ISOLASI DNA PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI PERTANIAN

Nofita Ayu Ning Fias (105040200111101) Kelompok : Jumat, 09.15 wib Asisten: Mbak Icha

UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2011

Praktikum Bioteknologi Pertanian

Perusakan dinding sel

Isolasi DNA

Lisis membran sel

Pemurnian

Presipitasi

Isolasi DNA adalah pemisahan DNA untuk mengetahui sifat dari suatu tanaman dan untuk melakukan rekayasa genetika

Universitas Brawijaya Malang

Praktikum Bioteknologi Pertanian

Tahap Isolasi DNA

0.5 g daun + PVP Digerus sampai menjadi bubuk dengan bantuan nitrogen cair Masukkan bubuk ke dalam eppendorf berisi buffer CATB

Diisi dengan 1 ml buffer ekstraksi (CATB) + 5 l mercaptoethanol

Eppendorf

Inkubasi dalam waterbath Selama 30-60 menit T=650 C

Universitas Brawijaya Malang

Praktikum Bioteknologi Pertanian

Tahap Isolasi DNA

700 l CHISAM Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil supernatant, pindahkan ke effendorf baru

Ditambahkan dalam sample Dihomogenisasi menggunakan vortex

Sentrifugasi

700 l CHISAM

Ditambahkan pada sampel

Universitas Brawijaya Malang

Praktikum Bioteknologi Pertanian

Tahap Isolasi DNA

Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil supernatant, pindahkan ke effendorf baru

Sentrifugasi Ditambahkan pada sample Bolak-balik perlahan Inkubasi dalam freezer 30 menit

Kecepatan 6000 rpm selama 10 menit Ambil pellet, supernatant dibuang

Isopropanol dingin 1 ml

Sentrifugasi

Universitas Brawijaya Malang

Praktikum Bioteknologi Pertanian

Tahap Isolasi DNA

DNA Pellet

Dicuci dengan 200 l buffer pencuci 2x Endapan di keringkan

Resuspensi dengan 500 l buffer TE Inkubasi T=370 C selama 30 menit Dinginkan sebentar

Ditambahkan RNAse 1 l

Universitas Brawijaya Malang

End Show