I. JUDUL PRAKTIKUM

: Pemeriksaan Eschericia coli pada Rectal SwabII. PELAKSANAAN PRAKTIKUM:

Hari, tanggal

: Selasa, 24 Maret 2015

Waktu

: 07.30 15.00 wib Lokasi

: Lab. Mikrobiologi Kesling Surabaya

III. TUJUAN

1. Tujuan umum:

a. Mahasiswa dapat mengetahui teknik pengambilan sampel pada rectal swabb. Mahasiswa dapat mengetahui teknik pemeriksaan sampel pada rectal swab2. Tujuan khusus :

a. Mahasiswa dapat melakukan pembuatan media secara benar

b. Mahasiswa dapat melakukan pengambilan sampel dengan benar

c. Mahasiswa dapat melakukan pemeriksaan sampel dengan benarIV. DASAR TEORIRektal swab merupakan apusan yang dilakukan pada daerah rectum + 2-3 cm diatas lubang anus. Kuman-kuman pathogen penyebab gastroenteritis dapat diisolasi dari swab rectum. Kuman-kuman yang ditemukan dari swab rectumjuga terdapat pada saluran pencernaan. pengambilan sampel dengan cara memutar lidi kapas pada kripte anus searah jarum jam satu kali putaran dan putaran selanjutnya dengan menarik lidi kapas keluar.Menurut Permenkes RI No. 1096/Menkes/Per/VI/2011, Syarat Higiene sanitasi makanan meliputi pemeriksaan laboratorium, yaitu:

a. Cemaran kimia pada makanan negatif

b. Angka kuman E.coli pada makanan 0/gr contoh makanan

c. Angka kuman pada peralatan makan 0 (nol)

d. Tidak diperoleh adanya carrier (pembawa kuman patogen) pada penjamah makanan yang diperiksa (usap dubur/rectal swab)Bakteri Escherichia memiliki cirri-ciri seperti batang lurus, 1,1 1,5 m x 2,0 6,0 m, motil dengan flagellum peritrikus atau nonmotil. Bakteri ini juga tergolong bakteri gram negative, tumbuh dengan mudah pada medium nutrient sederhana. Spesies tipe E.coli.

EMB Agar disebut sebagai media selektif karena kandungan methylen blue pada media bisa menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif. Gula yang terdapat dalam media, yaitu sukrosa dan laktosa merupakan substrat yang bisa difermentasi oleh sebagian besar bakteri Gram negative, terutama bakteri Coliform. Adanya sukrosa dan laktosa juga bertujuan untuk membedakan antara bakteri Coliform yang mampu memfermentasi sukrosa lebih cepat daripada laktosa dan yang yang tidak dapat memfermentasi sukrosa. Bakteri Coliform umumnya mampu memfermentasi laktosa dan menghasilkan asam. Kondisi ini membuat media menjadi asam sehingga indikator Eosin Y berubah warna dari bening menjadi ungu gelap yang biasanya disertai kilap logam. Koloni yang tumbuh berinti gelap disertai kilap logam pada permukaan Eosin Methylen Blue (EMB). Agar merupakan ciri koloni Escherichia coli. Bakteri gram negative lain yang mampu memfermentasi laktosa dengan lambat akan ditunjukkan dengan warna coklat merah muda, dan bakteri yang tidak mampu memfermentasi laktosa akan terlihat merah muda pudar. (Lal dan Cheepthman dkk., 2007 ; Merck, 1996

V. ALAT

1. Cotton swep

2. Gunting

3. Timbangan

4. Botol kecil berisi media transport

5. Autoclave

6. Pipet ukur 1ml, 10 ml7. pipump

8. Petridish steril

9. Spatula10. Ose

11. Tabung reaksi

12. Rak tabung reaksi

13. Erlenmeyer

14. Gelas ukur

15. Korek api

16. Lampu spiritus

17. Etiket

18. Coolbox

19. Sarung tangan

20. Masker

21. Alat tulis

22. Inkubator

23. Waterbath

24. Termometer VI. BAHAN

1. Media transport (NaCl 0,9 %)

2. Media pemupuk EC Broth ( Eschericia coli broth ) @ 5mL

3. EMB ( Eosin Methilen Blue Agar )

4. Aquades

5. Alkohol 70 %

6. Kapas

7. Alumunium foil

8. Kertas coklat

9. Tali ramiVII. PROSEDUR KERJA

HARI PERTAMA

A. Pembuatan Media Transport

B. Pembuatan Eschericia coli broth (EC Broth)

Lanjutan

C. Teknik Sampling Rectal Swab

Lanjutan

D. Penanganan Sampel Rectal Swab

HARI KEDUA

Lanjutan

VIII. HASIL1. Hari pertama:

( - ) pada media Eschericia coli broth ( EC broth )

Tidak ada perubahan warna pada media EC (warna masih tetap jernih sama seperti sebelum di inkubasi). Oleh karena itu pemeriksaan tidak di lanjutkan pada media EMB.

IX. PEMBAHASANBerdasarkan hasil pengamatan, pada pemeriksaan rectal swep yang dilakukan, pada media pemupuk ( Eschericia coli broth ) negative, karena tidak ada perubahan warna pada media EC (tidak ada tanda-tanda warna keruh). Kekeruhan terjadi karena bakteri E.coli memfermentasi laktosa pada EC Broth. Sehingga tidak diteruskan pada media EMB. Hal ini mungkin terjadi karena adanya kontaminasi pada saat pengambilan sampel rectal swab atau pada saat penanganan sampel, kemudian kesalahan petugas pada saat mengusap dubur, kedalaman lubang dubur kurang dari 2,5 3 cm.X. KESIMPULAN

Dari hasil pemeriksaan rectal swab menunjukkan bahwa Negatif E.Coli karena pada media EC broth/Ec medium tidak menunjukan warna keruh sehingga tidak diteruskan pada media EMB. Menurut Permenkes RI No. 1096/Menkes/Per/VI/2011, Syarat Higiene sanitasi makanan meliputi pemeriksaan laboratorium, yaitu: Tidak boleh adanya carrier (pembawa kuman patogen) pada penjamah makanan yang diperiksa (usap dubur/rectal swab). Keadaan tersebut menunjukan Higiene perorangan masih sangat kurang, sehingga perlu lebih di tingkatkan lagi.XI. DAFTAR PUSTAKA

Fardiaz, Srikandi. 1993, Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta : PT.RajaGrafindoPersadaPermenkes RI No. 1096/Menkes/Per/VI/2011 tentang Higiene Sanitasi JasabogaLal, A., Cheeptham, N. 2007. http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/2869-eosin-methylene-blue-agar-plates-ptocol Eosin Methylen Blue Agar Protocol.ML Library American Society for Microbiology. Diakses Hari Sabtu 4 April 2015 Pukul 11.25 WIBMichael J. Pelcaar, Jr. 2009. Dasar-Dasar Mikrobiologi 2. Jakarta. Universitas Indonesia (UI-Press)XII. DOKUMENTASI

LAPORAN PRAKTIKUM

PENYEHATAN MAKANAN DAN MINUMAN B (PMM-B)

PEMERIKSAAN ESCHERICIA COLI PADA RECTAL SWAB

Dosen Pembimbing :

Narwati, S.Si, M.Si

Disusun oleh :

Kelas B/ Kelompok A / Semester IV /Sub 3

Kementerian Kesehatan RI

Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Surabaya

Jurusan Kesehatan Lingkungan

Program Studi DIII Kampus Surabaya

2015

Nama kelompok:1. Patria Hamka Ranggi

(P278331130)

2. Dema Indah Sulistyorini (P278331130510

3. Aulia Faradina

(P27833113060)

4. Puri Manggar Sari

(P27833113067)Hitung kebutuhan NaCl 0,9% (0,09 gr dalam 10 ml aquades)

Timbang NaCl 0,09 gr larutkan kedalam 10 ml aquades

Aduk rata dengan spatula

Masukkan kedalam botol kecil @10 ml

Tutup dengan kapas kemudian sterilkan kedalam autoclave 121o C

Hitung kebutuhan EC Broth, dengan rumus

QUOTE x 10 = 0,74

Timbang EC Broth 0,74 gr, larutkan ke dalam 10 ml aquades

Aduk rata dengan spatula

Masukkan kedalam tabung reaksi @5 ml ( 1 untuk specimen 1 untuk control)

Tutup dengan kapas kemudian sterilkan ke dalam autoclave 121o C

Persiapkan sarung tangan, botol kecil berisi media transport, cotton swab, alat tulis, gunting, lampu spiritus, alkohol 70% dan coolbox

Gunakan sarung tangan dengan rapi.

Penjamah harus membersihkan dubur terlebih dahulu.

Penderita diambil usap duburnya dengan posisi menungging, kedua tangan memegang masing-masing pinggul, atau dengan cara tengkurap

Pemeriksa berdiri disamping kiri dari penderita

Tangan kiri pemeriksa memegang dan melebarkan lubang anus ke arah samping kiri dan kanan dan meregangkan dengan jari tangan kiri. Kemudian tangan kanan bersiap dengan cotton swab ( yang telah dibasahi media transport ) dan dimasukkan kedalam anus.

Masukkan cotton swab steril sepanjang 2,5 cm kedalam dubur secara hati-hati, putar cotton swep searah jarum jam dengan terus memutar kearah yang sama sampai cotton swab keluar

Masukkan cotton swep kedalam botol kecil yang berisi media transport, gunting kelebihan lidi setinggi tutup botol.

Flambir bibir tutup botol dengan lampu spirits, kemudian tutup rapat

Beri kode pada label botol kecil berisi sampel

Masukkan kedalam coolbox

Siapkan botol kecil berisi sampel rectal swab

Ambil 2 mata ose kedalam EC Broth, dekatkan dengan lampu spiritus. Lakukan secara steril.

Eramkan dalam inkubator dengan suhu 37oC selama 1x24 jam

Bila EC broth + yang ditandai dengan kekeruhan maka dilanjutkan ke penanaman media EMB agar

Penanaman dilakukan dengan cara tuang : ambil 1 ml kuman dengan pipet steril dan masukkan kedalam petridish steril.

Tuang media EMB agar yang telah di waterbath dengan suhu 55oC 15 ml,

Putar searah jarum jam, biarkan hingga membeku.

Eramkan kedalam incubator pada suhu 37o C 1x24 jam