SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal...

15
i SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI DALAM FRAKSI ETANOL DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) DARI DAERAH DENGAN ZONA IKLIM PANAS (0-700 MDPL) DI BALI TERHADAP Candida albicans ATCC 10231 DENGAN MENGGUNAKAN METODE KLT-BIOAUTOGRAFI Skripsi I GUSTI AYU NYOMAN SUASTINI 1208505061 JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2016

Transcript of SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal...

Page 1: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

i

SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI

DALAM FRAKSI ETANOL DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.)

DARI DAERAH DENGAN ZONA IKLIM PANAS (0-700 MDPL) DI

BALI TERHADAP Candida albicans ATCC 10231 DENGAN

MENGGUNAKAN METODE KLT-BIOAUTOGRAFI

Skripsi

I GUSTI AYU NYOMAN SUASTINI

1208505061

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2016

Page 2: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

ii

Page 3: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Skrining

Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Dalam Fraksi Etanol Daun Sirih

Hijau (Piper Betle L.) Dari Daerah Dengan Zona Iklim Panas (0-700 mdpl)

Di Bali Terhadap Candida albicans ATCC 10231 Dengan Menggunakan

Metode KLT-Bioautografi” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan

dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada:

1. N. L. P. Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana, khususnya dalam

penyusunan skripsi ini.

2. A. A. Gede Rai Yadnya Putra, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen

pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

3. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M.Si., selaku Dekan Fakultas MIPA

Universitas Udayana.

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan

Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana.

Page 4: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

iv

5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama

penyusunan skripsi ini. Ibu Nova Armita, Mbok Dwik, Kak Anggi dan Kak

Pasek yang telah memberikan bantuan dan dukungan kepada penulis selama

penelitian di Laboratorium.

6. Orang tua yang sangat penulis cintai dan hormati, I Gusti Putu Tagel dan Jro

Nyoman Asmini yang telah memberi dukungan dalam penyusunan skripsi ini.

7. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi Udayana angkatan 2012 “Dioscuri

Hygeia” dan Bahan Alam 2012 yang penulis cintai, khususnya Tim

seperjuangan Piper betle Acne dan Albicans yaitu Budi, Cahyani, Sulys,

Dewi, Putri, Pebri, Dein, Inggrid dan Lina. Terimakasih atas kebersamaannya

selama di Laboratorium.

8. Seluruh rekan mahasiswa KKN XII Desa Gulingan yang senantiasa

memberikan semangat dan dukungan kepada penulis.

9. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di kedepannya dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap

semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan.

Bukit Jimbaran, Mei 2016

Penulis

Page 5: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

v

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................ ii

KATA PENGANTAR ........................................................................................ iii

DAFTAR ISI ........................................................................................................ v

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ......................................................... ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xiii

ABSTRAK ......................................................................................................... xv

BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah .................................................................................... 5

1.3 Tujuan Penelitian ..................................................................................... 5

1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 6

2.1 Tanaman Sirih (Piper betle L.) ................................................................ 6

2.1.1 Klasifikasi Tanaman ...................................................................... 6

2.1.2 Deskripsi Tanaman ........................................................................ 7

Halaman

Page 6: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

vi

2.1.3 Kandungan Kimia dan Bioaktivitas Antifungi Tanaman Sirih

Hijau ............................................................................................. 7

2.2 Candida albicans ..................................................................................... 8

2.2.1 Taksonomi C. albicans .................................................................. 8

2.2.2 Morfologi dan Karakteristik Umum C. albicans ........................... 9

2.2.3 Patogenitas Candida albicans ...................................................... 10

2.3 Kandidiasis ............................................................................................. 11

2.4 Iklim ....................................................................................................... 11

2.5 Ekstraksi ................................................................................................. 12

2.6 KLT Bioautografi ................................................................................... 13

2.6.1 KLT Bioautografi Kontak ............................................................ 14

2.6 Metode Deteksi Bercak KLT ................................................................. 14

BAB III METODE PENELITIAN...................................................................... 17

3.1 Rancangan Penelitian ............................................................................. 17

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ................................................................. 17

3.3 Obyek Penelitian .................................................................................... 18

3.4 Bahan Penelitian .................................................................................... 18

3.4.1 Bahan Ekstraksi ........................................................................... 18

3.4.2 Bahan KLT Bioautografi Kontak................................................. 18

3.5 Alat Penelitian ........................................................................................ 19

Page 7: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

vii

3.6 Batasan Operasional ............................................................................... 19

3.7 Prosedur Penelitian ................................................................................ 20

3.7.1 Determinasi Tanaman .................................................................. 20

3.7.2 Preparasi Sampel .......................................................................... 20

3.7.3 Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Simplisia .......................... 20

3.7.4 Pembuatan Fraksi Etanol ............................................................. 21

3.7.5 Penetapan Susut Pengeringan Fraksi Etanol ............................... 21

3.7.6 Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi Etanol

dengan Metode KLT Bioautografi ............................................. 22

A. Penyegaran Jamur C.. albicans............................................... 22

B. Pembuatan Suspensi Jamur C. albicans ................................. 22

C. Optimasi Fase Gerak untuk Pemisahan Fraksi etanol Daun Sirih

Hijau dengan Metode KLT (Kromatografi Lapis Tipis) ....... 22

D. Optimasi Konsentrasi Penotolan Fraksi Etanol Daun Sirih

Hijau ....................................................................................... 23

E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia Fraksi Etanol Daun Sirih

Hijau dan Uji Antifungi secara KLT Bioautografi Kontak .... 23

3.8 Analisis Data .......................................................................................... 25

3.9 Skema Kerja Penelitian .......................................................................... 26

Page 8: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

viii

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 27

4.1 Determinasi Tanaman ............................................................................ 27

4.2 Preparasi Sampel .................................................................................... 28

4.3 Penetapan Susut Pengeringan Serbuk dan Fraksi Etanol P. betle.......... 29

4.4 Pembuatan Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau (P. betle) ........................... 31

4.5 Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi Etanol Daun

Sirih Hijau ............................................................................................. 34

4.5.1 Optimasi Fase Gerak dan Konsentrasi Penotolan Fraksi Etanol . 34

4.5.2 Uji KLT Bioautografi Kontak dan Analisis Kualitatif Kandungan

Kimia Fraksi Etanol Daun Sirih Hijau ........................................ 37

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 46

5.1 Kesimpulan ............................................................................................ 46

5.2 Saran ...................................................................................................... 46

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 47

LAMPIRAN ........................................................................................................ 55

Page 9: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

ix

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

Aerob : Suatu proses biologi yang memerlukan oksigen

(oksigen terlarut).

Autoklaf : Pemanas tertutup yang digunakan untuk mensterilisasi

suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan

tinggi (121oC, 15 psi) selama kurang lebih 15 menit.

C. albicans : Candida albicans

Dimorfik : Jamur yang memiliki dua bentuk, yaitu bentuk kapang

dan bentuk khamir.

Ekstrak : Sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan menyari

simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok,

diluar pengaruh cahaya matahari langsung.

Eluen : Pelarut yang dipakai dalam proses migrasi/pergerakan

dalam membawa komponen-komponen zat sampel atau

fasa yang bergerak melalui fasa diam dan membawa

komponen-komponen senyawa yang akan dipisahkan.

Filtrat : Hasil penyaringan.

Gastric ulcer : Luka terbuka pada lapisan lambung.

Host : Makhluk hidup sebagai tempat hidup parasit.

Inkubasi : Proses pemeliharaan kultur mikroba dalam suhu

tertentu selama jangka waktu tertentu untuk memantau

pertumbuhan mikroba.

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

Page 10: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

x

Komensal : Makhluk hidup kecil bersel satu yang hidup bersama

organisme lain, tetapi tidak bersifat merugikan dan

mungkin juga bisa menguntungkan.

Multiplikasi : Tindakan atau proses memperbanyak.

P. betle : Piper betle

Saprofit : Organisme yang hidup mendapatkan bahan organik dari

organisme yang telah mati atau membusuk.

SDA : Media Saboraud Dextrose Agar

Simplisia : Bahan alam yang digunakan sebagai obat yang belum

mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan

lain, berupa bahan yang dikeringkan.

Sterilisasi : Proses penghilangan semua jenis organisme

hidup,dalam hal ini adalah mikroorganisme (protozoa,

fungi, bakteri, mycoplasma, virus) yang terdapat dalam

suatu benda.

Streak for single colony : Metode untuk memisahkan mikroorganisme menjadi

koloni tunggal dengan cara menggoreskan isolat pada

media agar.

Vulvovaginitis : Peradangan atau infeksi pada vulva (organ kelamin

bagian luar wanita) dan vagina.

Page 11: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

xi

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Pereaksi Semprot untuk Masing-Masing Golongan Senyawa ........... 16

Tabel 4.1. Optimasi Sistem Fase Gerak ............................................................. 34

Tabel 4.2. Hasil Uji Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi Fraksi

Etanol ................................................................................................ 44

Halaman

Page 12: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Tanaman Sirih Hijau (P. betle) ........................................................ 6

Gambar 3.1. Skema Kerja Penelitian ................................................................. 26

Gambar 4.4. Senyawa Golongan Monosiklik Monoterpenoid dengan Gugus

Fenol dalam Daun Sirih Hijau ....................................................... 41

Gambar 4.5. Struktur Inti Katekol ..................................................................... 42

Halaman

Page 13: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan Pembuatan Fase Gerak (Eluen) ................................. 55

Lampiran 2. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah H ........................ 57

Lampiran 3. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah H ................ 58

Lampiran 4. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah A ........................ 59

Lampiran 5. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah A ................. 60

Lampiran 6. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah C ........................ 61

Lampiran 7. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah C ................. 62

Lampiran 8. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah B ........................ 63

Lampiran 9. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah B ................. 64

Lampiran 10. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah G ...................... 65

Lampiran 11. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah G ............... 66

Lampiran 12. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah E ....................... 67

Lampiran 13. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah E ............... 68

Lampiran 14. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah F ....................... 69

Lampiran 15. Hasil Klasifikasi Tanaman Daun Sirih Hijau Daerah F ............... 70

Lampiran 16. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah D ...................... 71

Lampiran 17. Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Daerah D ...................... 72

Halaman

Page 14: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

xiv

ABSTRAK

Daun sirih hijau dimanfaatkan untuk mengobati keputihan (kandidiasis

vaginitis). Infeksi kandidiasis vaginitis oleh C. albicans terjadi pada sekitar 90%

wanita di Indonesia. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa fraksi etanol P.

betle memberikan daya hambat sebesar 7,2 mm terhadap C. albicans dan

diketahui mengandung metabolit sekunder seperti flavonoid, fenol dan terpenoid

yang bersifat sebagai antifungi. Kondisi iklim mempengaruhi produksi metabolit

sekunder, semakin panas kondisi iklim akan meningkatkan produksi senyawa

flavonoid, fenol dan terpenoid.

Penelitian ini bersifat eksploratif laboratoris yang bertujuan untuk

mengetahui profil golongan senyawa bioaktif antifungi C. albicans dari fraksi

etanol P. betle yang tumbuh di beberapa daerah dengan zona iklim panas (0-700

mdpl) di Bali. Metode yang digunakan yaitu KLT bioautografi kontak dengan fase

diam silika gel GF254, fase gerak n-heksana:etil asetat (7,2:2,9v/v) hasil optimasi

dan konsentrasi fraksi etanol 37,5 mg/mL (20µL) hasil optimasi. Analisis data

secara deskriptif dengan membandingkan nilai hRf hasil KLT bioautografi dengan

nilai hRf hasil identifikasi pereaksi.

Hasil dalam penelitian ini menunjukkan bahwa enam dari delapan daerah

fraksi etanol memberikan zona jernih pada hRf 45 dan satu daerah dengan hRf 42

yang teridentifikasi sebagai golongan senyawa fenol. Fraksi etanol daerah G tidak

menunjukkan adanya zona jernih, namun terdapat bercak pada kromatogram yang

teridentifikasi sebagai golongan senyawa fenol dengan nilai hRf yang sama

dengan daerah lainnya. Kesimpulan dari penelitian ini yaitu profil golongan

senyawa bioaktif antifungi fraksi etanol adalah golongan senyawa fenol dengan

nilai hRf 45 kecuali daerah A hRf 42. Perbedaan tempat tumbuh P. betle diduga

mempengaruhi jumlah kandungan senyawa aktif antifungi dalam tanaman.

Kata Kunci: Sirih Hijau, Fraksi Etanol, Bioautografi Kontak, C. albicans, Iklim

Panas

Page 15: SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI … awal.pdf · the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a class of phenolic compounds with a hRf

xv

ABSTRACT

Piper betle leaf has been used as a healing of candidiasis vaginitis. Infection

of candidiasis vaginitis by C. albicans occurs in approximately 90% of women in

Indonesia. A previous study reported that ethanolic fraction of P. betle leaf gives

the inhibition zone of 7,2 mm against C. albicans and it is known contain

secondary metabolites such as flavonoids, phenols and terpenoids as antifungal

properties. The climatic conditions affect the production of secondary metabolites.

Higher temperatures is known increasing the production of flavonoids, phenols

and terpenoids.

This study is explorative laboratory research which aims to determine the

class of antifungal bioactive compounds profile againts C. albicans from ethanolic

fraction P. betle leaf that grows in some areas with a high temperature climate

zones (0-700 masl) in Bali. TLC contact bioautography is used as research method

and silica gel GF254 was used as stationary phase. The optimization condition

found that the composition of mobile phase choosen was n-hexane:ethyl acetate

(7,2:2,9 v/v). The concentration of ethanolic fraction with the mobile phase

resulted 37,5 mg/mL (20 µL). The data were analyzed descriptively by comparing

the hRf value of bioautography to the hRf value of identification by reagents.

The results of this study indicate that the six out of eight regions ethanolic

fraction gives a clear zone on hRf 45 and one region with hRf 42 were identified

as the phenolic compound. Ethanolic fraction of G region didn’t show any clear

zone, but there are spots on the chromatogram were identified as a class of

phenolic compounds with hRf value same to other regions. This study found that

the profile of class antifungal bioactive compounds from ethanolic fraction is a

class of phenolic compounds with a hRf value 45, except for A region hRf value

is 42. The difference grown area of P. betle is expected to affect the amount of

active antifungal compound in plants.

Key word: P. betle, Ethanolic Fraction, Contact Bioautography, C. albicans, high

temperature climate