PENINGKATAN KEMAMPUAN Ganoderma, sp MELALUI

IRADIASI GAMMA DALAM MENDEGRADASI LIGNIN

PROPOSAL PENELITIAN

USWATUN HASANAH

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

2015 M/1436 H

LEMBAR PENGESAHAN

Judul penelitian : Peningkatan Kemampuan Ganoderma, sp Melalui Iradiasi

Gamma Dalam Mendegradasi Lignin

Nama : Uswatun Hasanah

NIM : 1111096000054

Program Studi : Kimia

Fakultas : Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif

Hidayatullah Jakarta

Menyetujui,

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah Yang Maha Esa, karena berkat

rahmat dan hidayah-Nya penulis dapat menyelesaikan proposal penelitian yang

berjudul “Peningkatan Kemampuan Ganoderma, sp Melalui Iradiasi Sinar Gamma

Dalam Degradasi Lignin”. Penulis menyadari bahwa terselesaikannya proposal

penellitian ini tak lepas dari bantuan banyak pihak. Pada kesempatan ini, penulis

mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. Dra. Tri Retno Dyah Larasati, M.Si selaku Pembimbing I yang telah

memberikan pengarahan serta bimbingannya sehingga banyak membantu

penulis dalam menyelesaikan proposal penelitian ini.

2. Nurhasni, M.Si selaku Pembimbing II yang telah membimbing dan

memberikan banyak masukan kepada penulis.

3. Yusraini DIS, M.Si selaku Ketua Program Studi Kimia Fakultas Sains dan

Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

4. Dr. Agus Salim, M.Si selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif

Hidayatullah Jakarta.

5. Kedua orang tua, adik, kakak, dan keluarga tercinta atas segala doa,

pengorbanan, nasihat dan motivasinya kepada penulis.

6. Segenap dosen program studi Kimia atas ilmu pengetahuan dan ilmu hidup

yang dengan ikhlas diajarkan kepada penulis.

7. Teman-teman Kimia angkatan 2011 yang senantiasa memberi dukungan,

motivasi dan keceriaan kepada penulis.

v

8. Serta semua pihak yang telah membantu secara langsung dan tidak langsung,

yang tidak dapat disebutkan satu persatu.

Penulis menyadari bahwa proposal penelitian ini masih jauh dari

kesempurnaan, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang

bersifat membangun dari pembaca. Harapan penulis semoga proposal penelitian ini

dapat dilakukan sesuai dengan rancangannya.

Jakarta, Maret 2015

Penulis

DAFTAR ISI

Halaman

KATA PENGANTAR .............................................................................. iv

DAFTAR ISI ............................................................................................. vi

DAFTAR TABEL .................................................................................... viii

DAFTAR GAMBAR ................................................................................ ix

BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... 1

1.1. Latar Belakang .................................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah ...............................................................................

1.3. Hipotesis ............................................................................................. 4

1.4. Tujuan ................................................................................................. 4

1.5. Manfaat ............................................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 5

2.1. Lignin .................................................................................................. 5

2.2. Selulase ............................................................................................... 6

2.3. Hemiselulase ....................................................................................... 7

2.4. Enzim Pendegradasi Lignin ................................................................ 8

2.5. Ganoderma, sp .................................................................................... 9

2.6. Iradiasi Sinar Gamma Co-60 ............................................................... 10

2.7. Parameter Proses Degradasi Lignin .................................................... 12

2.7.1. pH .............................................................................................. 12

2.7.2. Bobot Kering Miselia ............................................................... 13

2.7.3. Aktivitas Enzim ....................................................................... 13

2.7.4. Degradasi Lignin ...................................................................... 14

2.8. Spektrofotometer UV-Vis ................................................................... 14

vii

BAB III METODE PENELITIAN .......................................................... 16

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian ............................................................. 16

3.2. Alat dan Bahan .................................................................................... 16

3.2.1. Alat ............................................................................................ 16

3.2.2. Bahan ........................................................................................ 16

3.3. Rancangan Penelitian .......................................................................... 17

3.4. Cara Kerja ........................................................................................... 17

3.4.1. Preparasi Serbuk Kayu Jati Putih (Gmelina arborea Roxb.) ................ 17

3.4.2. Iradiasi Fungi ....................................................................................... 17

3.4.3. Preparasi Kultur Fungi Ganoderma, sp ............................................... 18

3.4.4. Fermentasi Cair Substrat Kayu Jati Putih (Gmelina arborea Roxb.) ................................................................. 18

3.4.5. Penentuan Viabilitas Fungi ................................................................. 19

3.4.6. Evaluasi Hari Ke 0, 4, 8, dan 12 ............................................... 20

3.4.6.1. Pengukuran pH ........................................................... 20

3.4.6.2. Pengujia komponen lignoselulosa .............................. 20

3.4.6.3. Bobot Massa ............................................................... 22

3.4.7. Analisis Data ............................................................................ 22

3.4.8. Jadwal Penelitian ..................................................................... 23

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 24

viii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Perlakuan Pengaruh Radiasi Sinar Gamma Pada Jamur Pelapuk

Putih ........................................................................................... 18

Tabel 2. Jadwal Penelitian ......................................................................... 22

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Satuan Penyusun Lignin .......................................................... 6

Gambar 2. Fungi Ganoderma, sp ............................................................. 10

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Indonesia saat ini masih banyak memiliki limbah pertanian, seperti kayu,

dan serbuk geragaji. Limbah pertanian yang mengandung banyak bahan

lignoselulosa yang sulit didegradasi. Kesulitan yang dihadapi dalam proses

degradasi lignoselulosa adalah susunan yang heterogen dari polisakarida yang

terdapat pada dinding sel. Selulosa merupakan polimer linier dari D-glukosa yang

terikat pada ikatan 1,4 glikosidik dan sangat erat berasosiasi dengan hemiselulosa

dan lignin.

Lignoselulosa adalah makromolekul kompleks yang terdiri dari lignin,

selulosa dan hemiselulosa. Lignin adalah polimer yang sangat tidak teratur dan

tidak larut, memiliki ikatan kovalen dengan hemiselulosa dan lignin. Kabohidrat

kompleks yang membungkus selulosa di dinding sel tumbuhan (Perez et al., 2002).

Enzim pendegradasi lignoselulosa adalah selulase yang banyak digunakan dalam

berbagai industri seperti industri makanan, farmasi, tekstil, detergen, dan

sebagainya (Trisanti, 2009). Enzim dapat diproduksi oleh kelompok bakteri,

kapang maupun khamir.

Jamur adalah eukariotik berfilamen tanpa klorofil yang melakukan

pencernaan berbagai senyawa karbon secara eksternal. Sumber karbon dapat

diperoleh dari dalam kayu, yang terdiri atas matrik yang kompleks yaitu selulosa,

2

lignin, dan hemiselulosa, sehingga diperlukan perlakuan kimia untuk mendapatkan

degradasi enzimatik selulosa kayu yang efektif (Yoshimura, 1995)

Jamur lebih dapat mendegradasi lignin dari pada mikroba atau bakteri

karena mampu mensintesis enzim ligninase. Ada tiga enzim ligninase dari jamur

yaitu lignin peroxidase (LiP), mangan peroxidase (MnP), dan laccase (Singh,

2006). White rot fungi merupakan mikroorganisme yang paling aktif dalam

pendegradasian lignin, yang menghasilkan CO2 dan H2O dalam mendegradasi

lignin (Hattaka, 1995). Dibandingkan jamur yang lainnya, jamur pelapuk putih

mempunyai jenis yang paling aktif mendegradasi lignin. Jamur pelapuk putih

memerlukan sumber karbon sebagai energi tanaman atau nutrisinya agar kandungan

polisakarida dalam kayu tidak didegradasi (Howard et al., 2003)

Jamur yang sering digunakan adalah jenis ganoderma, sp karena jika tidak

diberikan perlakuan dalam jangka waktu lama akan bersifat patogen bagi tanaman

tersebut jadi diberikan variasi dosis agar ganoderma, sp tersebut tidak bersifat

patogen (Hattaka, 1995)

Iradiasi sinar gamma dosis rendah mampu meningkatkan aktivitas enzim

oxamyl peptisida pada jamur Trichoderma, spp. Dosis rendah pada radiasi pengion

dalam mikroorganisme bertanggungjawab dari dipercepatnya aktivitas enzim.

Trichoderma, spp mampu meningkatkan 0.5 KGy dan pada hasil akhir persentase

yang menunjukan aktivitas enzim paling tinggi berada di dosis 250 Gy iradiasi sinar

gamma (Afify et al., 2013)

Pada penelitian terdahulu telah dilakukan isolat kapang tanah dalam

mendegradasi lignin. Pada hasil akhirnya isolat kapang yang mampu mendegradasi

3

lignin ada 4 yaitu Gliomastix, sp, Myselia sterilia, Penicillium, sp, dan Mortiriella

dari 18 genus yang diteliti. Tetapi, yang paling optimum untuk mendegradasi lignin

adalah isolat kapang Gliomastix, sp dari hasil uji skrining degradasi lignin dan uji

degradasi lignin menggunakan media cair.(Yuni et al., 2010). Pada penelitian lain

telah dilakukan degradasi lignin batang jagung dengan jamur pelapuk putih

Phanerochaete chrysosporium. Jamur Phanerochaete chrysosporium dapat

mendegradasi lignin pada batang jagung dengan hasil yang baik pada waktu

inkubasi 30 hari. Pada waktu inkubasi tersebut selain mampu mendegradasi lignin

jamur Phanerochaete chrysosporium juga dapat degradasi enzim selulase walaupun

dalam relative rendah (Fadilah et al., 2008).

Penelitian ini akan menggunakan iradiasi sinar gamma dosis rendah untuk

mendegradasi lignin pada Ganoderma, sp. Dosis iradiasi sinar gamma yang

digunakan adalah 0 Gy; 200 Gy; 400 Gy; 600 Gy; 800 Gy; 1000 Gy. Dosis inokulan

yang digunakan 0,1 mL, 1 mL, 10 mL.

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan masalah dari penelitian ini adalah:

1. Apakah radiasi sinar gamma dosis rendah berpengaruh pada kemampuan

jamur Ganoderma, sp dalam mendegradasi lignin?

2. Apakah dosis inokulan berpengaruh pada kemampuan Ganoderma, sp

dalam mendegradasi lignin?

4

1.3 Hipotesis

Hipotesis dari penelitian ini adalah:

1. Radiasi sinar gamma dosis rendah akan berpengaruh pada kemampuan

jamur Ganoderma, sp dalam mendegradasi lignin.

2. Dosis inokulan berpengaruh pada kemampuan Ganoderma, sp dalam

mendegradasi lignin?

1.4 Tujuan

1. Mengetahui dosis optimum dari radiasi sinar gamma dalam mendegradasi

lignin pada Ganoderma, sp.

2. Mengetahui masing-masing dosis inokulan pada Ganoderma, sp dalam

mendegradasi lignin.

1.5 Manfaat

Hasil penelitian diharapkan dapat memberikan informasi tambahan

mengenai kemampuan fungi atau kapang jenis Ganoderma, sp yang sudah di

stimulasi dengan iradiasi sinar gamma dosis rendah. Selain itu dapat menjadi solusi

alternatif untuk mengurangi jumlah limbah lignoselulosa.

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Lignin

Secara morfologi lignin merupakan senyawa amorf yang terdapat dalam

lamela tengah majemuk maupun dalam dinding sekunder. Selama perkembangan

sel, lignin dimasukkan sebagai komponen terakhir di dalam dinding sel, menembus

di antara fibril-fibril sehingga memperkuat dinding sel (Fengel dan Wegener,

1995). Lignin terbentuk melalui polimerasi tiga dimensi turunan dari sinamil

alkohol terutama ρ-kumaril, koniferil dan sinapil alkohol dengan bobot molekul

mencapai 11.000. Lignin yang melindungi selulosa bersifat tahan terhadap

hidrolisis karena adanya ikatan arilalkil dan ikatan eter (Perez et al., 2002).

Lignin adalah bagian utama dari dinding sel tanaman yang merupakan

polimer terbanyak setelah selulosa. Lignin yang merupakan polimer aromatik

berasosiasi dengan polisakarida pada dinding sel sekunder tanaman dan terdapat

sekitar 20-40% . Komponen lignin pada sel tanaman (monomer guasil dan siringil)

berpengaruh terhadap pelepasan dan hidrolisis polisakarida.

Lignin dapat dibagi menjadi beberapa kelas menurut unsur-unsur

strukturnya. Satuan penyusun lignin dapat dilihat pada Gambar 1.

6

Gambar 1. Satuan penyusun lignin (Eaton dan Hale, 1993)

Lignin bersifat tahan terhadap degradasi oleh sebagian besar mikroba.

Lignin sulit didegradasi karena strukturnya yang kompleks dan heterogen yang

berikatan dengan selulosa dan hemiselulosa dalam jaringan tanaman. Lebih dari 30

persen tanaman tersusun atas lignin yang memberikan bentuk yang kokoh dan

memberikan proteksi terhadap serangga dan patogen (Orth et al., 1993). Meski

demikian, fungi tertentu mampu menguraikan lignin secara selektif.

2.2. Selulosa

Selulosa hampir tidak pernah ditemui dalam keadaan murni di alam,

melainkan selalu berikatan dengan bahan lain yaitu lignin dan hemiselulosa. Serat

selulosa alami terdapat di dalam dinding sel tanaman dan material vegetatif lainnya.

Selulosa mengandung komponen C sebesar 44.4%, komponen H sebesar 6.2%, dan

komponen O sebesar 49.3%. Rumus empiris selulosa adalah (C6H10O5)n, dengan

banyaknya satuan glukosa yang disebut dengan derajat polimerisasi (DP), yang

jumlahnya mencapai 1.200-10.000 dan panjang molekul sekurang-sekurangnya

5.000 nm (Sjostrom, 1995). Bobot molekul selulosa rata-rata sekitar 400.000.

7

Mikrofibril selulosa terdiri atas bagian amorf (15%) dan bagian berkristal

(85%). Struktur berkristal dan adanya lignin serta hemiselulosa di sekeliling

selulosa merupakan hambatan utama untuk menghidrolisis selulosa.

Berdasarkan pemisahan menggunakan alkali (NaOH), selulosa dibagi

menjadi tiga jenis yaitu α-selulosa, β-selulosa dan γ-selulosa. α- selulosa dalam

keadaan basa ada dalam keadaan tidak larut, β-selulosa ada dalam bagian terlarut

melalui katalis oleh asam, dan γ-selulosa adalah bagian yang dapat larut tanpa perlu

katalis (Fengel dan Wegener, 1995).

Degradasi selulosa merupakan proses pemecahan polimer anhidroglukosa

menjadi molekul-molekul yang lebih sederhana. Proses tersebut akan menghasilkan

oligosakarida, disakarida atau trisakarida seperti selobiosa, glukosa monomer atau

produk degradasinya. Produk utama degradasi selulosa adalah glukosa dan

selobiosa (Judoamidjojo et al., 1989). Hasil degradasi tersebut selanjutnya

dimanfaatkan sebagai bahan pembuat produk yang lebih bernilai ekonomis seperti

asam amino dan asam karboksilat.

2.3. Hemiselulosa

Hemiselulosa merupakan kelompok polisakarida heterogen dengan berat

molekul rendah. Jumlah hemiselulosa biasanya antara 15 dan 30 % dari berat kering

bahan lignoselulosa (Taherzadeh, 1999). Hemiselulosa relatif lebih mudah

dihidrolisis dengan asam menjadi monomer yang mengandung glukosa, mannose,

galaktosa, xilosa dan arabinose. Hemiselulosa mengingkat lembaran serat selulosa

membentuk mikrofibril yang meningkatkan stabilitas dinding sel. Hemiselulosa

8

juga berikatan silang dengan lignin membentuk jaringan kompleks dan memberikan

sktruktur yang kuat.

2.4. Enzim Pendegradasi Lignin

Enzim pendegradasi lignin (lignolitik) terdiri dari lakase (polifenol

oksidase), lignin peroksidase (Li-P) dan mangan peroksidase (Mn-P). Ketiganya

merupakan multi enzim ekstraseluler yang berperan dalam proses depolimerisasi

lignin. Ketiga enzim tersebut dapat dihasilkan oleh jamur pelapuk putih Omphalina

sp dan Pleurotus ostreatus (Widyastuti, et al.., 2007). Lakase, selain berperan

dalam proses bioremediasi, juga bermanfaat dalam industri kertas (biopulping dan

biobleaching). Produksi lakase dari Omphalina sp. cukup potensial digunakan

untuk mendelignifikasi material lignoselulosa dari tandan kosong kelapa sawit

(Siswanto et al., 2007).

Selain itu Lentinus squarrosulus dan Psathyrella atroumbonata juga

diketahui dapat mendegradasi lignin (Wuyep, et al., 2003). Lobos, et al., (2001)

melaporkan bahwa Ceriporiopsis subvermispora juga mempunyai kemampuan

kuat dalam mendegradasi lignin. Selain dengan cara enzimatis, proses degradasi

lignin dapat dilakukan secara kimia yaitu dengan me-nambahkan asam (asam sulfat,

asam perklorat dan asam khlorida).

9

2.5. Ganoderma, sp

Taksonomi Fungi ganoderma, sp (Ratnaningtyas NI, 2009) adalah sebagai

berikut:

Kingdom : Fungi

Filum : Basidiomycota

Kelas : Agaricomycetes

Ordo : Polyporales

Famili : Ganodermataceae

Genus : Ganoderma

Spesies : Ganoderma

Ganoderma sp. merupakan jamur patogen (penyebab penyakit) akar merah

yang menyebabkan kerusakan tanaman perkebunan dan kehutanan. Karena sifatnya

yang memiliki kisaran inang yang luas, tidak mengherankan kalau Ganoderma sp.

menyerang berbagai jenis tanaman kehutanan dan perkebunan, misalnya beberapa

spesies akasia (Acacia mangium, A. auriculiformis, A. oraria), sengon

(Paraserianthes falcataria), flamboyan (Delonix regia), cemara (Casuarina

equisetifolia), angsana (Pterocarpus indicus), dan kelapa sawit (Widyastuti, 2007).

Ganoderma adalah fungi poliporus yang banyak dijumpai tumbuh di dalam

vegetasi berkayu, yaitu pada tonggak-tonggak berbagai jenis kayu dan sebagian

pada batang-batang kayu pohon hidup. Fungi ini dideskripsikan pertama kali oleh

Karsten (1881). Turner (1981) melaporkan bahwa paling sedikit terdapat 15 species

Ganoderma di berbagai tempat di dunia,yang menyebabkan penyakit busuk pangkal

batang. Sampai saat ini telah ditemukan lebih dari 250 jenis dan marga Ganoderma

di seluruh dunia. Jumlah tersebut masih ada yang tumpang tindih (hanya

sinonimnya), sehingga jumlah sebenarnya kurang dari 250 (Susanto, 1998).

10

Tubuh buah fungi mula-mula tampak sebagai suatu bongkol kecil berwarna

putih, kemudian berkembang menjadi berbentuk kipas tebal dengan bentuk yang

sangat bervariasi. Bagian bawah tubuh berpori dan kadang-kadang tubuh buah

seperti mempunyai tangkai. Seringkali banyak tubuh buah terbentuk berdekatan,

saling menutupi atau sa1ing bersambungan. sehingga menjadi suatu susunan yang

besar (Sumardi dan Widiastuti, 2001).

Disamping hidup sebagai parasit, Ganoderma sp. mampu hidup sebagai

saprofit dengan memanfaatkan sisa-sisa tanaman, seperti sisa-sisa akar dalam tanah,

ranting-ranting, dan batang pohon di hutan (Semangun, 2000).

Gambar 2. Fungi Ganoderma, sp (Sumber: Ratnaningtyas NI, 2009)

2.6. Iradiasi Sinar Gamma Co-60

Radiasi adalah pancaran energi melalui suatu materi atau ruang dalam

bentuk panas, partikel, atau gelombang elektromagnetik (foton) dari suatu sumber

energi. Radiasi dengan tingkat energi yang terukur atau diketahui dosisnya disebut

iradiasi. Iradiasi dengan energi yang tinggi dapat mengadakan reaksi dengan obyek

yang dikenainya melalui ionisasi, yaitu dihasilkannya ion-ion dalam bahan yang

11

ditembus oleh energi tersebut (Badan Tenaga Nuklir Nasional, 2009). Pada dosis

tinggi, radiasi dapat menginduksi terjadinya mutasi karena sel yang teradiasi akan

dibebani oleh tenaga kinetik yang tinggi, sehingga dapat mempengaruhi atau

mengubah reaksi kimia sel yang pada akhirnya dapat menyebabkan terjadinya

perubahan susunan kromosom (Poespodarsono, 1988).

Pengaruh radiasi terhadap spesimen biologis bergantung pada total energi

yang diabsorpsi dan jenis radiasi pengion. Jumlah unit energi yang diserap per

satuan massa akibat radiasi dinyatakan dalam rad (radiation absorbtion dose) atau

Grey / Gy (Bueche dan Wallach, 1994).

Sinar gamma dosis rendah merupakan iradiasi sinar gamma dengan dosis

kurang dari 1000 Gy (BPOM, 1986). Penggunaan iradiasi sinar gamma pada kultur

in vitro umumnya dilakukan pada dosis rendah (Al-Safadi et al., 2000; La Vina et

al., 2001). Penggunaan iradiasi sinar gamma dengan dosis rendah dapat

menstimulasi pertumbuhan tanaman secara in vitro (Al-Safadi et al., 2000). Selain

itu juga dapat menginduksi perubahan fisiologi dan biokimia tanaman (Berezina

dan Kaushanskii, 1989). Iradiasi sinar gamma sebaiknya dilakukan pada sel-sel

yang masih aktif membelah seperti kalus karena sel-sel tersebut bersifat sensitif

terhadap iradiasi sinar gamma.

Pada umumnya sinar gamma yang digunakan untuk radiasi adalah hasil

peluruhan inti atom Co-60. Co-60 adalah sejenis metal yang mempunyai

karakteristik hamper sama dengan besi atau nikel (Sinaga 2000). Sinar gamma

memiliki energy yang tinggi sehingga daya penetralannya ke dalam sel lebih besar.

Sinar gamma efektif untuk menembus dinding sel yang dimiliki fungi.

12

Dosis iradiasi yaitu jumlah energi radiasi yang diserap kedalam bahan.

Penggunaan dosis radiasi bergantung pada beberapa hal, yaitu: populasi

mikroorganisme, daya tahan mikroorganisme, lingkungan saat radiasi, waktu

iradiasi dan tujuan dari iradiasi (Suwadji 1980). Menurut Lydia et al., 1994, mutasi

akibat radiasi dapat menstimulasi fungi untuk meningkatkan enzim. Hal tersebut

menjadi dasar perlunya dilakukan proses iradiasi untuk membantu produktivitas

enzim.

2.7. Parameter Proses Degradasi Lignin

2.7.1. pH

Derajat keasaman (pH) mempengaruhi proses degradasi lignin oleh jamur

dan kerja enzim. Pada pH optimum, jamur akan tumbuh dengan baik sehingga

enzim yang dihasilkan optimal, sehingga proses degradasi lignin berlangsung

dengan baik (Ali dan Muhammad, 2008). Tetapi, dengan adanya aktivitas degradasi

lignin itu dapat menyebabkan terjadinya perubahan pH dalam lingkungan medium

(Widyastuti, 2007). Dan disisi lain perubahan pH sangat mempengaruhi kerja

enzim ligninase.

Disamping itu, pengukuran pH juga sesuai untuk pertumbuhan jamur. Di

laboratorium umumnya jamur akan tumbuh pada kisaran pH yang cukup luas yaitu

antara 4,5-8,0 dengan pH optimum antara 5,5-7,5 atau bergantung pada jenis

jamurnya. Pengaruh pH terhadap pertumbuhan jamur juga tidak dapat dinyatakan

secara umum karena bergantung pada beberapa faktor, seperti ketersediaan ion

logam tertentu, permeabilitas membran sel yang berhubungan dengan permukaan

ion, produksi CO2, NH3 dan asam organik (Lim, 1998). Media pH berpengaruh juga

13

terhadap pertumbuhan dan produksi enzim. Pada umumnya jamur tumbuh dan

menghasilkan berbagai macam enzim pada kisaran pH asam. (Widyastuti, 2007)

2.7.2. Bobot Massa

Persentase miselium rendah dan tingginya disebabkan beberapa hal antara

lain karakter sampel, kadar air, pH, suhu, kontaminasi dan serangan hama. Masa

pertumbuhan miselium jamur membutuhkan kelembaban udara 60-75% dan

miselium jamur tumbuh optimal pada media tumbuh yang memiliki kandungan

(kadar) air sekitar 65% (Maryati, 2009). Suhu optimum untuk jamur adalah 28oC,

sedangkan untuk pertumbuhan badan buah jamur suhu optimum 22-25oC

(Gunawan, 1997).

Jika kadar air dalam media >78%, maka substrat menjadi anaerobik dan

miselium jamur tidak dapat tumbuh dan berkembang, akhirnya miselium mati dan

tubuh buah jamur tidak dihasilkan (Sohi dan Upadhyay, 1989). Kisaran pH

optimum untuk jamur adalah 4,5-7,5 sedangkan untuk pertumbuhan badan buah

jamur pH optimum 5,5. Nilai pH optimum tersebut mendekati nilai pH pada control

sehingga mendukung pertumbuhan miselium dengan baik (Gunawan, 1997).

2.7.3. Aktivitas Enzim

Lignin Peroksidase (LiP) merupakan enzim peroksidase ekstraseluler yang

aktivitasnya bergantung pada H2O2. Veratil alkohol merupakan produk metabolit

sekunder, substrat untuk LiP dan menstimulasi kerjanya tetapi kemungkinan bukan

sebagai mediator elektron akan tetapi dengan mendonasikan elektron ke LiP.

Sehingga akan membuat siklus katalitiknya menjadi lengkap (Akhtar et al., 1997).

Sumber karbon mempengaruhi aktivitas LiP. Aktivitas enzim ini sangat

tinggi jika jamur ditumbuhkan pada Indulin AT dan berbeda nyata dengan aktivitas

14

enzim jamur-jamur yang ditumbuhkan pada media dengan sumber karbon lainnya.

Sumber karbon ini kurang berpengaruh terhadap produksi enzim ligninolitik.

Hanya Indulin AT yang dapat dipergunakan sebagai media penginduksi enzim

ligninolitik (Typuk, 2006)

2.7.4. Degradasi Lignin

Uji degradasi lignin di medium cair merupakan salah satu konfirmasi dari

uji skrining degradasi lignin pada medium padat. Uji degradasi lignin diukur

berdasarkan nilai absorbansi pada panjang gelombang 232 nm (Agustina, 2007).

Besarnya persen penurunan nilai lignin menyatakan seberapa besar kemampuan

enzim dalam menguraikan lignin. (Subowo, 2010)

Proses degradasi lignin secara kimia dapat terjadi menggunakan proses

pemanasan uap dengan reagen feton. Feton terdiri dari hydrogen peroksida dan

ferro sulfat yang mampu mendegradasi lignin. (Bentivenga, 2003)

2.8. Spektrofotometer UV-Vis

Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang

digunakan untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan

kualitatif yang didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya. Peralatan

yang digunakan dalam spektrofotometri disebut spektrofotometer. Cahaya yang

dimaksud dapat berupa cahaya visibel, UV dan inframerah, sedangkan materi dapat

berupa atom dan molekul namun yang lebih berperan adalah elektron valensi

(Khopkar, 2003).

15

Spektroskopi UV-Vis telah menjadi salah satu teknik spektroskopi absorpsi

yang banyak dimanfaatkan karena relatif sederhana dan praktis digunakan dalam

berbagai jenis analisis, misalnya senyawa organik, anorganik, maupun dalam

bidang mikrobiologi (Day et al, 2002). Spektrokopi ini hanya terjadi bila terjadi

perpindahan dari tingkat energi yang rendah ketingkat energi yang lebih tinggi.

Perpindahan elektron tidak diikuti oleh perubahan arah spin, hal ini dikenal dengan

sebutan tereksitasi singlet, sehingga dapat didefinisikan bahwa spektroskopi UV-

Vis adalah interaksi radiasi elektromagnet dengan molekul akan menyebabkan

terjadinya interaksi elektron (Khopkar ,2003).

Prinsip dasar pada spektrofotometer UV-Vis didasarkan pada pengukuran

jumlah cahaya yang diabsorbsi atau ditransmisikan oleh molekul-molekul dalam

larutan. Ketika panjang gelombang cahaya ditransmisikan melalui larutan, sebagian

energi cahaya tersebut akan diserap (diabsorbsi). Besarnya energi tersebut dapat

mendorong elektron dari orbital ikatan ke orbital non ikatan. Energi yang masuk

akan diabsorbsi pada lamdaa yang spesifik (Mulja ,1995).

Absorbansi dari larutan sampel yang diukur oleh spektrofotometer UV-Vis

digunakan untuk mengukur intensitas sinar yang dilalui menuju sampel (1) dan

membandingkannya dengan intensitas sinar sebelum dilewatkan ke sampel tersebut

(10). Rasio 1/10 disebut transmitan (T), sedangkan absorbans diperoleh dari

transmitan tersebut dengan rumus A = -log T, sesuai dengan hukum dasarnya yaitu

hukum Lambert-Beer. Hukum Lambert-Beer ini juga memiliki kelemahan, yaitu

kenaikan konsentrasi menjadi 2x konsentrasi tidak mengubah nilai serapan menjadi

2x serapan mula-mula. Ketidaklineran hubungan antara serapan dengan konsentrasi

tersebut dinamakan penyimpangan dari hukum Lambert-Beer (Harvey, 2000).

16

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilakukan pada bulan Februari 2015 sampai April 2015 di

Laboratorium Lingkungan, Pusat Aplikasi Isotop dan Radiasi, Badan Tenaga Nuklir

Nasional (PAIR-BATAN), Pasar Jumat, Jakarta Selatan.

3.2. Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan antara lain: autoclave, oven, laminar air flow, timbangan

digital, inkubator, rotary shaker, kertas saring Whatmann no.1, spektrofotometer tipe

20 D, magnetic stirrer, ose, hand sprayer, Bunsen, petri disk, sumber isotop Cobalt-

60 dalam chamber IRPASENA 4000A, dan peralatan gelas lainnya.

3.2.2 Bahan

Bahan utama yang digunakan pada penelitian ini adalah kultur Ganoderma sp.

hasil biakan Laboratorium Biologi Universitas Nusa Bangsa (UNB)-Bogor, LA

(Lignin Agar), L (Lignin),, Potato Dextrose Agar (PDA), KH2PO4, MgSO4. 7H2O,

CaCl2. 2H2O, FeSO4. 7H2O, MnSO4, Yeast ekstrak, alkohol 70%, veratril alcohol 8

17

mM, H2O2 5 mM, buffer asetat 0,05 M pH 3, aquades, aluminium foil, kapas dan kertas

label.

3.3. Rancangan Penelitian

Penelitian dilakukan menggunakan metoda Rancangan Acak Lengkap (RAL)

faktorial dengan 2 faktor dan 4 ulangan, faktor pertama yaitu dosis iradiasi meliputi :

0, 200, 400, 600, 800 dan 1000 Gy. Faktor kedua yaitu jenis dosis inokulan : 0,1 mL,

1 mL, 10 mL.

3.4. Cara Kerja

3.4.1. Preparasi Serbuk Kayu Jati Putih (Gmelina arberoa Roxb.)

Kayu jati putih (Gmelina arberoa Roxb.) dikeringkan dan dicacah dengan

chopper mekanis, kemudian dihaluskan dengan cutting mill dan diayak sehingga

diperoleh substrat serbuk kayu jati putih dengan ukuran partikel < 2 mm. Pada

penelitian ini dilakukan perlakuan pendahuluan dengan NaOH. Pada perlakuan

pendahuluan alkali, ke dalam substrat ditambahkan larutan NaOH 1% dengan

perbandingan 1:10. Masing-masing campuran bahan tersebut diaduk secara merata dan

dibiarkan selama 1-2 jam kemudian dilakukan pencucian sebanyak 2-3 kali dengan air

mengalir dan dikeringkan dalam oven pada 40ºC sampai diperoleh berat yang konstan.

3.4.2 Iradiasi Fungi

18

Perkembangbiakan Ganoderma sp yang berumur 3-7 hari tersebut kemudian

diiradiasi sinar Gamma isotop Cobalt-60 dalam chamber IRPASENA 4000A dengan

laju dosis 2,1 kGy/jam. Dosis iradiasi yang digunakan adalah 0 Gy (kontrol, tanpa

iradiasi); 200 Gy; 400 Gy; 600 Gy; 800 Gy dan 1000 Gy. (Afify et al., 2013)

3.4.3. Preparasi Kultur Fungi Ganoderma, sp

Strain fungi Ganoderma, sp diperoleh dari koleksi kultur terseleksi yang

dipelihara dalam slent dengan media PDA pada 4ºC di Laboratorium Biologi

Universitas Nusa Bangsa (UNB)-Bogor. Kultur fungi ini dikultivasi dalam media

Potatoes Dextrose Broth (PDB) dengan shaker mekanis pada 150 rpm dan suhu ruang

sekitar 28-32ºC selama 4 hari, kemudian disebarkan pada permukaan media Potatoes

Dextrose Agar (PDA) di dalam cawan petri dan diinkubasi pada 32ºC selama 4 hari.

Setelah kultur fungi tumbuh secara merata pada permukaan PDA dalam cawan petri

kemudian dipindah tanam ke permukaan media PDA di dalam tabung slent dan

diinkubasi pada 32ºC selama 7 hari sebelum perlakuan iradiasi gamma.

3.4.4. Fermentasi Cair Substrat Kayu Jati Putih (Gmelina arberoa Roxb.)

Sebanyak 2 g (berat kering) substrat kayu jati putih dimasukkan ke dalam botol

yang berukuran 250 ml kemudian ditambahkan 100 ml larutan nutrisi dan garam

mineral. Setiap liter larutan nutrisi dan garam mineral mengandung 24g PDB, 5g yeast

ekstrak, 1g (NH4)2SO4, 0,5g KH2PO4, 0,5g K2HPO4 dan 0,2g MgSO4.7H2O. Semua

medium SmF disterilkan dengan autoclave pada 121ºC selama 2x15 menit kemudian

19

didinginkan. Ke dalam 30 ml medium SmF steril diinokulasi masing-masing dosis

sesuai dengan rancangan penelitian kultur cair fungi Ganoderma, sp dengan kerapatan

masing-masing sekitar 106 spora/ml, kemudian diinkubasi dalam shaker mekanis pada

75 rpm dan suhu ruang 28-32ºC selama 12 hari.

3.4.5. Penentuan Viabilitas Fungi (Nakagiri, 2005)

Dimasukkan 0,9 mL NaCl 0,85 % ke dalam mikrotube dan dilakukan

pengenceran dari 10-2 dan seterusnya. Selanjutnya pada pengenceran yang dikehendaki

diambil sebanyak 0,1 mL kedalam media PDA dan diinkubasi pada suhu 37oC selama

2-3 hari. Perhitungan total fungi dilakukan dengan metode Total Plate Count (TPC).

Tabel 1. Perlakuan Pengaruh Radiasi Sinar Gamma pada Jamur Pelapuk Putih

F1 Ganoderma, sp

F2 0.1 mL 1 mL 10 mL

0 Gy GnA0 GnB0 GnC0

200 Gy GnA200 GnB200 GnC200

400 Gy GnA400 GnB400 GnC400

600Gy GnA600 GnB600 GnC600

800Gy GnA800 GnB800 GnC800

1000 Gy GnA1000 GnB1000 GnC1000

Keterangan : F1 = faktor pertama, variasi dosis radiasi sinar gamma

( 0- 1000 Gy)

20

F2 = factor kedua, dosis inokulan (0.1; 1; 10 mL)

Gn = Ganoderma sp

A = Dosis inokulan 0.1

B = Dosis inokulan 1

C = Dosis inokulan 10

3.4.6. Evaluasi Hari Ke-0, 4, 8, dan 12

3.4.6.1. pH

Pengukuran pH dilakukan dengan cara sampel ditimbang sebanyak 2-3 gram

dan ditambahkan akuades sebanyak 10-15 mL. Selanjutnya dihomogenkan

menggunakan shaker mekanis selama 15 menit dan diukur dengan menggunakan pH

meter.

3.4.6.2. Kandungan Lignoselulosa metode Chesson-Datta(Isroi, 2013)

1 gram sampel direflux selama 2 jam dengan 150 mL H2O pada suhu 100O C

dan ditimbang (a). Kemudian, residu sampel yang telah dikeringkan direflux selama 2

jam dengan 150 mL0.5 M H2SO4 pada suhu 100O C dan ditimbang (b) dapat diketahui

kadar Hemiselulosa.

Kadar Selulosa, residu sampel yangtelah dikeringkan diperlakukan dengan

menambahkan 10 mL 72 % (v/v) H2SO4 pada suhu kamar selama 4 jam, kemudian

diencerkan menjadi 0.5 M H2SO4 dan direflux pada suhu 100O C selama 2 jam dan

ditimbang (c).

21

Kadar Lignin, residu sampel yang telah dikeringkan kemudian diabukan

dengan furnace pada suhu 25O C hingga beratnya constant dan ditimbang (d).

kemudian, menentukan kadar abunya (e).

Perhitungan kandungan lignoselulosa:

𝑏−𝑐

𝑎𝑋 100%Hemiselulosa (%) =

Selulosa (%) = 𝑐−𝑑

𝑎𝑋 100%

Lignin (%) = 𝑑−𝑒

𝑎𝑋 100%

Abu (%) = 𝑒

𝑎𝑋 100%

22

3.4.6.1. Bobot Massa

Berat massa sel dianalisis dengan metode gravimetri. Panen miselia dilakukan

dengan cara penyaringan menggunakan kertas saring Whatman no.1 yang sudah

diketahui beratnya. Kemudian, ditimbang kembali kertasnya hingga hasilnya constant.

3.4.7. Analisa Data

Data hasil penelitian ini dianalisis menggunakan analysis of variance

(ANOVA) pada SPSS versi 20.0 dengan batas kepercayaan sebesar 95% (α = 0,05) dan

uji lanjut Duncan. Pengujian hipotesis didasarkan pada ketetapan H0 dan H1.

H0= Ganoderma, sp yang diberikan dosis inokulan paling optimum dapat

mendegradasi lignin.

H1= Ganoderma, sp yang tidak diberikan dosis inokulan dapat mendegradasi lignin.

Penarikan kesimpulan berdasarkan nilai signifikansi, yaitu :

Jika p < 0,05 maka H0 ditolak dan H1 diterima

Jika p > 0,05 maka H0 diterima dan H1 ditolak

23

3.4.8. Jadwal Penelitian

Penelitian mengenai peningkatan kemampuan Ganoderma, sp melalui iradiasi

gamma dalam degradasi lignin akan dilakukan dengan rancangan kegiatan sebagai

berikut:

Tabel 2. Jadwal Penelitian

Kegiatan

Bulan

Jan Feb Mar Apr Mei Juni Juli

Pembuatan proposal

Seminar proposal

Pengumpulan data

Pengolahan data

Penyusunan skripsi

Seminar hasil

Sidang

Pendaftaran wisuda

24

DAFTAR PUSTAKA

Afify Abd El-Moneim MR, Mohamed A Abo-El-Seoud, Ghada M Ibrahim and

Bassam W Kassem. 2013. Stimulating of Biodegradation of Oxamyl

Pesticide by Low Dose Gamma Irradiated Fungi. J Plant Pathol Microb,

Vol.4 (9)

Al-Safadi B., Ayyoubi Z., and Jawdat D. 2000. The Effect of Gamma Irradiation

on Potato Microtuber Production In Vitro. Plant Cell, Tissue and Organ

Culture, 61: 183-187.

Akhtar M., R.A. Blanchette and T.K. Kirk. 1997. Fungal Delignification and

Biomechanical Pulping of wood. Advances in Biochemical Engineering

Biotechnology, 57:159-195

Agustina, I. 2007. Studi Pendahuluan Enzim Lignolitik Jamur Tremetes versicolor.

Tugas Akhir. Kimia FMIPA ITS: Surabaya.

Bentivenga, G., Bonini, C., D’Auria, M., and Bona, A. D. 2003. Degradation of

Steam-exploded Lignin from Beech by Using Fenton’s Reagen. Biomass

and Bioenergy. 24: 233-238.

Berezina N.M., and D.A. Kaushanskii. 1989. Pre-sowing Irradiation of Plant

Seeds. Oxonian Press PVT. Ltd., New Delhi.

Badan Tenaga Nuklir Nasional. 2009.

Dashtban, M., Schraft, H., Qin, W. 2009. Fungal Bioconversion Of Lignocellulosic

Residue; Opportunities dan Perpectives. Int. J. Biol Sci. 578-595

Datta, Subodh K, Debasis Chakrabarty, Arvind Kumar V, Biresh Kumar B. 2011.

Gamma Ray Chromosomal Aberration and Enzyme Related Defense

Mechanism in Allium Cepa L. Caryologia, Vol. 64 (4): 388-397

Day, R. A. dan A. L. Underwood. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi Keenam.

Jakarta : Erlangga

Eaton, R. A. dan M.D.C. Hale, 1993. Wood: Decay, pest and protection. Chapman

and Hall, Cambridge. Pp.313-314.

25

Fadilah, Sperisa D, Enny Kris. A, Arif, J. 2008. Biodelignifikasi Batang Jagung

Dengan Jamur Pelapuk Putih Phanerochaete crysosporium. Ekuilibrium,

Vol. 7 (1): 7-11

Fengel, D., G. Wegener. 1995. Kayu : Kimia, Ultrastruktur, Reaksi-reaksi.

Diterjemahkan oleh Hardjono Sastrohamidjoyo. Cetakan I, Gajah Mada

University Press, Yogyakarta. Hal. 124-154.

Harvey D. 2000. Modern Analytical Chemistry. McGraw-Hill. New York

Hattaka, A. 1995. Modifying Enzymes from Selected White-Rot Fungi: Production

and Role in Lignin Degradation. Microbiology. 13: 125- 135.

Hawksworth, D.L. 1991. The Fungal Dimension Biodiversity. Mycological

Research: 95 (6) . 641-645

Howard, R.L., Abotsi, E., J. van Rensburg E.L., and Howard, S. 2003.

Lignocellulose Biotechnology: Issue of Bioconversion and Enzyme

Production. African J. of Biotech. Vol 2(12), 602-619.

Johjima, T., Itoh, N., Kabuto, M., Tokimura, F., Nakagawa, T., Wariishi, H., and

Tanaka, H., 1999, Diretct Interaction of Lignin and Lignin Peroxidase from

Phanerochaete chrysosporium, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 1989-1994

Karsten P. 1881. Enumeratio Boletinearum et Polyporearum Fennicarum,

Systemate novo dispositarum. Rev. Mycol. (Toulouse) 3: 16-19

Khopkar, S. M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press

Kirk T.K. and R.L. Farrell. 1987. Enzymatic “combustion”: the microbial

degradation of lignin. Ann. Rev. Microbiol. 41:465-505

Kodri, Bambang Dwi A, Rini Y. 2013. Pemanfaatan Enzim Selulase dari

Trichoderma Reseei dan Aspergillus Niger sebagai Katalisator Hidrolisis

Enzimatik Jerami Padi dengan Pretreatment Microwave. Jurnal Bioproses

Komoditas Tropis. Vol. 1 (1): 36-43

Lim, D. 1998. Microbiology. McGraw Hill Publishing Company. New York.

Lydia A, Sjarief SH, Sutarmi A, dan Sudrajad D, 1994. Pengaruh Kapang Iradiasi

untuk Produksi Glukosa dari Tepung sagu. Majalah BATAN. 27: 3–4, 25–

34.

26

Marginingrum, D. dan N. Karningsih. 2001. Studi Degradasi Lignin ekstraktif

Menggunakan Bakteri Serratia marcescens dengan Menggunakan Metode

Reaktor Batch. Prosiding Seminar Nasional Kimia Pusat Penelitian

Geoteknologi LIPI. Surakarta: 149-157.

Mulja, M. Surahman. 1995. Analisa Instrumental. Surabaya : UNAIR Press

Orth A.B., D.J. Royse, M. Tien. 1993. Ubiquity of lignin-degrading peroxidases

among various wood-degrading fungi. Appl Environ Microbiol. 59:4017-

4023

Perez, J., J.M. Dorado, T. Rubia, J. Martinez. 2002. Biodegradation and Biological

treatments of Cellulose, Hemicellulose and Lignin: An Overview. Int.

Microbiol. 5, 53-63.

Poespodarsono S. 1988. Dasar-Dasar Ilmu Pemuliaan Tanaman. Bogor: IPB Press.

Pointing S.B. 1999. Qualitative Methods for The Determination of Lignocellulotik

Enzyme Production by Tropical Fungi. Juornal Fungal Diversity. 2: 17-33.

Semangun H. 2000. Penyakit-Penyakit Tanaman Perkebunan Indonesia.

Yogyakarta: Gajah Mada Univ Press

Sinaga R, 2000. Pemanfaatan Teknologi Iradiasi dalam Pengawetan Makanan.

Prosiding 2 Seminar Ilmiah Nasional dalam Rangka Lustrum IV Fakultas

Biologi Universitas Gadjah Mada, Penerbit MEDIKA, Yogyakarta, 2–7.

Singh, H. 2006. Mycoremidiation. John Wiley & Sons, Inc: America. Hal 358-375.

Siswanto, Suharyanto, dan R. Fitria. 2007. Produksi dan karakterisasi lakase

Omphalina sp. Menara Perkebunan, 75(2), 106-115.

Sjostrom E. 1995. Kimia Kayu, Dasar-dasar Penggunaan. Edisi 2. Penerjemah:

Sastrohamidjojo. Penyunting: Prawirohatmodjo. Yogyakarta: Gajah Mada

University Press. Terjemahan dari : Wood ; Chemistry.

Subowo, Y. B. 2010. Uji Aktivitas Selulase dan Ligninase dari Beberapa Jamur dan

Potensinya sebagai Pendukung Pertumbuhan Tanaman Terong (Solanum

melongena). Berita Biologi LIPI Mikrobiologi. Cibinong. 10(1): 1-6.

Sumardi dan Widiastuti SM. 2001. Pemanfaatan Sabut Kelapa untuk

Pengembangan Budidaya Fungi Ganoderma sebagai Bahan Obat Tradisional

di Daerah Sekitar Hutan. J. ASPI, Vol.2(5): 12-52.

27

Susanto, A. 1998. Sifat-sifat Biokimiawi dan Fabrikasi Ganoderma, Fungi Patogen

Pohonan. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia, Vol. 4 (2): 83- 91.

Suwadji E, 1980. Pengaruh Lingkungan Substrat pada Proses Kematian

Mikroorganisme Akibat Radiasi Sterilisasi PAIR-BATAN, Jakarta.

Taherzadeh M.J. 1999. Ethanol from Lignocellulose: Physiological Effects of

inhibitors and Fermentation Strategies. [thesis]. Goteborg: Department of

Chemical Reaction Engineering, Chalmers University Of Technology

Triasanti, A. 2009. Prospek Enzim dan Limbah Lignoselulose untuk Produksi

Bioetanol. Berita Selulase, Vol. 44 (1): 49-56

Triasanti, A. 2010. Potensi Selulase dalam Mendegradasi Lignoselulase Limbah

Pertanian untuk Pupuk Organik. Berita Selulase, Vol. 45 (2): 70-77

Turner PD. 1981. Diseases and Disorders of the Oil Palm in Malaysia. Oxford

University Press.

Widyastuti. 2007. Jamur Ganoderma philippii dan Rigidoporus lignosus. Fakultas

Kehutanan. UGM

Widyastuti, H., Siswanto, dan Suharyanto. 2007. Optimasi pertumbuhan dan

aktivitas enzim lignolitik Omphalina sp dan Pleurotus ostreatus pada

fermentasi padat. Menara Perkebunan, 75(2), 93-105.

Yoshimura, T., 1995. Contribution of the protozoa fauna to nutritional physiology

of the lower termite, Coptotermes formosanus Shiraki (Isoptera:

Rhinotermitidae). Disertation (Unpublished), Kyoto University, Kyoto

Yuni Miftachul R, Nengah Dwianita K, Maya S. 2010. Studi Potensi Isolat Kapang

Tanah Dari Wonorejo Surabaya Dalam Mendegradasi Lignin. Jurusan

Biologi, FMIPA, ITS