PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum...

16
PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) STRUKTUR DAN FUNGSI BIOMOLEKUL LABORATORIUM BIOKIMIA PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG 2017 Protein Glukosa DNA Fosfolipid

Transcript of PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum...

Page 1: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161)

STRUKTUR DAN FUNGSI BIOMOLEKUL

LABORATORIUM BIOKIMIA PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

2017

Protein

Glukosa

DNA

Fosfolipid

Page 2: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB
Page 3: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

i

PRAKTIKUMBIOKIMIA(KI-3161)STRUKTURDANFUNGSIBIOMOLEKUL

KIMIASEMESTERI2017/2018

PENANGGUNGJAWABKULIAH(KI3161)

1. Prof.FidaMadayantiW.

2. Dr.Ihsanawati

PEMIMPINPRAKTIKUM

1. Dr.RezaAditama

PETUGASLABORATORIUM

1. DiahHadiati

2. BellaYashinta

3. DadanGunawan

Page 4: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

ii

JADWALPRAKTIKUMBIOKIMIA

Waktu KegiatandanJudulPercobaan

Mingguke-1 Penjelasanawalpraktikum1–4diLab.BiokimiaDasar

Mingguke-2 1.ReaksiUjiterhadapProteindanPemisahanProteindengancaraFraksinasi

Mingguke-3 2.PenentuanKadarProteinSecaraLowry

Mingguke-4 3.KajianStrukturFungsiProtein

Mingguke-5 4.KinetikaReaksiEnzimatis

Mingguke-6 UjianPraktikumI&Penjelasanawalpraktikum4–6diLab.BiokimiaDasar

Mingguke-7 5.ReaksiUjiKarbohidratdanReaksiUjiLipid

Mingguke-8 6.PenentuanLaktosaDalamSusu

Mingguke-9 7.PenentuanAngkaPenyabunan,NetralisasiEkivalen,danGliseroldalamMinyak

Mingguke-10 8.IsolasiDNAdariplasmiddanElektroforesisGelAgarosa

Mingguke-11 UjianPraktikumII

Mingguke-12 Akhirmasapengembaliandanpenggantianperalatan

Page 5: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

iii

ATURANUMUMLABORATORIUMBIOKIMIAPROGRAMSTUDIKIMIAFMIPA-ITB

SelamamengikutiPraktikumBiokimia(KI-3161),pesertadiwajibkanuntuk:1.Mempersiapkandiri,dengan:

1. Menggunakanjaslabdansepatutertutupselamapraktikum2. Menyiapkanjurnal/catatanpraktikumdanlaporan3. MemahamiMaterial Safety Data Sheet (MSDS) dari bahan-bahan kimia yang akan

digunakanpadapercobaansebelummemulaipraktikum4. Membawakainlap,tissuegulung,sikattabung,sabuncucicair,dankorekapi

2.Bertanggungjawabterhadapperalatanyangdigunakan:

1. Meminjamperalatangelasyangselanjutnyadisimpandilemaripraktikum2. Mengecek ulang peralatan tambahan dan mengembalikan alat-alat yang dipinjam

harian setelah selesai melakukan praktikum. Apabila tidakmengembalikan alat padasaat itu,maka alat tersebut dianggap hilang/pecah dan dimasukkan ke dalam daftaralatyangharusdigantidiakhirsemester

3. Mengganti peralatan yang hilang/pecah di akhir semester dengan menyertakan bonpembelian

3.MenjagakebersihanruangkerjadanlingkunganLaboratorium1. Menjagakebersihanalatdanmejakerja2. Meletakkanbangkudiatasmejasecaraterbaliksetelahpraktikumselesai3. Tidakmembuangbatudidihataupadatankedalamwashbak4. Membuang sampah pada tempat yang telah disediakan, terutama tissue yang

digunakanselamapraktikum5. Membuang limbah logamberat dan limbahpelarut organik pada tempat yang sudah

disediakan6. Mematikankeranairdanapi/gassetelahselesaidigunakan7. Menanyakan hal-hal mengenai keselamatan dan keamanan kerja di lab kepada

ASISTEN,PETUGASLABatauPEMIMPINPRAKTIKUMjikaadakeraguan

Page 6: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

iv

ATURANKHUSUSPRAKTIKUMBIOKIMIAKI-3161(StrukturdanFungsiBiomolekul)

SelamamengikutiPraktikumBiokimia(KI-3161),pesertadiwajibkanuntuk:1.Datangtepatwaktu,yaituPukul08.00(shiftPAGI)atauPukul13.00(shiftSIANG)

1. Setiap keterlambatan berakibat pengurangan nilai praktikum hingga tidak bolehmengikutipraktikum

2. Tanpajas labdanjurnalyangtelahditulis,praktikantidakdapatmengikutipercobaansaatitu

3. PengecualiandimungkinkandenganijinPemimpinPraktikum

2.Mengerjakanseluruhmodulpercobaandengantertib 1. Jikapercobaanmemerlukan tahapandanwaktuyangpanjang,masing-masingasisten

akanmembagipraktikankedalamsub-subkelompok2. Masing-masingpraktikanmencatatseluruhhasilpercobaandijurnalnya3. Setiap praktikan wajib membuat laporan yang berisi pendahuluan, hasil, dan

pembahasandandikumpulkankeasistenpadahariyangsama4. Penggunaankomputer/notebookhanyapadasaatanalisishasilpercobaan

3.Hak-hakPraktikan

1. Setiappraktikanberhakmengerjakansetiapmodulpercobaan,tetapijikaperalatandanzat-zat kimia terbatas,modulpercobaandilaksanakanolehbeberapaorangpraktikansecarabersama-sama

2. Masing-masing praktikan berhakmendapatkan penjelasanmengenai percobaan yangsedangdikerjakandariasistenataupemimpinpraktikum

3. Hasil tesawalsetiappercobaanakandikembalikankepraktikansetelahdikoreksidannilainyadicatatkedalamkartuBIRU

4. TespraktikumIyangmencakuppercobaan1–4dantesakhiryangberisimateri-materipercobaan5–8,jugaakandikembalikankepraktikan

Page 7: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

v

DENAHLABORATORIUMBIOKIMIA

DANZONAEVAKUASIDARURAT

GambarDenahLaboratoriumBiokimiaDasar InstitutTeknologiBandungProgramStudiKimiadan

ZonaEvakuasiDaruratnya

Meja 7

Meja 8

Meja 6

Meja 5

Meja 4

Meja 3

Meja 2

Meja 1

Ruang Asisten Ruang

Analis & Gudang

EXIT

EXIT

W

E

Pintu Utama

Meja 7

Meja 8

Meja 6

Meja 5

Meja 4

Meja 3

Meja 2

Meja 1

Ruan

g K

epal

a Lab

. Bi

okim

ia

Lab.

Bio

kim

ia

Kom

puta

si Ruang Asisten

Ruang Analis & Gudang

Ruan

g A

sam

Ruang Asam

Page 8: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

vi

PANDUANPENGGUNAAN HAZARDOUSMATERIALSIDENTIFICATIONSYSTEM

Hazardous Identification System adalah suatumetodeuntukmengidentifikasi potensi bahayasuatubahankimiadenganmenggunakankodenumerikdanwarnaberdasarkanOSHAHazardCommunication Standard. Metode yang biasa digunakan untuk mengklasifikasikan hazardterbagimenjadiduayaituNFPA704(NationalFireProtectionAssociation)danHIMS(HazardousMaterials Identification System). Prinsip dari kedua metode ini hampir sama hanya sajaterdapat perbedaan pada cara menggambarkan risiko bahaya dan penggunaan standarhazardnya. PadaNFPA704, bahayadigambarkandenganbelah ketupatberwarna sedangkanpadaHIMSdigunakanbarberwarnadankodeangkadarinolsampaiempat.

(a) (b)

GambarHazardousIdentificationSystemuntukNFPA(a)danHIMS(b) NFPAWarna biru di sebelah kiri menandakan risiko kesehatan. Warna Merah di bagian atasmerupakanketeranganmengenaitingkatmudahmenyalanyasuatubahandanwarnakuningdisebelah kuning memberikan informasi mengenai tingkat reaktivitas bahan kimia tersebut.Proteksi personal sendiri diberikan pada warna putih di bagian paling bawah. Setiap warnapadaHazardousIdentificationSystemcaraNFPAinimemilikikodenumerikyangmenunjukkantingkatan-tingkatantertentu. HIMSPadaHazardousIdentificationSystemcaraHIMS,bolehdikatakantidakterlaluberbedadenganNFPAhanyasajapenggambaranmasing-masingkategorinyadisusunberdasarkankolom-kolomberwarna.Kolompertamaadalahkolomrisikokesehatandandilanjutkandengankolomkeduayangberisikaninformasitingkatmudahmenyalanyasuatubahankimia.Kolomketigaberwarnaoranyeberisikan informasi reaktivitas dan terakhir kolomberwarnaputih berisikan informasialat kelengkapan untuk proteksi diri. Sama dengan NFPA, HIMS ini jugamenggunakan kodenumerikuntukmemberikaninformasimasing-masingkolom.

Page 9: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

vii

KodeNumerikHazardousIdentificationSystemBiru/KesehatanKodeAngka Keterangan

0 Tidakadaresikosignifikanbagikesehatan1 Iritasiataucederaringanmungkin2 Cederasementaraatauminordapatterjadi3 Kemungkinan besar cedera kecuali dilakukan pengobatan medis

dengansegera4 Mengancam jiwa, kerusakan besar atau permanen dapat dihasilkan

darioverexposurestunggalatauberulangMerah/KemudahanmenyalaKodeAngka Keterangan

0 Bahanyangtidakakanterbakar1 Bahan yang harus dipanaskan sebelum pengapian terjadi. Termasuk

cairan,padatandanpadatansetengahmemilikititiknyaladiatas93°C2 Bahan yang harus dipanaskan atau terkena suhu lingkungan yang

tinggisebelumpengapianakanterjadi.Termasukcairanyangmemilikititiknyalapadaataudiatas38°C),tetapidibawah93°C

3 Dapat menyala hampir di semua kondisi suhu normal. Termasukcairan yangmudah terbakar dengan flash point di bawah23 °C dantitikdidihdiatas38 °C, sertacairandengan flashpointantara23 °Cdan38°C

4 Gas yangmudah terbakar, atau cairan yangmudah terbakar sangatfluktuatifdenganflashpointdibawah23°C,dantitikdidihdibawah38°C.Bahandapatmenyalasecaraspontandenganudara

Kuning/ReaktivitasKodeAngka Keterangan

0 Bahan yang biasanya stabil, bahkan di bawah kondisi api, dan tidakakanbereaksidenganair,polimerisasi,membusuk,menguap,ataudiribereaksi.Tidakeksplosif

1 Bahanyangbiasanyastabiltetapidapatmenjaditidakstabil(bereaksisendiri)padasuhutinggidantekanantertentu.Bahandapatbereaksitidak kuat air atau mengalami polimerisasi berbahaya dengan tidakadanyainhibitor

2 Bahanyangtidakstabildandapatmengalamiperubahankimiapadasuhudantekanannormaldenganrisikoledakanrendah.Bahandapatbereaksi hebat dengan air atau membentuk peroksida setelahterpaparudara

3 Bahan yangmemungkinkanmembentuk ledakan apabila bercampurdengan air sangat eksplosif apabila ada sumber inisiasi kuat. Bahan

Page 10: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

viii

dapat terpolimerisasi, membusuk, bereaksi sendiri, atau mengalamiperubahankimialainnyapadasuhudantekanannormaldenganrisikoledakansedang

4 Bahan yang dapat segera bereaksi dengan air (eksplosif),terpolimerisasi,ataubereaksisendiripadasuhudantekanannormal

Putih/ProteksipersonalKodeAngka Keterangan

0 Bahayaminimal1 Agakberbahaya2 Cukupberbahaya3 Berbahaya4 Sangatberbahaya

GambarAlatkelengkapanproteksidiri

Page 11: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

1

PERCOBAAN1REAKSIUJITERHADAPPROTEINDAN

PEMISAHANPROTEINDENGANCARAFRAKSINASIAMONIUMSULFAT

PENDAHULUANProteinadalahkomponenyangterdapatdiberbagaijaringanmanusia,hewan,tanaman,dandidalamsel-selmikroorganisme.Proteinmemilikifungsisebagaiarsitektursel,katalis,pengendalimetabolisme,proseskontraktil,dansenyawayangpentingdalamsistim imundan regenerasisel.Dengandemikian,proteinberkaitaneratdenganhampirsemuaaktivitasfisiologismakhlukhidup. Untukmemahami fungsi biologi suatu protein, maka terlebih dahulu harus dipelajaristrukturproteintersebut.Secara kimiawi, protein adalah suatu polimer asam amino. Hidrolisis lengkap proteinmenghasilkan campuran 20—22 macam asam amino. Struktur protein dibagi dalam empatkelas: primer, sekunder, tersier, dan kuartener. Keempat struktur protein pada dasarnyadibedakanatasjenisdanjumlahikatan/interaksikimia.Strukturprimerhanyaterdiridarisatujenisikatan,yaituikatankovalenyangmenghubungkangugusaminodankarboksilantarasamaminoataudisebutjugasebagaiikatanamida/peptida(Gambar1.2).Olehkarenaitu,strukturprimermengandunginformasiurutanasamaminoyangmenyusunsuatuprotein.

Gambar1.1.IkatanpeptidaIkatankimiayangterdapatpadastruktursekunderadalah ikatanyangterdapatpadastrukturprimer (kovalen) dan ikatan hidrogen antara oksigen karbonil dan hidrogen amida (C=O---H―N).Ikatanhidrogeniniterbentukmenurutpolayangteratursehinggamembentukstrukturyanguniksepertiα-heliksdanlembaran-β.Struktur tersier sudahmemiliki strukturyang lengkap.Padastruktur jenis ini,elemen-elemenstruktursekunderdikemaskedalambentuktertentu.Dalampengemasannya,berbagaiikatandaninteraksikimiadilibatkan,sepertiikatansulfidaantarasamaminosistein,ikatanhidrogen,interaksi ionik antar gugus fungsi yang terionisasi, interaksi hidrofobik dan hidrofilik, dankemungkinan juga terdapat ikatan kovalen koordinasi, seperti pada metaloprotein. Semuaikatan maupun interaksi-interaksi kimia berperan sebagai penstabil, di samping membentukstrukturtersier. Struktur terakhir adalah struktur kuartener yang terbentuk pada beberapa protein yangmemilikilebihdarisatusub-unit.Padastrukturkuartenerterjadiinteraksiantarstrukturtersierproteinmembentuk suatu agregat yangmemiliki fungsi biologi tertentu. Ikatan yang terlibatbiasanya non-kovalen dan kebanyakan ikatan hidrofobik antar daerah non-polar pada

Page 12: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

2

permukaan molekul protein. Haemoglobin, sebagai contoh, terdiri dari empat rantaipolipeptida(sub-unit),α,α',βdanβ'.Seluruhsub-unitmembentukhaemoglobintetrameryangmemiliki fungsi yang lebih efektif dalam mentransport oksigen dibandingkan haemoglobinmonomer.Penambahan garam pada konsentrasi rendah dapatmeningkatkan kelarutan protein (saltingin), tetapi protein akan mengalami presipitasi garam pada konsentrasi tinggi (salting out)(GambarII.1).Garamyangbiasadigunakanadalahamoniumsulfat,sodiumsulfat,dansodiumklorida.Endapanyangterbentukdapatdilarutkankembaliproteintidakmengalamidenaturasi.

Mekanismesaltingoutdidugaterjadimelaluidehidrasiproteinakibatpenambahangaram.Iongaramdapatmenarikmolekulairyangmelarutkanproteinsehinggaproteinmenjaditidaklarut.Dalam percobaan ini akan dilakukan pemisahan protein dengan cara penambahan garamamoniumsulfatjenuh.

Gambar1.2.Kelarutankarboksihemoglobinpadaberbagaikonsentrasiion

Padapercobaaniniakandipelajaricaraidentifikasiproteindenganmemanfaatkanikatanyangkhas pada protein, yaitu ikatan peptida dengan uji biuret dan juga akan diamati pengaruhperubahan fisik, seperti suhu dan pH serta penambahan zat-zat kimia terhadap strukturprotein.Selain itu,padapercobaan ini jugaakandipelajarisalahsatucarauntukmemisahkanproteindenganmenggunakanfraksinasiamoniumsulfat.

Perhatian: Beberapa percobaan berikut melibatkan pemanasan reaksi di inkubator-air mendidih. Berhati-hatilah terhadap uap atau permukaan yang panas.

Page 13: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

3

PERCOBAAN1.UjiBiuretBiuretdihasilkandenganmemanaskanureapadasuhu±180ºC.

Urea Biuret

Gambar1.3ReaksiyangterlibatdalamujiBiuretDalamlarutanbasa,biuretmemberikanwarnavioletdenganCuSO4.Reaksiinidisebutdenganreaksi biuret, kemudian terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus C=O dan N—H dari rantaipeptida dalam suasana basa. Dipeptida dan asam-asam amino (kecuali histidin, serin, dantreonin)tidakmemberikanhasilyangpositif. Bahan-bahan:

• NaOH2,5N• larutanalbumintelur(1:5)• CuSO40,01M

Prosedur:

1. Siapkan1buahtabungreaksiyangbersihdankering.Masukkan3mLlarutanalbumintelur(1:5).

2. Tambahkan1mLNaOH2,5Ndanaduk.3. Kemudian tambahkan pula setetes CuSO4 0,01 M ke dalam campuran. Aduk

campuran,jikatidaktimbulwarna,tambahkanlagisetetesatau2teteslarutanCuSO4.4. Catatpengamatananda.5. Buanglah larutan yang mengandung logam berat ke dalam wadah berlabelkan

“LimbahLogamBerat”(dilemariasam).Cucilahtabungreaksidengansabundanbilasdenganairsebanyaktigakalidankeringkan.

Pertanyaan:

1. Warnaapayangterbentuk?2. MengapaharusdihindarkanpenambahanlarutanCuSO4berlebih?3. Mengapagaramamoniummenggangguujibiuret?4. Sebutkanduamacamzatlainselainproteinyangmemberikanujibiuretpositif?

2.PengendapandenganlogamBahan-bahan:

• larutanalbumintelur(1:5)• HgCl20,2M

• Pbasetat0,2M

Page 14: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

4

Prosedur:1. Siapkan2buahtabungreaksiyangbersihdankering,beri label:HgCl2danPb-asetat.

Masukkan3mLlarutanalbumintelur(1:5)kemasingmasingtabung. 2. Tambahkan 5 tetes larutan HgCl20,2M atau Pb-asetat 0,2M ke tabung reaksi yang

sesuai.3. Catatpengamatananda.4. Buanglah larutan yang mengandung logam berat ke dalam wadah berlabelkan

“LimbahLogamBerat”(dilemariasam).Cucilahtabungreaksidengansabundanbilasdenganairsebanyaktigakalidankeringkan.

Pertanyaan:

1. Apayangdapatandaamatidarireaksidiatas?2. TerangkanmengapaputihtelurdigunakansebagaipenawarkeracunanPbdanHg?

3.PengendapandengangaramApabilaproteinmengandunggaram-garamanorganikdalamkonsentrasitinggi,makakelarutanprotein akan berkurang sehingga mengakibatkan terjadinya proses pengendapan protein(presipitasi). Secara teori, presipitasi protein terjadi karena kemampuan ion garam untukterhidrasisehinggaberkompetisidenganmolekulproteindalammengikatair. Bahan-bahan:

• larutanalbumintelur(1:5)• larutan(NH4)2SO4• reagenMillon• reagenuntukujiBiuret

Prosedur:Jenuhkan 5 mL larutan albumin telur (1 : 5) dengan amonium sulfat. Untuk pekerjaan ini:pertama-tamatambahkansedikitgaramamoniumsulfatkedalamlarutanprotein,adukhinggamelarut.Tambahkan lagi sedikitamoniumsulfatdanaduk lagi, lakukanterussehinggagaramtidak akan larut lagi. Setelah larutan jenuh, saring dan uji kelarutan endapan di dalam air.SelanjutnyaujiendapandenganreagenMillondanujilarutanfiltratdenganreagenBiuret.Pertanyaan:Terangkanhasil-hasilyangdiperoleh!4.PengaruhpHterhadapProteinBahan-bahan:

• larutanalbumintelur(1:5)• HCl0,1M• buferasetatpH4,71M• NaOH0,1M

Page 15: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

5

Prosedur:

Perlakuan 1 2 3 4

Larutanalbumin 9mL 9mL 9mL 9ml

BuferasetatpH4,71M - - 1mL -

HCl0,1M 1mL - - -

NaOH0,1M - 1mL - -Pertanyaan:

1. Sifatfisikproteinapakahyangmempengaruhikelarutanproteinpadapercobaanini?2. Perubahansifatkimiaapakahyangberhubungandengandenaturasitelur?

5.PemisahanproteindengancarafraksinasiamoniumsulfatAlat:• Tabungreaksi• Batangpengaduk• Gelaskimia• SentrifugaBahan:• Garamammoniumsulfat• Larutanprotein• BuffertrispH720mM• TabungselofanProsedurA.Fraksinasilarutanproteinputihtelurdenganpenambahan(NH4)2SO4jenuh

1. Siapkan5mllarutanproteinputihtelur.2. Tambahkangaramamoniumsulfathinggamencapai20%jenuh(11,4gamoniumsulfat

per100mllarutan) 3. Adukcampurandanbiarkanselamalimamenitpadatemperaturkamar 4. Lakukansentrifugasiselama15menit 5. Pindahkansupernatankedalamtabungbaru.(endapanyangterbentukdisebutdengan

fraksi0-20%ammoniumsulfatjenuh)6. Larutkanendapandengan5mlbuffertrispH7 7. Tambahkan garam ammonium sulfat ke dalam supernatant dari tahap 5 hingga

mencapai50%jenuh(18,9gammoniumsulfatper100mLlarutan) 8. Adukcampurandanbiarkanselamalimamenitpadatemperaturkamar 9. Lakukansentrifugasiselama15menit 10. Pindahkansupernatankedalamtabungbaru.(endapanyangterbentukdisebutdengan

fraksi20-50%ammoniumsulfatjenuh)11. Larutkanendapandengan5mLbuffertrispH7 12. Tambahkan garam ammonium sulfat ke dalam supernatant dari tahap 11 hingga

mencapai70%jenuh(13,7gammoniumsulfatper100mllarutan) 13. Adukcampurandanbiarkanselamalimamenitpadatemperaturkamar

Page 16: PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA (KI-3161) - · PDF fileMinggu ke-1 Penjelasan awal praktikum 1–4 di Lab. Biokimia Dasar ... Minggu ke-11 Ujian Praktikum II ... PROGRAM STUDI KIMIA FMIPA-ITB

6

14. Lakukansentrifugasiselama15menit 15. Pindahkansupernatankedalamtabungbaru.(endapanyangterbentukdisebutdengan

fraksi50-70%ammoniumsulfatjenuh). 16. Larutkanendapandengan5mlbuffertrispH717. Larutkan dialysis terhadap setiap fraksi ammonium sulfat yang dihasilkan dengan

menggunakanbuffertrispH7selamasatumalam B.AnalisisSDS-Page

1. LakukananalisaproteinsetiapfraksiammoniumsulfatyangdiperolehdenganmetodeSDS-Page

TUGAS

1. Lakukananalisisprofilproteinsetiapfraksiamoniumsulfat!2. Tentukanberatmolekulproteindominanpadasetiapfraksiamoniumsulfat!

TUGASPENDAHULUAN

1. GambarkanstruktursenyawakompleksantaraCu2+denganrantaipeptida2. Mengapalogamdapatmenggendapkanprotein?3. Apayangdimaksuddengansaltingindansaltingout?4. Unsur-unsurkimiaapa sajayangbiasaadadidalamprotein tetapi tidakadadidalam

lipiddankarbohidrat?5. Jelaskanapayangdimaksuddengandenaturasiprotein! 6. Jelaskan4faktoryangdapatmenyebabkanproteinterdenaturasi! 7. Jelaskanmengapagaramamoniumsulfatdapatdigunakanuntukpemurnianprotein!

DAFTARPUSTAKABollag,D.M.,Rozycki,M.D.,andEdelstein,S.J.,1996,ProteinMethods,2nded., JohnWiley&

Sons.Inc.Pub.NewYork Boyer R.F., 1993, Modern Experimental Biochemistry, 2nd ed., The Benyamin Cummings

PublishingCompany,Inc.California Harrow,B.”LaboratoryManualofBiochemistry”,Ed.V,1960Mathews, C.K., Holde, K.E. (1990). Biochemistry, the Benjamin/Cummings Publishing Co.,

RedwoodCity,USA.Stryer,L.,1998,Biochemistry,4thed,W.H.FreemanandCompany,NewYork.