Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

download Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

of 23

Transcript of Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    1/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 1 | P a g e

    PENUNTUN PRAKTIKUM

    BIOKIMIA

    MUH. FAJRI RAMADHAN

    A1C4 13 29

    LABORATORIUM JURUSAN PENDIDIKAN KIMIA

    FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

    UNIVERSITAS HALU OLEO

    KENDARI

    2016

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    2/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 2 | P a g e

    BAGIAN I

    PEMBUATAN PEREAKSI

    1. Pee!"#$ M%&&$#'(

    Timbang 5 g -naftol, masukkan dalam tabu takar 50 ml. Larutkandengan sedikit alkohol sambil diaduk dengan batang pengaduk.Setelah larut, cukupkan volumenya dengan alkohol hingga 50 ml.

    2. Pee!"#$ B$!& O#$)%&

    Timbang 0,5 g orcinol besi !!!" klorida, masukkan dalam tabu takar #0ml. Larutkan dengan sedikit $%l pekat sambil diaduk dengan batang

    pengaduk. Setelah larut, cukupkan volumenya dengan $%l pekathingga #0 ml.

    %atatan & ker'a harus dilakukan di dalam lemari asam danmenggunakan masker.

    3. Pee!"#$ Se&$*!)%+

    %ampurkan (,5 ml resorsinol 0,5) dengan #,5 ml $%l, masukkandalam tabu takar #0 ml. Setelah larut, cukupkan volumenya dengan$%l * + hingga #0 ml.

    %atatan & ker'a harus dilakukan di dalam lemari asam dan

    menggunakan masker.4. Pee!"#$ B!,%e-

    Timbang *,*5 g ristal %u!!"asetat ke dalam #00 ml asam asetat #).

    Pe/!!) &!!) !#! !#e! 1

    $itung volume untuk # gram asam asetat glacial dengan rumus & m/v. nilai dapat dilihat pada label botol asam asetat glacial". ipetse'umlah volume yang sesuai untuk asam asetat glacial danmasukkan dalam labu takar #00 ml. cukupkan volumenya dengana1uadest hingga tanda tera.

    %atatan & ker'a harus dilakukan di dalam lemari asam danmenggunakan masker.

    . Pee!"#$ S'($+

    Timbang # g natrium metabisul2t, masukkan dalam labu takar.Timbang 0,# g larutan p-rosanilin $%l dan dan pipet # ml $%l pekat,masukkan ke dalam labu takar tsb. %ukupkan volumenya dengana1uadest hingga tanda tera.

    6. Pee!"#$ T%&&e)#

    Larutan 3 & timbang # g 3g4(, larutkan dalam #0 ml a1uadest.

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    3/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 3 | P a g e

    Larutan 6 & timbang ( g 4a$ ristal menggunakan kaca arlo'i hati-hati, bersifat korosif", larutkan dalam #0 ml air.

    7ika pereaksi akan dipakai, campurkan larutan 3 dan larutan 6 denganvolume yang sama ke dalam tabung reaksi dan tambahkan larutanammonia encer tetes demi tetes sampai semua 3g8 larut.

    . Pee!"#$ Fe(&$)5

    Larutan 9ehling 3 & timbang *,:8; g ristal %u!!"S

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    4/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 4 | P a g e

    as liter

    0,0# 0,;:

    0,08 #>,;

    0,05 ,8 g%8$(84a.($8 dalam #000 ml"

    %ara membuat & @ ml larutan 3 A y ml larutan 6, encerkan hingga #00ml.

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    5/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 5 | P a g e

    B y h B y p$

    (,* 80,0 (0,0

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    6/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 6 | P a g e

    BAGIAN II

    PROTEIN DAN ASAM AMINO

    A. UJI SIFAT SIFAT PROTEIN

    elarutan protein dalam suatu cairan dipengaruhi oleh berbagaifaktor, antara lain pada p$ isolistrik, kebanyakan protein sangat mudahuntuk diendapkan. Sebaliknya pada pada p$ diatas atau diba?ah titikisolistrik kelarutan protein sangat meningkat. Sementara itu kelarutanprotein akan meningkat dalam selang suhu tertentu, yaitu kira-kira 0o% D

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    7/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 7 | P a g e

    7enuhkan #0 mL larutan protein dengan amonium sulfat. Gntuk peker'aanini yang harus dilakukan & pertama tambahkan sedikit dari garamtersebut. 3duk hingga larut kemudian tambahkan sedikit amonium sulfatdan aduk secara terus menerus sehingga sedikit garam tertinggal tidak

    larut" apabila larutan telah 'enuh, kemudian saring. G'i kelarutan dariendapan di dalam air dan u'i endapan dengan reagen +illon, sedangkan2ltratnya dengan u'i 6iuret.

    2. UJI KOAGULASI

    6ahan & asam asetat # + larutan protein

    =eagen +illon air

    3lat yang digunakan sesuai dengan kebutuhan dalam prosedur

    P%#e-Tambahkan 8 tetes asam asetat # + kedalam 5 ml. Larutan proteinletakkan tabung reaksi dalam air mendidih selama 5 menit. 3mbilendapan dengan batang pengaduk. G'i kelarutan endapan di dalam airdan u'i endapan dengan reagen +illon.

    Pe!);!!) !)!U8$ M%&&$#'(

    +asukkan 5 mg cuplikan ke dalam tabung reaksi yang berisi 0,5 ml airdan tambahkan 8 tetes larutan #0) 8-naftol dalam pealrut etanol ataukloroform. +asukkan # ml asam sulfat pekat ke dasar tabung reaksidengan menggunakan pipet tetes sedemikian rupa pipet tetes pan'ang"hingga asam sulfat membentuk lapisan yang terpisah dari lapisan a?al.7mika dalam cuplikan terdapat karbohidrat, maka akan terbentuk cincinber?arna merah pada permukaan lapisan ba?ah. Narna merah akansegera berubah dan larutan men'adi ber?arna ungu tua. Setelah

    didiamkan selama 8 menit, encerkan campuran tsb dalam 5 ml air. 7ikadidalam cuplikan terdapat kerbohidrat, maka akan ter'adi endapanber?arna ungu.

    U8$ B$!& O#$)%&

    +asukkan 0,8 ml 8 D ( tetes" larutan cuplikan #)" ke dalam tabungreaksi. Tambahkan perlahan-lahan 8 ml pereaksi orsinol. ocok danpanaskan pada penangas air. %atat perubahan ?arna yang ter'adisetelah pemanasan selama #5 menit. Narna biru kehi'auan menun'ukkanu'i positif.

    U8$ Se&$*!)%+

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    15/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 15 | P a g e

    +asukkan 8 ml pereaksi Seli?anoJ dalam tabung reaksi dan tambahkan0,8 ml 8-( tetes" cuplikan #). %ampuran dikocok dan dipanaskan di ataspenangas air. $itung ?aktu yang diperlukan untuk ter'adinya perubahan?arna. 7ika perubahan ?arna memerlukan ?aktu di atas #0 menit, u'i

    dinyatakan negative.U8$ B!,%e-

    anaskan tabung reaksi yang berisi # ml pereaksi 6arfoed dan # mllarutan encer cuplikan alam penangas air. 7ika terdapat endapan merahdari %u8 selama 8 menit berarti dalam cuplikan terdapat monosakarida.Misakarida pada pemaanasan selama #0 menit 'uga akan menun'ukkanu'i positif. $al ini ter'adi karena disakarida akan terhidrolisis men'adimonosakarida dalam suasana asam".

    U8$ F'(#$)

    %ampurkan 8 ml pereaksi 9uchsin dan # tetes cuplikan ke dalam tabungreaksi. ocok dan amati ?arna yang ter'adi setelah (-< menit.

    U8$ S'($+

    %ampurkan 8 ml pereaksi SchiJ dengan 8 tetes cuplikan 0,05 g" dandiamati ?arna yang ter'adi.

    U8$ T%&&e)#

    +asukkan 8-( tetes 0,05 g" cuplikan ke dalam tabung reaksi dantambahakan 8-( ml pereaksi Tollens. 7ika tidak ter'adi kaca perak, dapatdicoba dengan memanaskan campuran tsb. Terbentuknya kaca perak

    menun'ukkan positif adanya gugus aldehid.

    U8$ Fe(&$)5

    %ara # & %ampur 8 tetes 0,05 g" cuplikan dan 8-( ml larutan 9ehling.anaskan dengan penangas air selama (-< menit. 3mati endapan yangter'adi.

    %ara 8 & anaskan 8-( ml larutan cuplikan hingga mendidih lalu teteskanpereaksi 9ehling beberapa ml. hasil dinyatakan positif 'ika ?arna biru daripereaksi 9ehling hilang dan terbentuk endapan merah atau kuning dari%u8.

    U8$ Be)e-$'

    %ampurkan 5 ml pereaksi 6enedict dengan 0,< ml larutan 8)karbohidrat. anaskan selama 8 menit dan setelah dingin amatiperubahan yang ter'adi. 7ika di dalam cuplikan tidak terdapat gulapereduksi maka larutan 'ernih, sedangkan 'ika terdapat gula pereduksiakan terbentuk endapan %u8.

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    16/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 16 | P a g e

    BAGIAN IV

    EN@IM

    TEORICnEim merupakan kelompok protein yang berperan penting dalam prosesaktivitas biologi. CnEim berfungsi sebagai katalisator dalam sel dansifatnya sangat khas. Malam 'umlah sangat kecil enEim dapat mengaturkecepatan reaksi tertentu sehingga dalam keadaan normal tidak terdapatpenyimpangan-penyimpangan hasil akhir reaksinya. CnEim akankehilangan aktivitas akibat panas, asam, atau basa kuat, pelarut organik,atau apa sa'a yang menyebabkan denaturasi protein.

    A. UJI UREASE

    +embuktikan adanya enEim urease dalam suspensi kedelaiSubstrat urea oleh enEim urease dalam suspensi kedelai akan diuraikanmen'adi amonia 4$(0 dan gas %8. Senya?a amonia yang dihasilkanbersifat basa sehingga p$ larutan men'adi naik dan dapat ditun'ukkandengan menggunakan indiokator . 3ktivitas enEim urease dirusak olehadanya inhibitor logam berat seperti $g8A atau b8A dan rusak padapemanasan #00o%.3lat dan bahan &Suspensi kedelai larutan urea # )Larutan p$ & ;,( D #0" larutan $g%l8#)3lat pemanas tabung reaksi

    ipet tetesP%#e- 5 mL

    (. +asukkan $ sebanyak 85 mL

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    21/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 21 | P a g e

    ##. 6iarkan 2ltrat men'adi dingin agar diperoleh kristal yang baikbila asam lemak sudah mengkristal sempurna saring dan keringkankristal diantara kertas saring. emudian biarkan pada suhu kamar.

    D. UJI KETENGIKAN KREIS

    3lat dan bahan &

    +inyak 6imoli larutan Roroglusinol dalam eter

    6eaker glass oven

    Pe/!!) $);!" e)5$"

    +asukkan minyak yang diduga mempunyai ikatan tidak 'enuh ke dalambeker gelas. anaskan minyak tersebut pada suhu #50o% selama # 'amdan 8 'am. ada selang ?aktu tersebut amati bilangan peroksida,bilangan asam, bilangan iod dan u'i reis.

    U8$ Ke$#

    e dalam minyak sebanyak # ml ditambah 8 ml asam klorida danselan'utnya dikocok dengan larutan encer Roroglusinol dalam eter. 7ikalarutan ber?arna merah 'ambu menun'ukkan minyak mulai tengik.

    E. UJI KOLESTEROL

    elompok lipid seperti fosfolipid dan sterol merupakan komponenpenting yang terdapat dalam membrane semua mahluk hidup.olesterol adalah sterol utama yang banyak terdapat di alam. Gntukmengetahui adanya sterol dan kolesterol dapat dilakukan u'i kolesterolmenggunakan reaksi ?arna. Salah satunya adalah reaksi Lieberman-6urchard. $asil positif menun'ukkan ?arna yang berubah dari merah,kemudian biru dan hi'au. Narna hi'au yang ter'adi sebanding dengankonsentrasi kolesterol dalam bahan.3lat dan bahan &olesterol 0,5) dalam kloroform minyak kelapa

    3sam asetat anhidrat minyak ikanloroform $8S

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    22/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 22 | P a g e

    *. 3mati perubahan ?arna yang ter'adi.

    Laboratorium Pendidikan Kimia FKIP UHO

  • 7/25/2019 Penuntun Prakt Biokimia Fkip 2014

    23/23

    Penuntun Praktikum Biokimia, Program Studi Pendidikan Kimia FKIP UHO 23 | P a g e

    DAFTAR PUSTAKA

    #. $arro?, 6. #:*0, Laboratory +anual of 6lochemistry, Cdisi K

    8. Soedarmo, 7., 3. Firindra, 3. +anaf, +. $a?ab, C.ustaman, +.6intang, Sulistiayani, #:;;, enuntun raktikum 6iokimia, 3G !6,6ogor.

    (. Suhartono, +T. #:;:, etun'uk Laboratorium Masar D Masar6iokimia, 3G !6, 6ogor