pemeriksaan mpn.docx

8/10/2019 pemeriksaan mpn.docx

1/12

BAB I

PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG

Standar Air Minum, menurut standar WHO semua sampel tidak boleh mengandung E. coli

dan sebaiknya juga bebas dari bakteri coliform. Standar WHO dalam setiap tahun, 95% dari

sampel-sampel tidak boleh mengandung coliform dalam 100 ml, tidak ada sampel yang

mengandung E. coli dalam 100 ml, Tidak ada sampel yang mengandung coliform lebih dari 10

dalam 100 ml, tidak boleh ada coliform dalam 100 ml dan dua sampel yang berurutan

(AOAC,2000).

Bakteri coliform adalah golongan bakteri intestinal, yaitu hidup dalam saluran pencernaan

manusia. Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih

tepatnya, sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran bakteri

patogen. Penentuan coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah koloninya

pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliformjauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain (Dad,2000).

Contoh bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, coliform

adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin

baik. Berdasarakan latar belakang itulah maka praktikum ini penting untuk dilaksanakan.

Hasil pemeriksaan MPN Coliform metode tabung ganda dinyatakan dengan jumlah perkiraan

terdekat kuman golongan coli yang terdapat dalam 100 ml contoh air atau 100 gr contoh

makanan (MPN).

Untuk contoh air yang bukan air minum, biasanya pemeriksaan rutin laboratorium, hanya

bertujuan untuk mengetahui derajat kontaminasi dari bekteri atau untuk menentukan sumber

polusi.Pemeriksaan MPN Coliform metode tabung ganda didasarkan bahwa bakteri golongan coli

dapat meragikan laktosa, membentuk asam atau gas. Untuk itu digunakan metode ini :

1. Tes Perkiraan (Presumtive Test)

Perbenihan yang diperlukan adalah lactose broth yang single strength (SS) dan Double

Strength (DS). LBDS dipakai untuk pengenceran yang lebih besar (10 ml) dan LBSS dipakai

untuk pengenceran yang lebih kecil ( 1 ml dan 0,1 ml). Sedangkan jumlah tabung yang dipakai

ada bermacam-macam kombinasi, seperti:

No. Jumlah Tabung Volume Air

1. 5 tabung LB DS

5 tabung LB SS

5 tabung LB SS

10 ml contoh air

1 ml contoh air

0,1 ml contoh air

2. 5 tabung LB DS

1 tabung LB SS

1 tabung LB SS

10 ml contoh air

1 ml contoh air

0,1 ml contoh air

3. 3 tabung LB DS 10 ml contoh air


2/12

3 tabung LB SS

3 tabung LB SS

1 ml contoh air

0,1 ml contoh air

Sesudah masing-masing tabung diisi dengan contoh air dengan menggunakan pipet ukur

secara aseptis, kemudian disimpan kedalam lemari pengeram (incubator) dengan suhu 35-37oC

selama 1 x 24 jam. Tiap-tiap tabung yang menunjukkan peragian (keruh) dan adanya gas, maka

tabung itu diperkirakan mengandung kuman golongan Coli, atau positif. Dari tabung ini perlu

diteruskan pada tes penegaan (Confirmatory Test).

2. Tes Penegasan (Confirmatory Test)

Pembenihan yang dipakai adalah B.G.L.B. Adapun yang diperiksa adalah semua tabung

yang positif (keruh + gas) pada Lactose Broth. Pindahkan dengan jarum ose dari tiap-tiap tabung

yang positif ke B.G.L.B kemudian masukkan ke dalam incubator 35-37oC selama 1 x 24 jam.

Tabung yang menunjukkan keruh dan gas dianggap positif. Hasil pemeriksaan pada tes

penegasan ini dapat dibaca dalam tabel PTD/MPN Coliform, sesuai dengan jumlah tabung yang

dipergunakan. Misalnya dalam tabel kita mendapatkan angka MPN = 5, ini berarti bahwa dalam

100 ml contoh air terdapat 5 kuman golongan Coli.3. Tes Lengkap (Complete Test)

Pembenihan yang dipakai adalah :

Endo agar plate atau EMB agar plate

Pepton untuk indol

Metil red

Vogas Proskauer

Citrat media

Tes ini ditunjukkan untuk menentukan jenis dari coliform misalnya E. Coli,

A.aerogenesis, E. freundii, dan lain-lain dengan melihat hasil peragian kuman (test biokimia)

pada media :

Media E. Coli A. aerogenesis

Indol

Metil red

Vogas Proskauer

Citrat

+

+

-

-

-

-

+

+

B. TUJUAN

Tujuan dari pemeriksaan MPN Coliform pada makanan dan air terutama contoh air yang

sudah mendapat pengolahan proses desinfeksi, ialah mencari atau menentukan adanya bakterigolongan Coli atau E.Coli dalam contoh makanan dan air yang diperiksa, selain itu juga untuk

mengetahui korelasi antara jumlah bakteri koliform dengan kualitas air sampel.

C. MANFAAT

Manfaat dari praktikum ini adalah parktikan mampu menganalisa kualitas air dengan metode

MPN (Most Probable Number) dengan menghitung jumlah koliform yang ditemukan.


3/12

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. LATAR BELAKANG

1. Metode MPN

Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi

(confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan


4/12

coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi sifat

fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki

sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali kebenaran adanya coliform

dengan bantuan medium selektif diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji

konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan mikroskop terhadap ciri-ciri

coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak-berspora.

(Fardiaz,1989).

Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit tumbuh

(growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming unit) dalam sampel. Namun, pada

umumnya, nilai MPN juga diartikan sebagai perkiraan jumlah individu bakteri. Satuan yang

digunakan, umumnya per 100 mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai MPN 10/g dalam

sebuah sampel air, artinya dalam sampel air tersebut diperkirakan setidaknya mengandung 10

coliform pada setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN, maka air tersebut makin tinggi

kualitasnya, dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit kepercayaan 95 persen

sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN terendah dan nilai MPN tertinggi.(FDA, 1989).

2. Bakteri Coliform

Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih

tepatnya, sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran bakteri

patogen. Penentuan coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah koloninya

pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform

jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Contoh

bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, coliform adalah

indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin baik.

(FRIEDHEIM, 2001).Banyaknya kontaminan dalam air memerlukan standar tertentu untuk menjamin

kebersihannya. Air yang terkontaminasi oleh bakteri patogen saluran cerna sangat berbahaya

untuk diminum. Hal ini dapat dipastikan dengan penemuan organisme yang ada dalam tinja

manusia atau hewan dan yang tidak pernah terdapat bebas di alam. Ada beberapa organisme

yang termasuk kategori ini, yaitu bakteri coliform (E. coli), Enterococcus faecalis, Clostridium

sp. Di Indonesia, bakteri indikator air terkontaminasi adalah E. coli.

Terdapatnya bakteri coliform dalam air minum dapat menjadi indikasi kemungkinan

besar adanya organisme patogen lainnya. Bakteri coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu faecal

coliform dan non-faecal coliform. E. coli adalah bagian dari faecal coliform. Keberadaan E. coli

dalam air dapat menjadi indikator adanya pencemaran air oleh tinja. E. coli digunakan sebagai

indikator pemeriksaan kualitas bakteriologis secara universal dalam analisis dengan alasan;

a) E. coli secara normal hanya ditemukan di saluran pencernaan manusia (sebagai flora normal)

atau hewan mamalia, atau bahan yang telah terkontaminasi dengan tinja manusia atau hewan;

jarang sekali ditemukan dalam air dengan kualitas kebersihan yang tinggi,


5/12

b) E. coli mudah diperiksa di laboratorium dan sensitivitasnya tinggi jika pemeriksaan dilakukan

dengan benar,

c) Bila dalam air tersebut ditemukan E. coli, maka air tersebut dianggap berbahaya bagi penggunaan

domestik,

d) Ada kemungkinan bakteri enterik patogen yang lain dapat ditemukan bersama-sama dengan E.

coli dalam air tersebut

Bakteri pembusuk ini dimasukkan ke dalam golongan bakteri Coliform, salah satu yang

termasuk didalamnya adalah Escherichia coli. Bakteri coliform ini menghasilkan zat ethionine

yang pada penelitian menyebabkan kanker. Bakteri-bakteri pembusuk ini juga memproduksi

bermacam-macam racun seperti Indole, skatole yang dapat menimbulkan penyakit bila berlebih

didalam tubuh.

(GAUSE, G. F. 1946).

Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air minum.

Kelompok bakteri coliform terdiri atas Eschericia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter

fruendii, dan bakteri lainnya. Meskipun jenis bakteri ini tidak menimbulkan penyakit tertentusecara langsung, keberadaannya di dalam air minum menunjukkan tingkat sanitasi rendah. Oleh

karena itu, air minum harus bebas dari semua jenis coliform. Semakin tinggi tingkat kontaminasi

bakteri coliform, semakin tinggi pula risiko kehadiran bakteri-bakteri patogen lain yang biasa

hidup dalam kotoran manusia dan hewan. Salah satu contoh bakteri patogen-yang kemungkinan

terdapat dalam air terkontaminasi kotoran manusia atau hewan berdarah panas-adalah Shigella,

yaitu mikroba penyebab gejala diare, deman, kram perut, dan muntah-muntah.

(Official Chemical Method, 1979).

Jenis bakteri coliform tertentu, misalnya E coli O:157:H7, bersifat patogen dan juga dapat

menyebabkan diare atau diare berdarah, kram perut, mual, dan rasa tidak enak badan (Dad,2000).


6/12

BAB III

PELAKSANAAN KEGIATAN

A. PELAKSANAAN PRAKTIKUMHari : Senin

Tanggal : 21 November 2011

Waktu : 08.00 - Selesai

Tempat : Lab. Kesling Poltekkes Banjarmasin

Cuaca :Cerah

B. ALAT dan BAHAN

1. ALAT

Pipet steril 1 ml dan 10 ml

Lampu spritus

Jarum ose

Kapas

Inkubator

Spidol + label

Rak tabung reaksi


7/12

2. BAHAN

LBSS

LBDS

BGLB

3. SAMPEL

Air/makanan

C. CARA KERJA/TEKNIK PEMERIKSAAN

Persiapan Sampel

Untuk sampel air dan minuman cair dapat langsung diperiksa tanpa perlu persiapan

sampel terlebih dahulu.

Untuk sample minuman yang pekat/kental dan makanan padat perlu dilakukan persiapan

sampel terlebih dahulu.

Sampel Minuman pekat/kental :

1. Memipet 10 ml sampel ml minuman pekat masukkan dalam botol yang telah berisi aquadessteril 90 ml,

2. Mengocok, dengan cara dibolak-balik beberapa kali,

3. Dengan Melakukan secara aseptis.

Sampel Makanan padat :

1. Menimbang 10 gr makanan padat masukkan dalam botol yang telah berisi 100 ml aquades steril,

2. Mengocok, dengan cara dibolak-balik beberapa kali,

3. Melakukannya secara aseptis,

4. Mendiamkan beberapa saat agar makanan mengendap.

Teknik Pemeriksaan

1. MPN Coliforma. Persumtif Test (Tes Perkiraan)

1. Menyiapkan tabung LB DS dan LB SS dan beri label sesuai dengan ragam pemeriksaan yang

digunakan sesuai dengan jenis sampel yang diperiksa,

2. Lalu dengan pipet steril 10 ml pindahkan 10 ml sampel ke dalam tabung LB DS. Dengan pipet 1

ml pindahkan 1 ml sampel kedalam tabung LB SS dan 0,1 ml kedalam tabung LB SS lainnya,

3. Kemudian tabung-tabung didalam rak digoyang, supaya sampel bercampur rata dengan media,

kemudian diberi label,

4. Setelah itu eramkan dalam incubator pada suhu 37oC selama 2 x 24 jam,

5. Kemudian tiap tabung yang keruh dan timbul gas pada tabung durham, maka menurut test

perkiraan mengandung bakteri golongan coli (positif) dan bila tidak ada gas maka test perkiraan

dinyatakan negatif,

6. Terakhir melakukan pembacaan hasil.

b. Confirmatory Test (Tes Penegasan)

1. Dari masing-masing tabung yang pada test perkiraan dinyatakan positif, ditanam masing-masing

1 ose ke dalam media BGLB,


8/12

2. Mengeramkan ke dalam inkubator pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam,

3. Melakukan pembacaan hasil.

c. Completted Test (Tes Lengkap)

Test lengkap bertujuan untuk mencari adanya E.Coli dalam sampel yang diperiksa.

1. Mengambil 1 ose cairan dari BGLB yang positif dan tanamkan pada endo agar atau EMB agar

secara zigzag atau garis lurus,

2. Mengeramkan dalam incubator selama 1 x 24 jam,

3. Apabila tumbuh koloni berwarna merah metalik pada endo agar atau koloni berwarna hijau

metalik dengan bagian tengah berwarna hitam pada EMB agar, kemudian koloni ini ditanam

pada TSI agar, SIM Medium dan citrate agar untuk memstikan adanya E. Coli.

4. Mengeramkan dalam incubator 1 x 24 jam,

5. E. coli positif apabila hasil reaksi biokimia sebagai berikut :

TSIA = +/+ {GAS(+);H2S(-)}

SIM = (-)

Citrat = (-)2. Golongan Coli Tinja

Untuk menentukan golongan coli, apakah berasal dari tinja manusia atau dari sumber lainnya

maka dipakai cara dengan menaikkan temperature pengeraman menjadi 44-46oC. Penentuan

selanjutnya sama seperti yang dilakukan untuk test lengkap.


9/12

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. HASIL

No.Jenis

SampelTanggal

Pemeriksaan

Hasil Test Perkiraan Hasil Test Penegasan NilaiMPN

ColiformE.coli

10 ml 1 ml 0,1 ml 10 ml 1 ml 0,1 ml

1.Ice Top

Ice

24-11-

20113/5 1/1 0/1 0 0 0 0

B. PERHITUNGAN1. Makanan Padat

100

Nilai MPN/100 gr = x Nilai MPN pada tabel

10

100

= x 0 = 0

10

2. Minuman Kental/Pekat

100

Nilai MPN/100 gr = x Nilai MPN pada tabel

10


10/12

100

Nilai MPN/100 gr = x 0 = 0

10

3. Minuman cair/air bersih

Nilai MPN/100 ml sama dengan nilai MPN pada tabel.

C. PEMBAHASAN

Pertama-tama kami mengusap tangan kami dan meja praktikum dengan alcohol 70% agar

steril, lalu kami memipet 10 ml sampel air top ice dengan menggunakan pipet 10 ml ke botol

yang telah berisi aquades 90 %, kemudian kami kocok, pada tes perkiraan kami menyiapkan

tabung LBDS dan LBSS yang diberi label, lalu kami memipet 10 ml sampel yang dipindahkan

kedalam tabung LBDS, lalu dengan pipet 1 ml kami pindahkan 1 ml sampel kedalam tabung

LBSS dan 0,1 ml kedalam tabung LBSS lainnya, tabung tadi diletakkan dirak dan digoyang yangkenudian diberi label, lalu dieramkan di incubator dengan suhu 37

oC selama 2 x 24 jam. Adapun

pada tiap tabung berisi tabung durham dimana setelah 2 x 24 dan diperiksa keadaan tabung

durham terisi gas maka mengandung bakteri golongan coli (+) tapi kalau tidak ada gas berarti

hasilnya negative.

Lalu melakukan tes penegasan, dimana tabung test perkiraan yang dinyatakan positif diambil

masing-masing 1 ose dan ditanam pada BGLB, dengan suhu yang sama pada incubator, lalu

eramkan selama 1 x 24 jam.

Terakhir melakukan Completted test/tes complet, yaitu kami mengambil 1 ose cairan dari

BGLB yang positif dan ditanamkan pada endo agar, lalu eramkan kembali selama 1 x 24 jam,

setelahnya dilakukan lagi pemeriksaan, namun sayang, pada pemeriksaan ini endo agar kamitidak menunjukkan adanya bakteri e.coli positif sehingga menghasilkan nilai 0.


11/12

BAB V

PENUTUP

A. KESIMPULAN

1. Pada hasil perhitungan kami menghasilkan nilai nol pada 10 ml, 0 pada 1 ml, dan 0 pada 0,1 ml,

2. Pada pemeriksaan kali ini ada beberapa metode, yaitu :

a. Tes Perkiraan (Presumtive Test)

b. Tes Penegasan (Confirmatory Test)

c. Tes Lengkap (Complete Test)

3. Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya,

sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran bakteri pathogen.

4. Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air minum.

B. SARAN

1. Dalam melakukan praktek, semuanya harus steril baik itu alat, maupun bahannya,

2. Dalam melakukan praktek, dibutuhkan ketelitian dan ketekunan yang tinggi,

3. Dalam melakukan perhitungan harus teliti, jangan sampai terjadi kesalahan.


12/12

DAFTAR PUSTAKA

http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-dengan-mpn.html

www.wikipedia.com

www.google.com

http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/
http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-dengan-mpn.htmlhttp://www.wikipedia.com/http://www.google.com/http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/http://www.google.com/http://www.wikipedia.com/http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-dengan-mpn.html

pemeriksaan mpn.docx

Documents

Transcript of pemeriksaan mpn.docx