aktivitas

penghambatan ACE dapat dilihat pada

Lampiran 5.

Gambar 1 Tanaman kultur jaringan pegagan

steril mikrob endofit umur 55 hari

pada media MS.

Tanaman kultur jaringan pegagan

dikatakan steril mikrob endofit karena media

tanam (Murashige & Skoog (MS) (Lampiran

3) dengan penambahan auksin dan sitokinin),

jaringan pegagan, serta proses pengkulturan

dari awal hingga akhir, keseluruhan dilakukan

secara aseptik.

HASIL

Isolasi dan Kultivasi Mikrob Endofit dari

Akar, Batang, dan Daun Pegagan, serta

Buah Belimbing Wuluh

Total isolat aktinomiset endofit yang

berhasil diisolasi berjumlah 12 isolat. Tiga

isolat berasal dari daun pegagan, sedangkan

sembilan isolat lainnya dari buah belimbing

wuluh. Isolat aktinomiset endofit tidak ada

yang diperoleh dari akar dan batang pegagan.

Semua isolat yang diperoleh dapat tumbuh

dengan baik pada media HV yang merupakan

media selektif bagi pertumbuhan aktinomiset,

sehingga adanya koloni berwarna putih yang

tumbuh pada media tersebut (Gambar 2),

menandakan aktinomiset endofit.

Hasil uji kontrol negatif menunjukkan

bahwa pada media HV yang telah disebar air

4

a b c

d e f

g h i

j k l

hasil rendaman terakhir dari proses sterilisasi

permukaan, tidak tumbuh satu koloni pun baik

koloni berwarna putih yang menandakan

aktinomiset endofit maupun koloni mikrob

lainnya. Hal tersebut menandakan bahwa

proses sterilisasi permukaan berhasil dan

menguatkan dugaan bahwa aktinomiset

endofit yang berhasil diisolasi pada penelitian

ini berasal dari jaringan tanaman bagian

dalam.

Gambar 2 Koloni aktinomiset endofit pada

media HV umur 3 minggu.

Purifikasi aktinomiset endofit dan

pengamatan mikroskopis Hasil purifikasi aktinomiset endofit

pada media ISP2 selama 7 hari menunjukkan

keragaman karakteristik morfologi koloni dan

pigmentasi yang beragam. Tiga isolat

aktinomiset endofit yang diperoleh dari bagian

daun pegagan ialah AEP-1, AEP-2, dan AEP-

3 (Gambar 3a-c), sedangkan sembilan isolat

aktinomiset endofit lainnya hasil isolasi dari

buah belimbing wuluh ialah AEB-1, AEB-2,

AEB-3, AEB-4, AEB-5, AEB-6, AEB-7,

AEB-8, AEB-9 (Gambar 3d-l).

Berdasarkan morfologi koloni di atas

media ISP2, ke-12 isolat aktinomiset endofit

tersebut dapat dibedakan antara Streptomyces

spp. dan non-Streptomyces. Koloni

aktinomiset sebagian besar akan tampak keras

seperti tumbuh akar di dalam agar-agar,

berbeda dengan koloni mikrob lainnya yang

tampak lunak di atas media agar. Menurut

Ghadin et al. (2008) Streptomyces spp. di atas

media padat akan menunjukkan miselium

dengan spora aerial berwarna putih hingga

abu-abu. Genus non-Streptomyces hanya

membentuk miselium vegetatif, dan akan

tampak lembab di atas media agar (tidak

membentuk spora aerial). Berdasarkan ciri-ciri

tersebut, maka isolat AEP-1, AEP-2, AEP-3,

AEB-1, AEB-3, AEB-5, AEB-6, AEB-7, dan

AEB-8 termasuk ke dalam Streptomyces spp.,

sedangkan isolat AEB-2, AEB-4, dan AEB-9

termasuk ke dalam non-Streptomyces.

Penggolongan 12 isolat aktinomiset

endofit ke dalam Streptomyces spp. dan non-

Streptomyces juga didasarkan pada

pengamatan rantai spora secara mikroskopis.

Karakteristik morfologi rantai spora

Streptomyces spp. mampu membentuk rantai

spora aerial dengan morfologi yang beragam

(seperti rantai, kait, hingga spiral) (Gambar

4a), sedangkan karakteristik morfologi rantai

spora non-Streptomyces, tidak membentuk

rantai spora aerial dan tidak berbentuk rantai,

kait, atau spiral (Gambar 4b).

Gambar 3 Keragaman morfologi koloni

aktinomiset endofit umur 10 hari pada

media ISP2, Streptomyces spp. asal

daun pegagan (a) AEP-1, (b) AEP-2,

(c) AEP-3; asal buah belimbing wuluh

(d) AEB-1, (e) AEB-3, (f) AEB-5, (g)

AEB-6, (h) AEB-7, (i) AEB-8; non-

Streptomyces asal buah belimbing

wuluh (j) AEB-2, (k) AEB-4, (l)

AEB-9.

Berdasarkan pengamatan karakteristik

morfologi rantai spora, isolat AEP-1, AEP-2,

AEP-3, AEB-1, AEB-3, AEB-5, AEB-6,

AEB-7, dan AEB-8 termasuk Streptomyces

spp., sedangkan isolat AEB-2, AEB-4, dan

AEB-9 termasuk non-Streptomyces. Hal ini

menguatkan data yang diperoleh berdasarkan

pengamatan morfologi koloni di atas media

padat.

5

a

a

b

Granul-granul spora berwarna putih

Gambar 4 Morfologi rantai spora (a)

Streptomyces spp. dan (b) non-

Streptomyces, pada perbesaran 400x.

Produksi filtrat kultur aktinomiset endofit

asal daun pegagan dan buah belimbing

wuluh, serta pengukuran biomassa Hasil produksi filtrat kultur

aktinomiset endofit selama 10 hari

menunjukkan keragaman warna filtrat yaitu

dari kuning (seperti warna media cair ISP2)

hingga merah bata (Gambar 5). Hal tersebut

diduga karena sifat fisiologis masing-masing

isolat berbeda-beda untuk memproduksi

metabolit sekunder yang terkandung dalam

filtrat.

Gambar 5 Pertumbuhan aktinomiset endofit

pada media cair ISP2 selama 10 hari;

(a) isolat potensi asal daun pegagan

(AEP-1) (b) isolat potensi asal buah

belimbing wuluh (AEB-5).

Produksi filtrat dilakukan

menggunakan teknik aerasi dengan kecepatan

120 rpm pada suhu ruang sehingga isolat

tumbuh dengan membentuk granul-granul

spora berwarna putih, tersuspensi dengan

media dan mengendap jika didiamkan

(Gambar 5).

Tabel 1 Nilai bobot biomassa aktinomiset endofit

asal daun pegagan dan buah belimbing

wuluh umur 10 hari pada media cair ISP2

Jenis isolat

Bobot

biomassa total

(mg/mL)

Aktinomiset endofit asal

daun pegagan

Streptomyces spp.

AEP-1 0,720

AEP-2 0,926

AEP-3 1,023

Aktinomiset endofit asal

buah belimbing wuluh

Streptomyces spp.

AEB-1 0,553

AEB-3 1,686

AEB-5 5,263

AEB-6 0,883

AEB-7 0,430

AEB-8 1,467

non-Streptomyces

AEB-2 1,320

AEB-4 2,426

AEB-9 2,413

Tabel 1 menunjukkan hasil pengukuran

biomassa tiga isolat aktinomiset endofit asal

daun pegagan dan sembilan isolat aktinomiset

endofit asal buah belimbing wuluh. Bobot

biomassa yang diperoleh ke-12 aktinomiset

endofit menunjukkan keragaman antar isolat.

Bobot biomassa isolat potensial aktinomiset

endofit asal daun pegagan (AEP-1) dan buah

belimbing wuluh (AEB-5) yang menunjukkan

aktivitas penghambatan ACE tertinggi

berturut-turut yaitu 0,720 mg/mL dan 5,263

mg/mL. Adanya keragaman bobot biomassa

juga diduga karena kemampuan masing-

masing isolat berbeda-beda dalam

memproduksi metabolit sekunder yang

terkandung dalam filtrat.

Uji in vitro inhibisi ekstrak kasar

aktinomiset endof it terhadap

aktivitas ACE Gambar 6 & 7 menunjukkan

keragaman hasil uji in vitro penghambatan

aktivitas ACE oleh ekstrak kasar aktinomiset

endofit asal daun pegagan dan buah belimbing

wuluh.

6

Gambar 6 Persentase aktivitas penghambatan ACE ekstrak kasar isolat aktinomiset endofit

asal daun pegagan (AEP-1, AEP-2, dan AEP-3), ekstrak kultur jaringan tanaman

pegagan (EP1), ekstrak daun pegagan (EP2), captopril (C1 dan C2), dan media cair

ISP2 (M).

Gambar 7 Persentase aktivitas penghambatan ACE ekstrak kasar isolat aktinomiset endofit

asal buah belimbing wuluh (AEB-1, AEB-2, AEB-3, AEB-4, AEB-5, AEB-6,

AEB-7, AEB-8, dan AEB-9), ekstrak buah belimbing wuluh (EBW), captopril (C1

dan C2), dan media cair ISP2 (M).

7

Gambar 6 menunjukkan bahwa

persentase aktivitas penghambatan ACE yang

ditunjukkan oleh ketiga isolat aktinomiset

endofit asal daun pegagan (AEP-1, AEP-2,

dan AEP-3) lebih tinggi dibandingkan dengan

aktivitas kontrol negatif (media cair ISP2),

dan kontrol positif (captopril). Persentase

aktivitas penghambatan ACE oleh media cair

ISP2 (M) sebesar 26,04%, lebih kecil

dibandingkan dengan aktivitas tanaman inang

pegagan, ketiga isolat aktinomiset endofit asal

daun pegagan, dan kontrol positif captopril.

Berdasarkan data yang diperoleh,

antara captopril 0,01 mg/mL (C1) dan 0,02

mg/mL (C2) menunjukkan aktivitas yang

hampir sama satu sama lain. Captopril 0,01

mg/mL menunjukkan aktivitas sebesar

61,46%, sedangkan captopril 0,02 mg/mL

sebesar 66,67%. Adapun persentase aktivitas

penghambatan ACE oleh isolat AEP-1 sebesar

279,17%, isolat AEP-2 sebesar 140,63%, dan

isolat AEP-3 sebesar 144,79%. Hal tersebut

mengindikasikan bahwa nilai persentase

penghambatan ACE yang dihasilkan oleh

ketiga isolat aktinomiset endofit asal daun

pegagan lebih tinggi dibandingkan dengan

kontrol positif, sebesar dua hingga empat kali

lipat. Volume semua sampel yang diujikan

besarnya sama yaitu sebanyak 80 L dari

bobot biomassa yang berbeda-beda. Aktivitas

penghambatan ACE yang ditunjukkan oleh

ekstrak daun pegagan sebesar 198,96%.

Berdasarkan perhitungan nilai absorbansi

hasil pengukuran spektrofotometri pada 228 nm (Lampiran 4), diperoleh persentase

aktivitas penghambatan ACE oleh tanaman

kultur jaringan pegagan steril mikrob endofit

(EP1) sebesar -14,58% (negatif), sehingga

ekstrak tersebut dianggap aktivitas

penghambatannya nol persen.

Gambar 7 menunjukkan bahwa

persentase aktivitas penghambatan ACE oleh

ke-12 isolat aktinomiset endofit asal buah

belimbing wuluh hampir sama dengan

aktivitas yang ditunjukkan oleh ekstrak

tanaman inangnya (166,67%), bahkan ada dua

isolat (AEB-4 dan AEB-5) yang aktivitasnya

lebih besar hingga dua kali lipat (184,38% dan

222,92%). Isolat aktinomiset endofit asal buah

belimbing wuluh yang menunjukkan aktivitas

penghambatan tertinggi adalah isolat AEB-5

yaitu sebesar 222,92%, sedangkan aktivitas

penghambatan ACE terendah terdapat pada

isolat AEB-8 yaitu sebesar 0%. Hal tersebut

menunjukkan bahwa tidak semua isolat

aktinomiset endofit memiliki kemampuan

untuk menghambat ACE.

Jika aktivitas penghambatan ACE yang

ditunjukkan oleh Gambar 6 dan 7

dibandingkan, maka dapat dilihat adanya

perbedaan aktivitas antara ekstrak daun

pegagan dengan ekstrak buah belimbing

wuluh. Persentase aktivitas penghambatan

ACE yang ditunjukkan oleh ekstrak daun

pegagan (EP2) yaitu 198,96%, sedangkan

ekstrak buah belimbing wuluh (EBW) hanya

sebesar 166,67%. Oleh karena itu, dapat

dinyatakan bahwa aktivitas antihipertensi

ekstrak daun pegagan lebih tinggi

dibandingkan dengan aktivitas antihipertensi

ekstrak buah belimbing wuluh.

Selain itu, aktivitas tertinggi yang

ditunjukkan oleh isolat aktinomiset endofit

AEP-1 asal daun pegagan sebesar 279,17%

juga menunjukkan nilai yang lebih tinggi

dibandingkan dengan aktivitas penghambatan

ACE tertinggi oleh isolat AEB-5 asal buah

belimbing wuluh (222,92%).

PEMBAHASAN

Aktinomiset endofit asal daun pegagan dan buah belimbing wuluh menunjukkan

keragaman morfologi koloni pada media ISP2

(Gambar 3), bentuk rantai spora secara

mikroskopis (Gambar 4), dan aktivitas

penghambatan terhadap ACE (Gambar 6 & 7).

Menurut Takahashi dan Omura (2003)

keragaman jenis aktinomiset yang terisolasi

bergantung pada asal habitatnya, jenis media

yang digunakan, dan metode isolasi yang

dipakai. Media yang digunakan untuk isolasi

pada penelitian ini adalah media HV yang

ditambahkan antibiotik sikloheksamida (50

mg/mL) untuk menekan pertumbuhan

cendawan dan asam nalidiksat (20 mg/mL)

untuk menekan pertumbuhan bakteri Gram

negatif.

Beberapa macam media yang dapat

digunakan untuk mengisolasi mikrob endofit

antara lain Tap Water-Yeast Extract agar

(TWYE) (Crawford et al. 1993), media HV

(Hayakawa & Nonomura 1987), Yeast

Extract-Casein Hydrolysate agar (YECD),

dan Flour Calcium Carbonat agar, atau Flour

Yeast Extract Sucrose Casein Hydrolysate

agar (Coombs & Franco 2003). Media HV,

TWYE, dan YECD merupakan media yang

sangat miskin nutrien, oleh karena itu efektif

untuk mengisolasi aktinomiset endofit dari

dalam jaringan tanaman (Coombs & Franco

2003).

8

Koloni aktinomiset endofit pada media

HV tampak dominan berwarna putih (Gambar

2). Pemurnian koloni tersebut dilakukan pada

media ISP2. Aktinomiset endofit yang tumbuh

pada media ISP2 tampak memiliki morfologi

koloni yang beragam, demikian pula dengan

bentuk rantai sporanya.

Keberadaan aktinomiset di lingkungan

sangat melimpah terutama di rizosfer.

Aktinomiset endofit berasosiasi dengan

tanaman inang dan dapat memberikan efek

yang menguntungkan, serta tidak

membahayakan bagi tanaman inangnya.

Sharma et al. (2005) menyatakan bahwa akar

lateral merupakan bagian tumbuhan yang

paling banyak dihuni oleh mikrob endofit. Hal

ini dikarenakan mikrob endofit masuk ke

dalam jaringan tanaman melalui akar lateral

kemudian menyebar ke dalam ruang

interseluler dan berkas pembuluh. Selain itu,

mikrob endofit juga dapat masuk melalui

bagian daun, bunga, batang, stomata,

kotiledon, dan bagian tanaman yang terluka.

Dalam penelitian ini aktinomiset endofit

berhasil diisolasi dari daun pegagan, namun

tidak diperoleh dari bagian akar dan batang

pegagan, sedangkan pada belimbing wuluh

hanya digunakan buahnya yang umum

digunakan oleh masyarakat dan berhasil

diisolasi aktinomiset endofitnya. Tidak

diperolehnya aktinomiset endofit dari akar dan

batang pegagan kemungkinan karena adanya

faktor preferensi dalam hal mikrob endofit

tersebut mengkolonisasi tanaman inangnya.

Aktinomiset merupakan bakteri Gram

positif berfilamen, dengan kandungan guanin

dan sitosin (G+C) yang tinggi (>55%) di

dalam genomnya (Miyadoh 1997). Beberapa

senyawa bioaktif dihasilkan oleh kelompok

aktinomiset. Menurut Raja dan Prabakarana

(2011) aktinomiset dikenal sebagai penghasil

antibiotik terbesar, karena dari 16.500

antibiotik yang telah ditemukan, lebih dari

setengahnya dihasilkan oleh aktinomiset.

Sebagian besar aktinomiset (95%)

beranggotakan Streptomyces (Lachevalier et

al. 1977). Koloni aktinomiset yang tergolong

Streptomyces spp. membentuk miselium aerial

dan secara mikroskopis memiliki morfologi

rantai spora seperti kait, spiral atau heliks

(Kudo 1997). Aktinomiset yang tidak

membentuk miselium aerial atau hanya

membentuk miselium dalam substrat

merupakan kelompok non-Streptomyces.

Genus yang digolongkan ke dalam non-

Streptomyces antara lain Mycobacterium,

Nocardia, Micromonospora, Microbispora, A

ctinoplanes, dan Actinomadura (Miyadoh

1997). Menurut Miyadoh & Otoguro (2004)

morfologi rantai spora, permukaan spora,

warna miselium, serta pigmentasi dapat

dijadikan dasar klasifikasi hingga tingkat

spesies. Berdasarkan pengamatan terhadap

karakteristik morfologi koloni aktinomiset

pada media ISP2, tampak bahwa isolat AEP-

1, AEP-2, AEP-3, AEB-1, AEB-3, AEB-5,

AEB-6, AEB-7, AEB-8 termasuk

Streptomyces spp. karena mampu membentuk

miselium aerial dan spora berwarna putih,

putih kekuningan, putih kecokelatan, hingga

abu-abu (Gambar 3), serta menunjukkan

rantai spora yang tersusun keriting, seperti

kait atau spiral, (Gambar 4a). Isolat AEB-2,

AEB-4, dan AEB-9 tergolong non-

Streptomyces, karena tidak membentuk rantai

spora aerial (Gambar 4b). Ghadin et al. (2008)

menyatakan bahwa karakteristik Streptomyces

pada media padat ditunjukkan dengan

munculya substrat miselium setelah empat

hari inkubasi dan formasi miselium yang

lengkap setelah enam hari inkubasi, dengan

warna spora aerial berwarna putih hingga abu-

abu.

Interaksi antara mikrob endofit dengan

tanaman inangnya merupakan hubungan

simbiosis mutualisme. Koloni mikrob endofit

di dalam jaringan tanaman akan memperoleh

nutrisi dan perlindungan dari tanaman

inangnya, sedangkan tanaman inang

memperoleh senyawa bioaktif dari mikrob

endofit yang dapat berfungsi sebagai

antimikrob, pemacu pertumbuhan tanaman,

enzim pendegradasi lignin, selulosa,

hemiselulosa, kitinase, amilase, dan glukanase

(Hasegawa et al. 2006). Castillo et al. (2002)

berhasil mengisolasi aktinomiset endofit

Streptomyces sp. strain NRRL 30562 asal

tanaman Snakevine (Kennedia nigrisca) yang

dipercaya suku Aborigin untuk mengobati

luka dan infeksi, yang ternyata mampu

menghasilkan senyawa munumbycin A-D,

antibiotik peptida baru berspektrum luas.

Beberapa tanaman selain pegagan dan

belimbing wuluh yang secara empiris

digunakan sebagai obat hipertensi adalah

boroco (Celosia argentea), ketepeng kecil

(Cassia tora), mindi kecil (Melia azedarach),

murbei (Morus alba), pulai (Alstonia

scholaris), pule pandak (Rauvalfia

serpentine), sambiloto (Andrographis

paniculata), sambung nyawa (Gynura

procumbens), dan tempuyung (Sonchus

arvensis) (Iskandar 2007). Selain itu, beberapa

tanaman lain seperti belimbing manis

(Averrhoa carambola), alpukat (Persea

americana), dan kumis kucing (Orthosiphon

9

stamineus) juga pada umumnya digunakan

masyarakat secara tradisional untuk obat

hipertensi. Tanaman tingkat tinggi dapat

mengandung mikrob endofit yang mampu

menghasilkan senyawa bioaktif atau metabolit

sekunder yang diduga sebagai akibat

koevolusi atau transfer genetik dari tanaman

inangnya ke dalam mikrob endofit (Tan &

Zou 2001).

Berdasarkan penelitian Tejesvi et al.

(2008) pada tanaman obat Terminalia arjuna,

T. chebula, Azadirachta indica, dan

Holarrhena antidysenterica diperoleh isolat

dominan yaitu mikrob endofit Pestalotiopsis,

yang mempunyai aktivitas penghambatan

ACE sebesar > 60%. Anggota aktinomiset

seperti Streptomyces chromofuscus

(Nakatsukasa et al. 1985) dan

Micromonospora halophytica (Lima 1999)

juga diketahui dapat menghasilkan inhibitor

ACE.

Daya hambat aktivitas enzim ACE diukur menggunakan substrat N-Hippuril-L-

histidyl-L-leucine hydrate (HHL) .yang akan

terhidrolisis menjadi N-Hippuric acid dan L-

histidyl-L-leucine (Kasahara & Ashihara

1981). Kondisi optimal substrat HHL untuk

uji inhibisi ACE adalah pada pH 8.3 pelarut

NaCl 300 mM (Cheung et al. 1980). Dalam

penelitian ini, substrat HHL dilarutkan

menggunakan NaCl 150 mM, pH 8.3.

ACE merupakan enzim yang dapat

mengubah angiotensin I (Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-

His-Pro-Phe-His-Leu) menjadi angiotensin II

(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe). Ondetti

et al. (1983) melaporkan bahwa inhibitor ACE

dapat berfungsi sebagai antihipertensi.

Keunggulan inhibitor ACE sebagai

mekanisme antihipertensi selain dapat

berperan dalam proses diuretik, ACE-I juga

dapat berperan melalui aktivitas saraf

simpatik. Angiotensin II mempunyai efek

vasokonstriksi yang kuat, meningkatkan

aktivitas sistem saraf simpatik, serta dapat

merangsang produksi aldosteron (Akil &

Bakri 2001). Peningkatan aktivitas saraf

simpatik dapat meningkatkan aktivasi -1 adrenoreseptor jantung sehingga dapat

meningkatkan cardiac output yang dapat

meningkatkan tekanan darah. Mekanisme

tersebut berkaitan dengan potensial aksi dalam

hal pembukaan channel ion Na+ dan K

+.

Selain itu, peningkatan aktivitas saraf

simpatik juga dapat meningkatkan aktivitas -1 pada otot polos, yang akan meningkatkan

resistensi perifer, sehingga dapat

mempengaruhi elastisitas pembuluh darah

yang dapat meningkatkan kontraksi otot

jantung untuk memompa darah, dan pada

akhirnya akan meningkatkan tekanan darah.

Penurunan tekanan darah juga akan

meningkatkan aliran tekanan darah yang akan

mengakibatkan pelepasan protease renin dan

pemecahan dekapeptida angiotensin I menjadi

angiotensin II. Peningkatan angiotensin II

dapat meningkatkan produksi aldosteron yang

dapat meningkatkan retensi natrium dan air.

Dengan demikian volume darah akan

meningkat dan pada akhirnya menyebabkan

peningkatan tekanan darah (Akil & Bakri

2001; Yusuf 2008).

Captopril merupakan inhibitor spesifik

yang pertama kali ditemukan pada tahun 1975

oleh Chusman dan Ondetti dan merupakan

inhibitor kompetitif yang penting untuk

menghambat aktivitas ACE. Captopril ((2S)-

1-[(2S)-2-methyl-3-sulfanyl propanoyl]

pyrrolidine-2-carboxylic acid) merupakan

obat hipertensi yang berasal dari sintesis

kimiawi. Mishra (2011) melaporkan bahwa

sintesis captopril pertama kali diturunkan dari

bisa ular. Inhibitor ini dapat menginaktivasi

pengonversian dari angiotensin I menjadi

angiotensin II (Lima 1999).

Penelitian ini menggunakan captopril

(komersial) sebagai kontrol positif aktivitas

penghambatan ACE. Persentase aktivitas

penghambatan ACE oleh captopril (C1)

sebesar 61,46% dan captopril (C2) sebesar

66,67% (Gambar 6 & 7) menunjukkan

persentase penghambatan yang lebih rendah

dibandingkan dengan aktivitas penghambatan

ACE aktinomiset endofit. Persentase aktivitas

penghambatan ACE oleh captopril yang

ditunjukkan oleh Hayes et al. (2007) sebesar

100% dengan konsentrasi captopril yang

digunakan 0,005 mg/mL. Nilai persentase

tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan

hasil yang diperoleh pada penelitian ini.

Perbedaan persentase aktivitas penghambatan

ACE tersebut kemungkinan disebabkan oleh

perbedaan kemurnian captopril. Captopril

yang digunakan Hayes et al. (2007) berasal

dari Sigma Co. yang memiliki kemurnian

lebih tinggi dibandingkan dengan captopril

komersial yang mengandung berbagai

komponen bahan baku campuran obat.

Media cair ISP2 (kontrol negatif) yang

digunakan sebagai media produksi filtrat

menunjukkan aktivitas penghambatan yang

sangat rendah (26,04%) dibandingkan kisaran

aktivitas penghambatan yang ditunjukkan oleh

isolat aktinomiset endofit pada penelitian ini

(103,13%-279,17%).

Tiga isolat Streptomyces asal daun

pegagan (AEP-1, AEP-2, dan AEP-3)

10

menunjukkan aktivitas penghambatan ACE

yang bervariasi berkisar antara 140,63%-

279,17%. Isolat AEP-1 menunjukkan aktivitas

penghambatan ACE yang paling tinggi

(279,17%) di antara ke-3 isolat lainnya, serta

melebihi aktivitas penghambatan ACE yang

ditunjukkan oleh ekstrak daun pegagan

(198,96%). Hal tersebut mengindikasikan

bahwa ketiga isolat aktinomiset endofit asal

daun pegagan mampu menghasilkan senyawa

inhibitor ACE. Hasil uji in vitro terhadap

tanaman kultur jaringan pegagan umur 55 hari

(steril mikrob) ternyata tidak menunjukkan

aktivitas penghambatan ACE. Hal ini

menguatkan dugaan bahwa aktinomiset

endofit pada pegagan berperan untuk

menghasilkan senyawa inhibitor ACE.

Streptomyces spp. maupun non-

Streptomyces asal buah belimbing wuluh

menunjukkan persentase aktivitas

penghambatan ACE yang bervariasi antara

0% hingga 222,92%. Isolat AEB-5


tertinggi (222,92%) melebihi aktivitas

penghambatan ACE yang dihasikan oleh

ekstrak buah belimbing wuluh (166,67%). Hal

ini mengindikasikan bahwa aktinomiset

endofit asal buah belimbing wuluh juga

mampu menghasilkan senyawa inhibitor ACE.

Aktivitas penghambatan ACE

aktinomiset endofit isolat AEP-1 asal daun

pegagan menunjukkan aktivitas

penghambatan yang lebih tinggi dibandingkan

dengan isolat AEB-5 asal buah belimbing

wuluh. Bobot biomassa kedua isolat tersebut

berbeda, meskipun pada kondisi pertumbuhan

yang sama. Bobot biomassa isolat AEB-5

(5,263 mg/mL) lebih besar dibandingkan

dengan bobot biomassa yang dihasilkan oleh

isolat AEP-1 (0,720 mg/mL). Namun

demikian, aktivitas penghambatan ACE isolat

AEP-1 lebih tinggi dibandingkan dengan

kemampuan penghambatan ACE isolat AEB-

5. Perbedaan kemampuan aktivitas

penghambatan ACE dapat disebabkan oleh

perbedaan kemampuan masing-masing isolat.

Aktinomiset endofit yang digunakan untuk uji

penghambatan ACE pada penelitian ini berupa

ekstrak kasar yang masih mengandung

beragam komponen media. Ekstrak kasar

aktinomiset endofit tersebut kemungkinan

juga mengandung beragam senyawa bioaktif

lain yang dihasilkan oleh masing-masing

isolat, sehingga dapat berpengaruh terhadap

aktivitas penghambatan ACE.

Kemampuan mikrob endofit yang

dapat menghasilkan senyawa bioaktif yang

sama dengan tanaman inangnya diharapkan

dapat mengurangi kebutuhan bahan baku obat

berbasis biomassa tanaman. Produksi senyawa

bioaktif sebagai antihipertensi yang dihasilkan

oleh aktinomiset endofit akan lebih cepat dan

efisien dibandingkan dengan produksi

senyawa aktif menggunakan tanaman

inangnya. Penelitian ini menunjukkan bahwa

pegagan dan belimbing wuluh yang secara

empiris telah dikenal sebagai obat hipertensi

berasosiasi dengan aktinomiset endofit yang

mempunyai kemampuan menghasilkan

senyawa inhibitor ACE sehingga dapat

dikembangkan lebih lanjut sebagai bahan

baku obat hipertensi.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Total isolat aktinomiset endofit yang berhasil diisolasi berjumlah 12 isolat, tiga

isolat berasal dari daun pegagan (Centella

asiatica) yang termasuk Streptomyces spp.,

sedangkan sembilan isolat lainnya berasal dari

buah belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi),

enam isolat termasuk Streptomyces spp. dan

tiga isolat lainnya termasuk non-Streptomyces.

Ekstrak kasar isolat aktinomiset endofit yang

diuji menunjukkan aktivitas inhibitor ACE

yang beragam berkisar antara 103,13% -

279,17%. Isolat AEP-1 asal daun pegagan


tertinggi (279,17%), diikuti isolat AEB-5 asal

buah belimbing wuluh (222,92%). Aktivitas

inhibisi kedua isolat tersebut melebihi

aktivitas inhibisi kontrol positif captopril

(0,01 mg/mL) 61,46% dan captopril (0,02

mg/mL) 66,67%. Sementara itu, tanaman kultur jaringan pegagan steril mikrob endofit

tidak memiliki aktivitas inhibisi ACE. Dengan

demikian isolat AEP-1 dan AEB-5 berpotensi

sebagai penghasil inhibitor ACE dan dapat

dikembangkan lebih lanjut sebagai obat

hipertensi.

Saran

Kajian lebih lanjut mengenai optimasi

produksi senyawa antihipertensi serta

karakterisasi senyawa inhibitor ACE yang

dihasilkan oleh isolat potensial AEP-1 dan

AEB-5 perlu dilakukan. Selain itu perlu uji

lanjut secara in vivo serta uji toksisitas untuk

pengembangannya sebagai obat antihipertensi.

11

DAFTAR PUSTAKA

Akil MN, Bakri S. 2001. Angiotensin

converting enzyme inhibitor (ACE-I) dan

proteksi vaskular. Cermin Dunia

Kedokteran 132:7-9.

Castillo et al. 2002. Munumbicins, wide

spectrum antibiotics produced by

Streptomyces NRRL 30562, endophytic on

Kennedia nigriscans. Microbiology

148:2675-2685.

Cheung H, Wang FL, Ondetti MA, Sabo EF,

Chusman DW. 1980. Binding of peptide

substrates and inhibitors of angiotensin-

converting enzyme. J Biol Chem 255:401-

407.

Coombs JT, Franco CMM. 2003. Isolation

and identification of actinobacteria from

surface-sterilized wheat roots. Appl

Environ Microbiol 69:5603-5608.

Crawford DL, Lynch JM, Whipps JM, Ousley

MA. 1993. Isolation and

characterization actinomycete antagonists

of a fungal root phatogen. Appl Environ

Microbiol 59:3899-3905.

Ghadin N et al. 2008. Isolation and

characterization of novel endophytic

Streptomyces SUK 06 with antimicrobial

activity from Malaysian plant. Asian J

Plant Sci 7:189-194.

Hallmann J, Quadt-Hallmann A, Mahaffee

WF, Kloepper JW. 1997. Bacterial

endophytes in agricultural crops. Can J

Microbiol 43:895-914.

Hansen K et al. 1995. In vitro screening of

traditional medicines vfor antihypertensive

effect based on inhibition of the

angiotensin converting enzyme (ACE). J

Ethnopharmacol 48:43-51.

Hariana HA. 2004. Tumbuhan Obat dan

Khasiatnya. Jakarta: Penebar Swadaya.

Hasegawa S, Meguro A, Shimizu M,

Nishimura T, Kunoh H. 2006. Endophytic

actinomycetes and their interaction with

host plants. Actinomycetologica 20:72-81.

Hayakawa MT, Nonomura H. 1987. Humic

acid-vitamin agar, a new method for the

selective isolation of soil actinomycetes. J

Ferment Bioeng 65:501-509.

Hayes M et al.. 2007. Fermentate of

Lactobacillus animalis DPC6134 contains

of range of novel propeptide angiotensin

converting enzyme inhibitor. J Appl

Environ Microbial 73:4658-4667.

Iskandar Y. 2007. Tanaman obat yang

berkhasiat sebagai antihipertensi [karya

ilmiah]. Bandung: Fakultas

Farmasi Universitas Padjajaran Bandung.

Kasahara Y, Ashihara Y. 1981. Colorimetry

of angiotensin-I converting enzyme

activity in serum. Clin Chem 27:1922-

1925.

Kudo T. 1997. Family Streptomycetaceae. In:

Miyadoh S (ed). Atlas of Actinomycetes.

The Society for Actinomycetes Japan. p

122-155.

Lachevalier MP, Bievre C de, Lachevalier

HA. 1977. Chemotaxonomy of aerobic

actinomycetes: phospholipid composition.

Biochem Syst Ecol 5:249-260.

Lestari Y. 2006. Identification of indigenous

Streptomyces spp. producing antibacterial

compounds. J Mikrobiol Indones 11:99-

101.

Lima DP de. 1999. Synthesis of angiotensin-

converting enzyme (ACE) inhibitors: an

important class of antihipertensive drugs.

Quim Nova. 22:375-381.

Mishra BB. 2011. Natural products in drug

discovery: clinical evaluations and

investigations. Di dalam: Tiwari VK,

editor. Opportunity, Challenge and Scope

of Natural Products in Medicinal

Chemistry. Ed ke-2. India: Research

Signpost. hlm 1-62.

Miyadoh S. 1997. Morphology and Phylogeny

of Actinomycetes. Atlas of Actinomycetes.

The Society for Actinomycetes Japan.

Miyadoh S, Otoguro M. 2004. Workshop on

isolation methods and classification of

actinomycetes [makalah]. Biotechnology

Center LIPI.

Nakatsukasa WM, Wilgus RM, Thomas DN,

Mertz FP, Boeck LD. 1985. Angiotensin

converting enzyme inhibitors produced by

Streptomyces chromofuscus. Discovery,

taxonomy and fermentation. J Antibiot

38:997-1002.

Ondetti MA, Cushman DW, Rubin B, Bindra

JS, Lednicer D, editor. Ed ke-2. 1983. In

Chronicles of Drugs Discovery. New

York: John Wiley & Sons,Inc.

Raja A, Prabakarana P. 2011. Actinomycetes

and drug-an overview. Am J Drug Discov

Dev 1:75-84.

Sharma PK, Sarita S, Prell J. 2005. Isolation

and characterization of an endophytic

bacterium related to Rhizobium/Agrobacte

rium from wheat (Triticum aestivum L.)

roots. Current Sci 89:608-610.

Somanadhan B et al. 1996. An

ethnopharmacological survey for potential

angiotensin converting enzyme inhibitors

from Indian medicinal plants. J

Ethnopharmacol 65:103-112.

12

Strobel G, Daisy B. 2003. Bioprospecting

for microbial endophytes and their

natural product. Microbiol Mol Biol Rev

67:491-502.

Takahashi Y, Omura S. 2003. Isolation of

new actinomycete strains for screening

of new bioactive compounds. J Gen Appl


Tan RX, Zou WX. 2001. Endophytes: a rich

source of functional metabolites. Nat

Prod Rep 18:448-459.

Tejesvi MV, Kini KR, Prakash HS, Subbiah

V, Shetty HS. 2008. Antioxidant,

antihypertensive, and antibacterial pro-

perties of endophytic Pestalotiopsis

species from medicinal plants. Can J


Wagner H, Elbl G, Lotter H, Uinea M. 1991.

Evaluation of natural products as

inhibitors of angiotensin I-converting

enzyme (ACE). Pharm Pharmacol Lett

1:15-18.

Wijayakusuma H, Dhalimartha S. 2005.

Ramuan Tradisional untuk Pengobatan

Darah Tinggi. Bogor Penebar Swadaya.

Yusuf I. 2008. Hipertensi sekunder.

Medicinus 21:71-79.

14

LAMPIRAN

14

Lampiran 1 Komposisi media agar-agar asam humat mengandung vitamin B (HV)

Komposisi bahan Jumlah bahan (g) per liter media

Asam humat 1,00*

CaCO3 0,02

FeSO4.7H2O 0,01

KCl 1,71

MgSO4.7H2O 0,05

Na2HPO4 0,50

B-vitamin 5,00 mL**

Sikloheksimida 0,05

Asam nalidiksat 0,02***

Agar-agar murni 18,00

Akuades 1,00 L

Ket : *) Dilarutkan dalam 40 mL 0,4% NaOH; **) Menggunakan satu butir vitamin B complex

IPI, dilarutkan dalam 200 mL akuades steril (disaring menggunakan millipore 0,22 m); ***)

Dilarutkan dalam 1 mL NaOH 0,4% + 3 mL akuades steril. pH media HV adalah 7.2.

Lampiran 2 Komposisi media agar-agar International Streptomyces Project No.2 (ISP2)

Komposisi bahan Jumlah bahan (g) per liter media

Yeast extract 4

Malt extract 10

Glukosa 4

Agar-agar 18

Ket : Media cair ISP2 tidak menggunakan komposisi agar-agar.

Lampiran 3 Komposisi media Murashige & Skoog (MS)

Bahan kimia Konsentrasi larutan

(g/L)

Pemakaian larutan

media (ml/L)

NH4NO3 82,500 20

KNO3 95,000 20

KH2PO4 34,000 5

H3BO3 1,240 KI 0,166

Na2MoO4.2H2O 0,050 CoCl2.6H2O 0,005 CaCl.2H2O 88,000 5

MgSO4.7H2O 74,000 5

MnSO4.4H2O 4,460 ZnSO4.7H2O 1,720 CuSO4.5H2O 0,005 Na2EDTA.2H2O 3,730 10

FeSO4.7H2O 2,780 Myo-Inositol 10,000 10

Thiamine 0,010 10

Niacine 0,050

Pyridoxine 0,050

Glycine 0,200

Gula 30,000

15

Lampiran 4 Nilai absorbansi hasil pengukuran spektrofotometri 228 nm

Jenis sampel

Absorbansi Persentase (%)

aktivitas

penghambatan

ACE A1 A2

Rata-

rata B1 B2

Rata-

rata C1 C2

Rata-

rata D1 D2

Rata-

rata

Estrak kuljar tanaman pegagan 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5250 0,6490 0,5870 0,5330 0,5310 0,5320 -14,58

Ekstrak daun pegagan 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5600 0,4060 0,4830 0,5920 0,4690 0,5305 198,96

Ekstrak buah belimbing wuluh 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5580 0,4740 0,5160 0,5680 0,5280 0,5480 166,67

Media cair ISP2 (M) 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5630 0,5200 0,5415 0,4540 0,5580 0,5060 26,04

Captopril (0,01 mg/mL) 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,3460 0,3740 0,3600 0,3320 0,3510 0,3415 61,46

Captopril (0,02 mg/mL) 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,3500 0,3500 0,3500 0,3340 0,3340 0,3340 66,67

AEP-1 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,4420 0,4270 0,4345 0,4300 0,6110 0,5205 279,17

AEP-2 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,4150 0,4400 0,4275 0,5030 0,3910 0,4470 140,63

AEP-3 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,3840 0,3970 0,3905 0,4120 0,4120 0,4120 144,79

AEB-1 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,6220 0,6220 0,6220 0,5630 0,7440 0,6535 165,63

AEB-2 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5430 0,5430 0,5430 0,4910 0,6090 0,5500 114,58

AEB-3 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5190 0,6140 0,5665 0,5940 0,5720 0,5830 134,38

AEB-4 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5470 0,6030 0,5750 0,6500 0,5810 0,6155 184,38

AEB-5 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,4190 0,6080 0,5135 0,5640 0,5810 0,5725 222,92

AEB-6 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,6850 0,5450 0,6150 0,6420 0,6420 0,6420 156,25

AEB-7 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,6320 0,5050 0,5685 0,5700 0,5700 0,5700 103,13

AEB-8 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,6060 0,6060 0,6060 0,4640 0,4640 0,4640 -195,83

AEB-9 0,5670 0,5150 0,5410 0,5200 0,4660 0,4930 0,5240 0,5660 0,5450 0,4360 0,6600 0,5480 106,25

16

Lampiran 5 Contoh perhitungan penentuan persentase aktivitas penghambatan ACE

Keterangan dari rumus persamaan tersebut :

A = Hasil absorbansi dengan ACE, tanpa inhibitor ACE

B = Hasil absorbansi tanpa ACE, dan tanpa inhibitor ACE

C = Hasil absorbansi dengan ACE dan inhibitor ACE

D = Hasil absorbansi dengan inhibitor ACE, namun tanpa ACE

Contoh perhitungan:

1). Kontrol positif captopril (0,01 mg/mL)

Aktivitas inhibitor ACE (%) = 100 [100 x (0,3600 0,3415) / (0,5410 0,4930)]

= 100 [100 x (0,0185) / (0,048)]

= 100 (38,54)

= 61,46 %

2). Kontrol positif captopril (0,02 mg/mL)


= 100 [100 x (0,016) / (0,048)]

= 100 (33,33)

= 66,67 %

3). Isolat AEP-1 (0,058 mg/mL)


= 100 [100 x (- 0,086) / (0,048)]

= 100 (- 179,17)

= 279,17 %

4). Isolat AEB-5 (0,421 mg/mL)


= 100 [100 x (- 0,059) / (0,048)]

= 100 (- 122,92)

= 222,92 %

Aktivitas inhibitor ACE (%) = 100 [100 x (C D)/(A B)

Skripsi Wahyu Eka Sari g34061708 13 Juni11

Documents

Transcript of Skripsi Wahyu Eka Sari g34061708 13 Juni11