PowerPoint Presentation

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiReaksi biuret berdasarkan adanya ikatan peptida dalam protein, oleh karena itu reaksi biuret merupakan reaksi umum untuk semua jenis protein. Reaksi biuret menunjukkan reaksi berwarna ungu, merah ros sampai merah jambu dengan ion tembaga dalam larutan alkali.

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiReaksi Ninhidrin harus didahului oleh reaksi hidrolisis protein, karena reaksi ninhidrin berdasarkan adanya asam amino. Dengan demikian reaksi Ninhidrin merupakan reaksi umum untuk protein. Campuran asam amino dalam larutan hidrolisat suatu protein dapat dideteksi dan diidentifikasi dengan reaksi ninhidrin secara kromatografi

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiReaksi Millon terjadi jika protein mengandung tirosin yang merupakan asam amino yang mengandung fenol.Reaksi antara protein dengan merkuri nitrat dalam asam nitrat dan natrium nitrit, timbul warna merah. Reaksi ini berdasarkan pada reaksi merkuri fenolat dan senyawa nitro. 3UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiUNTUK MENGETAHUI ADANYA :: protein yang memiliki asam amino aromatikFENILALANINTIROSINTRIPTOFANMerupakan reaksi antara protein dan asam nitrat, timbul hasil akhir warna kuning. Reaksi tersebut berdasarkan reaksi nitrasi asam amino aromatik (nitrasi pada inti benzena) seperti fenilalanin, tirosin dan triptofan.UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchi REAKSI DIAZOTASI MENURUT PAULIReaksi antara protein dengan larutan garam diazonium, hasil akhir berupa warna kuning sampai coklat karena timbulnya zat warna azotiroson histidinReaksi diazotasi ini terjadi jika protein mengandung5UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiReaksi ini berdasarkan adanya gugus guanidin dengan reagensia Sakaguchi, memberikan warna merah.

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiNatriumnitroprusida dalam larutan amoniak akan menghasilkan warna merah dengan protein yang mempunyai gugus SH bebasProtein yang mengandung sistein dapat memberikan hasil positif.

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiTriptofan dapat berkondensasi dengan beberapa aldehida dengan bantuan asam kuat dan membentuk senyawa yang berwarna. Larutan protein yang mengandung triptofan dapat direaksikan dengan pereaksi Hopkins-Cole yang mengandung asam glioksilatHasil positif ditandai dengan terbentuknya cincin ungu diantara kedua batas lapisan protein dengan pereaksi Hopkins-ColeUJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiKelarutan protein akan berkurang bila kedalam larutan protein ditambahkan garam- garam anorganik. Pengendapan terus terjadi karena kemampuan ion garam untuk menghidrasi, sehingga terjadi kompetisi antara garam anorganik dengan molekul protein untuk mengikat air. Karena garam anorganik lebih menarik air maka jumlah air yang tersedia untuk molekul protein akan berkurang.Pengendapan Protein oleh Garam-Garam Anorganik

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiProtein dengan penambahan asam atau pemanasan akan terjadi koagulasiPada pH iso-elektrik (pH larutan tertentu biasanya berkisar 4 4,5 dimana protein mempunyai muatan positif dan negatif sama, sehingga saling menetralkan) kelarutan protein sangat menurun atau mengendap. Pada temperatur diatas 60oC kelarutan protein akan berkurang (koagulasi) karena pada temperatur yang tinggi energi kinetik molekul protein meningkat sehingga terjadi getaran yang cukup kuat untuk merusak ikatan atau struktur sekunder, tertier dan kuartener yang menyebabkan koagulasi.

UJI KUALITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinreaksi millonxantoproteindiazotasi Natrium nitroprusidahopkuns-colepengendapankoagulasipengendapan sakaguchiPelarut organik akan mengubah (mengurangi) konstanta dielektrika dari air, sehingga kelarutan protein berkurang, dan juga karena alkohol akan berkompetisi dengan protein terhadap air.

Pengendapan protein dengan alkoholUJI KUANTITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinMetode Titrasi FormolMetode KjedahlPengukuran serapan cahaya kompleks berwarna ungu dari albumin yang bereaksi dengan pereaksi biuret dimana, yang membentuk kompleks adalah protein dengan ion Cu2+ yang terdapat dalam pereaksi biuret dalam suasana basaPRINSIPUJI KUANTITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinMetode Titrasi FormolMetode KjedahlBerlaku untuk semua polipeptida, protein dan proteida, karena hidrolisatnya mengandung asam amino, dapat dikembangkan menjadi kolorimetri yang bersifat kuantitatif untuk menetapkan kadar dari tiap jenis asam amino.UJI KUANTITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinMetode Titrasi FormolMetode KjedahlLarutan protein dinetralkan dengan basa (NaOH) lalu ditambahkan formalin akan membentuk dimethilol. Dengan terbentuknya dimethilol ini berarti gugus aminonya sudah terikat dan tidak akan mempengaruhi reaksi antara asam dengan basa NaOH sehingga akhir titrasi dapat diakhiri dengan tepat. Titik akhir titrasi ditandai dengan perubahan warna menjadi merah muda.PRINSIPUJI KUANTITATIFreaksi biuretreaksi ninhidrinMetode Titrasi FormolMetode Kjedahlmetode yang sederhana untuk penetapan nitrogen total pada asam amino, protein, dan senyawa yang mengandung nitrogenNitrogen organik dalam protein didestruksi menjadi nitrogen anorganik berbentuk NH3, NH3 dipisahkan dengan cara destilasi uap air. Kadar nitrogen ditentukan dengan titrasi. Perhitungan Kadar protein atas dasar kadar nitrogen.PRINSIP