Responsi Bioreaksi

26
Kelompok 1 HIDROLISIS SELULOSA PADA RUMPUT LAUT DENGAN CRUDE ENZIM SELULASE DARI KULIT SINGKONG Disusun oleh : YULIANI (0918103010...) NANANG SUGIARTO (111810301001) EKA YUSTIANA (111810301050) ROSITA WAHYUNINGRUM (111810303051) Praktikum Bioreaksi

Transcript of Responsi Bioreaksi

Page 1: Responsi Bioreaksi

Kelompok 1

HIDROLISIS SELULOSA PADA RUMPUT LAUT DENGAN CRUDE ENZIM SELULASE

DARI KULIT SINGKONGDisusun oleh :YULIANI

(0918103010...)NANANG SUGIARTO

(111810301001)EKA YUSTIANA

(111810301050)ROSITA WAHYUNINGRUM

(111810303051)

Praktikum Bioreaksi

Page 2: Responsi Bioreaksi

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar BelakangHidrolisis Enzimatik lebih efisien

Rumput laut mengandung polisakarida (selulosa)

Analisis menggunakan reagen DNSA dan Sprektroskopi UV-Vis

Page 3: Responsi Bioreaksi

1.1 Rumusan Masalah

1.2 Tujuan

1. Bagaimana cara mengisolasi enzim dari bakteri penghasil enzim selulase pada kulit singkong?

2. Bagaimana aktivitas crude enzim selulase pada substrat CMC (Carboxy Methyl Cellulose)?

3. Bagaimana reaksi hidrolisis crude enzim selulase dari kulit singkong terhadap sampel rumput laut?

1. Mengetahui cara mengisolasi crude enzim selulase dari kulit singkong

2. Mengetahui uji aktivitas crude enzim selulase pada substrat CMC (Carboxy Methyl Cellulose)

3. Mengetahui reaksi hidrolisis crude enzim selulase dari kulit singkong terhadap sampel rumput laut

Page 4: Responsi Bioreaksi

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

Singkong (Manihot utilissima)

Hidrolisis Enzimatik

Selulosa adalah polisakarida yang terdiri dari monomer glukosa

Rumput laut

Page 5: Responsi Bioreaksi

BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN

3.1 AlatAlat-alatnya yaitu tabung reaksi steril, rak tabung, cawan petri pipet mohr 5 mL dan pipet mohr 10 mL, pipet tetes, pinset, spektrofotometer vis, kuvet, Erlenmeyer 250 mL, gelas ukur, labu ukur 10 ; 25 ; 50 mL, ball pipet, beakerglass 250 mL ; 100 mL, kertas saring, aluminium foil, hotplate, lemari pendingin, spatula, botol semprot, oven, blander, sentrifuse, lemari pendingin, baskom, pisau

Kulit singkong (penghasil enzim selulase), Mikroalga atau rumput laut (sampel), substrat selulase (Carbokxy Methyl Cellulose (CMC)) atau (oat spelt xylan), Aquades, Glukosa standart atau silosa standart, reagen DNSA (Dinitrosalicylic acid), bufer fosfat pH 7, Natrium Tartat

3.2 Bahan

Page 6: Responsi Bioreaksi

3.2.1 Isolasi Crude Enzim Selulase dari Kulit Singkong

Kulit Singkong

Hasil

Dicuci dengan air hingga bersih kemudian ditiriskan Dipotong kecil-kecil Dimasukkan ke dalam blender sebanyak 100 mL gram dan ditambah 100 mL fosfat pH 7 Diblender hingga halus Disaring slory yang didapat menggunakan kertas saring Disentrifugasi filtratnya dengan kecepatan 4200 rpm selama 80 menit Diambil Supernatan yang diperoleh, yang merupakan crude enzim selulase dan selanjutnya akan di uji aktivitasnya

3.2 Prosedur Kerja

Page 7: Responsi Bioreaksi

3.2.2 Uji Aktivitas Crude Enzim Selulase pada Substrat CMC3.2.2.1 Preparasi Larutan Substrat CMC (Carboxy Methyl Cellulose)Substrat CMC 1%

Hasil

Ditimbang serbuk CMC sebanyak 0,25 gram Dilarutkan dalam labu ukur 25 mL dengan pelarut buffer fosfat pH 7

Substrat CMC 1%

Hasil

Dimasukkan substrat CMC sebanyak 5 mL masing-masing ke dalam tiga tabung reaksi berbeda Ditambahkan 5 mL aquades pada tabung reaksi pertama, tabung reaksi kedua ditambah crude enzim selulase yang sudah dipanaskan (enzim inaktif), dan tabung reaksi ketiga ditambah crude enzim selulase dingin. Dilakukan inkubasi pada suhu kamar (25oC) selama 4 hari

3.2.2.2 Hidrolisis Enzimatik pada Substrat CMC

Page 8: Responsi Bioreaksi

3.2.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Glukosa Standart3.2.3.1 Pembuatan Larutan Glukosa Standar

Glukosa Standart

Hasil

Dibuat Larutan glukosa standart 0,01 M Diencerkan dengan cara ditempatkan pada labu ukur kemudian ditambah aquades sampai tanda batas dan dipindahkan ke tabung reaksi Dibuat larutan standar menjadi variasi konsentrasi 0 ; 0,0005 ; 0,0010 ; 0,0020 ; 0,0025 M

Page 9: Responsi Bioreaksi

3.2.3.2 Persiapan Pengukuran Absorbansi

Glukosa Standart (Variasi Konsentrasi)

Hasil

Diambil larutan glukosa standart masing-masing sebanyak 0,5 mL dan dimasukkan dalam tabung reaksi yang berbeda, Ditambah masing-masing tabung reaksi dengan 1,5 mL reagen DNSA (Dinitrosalicylic acid) dan 0,5 mL Natrium Tartat. Dipanaskan tabung reaksi tersebut selama 5 menit menggunakan penangas air Diamati Warna larutan sebelum dan sesudah pemanasan diamati.

Page 10: Responsi Bioreaksi

3.2.3.3 Pengukuran Absorbansi dan Pembuatan Kurva Kalibrasi

Glukosa Standart + Reagen DNSA + Na Tartat

Hasil

Dimasukkan larutan tersebut ke dalam kuvet dimulai dari blanko sampai konsentrasi terbesar Diukur absorbansinya menggunakan Spektrofotometer Visible pada panjang gelombang 540 nm. Dibuat grafik hasil nilai absorbansi larutan glukosa standar sehingga didapat persamaan y = ax + b

Page 11: Responsi Bioreaksi

3.2.4 Uji Real Sampel3.2.4.1 Preparasi Sampel

Rumput Laut

Hasil

Dicuci menggunakan air kemudian ditiriskan Ditimbang sebanyak 100 gram Diblender menggunakan pelarut aquades sebanyak 100 mL Diambil slory yang didapat untuk uji berikutnya

Page 12: Responsi Bioreaksi

3.2.4.2 Hidrolisis Enzimatik Pada Rumput Laut Menggunakan Variasi Volume Crude Enzim

Sampel Rumput Laut

Hasil

Diambil slory dengan takaran yang sama dan dimasukkan ke dalam lima tabung reaksi Ditambah masing-masing tabung reaksi dengan 4 mL aquades Ditambah tabung reaksi pertama dengan 5 mL crude enzim selulase yang sudah dipanaskan (enzim inaktif), tabung reaksi kedua sampai ke lima secara berurutan ditambah crude enzim selulase dingin sebanyak 1 ; 2 ; 4 ; 5 mL Ditutup tabung rekasi tersebut dengan aluminium foil Dilakukan inkubasi selama 4 hari pada suhu kamar (25oC)

Page 13: Responsi Bioreaksi

3.2.5 Analisis Kuantitatif Glukosa Menggunakan Metode KolorimetriSampel Rumput Laut (Hasil

Inkubasi)

Hasil

Diambil masing-masing sebanyak sebanyak 0,5 mL dan dimasukkan dalam tabung reaksi yang berbeda Ditambah masing-masing tabung reaksi dengan 1,5 mL reagen DNSA dan 0,5 mL Natrium Tartat Dipanaskan tabung reaksi tersebut dipanaskan selama 5 menit menggunakan penangas air Diamati Warna larutan sebelum dan sesudah pemanasan (apabila larutan berwarna pekat maka harus diencerkan dengan aquades) Dimasukkan larutan tersebut ke dalam kuvet dimulai dari tabung reaksi pertama (dari blanko ke konsentrasi paling tinggi) Diukur absorbansinya menggunakan Spektrofotometer Visible pada panjang gelombang 540 nm. Dihitung konsentrasi glukosa berdasarkan hasil absorbansi dan persamaan kurva kalibrasi (apabila larutan sebelumnya diencerkan, setelah didapat nilai konsentrasi glukosa maka dikalikan dengan faktor pengencerannya)

Page 14: Responsi Bioreaksi

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

Crude Enzim Selulase dari SingkongBerwarna kuning,

4.1.1 Crude Enzim Selulase

Page 15: Responsi Bioreaksi

4.1.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Glukosa Standart

No

C Glukosa Standar

t (M)

Absorbansi (A) pada 540

nm

1 0 0,1472 0,0005 0,1663 0,0010 0,4594 0,0020 0,8925 0,0025 1,483 1 ; 2 ; 3 ; 4 ;

5

Foto(Setelah Pemanasan 5-10

menit dan diukur Absorbansinya

Page 16: Responsi Bioreaksi

0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025 0.0030

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

f(x) = 524.906976744184 x − 0.00048837209302266R² = 0.929902471537284

Kurva Kalibrasi Glukosa Standart

Series1Linear (Series1)

Konsentrasi (C)

Abso

rban

si (A

)

Page 17: Responsi Bioreaksi

4.1.3 Uji Aktivitas Crude Enzim Selulase

No Analit Absorbansi (A)

C Glukosa (M)

Hasil Perhitungan

C x Faktor Pengencera

n (10)

1Aquades + Substrat CMC (Tanpa Pengenceran)

0,177 - -

2Crude enzim selulase panas + Substrat CMC

0,391 0,000744 0,00744

3Crude enzim selulase dingin + Substrat CMC

0,288 0,000548 0,00548

Hasil Setelah Inkubasi 4 hari Setelah penambahan DNSA dan Pemanasan

Setelah pengenceran 10 kali1 ; 2 ; 3 2 ; 31 ; 2 ; 3

Page 18: Responsi Bioreaksi

4.1.3 Uji Real Sampel Rumput Laut

No Analit Absorbansi (A)

C Glukosa (M)

Hasil Perhitungan

C x Faktor Pengencera

n (10)

1Sampel + Crude enzim selulase panas 5 mL(Tanpa Pengenceran)

1,048 0,0019 0,0019

2Sampel + Crude enzim selulase dingin 1 mL

0,121 0,000230 0,00230

3Sampel + Crude enzim selulase dingin 2 mL

0,223 0,000424 0,00424

4Sampel + Crude enzim selulase dingin 4 mL

0,279 0,000531 0,00531

5Sampel + Crude enzim selulase dingin 5 mL

0,289 0,000550 0,00550

Page 19: Responsi Bioreaksi

Foto Uji Real Sampel Rumput Laut

Hasil Setelah Inkubasi 4 hari

Setelah penambahan DNSA dan Pemanasan

1 ; 2 ; 3 ; 4 ; 5 1 ; 5 ; 4 ; 3 ; 2 5 ; 4 ; 3 ; 2

Setelah pengenceran 10 kali

Page 20: Responsi Bioreaksi

Perbandingan Struktur CMC dan Selulosa

4.2 Pembahasan

Page 21: Responsi Bioreaksi

Enzim Selulase

• Endo-β-1,4-Dglukanase : memecah ikatan internal glukosidik yang berada diantara rantai glukan yang utuh

• Exo-β-1,4-Dglukanase/exo-β-1,4-selobiohidrolase : memecah dimer selobiosa dari rantai glukan dan melepaskannya ke dalam larutan

• β-glukosidase : menyempurnakan hidrolisis selulosa menjadi glukosa dengan memecah selobiosa menjadi monomer glukosa

Page 22: Responsi Bioreaksi

Reaksi Hidrolisis Enzim Selulase pada Substrat CMC

Page 23: Responsi Bioreaksi

Reaksi Hidrolisis Enzim Selulase pada Selulosa

Page 24: Responsi Bioreaksi

BAB 5. PENUTUP

5.1 KesimpulanBerdasarkan percobaan yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa :1. Crude enzim selulase bisa diisolasi dari kulit singkong

dengan cara memblender kulit singkong menggunakan buffer fosfat pH 7 dan slorynya disentrifugasi. Supernatan yang dihasilkan merupakan crude enzimnya.

2. Uji aktivitas pada praktikum ini tidak mendapat hasil yang baik karena enzim innaktif seharusnya memberikan absorbansi lebih kecil dari pada enzim aktif (dingin).

3. Reaksi hidrolisis enzimatik dari Crude enzim selulase dengan selulosa pada rumput laut bisa diamati, dimana konsentrasi glukosa yang dihasilkan pada variasi volume enzim dingin 1 ; 2 ; 4 ; 5 mL yaitu secara berurutan 0,00230 ; 0,00424 ; 0,00531 ; 0,0050 M.

Page 25: Responsi Bioreaksi

5.2 Saran• Peralatan serta tempat praktikum harus lebih bersih.• Perlu ditinjau tentang keadaan substrat dan reagen yang dibutuhkan, apakah masih layak pakai atau tidak.• Crude enzim hasil isolasi tidak terlalu lama didiamkan dalam kulkas.

Page 26: Responsi Bioreaksi