praktikum biokimia

21
1 PETUNJUK PRAKTIKUM Biokimia Oleh: Agus Purnomohadi, M.Biotech JURUSAN KIMIA FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UIN SUNAN KALIJAGA

description

panduan praktikum biokimia

Transcript of praktikum biokimia

Page 1: praktikum biokimia

1

PETUNJUK PRAKTIKUM

Biokimia

Oleh: Agus Purnomohadi, M.Biotech

JURUSAN KIMIA FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UIN SUNAN KALIJAGA

Page 2: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

ii

Kata Pengantar

Assalamu’alaikum wr. wb.

Alhamdulillah, segala puji bagi Allah yang telah

memberikan barakah-Nya sehingga kami dapat menyelesaikan

penyusunan buku petunjuk bagi pelaksanaan Praktikum Biokimia.

Panduan Praktikum Biokimia ini berisi cara-cara sederhana

pengenalan senyawa biokimia dan teori dasar yang berhubungan

dengan materi praktikum. Diharapkan, melalui pengamatan

fenomena Biokimia secara langsung di laboratorium, mahasiswa

akan lebih memahami mata kuliah Biokimia.

Panduan praktikum ini masih sangat sederhana karena

disesuaikan dengan kondisi Laboratorium Terpadu UIN Sunan

Kalijaga Yogyakarta. Pada tahun-tahun mendatang diharapkan

materinya semakin disempurnakan.

Oleh karena itu, kritik dan saran demi perbaikan Panduan

Praktikum ini sangat kami harapkan.

Wassalamu’alaikum wr. wb.

Yogyakarta, Agustus 2015

Penyusun

Page 3: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

iii

Daftar Isi

Kata Pengantar .................................................................................................................... ii

Daftar Isi ............................................................................................................................... iii

Tata Tertib ............................................................................................................................. v

Praktikum Biokimia ........................................................................................................... v

PERCOBAAN 1 Enzim Pencernaan: Daya Cerna Amilase Saliva ..................... 1

A. Tujuan Percobaan ................................................................................................ 1

B. Dasar Teori ............................................................................................................. 1

C. Alat dan Bahan ...................................................................................................... 1

D. Cara Kerja................................................................................................................ 2

PERCOBAAN 2 Penentuan Kadar Glukosa Darah................................................. 4

A. Tujuan Percobaan ................................................................................................. 4

B. Dasar Teori .............................................................................................................. 4

C. Alat dan Bahan ....................................................................................................... 4

D. Cara Kerja................................................................................................................. 5

E. Perhitungan ............................................................................................................. 5

PERCOBAAN 3 Penentuan Kadar Kasein Dalam Susu ....................................... 6

A. Tujuan Percobaan ................................................................................................. 6

B. Dasar Teori .............................................................................................................. 6

C. Alat dan Bahan ....................................................................................................... 6

D. Cara Kerja................................................................................................................. 7

E. Perhitungan ............................................................................................................. 7

PERCOBAAN 4 Penentuan Kadar Vitamin C .......................................................... 8

A. Tujuan Percobaan ................................................................................................. 8

B. Dasar Teori .............................................................................................................. 8

C. Alat dan bahan ....................................................................................................... 8

D. Cara Kerja................................................................................................................. 9

PERCOBAAN 5 Analisis Kualitatif Terhadap Bahan Makanan ..................... 11

A. Tujuan Percobaan ............................................................................................... 11

B. Dasar Teori ............................................................................................................ 11

C. Alat dan Bahan ..................................................................................................... 11

Page 4: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

iv

D. Cara Kerja .............................................................................................................................................. 11

PERCOBAAN 6 Penentuan Kadar Protein dengan Metode Lowry .......................................... 13

A. Tujuan ................................................................................................................................................... 13

B. Dasar Teori .......................................................................................................................................... 13

C. Alat dan Bahan ................................................................................................................................... 13

D. Cara kerja ............................................................................................................................................. 13

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................................................................... 15

Page 5: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

v

Tata Tertib Praktikum Biokimia

1. Kehadiran

a. Praktikum harus diikuti secara keseluruhan. Apabila hal

tersebut tidak dipenuhi, maka praktikum dinyatakan tidak

lulus yang berakibat pada ketidaklulusan mata kuliah

Biokimia.

b. Ketidakhadiran karena sakit harus disertai surat

keterangan resmi.

c. Keterlambatan kurang dari sepuluh (10) menit dikenai

sanksi 1.

d. Keterlambatan lebih dari sepuluh (10) menit dikenai sanksi

3.

2. Persyaratan Mengikuti Praktikum

a. Berperilaku dan berpakaian sopan. Jika tidak dipenuhi

maka sekurang-kurangnya dikenai sanksi 1

b. Mengenakan jas lab dan membawa perlengkapan untuk

pelaksanaan praktikum (masker, gloves, pipet tetes, tissue,

goggle). Jika tidak dipenuhi maka dikenakan sanksi 2 atau

sanksi 1 ditambah sanksi administrasi.

c. Menyiapkan sampel yang akan dianalisis dalam kegiatan

praktikum (Percobaan 1: susu atau telur ayam, Percobaan

2: darah sapi yang sudah diberi antikoagulan, Percobaan 3:

susu, Percobaan 4: jus buah/sayur dan tablet vitamin C).

d. Menyiapkan diri dengan materi yang akan dilakukan.

Mahasiswa yang tidak siap untuk praktikum, dapat dikenai

sanksi 3.

3. Pelaksanaan praktikum

a. Menaati tata tertib yang berlaku di Laboratorium Kimia

b. Mengikuti petunjuk yang diberikan oleh Asisten atau Dosen

Penanggung Jawab Praktikum

c. Memelihara kebersihan dan bertanggung jawab atas

keutuhan alat-alat praktikum

Page 6: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

vi

4. Penilaian

a. Nilai praktikum ditentukan dari nilai pre-test, persiapan praktikum, aktivitas

praktikum, dan laporan.

b. Nilai akhir praktikum dihitung dari jumlah nilai setiap praktikum.

c. Kelulusan praktikum ditentukan berdasarkan nilai akhir praktikum dan

keikutsertaan praktikum.

d. Tindakan plagiarisme (copy-paste) dalam pembuatan laporan praktikum tidak

dapat dibenarkan dan akan langsung diberikan nilai 0 (nol) dalam laporan

5. Sanksi Nilai

a. Sanksi 1: Nilai dikurangi 10

b. Sanksi 2: Nilai praktikum dikurangi 50

c. Sanksi 3: Tidak diperkenankan mengikuti praktikum, sehingga nilai praktikum

= 0.

6. Sanksi Administrasi

a. Sanksi administrasi diberikan bagi praktikan yang selama praktikum

berlangsung menimbulkan kerugian, misalnya memecahkan atau merusakkan

alat, menghilangkan dan atau kunci loker tertinggal

7. Lain-Lain

a. Praktikum dilaksanakan pada hari Rabu, yaitu pukul 07.30 – 12.00.

b. Praktikum yang tidak dapat dilaksanakan karena hari libur, akan diberikan

praktikum pengganti setelah seluruh sesi praktikum selesai.

c. Tata tertib berperilaku sopan di dalam laboratorium meliputi larangan makan,

minum, merokok, larangan menggunakan pemutar musik MP3 portabel, telepon

seluler dan sejenisnya. Selama praktikum tidak diperkenankan menggunakan

telepon seluler untuk bertelepon maupun mengirim sms.

d. Tata tertib berpakaian sopan di laboratorium meliputi kewajiban menggunakan

sepatu, memakai jas laboratorium.

e. Informasi praktikum Biokimia dapat dilihat pada papan pengumuman di Lt.3

Laboratorium Terpadu FST.

f. Informasi praktikum dan tugas praktikum dapat diakses melalui e-learning UIN

SUKA. Mahasiswa wajib mengakses sendiri website tersebut dan dianggap telah

mengetahui semua informasi dan tugas yang ditampilkan pada website tersebut.

Page 7: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

1

PERCOBAAN 1 Enzim Pencernaan:

Daya Cerna Amilase Saliva

A. Tujuan Percobaan

Mengetahui sifat dan susunan air liur, mengetahui pengaruh suhu dan pH

terhadap aktivitas amilase air liur, dan perbedaan kemampuan hidrolisis

pati dan pati mentah oleh amilase air liur.

B. Dasar Teori

Saliva atau air liur merupakan cairan mulut yanng terdiri atas

campuran sekresi kelenjar saliva mayor dan minor yang ada dalam rongga

mulut. Sekitar 90% saliva yang dihasilkan pada saat makan merupakan

reaksi atas rangsangan yang berupa pengecapan dan pengunyahan

makanaN. Air liur mengandung glikoprotein berupa musin yang bekerja

sebagai pelumas pada waktu mengunyah dan menekan makanan. Enzim α-

amilase liur atau ptialin mampu menghidrolisis pati dan glikogen menjadi

maltosa dan oligosakarida lain dengan menyerang ikatan glikosidat

α(1→4). Amilase liur akan segera terinaktivasi pada pH 4.0 atau kurang

sehingga kerja pencernaan makanan di dalam mulut akan terhenti begitu

lingkungan lambung yang asam menembus partikel makanan.

C. Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan antara lain:

1. Indikator pH universal, 8. Glass wool,

2. Tabung reaksi, 9. Pipet tetes,

3. Penangas air 10, 37, dan 80 °C 10. Pipet volumetrik 5, 10, dan 25 ml,

4. Pelat tetes, 11. Termometer,

5. Piknometer, 12. Stopwatch,

6. Gelas piala 100 dan 200 ml, 13. Corong plastik

Bahan-bahan yang digunakan antara lain:

1. Air liur, 7. Larutan HNO3 pekat

2. Larutan CH3COOH 10 %, 8. Larutan kanji 1%,

3. Larutan NaOH 10 %, 9. Pereaksi Molisch,

4. Larutan HCl 0.4 %, 10 % dan 1 N, 10. Pereaksi yodium,

5. Larutan Na2CO3 0.1 % dan 0.5 % 11. Pereaksi Benedict.

6. Larutan H2SO4 pekat, 12. Larutan biuret

Page 8: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

2

D. Cara Kerja

1. Bersihkan rongga mulut dengan berkumur beberapa kali.

2. Ambil sepotong kertas saring yang bersih, tetesi dengan asam asetat 10 %, kunyah

kertas saring tersebut dan tampung air liur di dalam gelas piala 100 ml hingga

mencapai 50 ml.

3. Saring air liur dengan glass wool dan tampung filtratnya di gelas piala yang lebih

kecil.

4. Pengujian sifat-sifat fisik air liur:

a. Penentuan berat jenis

1) Timbang piknometer kosong, bersih, dan kering (Bkosong)

2) Tuang air liur ke dalam piknometer kosong tersebut dan timbang sekali lagi

(Bisi)

3) Hitung bobot air liur di dalam piknometer (Bisi – Bkosong)

4) Hitung berat jenis air liur tersebut dengan membagi bobot air liur dengan

volume piknometer.

b. Pengukuran pH air liur

1) Masukkan 2 ml air liur ke dalam tabung reaksi.

2) Celupkan indikator pH universal, cocokkan warna yang terbentuk dengan

skala pH yang ada.

5. Uji kualitatif penentuan komponen air liur

a. Uji biuret:

1) Siapkan tabung reaksi, isi dengan 3 ml air liur.

2) Campurkan dengan 1 ml larutan biuret.

3) Amati perubahan warna yang terjadi.

b. Uji xanthoprotein:

1) Siapkan tabung reaksi, isi dengan 3 ml air liur.

2) Tambahkan 3 ml HNO3 pekat dan panaskan

3) Amati perubahan warna yang terjadi.

c. Uji Molisch

1) Siapkan tabung reaksi, isi dengan 5 ml air liur.

2) Tambahkan 2 tetes pereaksi Molisch, campur merata

3) Tambahkan 3 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Amati

terbentuknya cincin pada campuran tersebut.

6. Pengaruh suhu terhadap aktivitas amilase

a. Siapkan 4 tabung reaksi, isi masing-masing tabung dengan 2 ml air liur dan 2 ml

akuades. Tabung I disimpan di pendingin bersuhu 10°C, tabung II disimpan di

suhu kamar, tabung III disimpan di penangas bersuhu 37°C, dan tabung IV

disimpan di penangas bersuhu 80°C.

b. Inkubasi keempat tabung selama 15 menit. Tambahkan 2 ml larutan kanji 1 %

pada masing-masing tabung dan inkubasi keempat tabung pada suhu

sebelumnya selama 10 menit.

c. Bagi isi tabung ke dalam dua tabung, tabung pertama untuk uji yodium dan

tabung kedua untuk uji Benedict.

Page 9: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

3

1) Uji yodium: ambil 2 tetes isi tabung reaksi dan campurkan dengan 2-3 tetes

pereaksi yodium. Amati warna yang terbentuk.

2) Uji Benedict: campurkan 8 ml pereaksi Benedict dengan 8 tetes campuran air

liur-akuades-kanji dan panaskan di air mendidih selama 5 menit. Amati

warna yang terbentuk setelah pemanasan.

7. Pengaruh pH terhadap aktivitas amilase air liur

a. Siapkan empat tabung reaksi, isi dengan 2 ml larutan HCl, 2 ml asam asetat 10%,

2 ml akuades, dan 2 ml Na2CO3 0.1%. Campurkan keempat isi tabung tersebut

dengan 2 ml larutan kanji 1% dan 2 ml air liur, dan simpan di penangas air 37°C

selama 15 menit.

b. Bagi kedua isi tabung reaksi untuk uji yodium dan uji Benedict.

8. Hidrolisis pati kanji oleh amilase air liur

a. Campurkan 0.2 ml air liur dengan 5 ml larutan kanji 1 % di dalam tabung reaksi

yang bersih.

b. Ambil 1 tetes campuran air liur-kanji pada pelat tetes dan beri pereaksi yodium

sebanyak 1 tetes setiap 1 menit. Catat perubahan warna yang terjadi.

c. Apabila uji dengan yodium sudah tidak menunjukkan perubahan warna lagi,

campuran air liur-kanji diuji dengan uji Benedict. Catat pada menit ke berapa

warna yodium mulai berubah menjadi biru hingga tidak menunjukkan

perubahan warna lagi.

Page 10: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

4

PERCOBAAN 2 Penentuan Kadar Glukosa Darah

A. Tujuan Percobaan

Percobaan ini bertujuan mengukur kadar glukosa darah sapi dengan

metode Folin-Wu. Percobaan ini juga bertujuan mengetahui fungsi masing-

masing pereaksi yang digunakan dalam metode Folin-Wu.

B. Dasar Teori

Pengukuran kadar glukosa darah akan menjadi hal yang sangat

diperlukan untuk mengetahui kondisi kesehatan seseorang apakan ia

berada dalam keadaan hiperglikemia atau hipoglikemia. Defisiensi insulin

pada manusia menyebabkan hiperglikemia yang sering juga disebut

sebagai diabetes mellitus. Penyakit ini terjadi karena berkurangnya jumlah

glukosa yang masuk ke sel, berkurangnya pengggunaan glukosa oleh

berbagai jaringan, dan peningkatan produksi glukosa oleh hati.

Hipoglikemia dapat disebabkan oleh peningkatan konsumsi glukosa

seperti pada masa kehamilan. Selain itu, insulin dalam jumlah terlalu

banyak juga akan menyebabkan hipoglikemia berat karena terjadi

peningkatan pemakaian dan penyimpanan glukosa di dalam hati dan otot

sebagai glikogen. Dengan demikian, kadar glukosa darah harus diketahui

dalam jumlah tepat untuk dapat menyimpulkan kondisi kesehatan

seseorang.

C. Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan:

1. Labu Erlenmeyer 100 ml, 6. Kertas saring

2. Tabung reaksi, 7. Penangas air

3. Pipet tetes, 8. Corong plastik

4. Pipet volumetrik 5, 10, dan 25 ml, 9. Batang pengaduk

5. Penjepit tabung, 10. Spektofotometer dan kuvetnya

Bahan-bahan yang digunakan:

1. Darah sapi, 6. Larutan kupritartrat

2. Larutan natrium wolframat 1 %, 7. Akuades

3. H2SO4 0.67 N,

4. Larutan standar glukosa 0.1 mg/ml,

5. Larutan fosfomolibdat-fosfotungstat

Page 11: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

5

D. Cara Kerja

1. Ambil 1 mL darah sapi dan tambahkan 7 ml akuades, 1 ml natrium wolframat, dan 1

ml H2SO4 0.67 N tetes demi tetes ke dalam labu Erlenmeyer 100 ml. Campuran ini

dikocok-kocok dan didiamkan selama 10 menit.

2. Saring campuran darah tadi dengan kertas saring.

3. Siapkan tiga buah tabung reaksi dan beri label tabung A, B, dan C. Isi tiga tabung

tersebut seperti tabel di bawah ini:

Tabung Volume (ml)

Filtrat Akuades Standar Glukosa Kupritartrat

A 1 0 0 1

B 0 1 0 1

C 0 0 1 1

4. Panaskan ketiga tabung dalam air mendidih selama 8 menit dan dinginkan.

5. tambahkan 7 ml akuades dan 1 ml larutan fosfomolibdat-fosfotungstat.

6. Ukur serapan tiga tabung tersebut pada panjang gelombang 660 nm.

E. Perhitungan

Kadar glukosa dalam darah dihitung dengan rumus:

Konsentrasi sampel=Absorban sampel

Absorban standar×Konsentrasi standar×Faktor pengenceran

Page 12: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

6

PERCOBAAN 3 Penentuan Kadar Kasein

Dalam Susu

A. Tujuan Percobaan

1. Mempelajari salah satu metode analisis kuantitatif protein

2. Menentukan kadar kasein dalam susu

B. Dasar Teori

Susu merupakan salah satu primadona gizi bagi manusia. Hal

tersebut disebabkan sebagian besar senyawa yang dibutuhkan oleh tubuh

terkandung dalam susu. Sehingga tidak salah jika susu menjadi

penyempurna kebutuhan gizi manusia seperti tersirat dalam slogan gizi

Indonesia yaitu “Empat Sehat Lima Sempurna”.

Salah satu penyusun utama susu adalah protein. Hampir 80%

protein dalam susu terdiri atas kasein di samping laktalbumin dan

laktoglobulin. Kasein dalam susu dapat dipisahkan melalui pengendapan

dengan membuatnya berada pada titik isoelektrik. Melalui pengendapan

ini, akan dapat ditentukan jumlah kasein dalm sampel yang dianalisis.

C. Alat dan Bahan

1. Alat

a. Gelas piala 100 mL

b. Penangas air

c. Hotplate magnetic stirer

d. Erlenmeyer 150 mL

e. Corong gelas

f. Buret 50 mL

g. Termometer

2. Bahan

a. Susu segar

b. Asam asetat 1 N

c. Asam asetat 0,25 N

d. NaOH 0,1 M

e. Formaldehid 40%

f. Akuades

g. Kertas saring

Page 13: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

7

D. Cara Kerja

1. 120 mL sampel susu encer [susu:air=1:2 (v/v)] dipanaskan dengan suhu 40 oC di atas penangas air.

2. Tambahkan 1,5 mL asam asetat 1 N, aduk hingga homogen dan diamkan selama 20

menit.

3. Tambahkan 4,5 mL asam asetat 0,25 N, aduk hingga homogen dan diamkan selama 1

jam.

4. Saring endapan dengan kertas saring dan cuci endapan hingga filtrat netral.

5. Endapan yang didapat dimasukkan dalam gelas piala dan ditambahkan akuades

hingga volumenya ±20 mL.

6. Tambahkan 4 mL NaOH 0,1 M kemudian panaskan hingga endapan larut kembali

seperti susu.

7. Dinginkan larutan hingga suhu kamar kemudian tambahkan indikator pp.

8. Tambahkan 4 mL formaldehide 40% kemudian titrasi dengan NaOH 0,1 M hingga

timbul warna merah muda. Titrasi diulangi untuk mendapatkan data kedua dan

ketiga.

E. Perhitungan

Kadar kasein = Volume rata-rata NaOH 0,1 M x 0,9 %

Page 14: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

8

PERCOBAAN 4 Penentuan Kadar Vitamin C

A. Tujuan Percobaan

Mengetahui cara penentuan vitamin C dalam suatu sampel

B. Dasar Teori

Vitamin C atau asam askorbat mempunyai massa molekul 176

gram/mol dengan rumus molekul C6H8O6. Dalam bentuk kristal tidak

berwarna, titik cair 190-192oC. Bersifat larut dalam air, sedikit larut

dalam aseton atau alkohol yang mempunyai berat molekul rendah.

Vitamin C sukar larut dalam kloroform, eter dan benzena, jika berikatan

dengan logam membentuk garam. Sifat asam ditentukan oleh ionisasi

gugus enol pada atom C nomor 3.

Vitamin C lebih stabil pada pH rendah daripada pH tinggi. Vitamin

C mudah teroksidasi, terutama apabila terdapat katalisator Fe, Cu, enzim

askorbat oksidase, sinar, dan temperatur tinggi. Larutan encer Vitamin C

pada pH kurang dari 7,5 masih stabil apabila tidak ada katalisator seperti

di atas. Oksidasi Vitamin C menghasilkan asam dehidroaskorbat. Vitamin

C dengan iod akan membentuk ikatan dengan atom C nomor 2 dan 3

sehingga ikatan rangkap hilang.

C. Alat dan bahan

Alat-alat yang diperlukan dalam percobaan ini adalah:

1. Erlenmeyer 125 mL 8. Pipet ukur 10 mL

2. Gelas beker 250 mL 9. Pipet volume 25 mL

3. Buret 10 mL 10. Labu ukur 100 mL

4. Statif dan klem 11. Labu ukur 250 mL

5. Sendok sungu 12. Penyaring buchner

6. Bola hisap 13. Kertas saring

Bahan-bahan yang diperlukan

1. Sample juice (buah atau sayur)

2. Tablet vitamin C

3. Larutan I2

4. Larutan Na2S2O3

5. Larutan Amilum

6. Akuades

Page 15: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

9

D. Cara Kerja

1. Pembakuan Larutan I2 terhadap Larutan Baku Na-tiosulfat

a. Pipet 25 mL larutan I2 ke dalam labu ukur 100 mL, kemudian encerkan dengan

akuades hingga garis.

b. Ambil 10 mL larutan I2 hasil pengenceran, kemudian titrasi menggunakan

larutan Na2S2O3 hingga larutan berwarna kuning pucat.

c. Tambahkan 2 mL indikator amilum, lakukan penggojokan agar homogen.

d. Lakukan titrasi hingga warna biru larutan tepat hilang.

e. Lakukan titrasi dengan tiga kali pengulangan.

2. Penentuan Kadar Vitamin C

a. Timbang sebanyak 10 gram sampel juice (buah atau sayur), kemudian encerkan

dengan 250 mL akuades. Saring dengan penyaring buchner, kemudian ambil

filtratnya.

b. Gerus dan larutkan 2 buah tablet vitamin C dalam 20 ml akuades dingin yang

sudah dididihkan sebelumnya.

c. Ambil 20 mL filtrat dan masukan ke dalam erlenmeyer.

d. Tambahkan 4 mL indikator amilum dan lakukan titrasi menggunakan larutan I2

hingga warna larutan menjadi biru.

e. Lakukan titrasi dengan tiga kali pengulangan.

Contoh tabel penentuan kadar vitamin C

Larutan

Volume titran (ml) Volume

terkoreksi

(ml)

Kadar vitamin C Awal Akhir Terpakai

Blangko

Tablet vitamin C

Sari jeruk

Standardisasi I2

I2+2e-→2I-

2S2O32-→ S4O6

2- + 2e-

I2 + 2 S2O32- → 2 I- + S4O62-

N I2 × V I2 = N S2O32- × V S2O32-

N I2 = N S2 O3

2-×V S2O3

2-

VI2

= A

N I2 total = A × Faktor pengenceran

= B

Page 16: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

10

Penentuan Kadar Vitamin C

C6H8O6 → C6H6O6 + 2 H+ + 2 e-

I2 + 2 e- → 2 I-

C6H8O6 + I2 → C6H6O6 + 2 H+ + 2 I-

N Vit.C × V Vit.C = N I2 × V I2

M × n × V Vit.C = B × V I2

M = B ×V I2

n × V Vit.C

Mol Vit.C = M Vit.C × Volume

Mol total = Mol Vit.C × 250 ml

20 ml

= C

Massa Vit. C = C × Mr Vit. C

% Vit.C = massa Vit.C

104mg×100%

Page 17: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

11

PERCOBAAN 5 Analisis Kualitatif Terhadap

Bahan Makanan

A. Tujuan Percobaan

Mempelajari teknik analisis karbohidrat dan protein dalam suatu sampel

secara kualitatif.

B. Dasar Teori

Di dalam susu sapi terdapat banyak komponen diantaranya

adalah karbohidrat dan protein. Karbohidrat dan protein dapat dianalisis

secara kualitatif dengan menggunakan beberapa uji. Analisis kualitatif

adalah suatu metode analisis untuk mengetahui kandungan senyawa

penyusun suatu zat. Analisis kualitatif menyangkut identifikasi suatu zat.

Dengan mempelajari metode analisis kualitatif dalam karbohidrat dan

protein, maka dapat dilakukan uji kualitatif keduanya secara bersamaan

dalam suatu sampel.

C. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam percobaan ini:

1. Tabung reaksi

2. Pipet tetes

3. Bunsen spiritus

4. Penjepit tabung

5. Cawan dan mortar

Bahan yang digunakan dalam percobaan ini:

1. Susu 8. Larutan asam nitrat pekat

2. Larutan tembaga sulfat 9. Larutan HCl

3. Larutan Na2CO3 10. Larutan NaOH

4. Larutan Fehling A dan Fehling B 11. Larutan asam oksalat

5. Naphtol 12. Larutan asam sufat encer

6. Larutan asam sulfat pekat 13. Larutan amonium hidroksida

7. Larutan asam asetat glasial 14. Daun pepaya

D. Cara Kerja

1. Uji Biuret

Ambil 2 mL susu tambahkan 1 mL larutan biuret. Amati

perubahan apakah yang terjadi dan jelaskan.

Page 18: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

12

1. Luff Test

Ambil 2 mL susu tambahkan 1 mL larutan tembaga sulfat dan 1 mL Na2CO3.

Amati apakah timbul endapan. Bandingkan apakah terjadi perubahan setelah dilakukan

pemanasan.

2. Uji Reduksi

Ambil 2 mL susu tambahkan 5 tetes larutan Fehling A dan Fehling B. Jelaskan

reaksi yang terjadi.

3. Hidrolisis

Ambil 5 mL susu tambahkan larutan HCl atau H2SO4 encer. Panaskan beberapa

menit, setelah dingin lakukan netralisasi dengan NaOH 10%. Hasil hidrolisis ditest

dengan Luff test dan Fehling test.

4. Moore Test

Ambil 5 mL susu tambahkan dengan 1 mL NaOH 10 %. Lakukan pemanasan

sampai mendidih. Amati perubahan yang terjadi.

5. Reaksi Molisch

Ambil 2 mL susu tambahkan dengan beberapa tetes asam sulfat pekat dan 2 mL

naphtol. Amati apakah terbentuk cincin violet atau tidak.

6. Reaksi Adam Kiewic

Ambil 2 mL susu tambahkan 2 mL asam asetat glasial dan beberapa tetes asam

sulfat pekat, amati apakah terbentuk cincin violet.

7. Xanthoprotein

Ambil 2 mL susu tambahkan dengan 2 mL HNO3 pekat, kemudian lakukan

pemanasan. Amati perubahan yang terjadi.

8. Pengendapan Kalsium

Ambil 10 mL susu tambah dengan ammonium hidroksida dan 1 mL asam oksalat,

panaskan apakah terjadi pengendapan atau tidak.

Ambil 10 mL susu tambah dengan Na2CO3 atau H2CO3 + NaOH, panaskan apakah terjadi

endapan putih atau tidak.

9. Protease

Ambil 5 mL susu tambah dengan 1 mL tumbukan daun pepaya, lakukan

pemanasan. Amati perubahan yang terjadi.

Page 19: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

13

PERCOBAAN 6 Penentuan Kadar Protein

dengan Metode Lowry

A. Tujuan

Percobaan ini bertujuan melatih pembuatan kurva standar larutan Bovine

Serum Albumine (BSA) metode Lowry. Kemudian kurva standar ini akan

digunakan untuk menentukan kadar protein sampel dengan metode

Lowry.

B. Dasar Teori

Penentuan kadar protein dalam sampel sangat penting untuk

menyediakan referensi bagi pengukuran aktivitas enzim ataupun kadar

metabolit tertentu. Cukup banyak metode yang dapat digunakan untuk

mengukur kadar protein dalam sampel. Secara umum, protein-protein

yang terdapat di alam memiliki ciri-ciri dasar yang sama. Yang

membedakan protein-protein tersebut adalah komposisi dan urutan asam

amino penyusunnya serta bentuk dan ukurannya.

C. Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan adalah:

1. Tabung reaksi,

2. Pipet 0.1 ml, 1 ml, dan 5 ml,

3. Spektrofotometer DAN kuvetnya.

Bahan-bahan yang digunakan untuk metode Lowry:

1. Larutan standar BSA 100 µg/ml,

2. Reagen Folin-Ciocalteu yang sudah diencerkan 1:1 dengan akuades

3. Reagen A (2 % Na2CO3 dalam 0.1 N NaOH)

4. Reagen B (0.5 % CuSO4.5H2O dalam 1 % KNa tartrat)

5. Reagen C (campuran 50 ml reagen A dengan 1 ml reagen B, dibuat

sebelum praktikum dimulai)

D. Cara kerja

1. Pembuatan Kurva Standar

a. Siapkan 5 buah tabung reaksi, isi masing-masing dengan 0, 0.3, 0.5,

0.7, dan 1 ml larutan standar BSA 100 µg/ml, dan tepatkan

volumenya hingga 1 ml.

b. Tambahkan 5 ml reagen C, kocok, dan diamkan selama 10 menit.

Page 20: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

14

c. Tambahkan 0.5 ml reagen Folin-Ciocalteu, kocok, dan diamkan kembali selama

30 menit.

d. Ukur serapan larutan BSA pada panjang gelombang 520 nm dengan blangko

berupa larutan yang tidak diisi dengan BSA.

e. Buat kurva hubungan antara serapan larutan dengan konsentrasi BSA. Tentukan

regresi liniernya.

2. Penentuan kadar protein sampel

a. Ambil larutan protein sampel sebanyak 1 ml, tambahkan 5 ml reagen C, kocok,

dan diamkan selama 10 menit.

b. Tambahkan 0.5 ml reagen Folin-Ciocalteu, kocok, dan diamkan kembali selama

30 menit.

c. Ukur serapan larutan BSA pada panjang gelombang 520 nm dengan blangko

berupa larutan yang tidak diisi dengan BSA.

d. Hitung konsentrasi protein sampel dengan menggunakan kurva standar yang

sudah didapat sebelumnya.

Contoh tabel hasil pengukuran serapan larutan standar BSA dan sampel protein

Larutan Volume

BSA (μL)

Konsentrasi

(mg/ml) Absorban

Blangko 0 0.00

Standar1 10 0.10

Standar2 20 0.20

Standar3 30 0.30

Standar4 50 0.50

Standar5 100 1.00

Sampel1 -

Sampel2 -

Page 21: praktikum biokimia

Petunjuk Praktikum Biokimia |

15

DAFTAR PUSTAKA

Day, R.A., Underwood, 1990, Kimia Analisis Kuantitatif. Jakarta: Erlangga.

Folin, O., Wu, H. 1919. A system of blood analysis. Journal of Biological Chemistry 38(1):81-110.

James, C. S. 1999. Analytical Chemistry of Foods. Maryland: Aspen Publishers,Inc.,.

Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A. L., Randall, R. J. 1951. Protein measurement with the Folin phenol reagent. Journal of Biological Chemistry 193(1):265-275.

Nielsen, S. S. 1998. Food Analysis. Aspen Publishers Inc., USA

Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhaedi, 1989, Prosedur Laboratorium untuk Analisa Bahan Makanan dan Pertanian, Yogyakarta: Liberty.

Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhaedi. 1989. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta: Liberty.

Winarno, F. G. 2002. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.