i

SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF

ANTIFUNGI DALAM MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH

HIJAU (Piper betle L.) DENGAN VARIASI KETINGGIAN

TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP Candida albicans

ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE

KLT BIOAUTOGRAFI

SKRIPSI

I GUSTI AYU ARYA TRISNADEWI

1208505089

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2016

ii

iii

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena

atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI DALAM

MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) DENGAN

VARIASI KETINGGIAN TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP

Candida albicans ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE KLT

BIOAUTOGRAFI” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan dari

berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan

terima kasih kepada:

1. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen

pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti

pendidikan di Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan

skripsi ini.

2. Putu Sanna Yustiantara, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan

Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas

Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.

iv

iv

3. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas Matematika

dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua

Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

5. Seluruh dosen dan staff pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis

selama penyusunan skrispi ini.

6. Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, I Gusti Ngurah

Agung, S.E. dan Gusti Ayu Warni yang telah mengasuh dan membesarkan

penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skrispi

ini.

7. Kakak kandung saya yaitu I Gusti Ayu Ngurah Lestari, S.E., I Gusti Ayu

Agung Adi Putri, S.Pd., dan adik kandung saya I Gusti Ngurah Agung

Pengalasan yang selalu memberi motivasi dan dukungan.

8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, mahasiswa

Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim penelitian sirih:

Sulys, Kak Suas, Cahyani, Utik, Pebri, Dek in, Budi, Inggrid serta sahabat

seperjuangan geng giri kencana: Gek in, Dwi, Eling, Cokti, Cahyani, dan

Nila yang selalu membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan

skripsi ini.

v

v

9. Teman terdekat I Nyoman Triadnyana, S.Ikom., yang telah memberikan

motivasi, dukungan, doa, dan selalu setia membantu dalam penyusunan

skripsi ini.

10. Para laboran Kak Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak

membantu dalam penyusunan skrispi ini.

11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

skrispi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skrispi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga skrispi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, Mei 2016

Penulis

vi

vi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................... vi

DAFTAR SINGKATAN ................................................................................ ix

DAFTAR ISTILAH ......................................................................................... x

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xiii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xv

ABSTRAK ...................................................................................................... xvi

BAB I. PENDAHULUAN ........................................................................... 1

1.1. Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah .................................................................... 5

1.3. Tujuan ....................................................................................... 5

1.4. Manfaat .....................................................................................

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................. 6

2.1. Sirih Hijau (P. betle L.) ............................................................ 6

2.1.1. Klasifikasi .................................................................... 6

2.1.2. Deskripsi tanaman ........................................................ 7

2.1.3. Kandungan kimia .......................................................... 7

2.2. Minyak Atsiri ............................................................................ 8

vii

vii

2.3. Minyak Atsiri Daun Sirih (P. betle L.) ..................................... 9

2.3.1. Sifat Fisika-Kimia ......................................................... 9

2.3.2. Kandungan Kimia ......................................................... 9

2.3.3. Aktivitas Antifungi ...................................................... 10

2.4. Kandidiasis ............................................................................... 10

2.5. Candida albicans ...................................................................... 12

2.5.1. Klasifikasi .................................................................... 12

2.5.2. Morfologi dan Karakteristik ......................................... 13

2.6. Destilasi Air .............................................................................. 14

2.7.Bioautografi Kontak ................................................................. 15

BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................ 17

3.1. Rancangan Penelitian ............................................................... 17

3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian .................................................... 17

3.3. Obyek Penelitian ...................................................................... 18

3.4. Bahan Penelitian ...................................................................... 18

3.5. Alat Penelitian ......................................................................... 18

3.6. Batasan Operasional ................................................................. 19

3.7. Prosedur Penelitian .................................................................. 20

3.7.1. Preparasi Tanaman dan Ekstraksi ................................ 20

a. Determinasi tumbuhan .................................................. 20

b. Ekstraksi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau (P. betle L.) 20

3.7.2. Preparasi Jamur C. albicans ......................................... 21

a. Penyegaran .................................................................... 21

viii

viii

b. Pembuatan Suspensi .................................................... 21

3.7.3. Penyiapan Sampel Uji................................................... 21

3.7.4. KLT Bioautigrafi Kontak ............................................. 21

a. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis............... 21

b. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi .................... 22

c. Uji Aktivitas Antifungi ................................................. 23

3.8. Analisis Data ............................................................................ 23

3.9.Skema Penelitian ...................................................................... 24

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 26

4.1. Determinasi Tanaman ............................................................... 26

4.2. Ekstraksi Minyak Atsiri dari Daun Sirih Hijau ........................ 26

4.3. Optimasi Jumlah Penotolan Sampel Minyak Atsiri Daun Sirih

Hijau ......................................................................................... 30

4.4. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis .......................... 31

4.5. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi ............................... 32

4.6. Uji Aktivitas Antifungi ............................................................ 34

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 39

5.1. Kesimpulan ............................................................................... 39

5.2. Saran ........................................................................................ 39

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 40

LAMPIRAN ..................................................................................................... 46

ix

ix

DAFTAR SINGKATAN

AIDS : Acquired Immune Deficiency Syndrome

ATS 4 : Automatic TLC Sampler 4

ATTC : American Type Culture Collection

C. albicans : Candida albicans

CFU : Colony FormingUnit

GC : Gas Chromatography

HIV : Human Immunodeficiency Virus

hRf : Hundred Retardation Factor

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

LAF : Laminar Air Flow

MIC : Minimum Inhibition Concentration

MTCC : Microbial Type Culture Collection

MS : Mass Spectrometry

p.a. : pro analisis

P. betle L. : Piper betle Linn

pH : Power of Hydrogen

SDA : Saboraud Dextrose Agar

SDB :Saboraud Dextrose Broth

UPCC : University of Portsmouth Culture Collection

UV : Ultraviolet

mm : Milimeter

x

x

DAFTAR ISTILAH

Kandidiasis : Istilah yang dipakai untuk infeksi kulit dan

selaput lendir yang disebabkan oleh jamur dari

genus Candida.

Candiduria : Invasi Candida pada saluran kemih yang dapat

diketahui dengan ditemukannya Candida pada

urin.

Gastrointestinal

candidiasis

: Penyakit jamur Candida yang mengenai

saluran pencernaan.

Fungi opportunistik : Organisme yang biasanya tidak menyebabkan

penyakit pada seseorang dengan sistem

kekebalan tubuh yang normal, tetapi dapat

menyerang seseorang dengan sistem kekebalan

tubuh yang buruk.

Hifa : Struktur biologis berupa berkas-berkas halus

yang merupakan bagian dari tubuh vegetatif

berbagai fungi.

Blastospora : Tunas yang tumbuh menjadi spora.

Pseudohifa : Rantai-rantai pertunasan yang memanjang dari

blastospora.

Sistem kohobasi : Air kondensat yang keluar dari separator masuk

kembali secara otomatis ke dalam ketel agar

xi

xi

meminimkan kehilangan air.

Resistensi : Perlawanan yang terjadi ketika jamur secara

bertahap kehilangan kepekaan terhadap obat

yang sebelumnya membunuh mereka.

Autoklaf : Alat pemanas tertutup yang digunakan untuk

mensterilkan suatu benda menggunakan uap

bersuhu dan bertekanan tinggi (121oC, 1 atm)

selama kurang lebih 15 menit.

Bioautografi : Suatu metode yang spesifik untuk mendeteksi

bercak pada kromatogram hasil kromatografi

lapis tipis atau kromatografi kertas yang

mempunyai aktivitas sebagai antibakteri,

antifungi, dan antiviral.

Inkubasi : Suatu teknik perlakuan bagi mikroorganisme

yang telah diinokulasikan pada media (padat

atau cair), kemudian disimpan pada suhu

tertentu untuk dapat melihat pertumbuhannya.

Inokulasi : Suatu proses penenaman jamur atau

memindahkan jamur dari suatu media ke media

lainnya.

Patogen : Agen biologis yang menyebabkan penyakit

pada inangnya.

Biosintesis : Suatu proses yang dikatalisis oleh enzim yang

xii

xii

terjadi dalam organisme hidup, dimana substrat

diubah menjadi senyawa lain (produk) yang

biasanya memiliki struktur lebih kompleks

Pour plate : Mencampur sejumlah suspensi bahan pada

media agar yang dicairkan, lalu dituang pada

cawan petri steril secara aseptik dan dibiarkan

memadat

Determinasi tumbuhan : Pedoman yang digunakan dalam

pengidentifikasian tumbuhan yang belum

diketahui dengan cara membanding-

bandingkan morfologi dan anatominya

xiii

xiii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 3.1. Pereaksi Pendeteksi Golongan Senyawa Bioaktif.......................... 22

xiv

xiv

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Tanaman sirih hijau (P. betle L.) ................................................ 6

Gambar 2.2 Candida albicans dan Ilustrasi morfologi Candida ................... 12

Gambar 3.1 Skema Umum Prosedur Penelitian ............................................. 24

Gambar 3.2 Skema Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi

Dengan Metode KLT Bioautografi Kontak ................................ 25

xv

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ......... 47

Lampiran 2 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ............ 48

Lampiran 3 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang .......... 49

Lampiran 4 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang ............. 50

Lampiran 5 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan ................ 51

Lampiran 6 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan .................. 52

Lampiran 7 Sterilisasi Alat dan Bahan ........................................................... 53

Lampiran 8 Pembuatan Media ....................................................................... 54

Lampiran 9 Perhitungan Pembuatan Fase Gerak (eluen) ............................... 55

Lampiran 10 Perhitungan Pembuatan Pereaksi Pendeteksi ............................. 56

Lampiran 11Perhitungan Persentase Rendemen Hasil Optimasi Metode

Ekstraksi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau .................................. 57

Lampiran 12Perhitungan Persentase Rendemen Minyak Atsiri Daun

Sirih Hijau ................................................................................... 58

xvi

xvi

ABSTRAK

Daun sirih hijau memiliki aroma khas yang berasal dari minyak atsiri

dengan kandungan golongan senyawa fenol dan terpenoid. Kandungan senyawa

minyak atsiri dipengaruhi oleh variasi ketinggian tempat tumbuh. Penelitian

sebelumnya melaporkan bahwa minyak atsiri daun sirih hijau memiliki potensi

sebagai antifungi terhadap C. albicans, sehingga pada penelitian ini bertujuan

untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif antifungi minyak atsiri daun sirih

hijau dengan variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali terhadap C. albicans

menggunakan metode KLT bioautografi kontak.

Penelitian ini bersifat eksploratif laboratorik untuk mengetahui golongan

senyawa bioaktif antifungi dalam minyak atsiri daun sirih hijau terhadap C.

albicans. Pemisahan kromatografi lapis tipis dilakukan menggunakan fase diam

silika gel GF254 dan fase gerak toluene:etilasetat (93:7)v/v. Selanjutnya,

karakterisasi golongan senyawa bioaktif dilakukan menggunakan pereaksi Folin-

Ciocalteu, FeCl3, dan Anisaldehid-asam sulfat. Sedangkan uji bioautografi kontak

dilakukan dengan menempelkan plat pada medium yang berisi suspensi C.

albicans selama 1 jam kemudian plat diambil dan media diinkubasi selama 18 jam

suhu 37oC. Nilai hRf hasil karakterisasi dibandingkan dengan nilai hRf KLT

bioautografi kontak.

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat pengaruh variasi

ketinggian tempat tumbuh di Bali dengan sampel pada dataran rendah, dataran

sedang, dan pegunungan. Hal tersebut dapat dilihat dari profil golongan senyawa

yang sama, yaitu golongan senyawa terpenoid dan fenol pada hRf 52 dan 66,

golongan senyawa fenol dengan inti katekol pada hRf 52 dan 66, dan golongan

senyawa fenol sederhana pada hRf 66. Jadi golongan senyawa bioaktif dalam

minyak atsiri daun sirih hijau yang berfungsi sebagai antifungi terhadap C.

albicans adalah golongan senyawa fenol dan terpenoid.

Kata Kunci : P. betle L., Minyak Atsiri, KLT Bioautografi Kontak, C. albicans,

Golongan Senyawa.

xvii

xvii

ABSTRACT

Piper betel leaf has a distinctive aroma that comes from its essential oil

which contain phenol and terpenoids compound (monoterpenes and

sesquiterpenes). The essential oil in a plant was affected by environmental

conditions. Previous study reported that P. betel essential oil has good potential as

an antifungal agent against C. albicans, so in this study aims to determine the

class of antifungal bioactive compounds in green betel leaf essential oil with a

height variation fungus grows in Bali against C. albicans using methods KLT

bioautografi contact.

Our exploration laboratory study aimed to determine the element of

antifungal bioactive compounds in P. betel leaf essential oil to the fungus C.

albicans. Separation by thin layer chromatography using silica gel GF254

stationary phase and the mobile phase toluene: ethyl acetate (93: 7) v/v.

Furthermore, the characterization of bioactive compounds was conducted using

detection reagent such as, Folin – Ciocalteu, FeCl3, and anisaldehyde-sulfuric

acid and test bioautografi contact is made by placing the plate on a medium which

already contains the suspension for 1 hour and then the plate is taken and the

media were incubated for 18 hours at 37°C. HRF value detection reagent

characterization results are then compared with the value HRF bioautografi TLC

contact inhibition zone.

The result of this study indicates that there is no influence of the variation of

altitude where Piper betel grows in Bali with a sample in the lowlands, plains, and

mountains. It can be seen from the profile the same classes of compounds, that is

terpenoids compounds and group phenolic compounds at the value of HRF 52 and

66, group of phenolic compounds with catechol nucleus at the value of HRF 52

and 66, and group of simple phenolic compounds at the value of HRF 66. So,

groups of bioactive compounds in P. betel leaf essential oil that serves as

antifungal against C. albicans is a type of phenol compounds and terpenoids.

Keyword : P. betle L., Essential oil, TLC bioautography Contact, C. albicans,

Group of Bioactive Compounds.