Nurul Wiqoyah

• Living state: Wet Mount Method Hanging drop Preparat

• Fixed state: pewarnaan

• Fiksasi:• Melekatkan spesimen pada obyek glass• Membunuh kuman tanpa merubah morfologinya• Mencegah enzym yang dapat merusak morfologi sel• Sebagai intensifier sehingga kuman mudah di cat

• Macam fiksasi:Secara phisic: pemanasan

Secara chemis: methyl/ethyl alkohol, formalin, asam asetat

•

• Sifat cat:• Mempunyai : struktur cincin benzena gugus chromofor menentukan warna cat gugus auxochrome menentukan sifat

elektrolit dissosiasi/ kemampuan membentuk salt linkages dengan protein jaringan dll.

Macam cat:

Basic dyes: garam-garam cat yang chromofor (ion-ion cat)nya kation dengan anion: Cl, SO4, asetat, oksalatex. Methylen blue, safranin, crystal violet

Acid dyes: khromofornya anion dengan kation: Na+, K+, Ca+, NH4+

Ex. Fuchsin, acid fuchsin, congo red dll

• Preparasi smear:

• Smear: lesi, exudate, darah, jaringan atau koloni kuman yang terisolir

Smear fiksasi pewarnaan

Types of stain

• Simple stains

• Differential stains

• Special stains

• General stains

Pewarnaan sederhana

• Menggunakan satu macam zat warna• Kuman terwarnai zat warna

• Ex. Methylen blue kuman berwarna biru

Safranin kuman berwarna merah

Pewarnaan negatif

• Zat warna Iodin Ink

• Kuman tidak terwarnai dengan bakcground gelap

• Kapsul jernih

Pewarnaan differensial

1. Pewarnaan Gram:

Paling umum digunakan Tehnik pengecatan diagnostik

Cat: crystal violet (primary stain) Lugol (mordan) Alkohol Safranin (counter stain)

Bakteri Gram positif purple

Bakteri Gram negatif merah

positivenegative

primary stain

mordant

decolorization

counterstain

Kuman Gram positif Kuman Gram negatif

2. Pewarnaan tahan asam ZEIHL-NEELSON METHOD

• Pewarnaan differensial untuk bakteri tahan asam kelompok kuman ycobacterium

Prinsip: tergantung pada ketahanan bakteri terhadap dekolorisasi

alkohol asam dinding sel mengandung asam mikolat yang

berikatan dengan polisakarida yang mencegah karbol fuchsin dari sel

Acid fast cells merah

Non Acid fast counter stain

• Pewarnaan kapsul

Congo Red METHOD

• MUIR’S METHOD

• Carbol Fuchsin• Ethanol• MUIR’S Mordant• Counterstain: Loeffler’s methylen blue

• ANTHONY METHOD:Crystal violet20% CUSO4

Pewarnaan khusus

Pewaranaan spora• Types:

• Moeller Modified Method Carbol Fuchsin, Ethanol, Loeffer’s Methylen Blue Vegetative cell biru, spora merah

• Pewarnaan Schaeffer fulton− Bahan malachite green, safranin− Spora kuman hijau− Vegetative cell merah− Pewarnaan Bartolomev dan Mittwer

Pewarnaan NEISSER• Zat warna Neisser AB Neisser C

Melihat granula metakhromatikGranula metakhromatik biru gelapVegetatif sel kuning coklat

• Pewarnaan flagella

• Pewarnaan Leiffson• Pewarnaan Bailey

mordan Asam tannin