Pemanfaatan Tepung Tempe Kedelai Sebagai Pencegah Osteoporosis, Kajian Histologi Femur Mencit...

7/25/2019 Pemanfaatan Tepung Tempe Kedelai Sebagai Pencegah Osteoporosis, Kajian Histologi Femur Mencit Ovariektomi

1/26

PROPOSAL PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

JUDUL PROGRAM

PEMANFAATAN TEPUNG TEMPE KEDELAI SEBAGAI PENCEGAHOSTEOPOROSIS, KAJIAN HISTOLOGI FEMUR MENCIT

OVARIEKTOMI

BIDANG KEGIATAN:

PKM PENELITIAN

Diusulkan oleh:

Nurul Aini Afifatus Solehah NIM 121810401033 Angkatan 2012

Arlina Mustika Sari NIM 111810401051 Angkatan 2011

Nindita Fitria Primasari NIM 121810401001 Angkatan 2012

UNIVERSITAS JEMBER

JEMBER

2015


2/26

i


3/26

ii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN PENGESAHAN PROPOSAL PKM-PENELITIAN ............ i

DAFTAR ISI................................................................................................... ii

RINGKASAN ................................................................................................. iii

BAB 1. PENDAHULUAN ............................................................................. 1

1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 2

1.3 Tujuan dan Manfaat.............................................................................. 2

1.4 Luaran yang Diharapkan ...................................................................... 2

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA.................................................................... 2

BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN ...................................................... 4

BAB 4. BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN............................................. 84.1 Anggaran Biaya..................................................................................... 8

4.2 Jadwal Kegiatan .................................................................................... 8

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 9

LAMPIRAN-LAMPIRAN ............................................................................ 11

Lampiran 1. Biodata Ketua, Anggota dan Dosen Pembimbing ....................... 11

Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan..................................................... 18

Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Kegiatan Pembagian Tugas ................. 21


4/26

iii

RINGKASAN

Osteoporosis terjadi akibat adanya gangguan metabolisme pada tulang yang

ditandai dengan pengurangan densitas, perubahan mikroarsitektur dan

peningkatan fragilitas tulang sehingga resiko fraktur tulang tersebut lebih besar(Sennang et al., 2006). Sebagian besar kasus osteoporosis melibatkan perempuan

pasca menopause yang salah satu penyebabnya adalah defisiensi estrogen (Djoko,

1997; Ang-sy, 1994).Berdasarkan analisis data resiko osteoporosis yang dilakukan

oleh Departemen Kesehatan RI bersama PT. Fonterra Brands Indonesia tahun

2006, menyatakan bahwa prevalensi osteoporosis di Indonesia mencapai 41,75%.

Artinya, setiap 2 dari 5 penduduk Indonesia beresiko terkena osteoporosis. Angka

ini lebih tinggi dari prevalensi dunia yang hanya 1 dari 3beresiko terkena

osteoporosis (Era Baru News, 2008).

Tempe merupakan makanan yang dikenal sebagai sumber gizi dan

dikonsumsi oleh mayoritas masyarakat Indonesia. Tempe terbuat dari biji kedelai

dan memiliki kandungan yang berhubungan dengan osteoporosis yaitufitoestrogen. Fitoestrogen dalam tempe kedelai adalah deidzein dan genistein,

struktur kimia keduanya mirip dengan -estradiol atau estrogen yang berperan

dalam peningkatan reabsorbsi kalsium pada proses osteoblastik tulang (Guyton

dan Hall, 2008).

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh fitoestrogen yang

terkandung dalam tepung tempe kedelai sebagai agen antiosteoporosis pasca

menopause. Pengamatan yang dilakukan untuk hasil uji meliputi jumlah sel

osteoblas yang merupakan sel berbentuk kubus atau kolumnar atau pipih pada

bagian tulang yang sedang mengalami aktifitas remodeling, serta sel osteoklas

yang merupakan sel berukuran besar, bentuknya tidak beraturan, dan berinti

banyak pada bagian yang sedang mengalami aktifitas remodeling. Luaran yangdiharapkan dari penelitian ini yaitu terciptanya suatu artikel ilmiah yang dapat

memberikan informasi mengenai manfaat tempe sebagai alternatif terapi sulih

hormon estrogen eksogen pada wanita pasca menopause untuk mengurangi resiko

osteoporosis secara alami, murah dan dapat terjangkau oleh berbagai kalangan.


5/26

1

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tulang adalah jaringan aktif yang secara metabolik mengalami remodelingberkelanjutan oleh dua proses, yaitu pembentukan (formasi) dan penyerapan

(resorpsi) tulang (Seibel, 2005). Apabila proses resorpsi tulang melebihi aktivitas

formasi tulang maka dapat menyebabkan terjadinya osteoporosis (Speroff, 2005).

Osteoporosis terjadi akibat adanya gangguan metabolisme pada tulang yang

ditandai dengan pengurangan densitas, perubahan mikroarsitektur dan

peningkatan fragilitas tulang sehingga resiko fraktur tulang lebih besar (Sennang

et al., 2006).

Sebagian besar kasus osteoporosis melibatkan perempuan pasca menopause

yang salah satu penyebabnya adalah defisiensi estrogen (Djoko, 1997; Ang-sy,1994). Berdasarkan analisis data resiko osteoporosis yang dilakukan oleh

Departemen Kesehatan RI bersama PT. Fonterra Brands Indonesia tahun 2006,

menyatakan bahwa prevalensi osteoporosis di Indonesia mencapai 41,75%.

Artinya, setiap 2 dari 5 penduduk Indonesia beresiko terkena osteoporosis. Angka

ini lebih tinggi dari prevalensi dunia yang hanya 1 dari 3 beresiko terkena

osteoporosis (Era Baru News, 03 Nov 2008).

Resiko osteoporosis pasca menopause akibat menurunnya produksi

hormon estrogen endogen dapat menyebabkan hilangnya mineral tulang dengan

sangat cepat (Dawson-Hughes, 1996). Beberapa sumber penelitian klinis

menyebutkan bahwa Terapi Sulih Hormon (TSH) dengan dosis yang disesuaikan,

secara efektif dapat mengurangi resiko terjadinya osteoporosis. Namun, selain

harganya mahal, dalam jangka panjang TSH dapat menimbulkan efek penyakit

berbahaya di antaranya kanker rahim dan kanker payudara (Nurrochmad et al.,

2010). Oleh karena itu, perlu diupayakan penanganan osteoporosis melalui

pemberian bahan serupa estrogen alami, cukup aman pemakaiannya, terjangkau

oleh masyarakat banyak dan relatif dapat dikomsumsi dalam jangka waktu lama.

Salah satu jenis hormon estrogen alami yang dapat digunakan adalah

fitoestrogen yang merupakan substansi pada tanaman yang secara struktural

maupun fungsional mirip dengan -estradiol atau estrogen pada wanita (Cassidy,2003; Duffy, 2007). Beberapa penelitian mengkaji kandungan fitoestrogen pada

tanaman yang dapat digunakan sebagai alternatif terapi estrogen eksogen yaitu

Silvia (2012), menyatakan bahwa ekstrak etanol 70 % buah kacang panjang

(Vigna unguiculata L.) dengan kandungan flavonoid cukup tinggi menunjukkan

efek antiosteoporosis optimum pada dosis 100 mg/200 gram BB tikus. Penelitian

lain yang dilakukan oleh Nurdiana (2011), menyatakan bahwa ekstrak kacang

tunggak yang memiliki kandungan fitoestrogen dengan dosis 0,5 ml/kg BB dapat

menurunkan jumlah osteoklas pada tikus ovariektomi kondisi 1 dan 2 bulan.


6/26

2

Tempe merupakan makanan yang dikenal sebagai sumber gizi dan

dikonsumsi oleh mayoritas masyarakat Indonesia. Tempe terbuat dari biji kedelai

dan memiliki kandungan fitoestrogen. Fitoestrogen dalam Tempe kedelai adalah

deidzein dan genistein yang berperan dalam peningkatan resorpsi kalsium pada

proses osteoblastik tulang (Guyton dan Hall, 2008). Berdasarkan uraian diatas,

perlu dilakukan penelitian menggunakan ekstrak tepung tempe kedelai sebagai

sumber fitoestrogen yang potensialsebagai agen antiosteoporosis pada wanita

pasca menopause.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas, diperoleh rumusan masalah sebagai

berikut:

1. Apakah ekstrak tepung tempe kedelai memiliki pengaruh terhadap jumlah

osteoblas dan osteoklas pada femur mencit betina ovariektomi?2. Berapakah dosis dan lama pemberian ekstrak tepung tempe kedelai yang paling

berpengaruh terhadap jumlah osteoblas dan osteoklas femur mencit betina

ovariektomi?

1.3 Tujuan dan Manfaat Penelitian

Tujuan dan manfaat dari penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. Mengetahui pengaruh ekstrak tepung tempe kedelai terhadap jumlah osteoblas

dan osteoklas femur mencit betina ovariektomi.

2. Mengetahui dosis dan lama pemberian ekstrak tepung tempe kedelai yangpaling berpengaruh terhadap jumlah osteoblas dan osteoklas pada femur mencit

betina ovariektomi.

1.4 Luaran yang Diharapkan

Luaran yang diharapkan dari penelitian ini yaitu terciptanya artikel ilmiah

yang dapat memberikan informasi mengenai manfaat tepung tempe kedelai

sebagai salah satu alternatif terapi sulih hormon estrogen eksogen pada wanita

pasca menopause untuk mengurangi resiko osteoporosis secara alami, murah dan

dapat terjangkau oleh berbagai kalangan.

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

Sebagai unsur utama sistem rangka dewasa, jaringan tulang berguna untuk

menunjang struktur berdaging, melindungi organ vital seperti yang terdapat pada

tengkorak, dan rongga dada. Secara fisiologi, tulang juga berfungsi sebagai

tempat penimbunan atau pembebasan kalsium, fosfat dan ion-ion lain (Junqueira

dan Carneiro, 2007). Menurut Djojosoebagio (1996), tulang terdiri atas sel-sel

(osteoblas, osteosit, osteoklas), matriks organik yang disusun oleh kolagen dan

bahan dasar yang mengandung mukopolisakarida, serta mineral (Geneser, 1994).


7/26

3

Berdasarkan klasifikasi bentuknya, tulang femur termasuk dalam tulang

panjang. Tulang ini memiliki corpus berbentuk tubular, diafisis, dan juga

dijumpai epifisis pada bagian ujungnya. Corpus mempunyai civitas medullaris di

bagian tengah yang berisi sumsum tulang, bagian luarnya terdiri dari tulang

kompak yang dilingkupi oleh selubung jaringan ikat yang disebut periosteum.

Secara dinamis, tulang terus-menerus melakukan proses penyusunan jaringan

tulang baru dan perombakan jaringan tulang lama yang disebut sebagai

remodeling tulang. Proses remodeling yang berhubungan langsung dengan fungsi

homeostasis mineral tulang dipengaruhi oleh hormon dalam tubuh seperti

parathormon, kalsitonin, dan estrogen (Junqueira dan Carneiro,2007).

Bertambahnya usia, secara fisiologi menyebabkan hilangnya sebagian

massa tulang yang disebut ostopenia. Jika dibiarkan, keadaan ini akan semakin

buruk karena ostopenia yang melewati ambang batas untuk terjadinya fraktur

(Fracture threshiod) disebut sebagai osteoporosis. Keadaan ini memiliki ciri-ciriyaitu jumlah komponen tulang yang mengisi jaringan berkurang, namun secara

struktural masih dalam keadaan normal (Isbagio, 1995). Sebagian besar kasus

osteoporosis melibatkan perempuan pascamenopause yang disebut sebagai

osteoporosis Tipe 1 (Post Menopausal Osteoporosis) (Djoko, 1997). Pada tipe ini,

akan terjadi osteoporosis spinal (trabekular) yang mengakibatkan terjadinya

fraktur tulang belakang. Seiring dengan bertambahnya usia, resiko osteoporosis

tipe ini juga terjadi pada tulang panjang (kortikal) yang menyebabkan terjadinya

fraktur femur (Silvia, 2012).

Secara alamiah, pada usia klimakterium (40 tahun) seorang wanita akanmengalami masa menopause. Menopause adalah suatu masa yang dialami wanita

dan ditandai oleh menurunnya fungsi ovarium yaitu tidak adanya pertumbuhan

folikel. Folikel dalam ovarium khususnya pada sel teka dan sel granulosa berperan

dalam sintesis hormon estrogen (Hafez, 2000). Akibatnya, setelah terjadi

menopause seorang wanita akan mengalami penurunan kadar estrogen. Meskipun

estrogen masih dapat dihasilkan dari jaringan tubuh lainnya terutama lemak dan

otot, namun estrogen dari lemak dan otot adalah dalam bentuk estron, yaitu jenis

estrogen yang memiliki aktivitas estrogenik lebih rendah dibandingkan dengan

jenis estrogen dari hasil pertumbuhan folikel dalam ovarium yaitu estradiol

(DeGroot, 1995).

Estrogen merupakan hormon seks steroid yang memegang peran penting

dalam metabolisme tulang, mempengaruhi aktivitas osteoblas maupun osteoklas,

dan menjaga keseimbangan kerja dari kedua sel tersebut melalui pengaturan

produksi faktor parakrin utamanya oleh sel osteblas. Osteoblas memiliki reseptor

alpha dan betha (ER dan ER) didalam sitosol. Dalam proses diferensiasinya ,

osteoblas mengekspresikan reseptor betha (ER) 10 kali lipat dari reseptor

estrogen alpha (ER) (Monroe et al., 2003). Sub tipe reseptor inilah yang

melakukan pengaturan homeostasis tulang dan dalam terjadinya osteoporosis

(Quaedackers et al., 2001). Disisi lain, estrogen dapat merangsang ekspresi


8/26

4

osteoprotegerin (OPG) dan TGF- (Transforming Growth Factor-) pada sel

osteoblas dan sel stroma yang lebih lanjut dapat menghambat penyerapan tulang

dan meningkatkan apoptosis sel osteoklas (Norman, 2003). Selain fungsi tersebut,

estrogen berperan penting dalam mengatur efek hormon paratiroid (PTH) pada

tulang yang pada kadar tertentu dapat menurunkan kadar kalsium dalam serum,

urin, dan hydroxyprolive pada wanita pasca menopause. Hormon estrogen juga

berpengaruh pada metabolisme vitamin D mengakibatkan penurunan absorbsi

kalsium di usus yang disebabkan karena menurunnya kadar 1,25-OH-D3. Selain

itu estrogen dapat merangsang sekresi kalsitonin yang mempunyai efek

menghambat kerja osteoklas dalam meresorpsi tulang (Singer, 1997).

Tempe kedelai merupakan makanan tradisional Indonesia terbuat dari biji

kedelai yang melalui proses fermentasi menggunakan jamurRhizopus sp.. Tepung

tempe kedelai memiliki 2 komponen utama yang berhubungan dengan

osteoporosis yaitu fitoestrogen dan kalsium. Fitoestrogen dalam kacang kedelaiadalah deidzein dan genistein yang komposisi kimiawinya mirip dengan -

estradiol atau etrogen pada wanita yang berperan dalam peningkatan resorpsi

kalsium pada proses osteoblastik (Guyton dan Hall, 2008). Fungsi estrogenik

dapat terjadi karena fitoestrogen memiliki 2 gugus OH (hidroksil) yang berjarak

1,0-11,5 A pada intinya, sama dengan inti dari hormon estrogen. Dengan struktur

pokok yang sama tersebut maka substrat ini akan memiliki afinitas tertentu untuk

dapat menduduki estrogen reseptors.

BAB 3. METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Waktu penelitian dilaksanakan pada bulan Januari sampai Mei 2016.

Tempat penelitian di Laboratorium Zoologi, Jurusan Biologi, Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember, Laboratorium

Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Umum Universitas Gadjah Mada,

Yogyakarta, dan Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta .

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari : kandang hewan

percobaan 34 cm x 25 cm x 12 cm (bak plastik dan penutup dari ram kawat besi),

botol minum mencit, dan jarum sonde lambung berujung tumpul (20 gauge, 5

cm), papan bedah, timbangan analitik 200 gram, spuit injection (Terumo Syringe 1

cc/ml) 0,45 x 13 mm, hecting set(One Med), silet (Gold), dan jarum sutura no.2

(One Med), beaker glass, gelas ukur 100 ml, Botol schott, corong plastik kecil,

pipet tetes, spatula, cawan porselen 75 cc, grinder, saringan tepung 60 mesh

(Retsch), lab stirrer electricity, rotary evaporator, water bath, baki stainless steel,


9/26

5

oven, pisau, baki plastik, talenan, sendok, dan cup, timbangan analitik, sendok

reagen, gelas ukur atau labu takar 1000 ml, botol reagen 1000 ml (Durant) atau

tabung erlenmeyer 1000 ml, magnetic stirer, corong kaca, object glass, cover

glass, rotary microtom, staining jar, botol flakon, holder, skalpel, oven, hot plate,

mikroskop binokuler (Olympus) dengan aplikasi optik lab.

3.2.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari:

Mencit betina galur Swiss Webster usia 90 hari berat rata-rata 28 gram,

pakan pellet(CP 511), aquades, sekam padi, serbuk gergaji kayu. Paracetamol,

ketamil 10%, xyla, benang silkno.3 (One Med), benang cat gutno.3 (One Med),

betadin 10% (Povidone Iodine), alkohol 70% (Mediss), antibiotik (Levofloxacin),

cairan infus 0,9% sodium cloride (Cotsu-NS), kasa steril (One Med), benang silk

(One Med), benang cat gut (One Med), povidone iodine, gloves, masker, tisu,tempe kedelai, alkohol 70%, kain saring, kertas saring, tisu, kloroform, sodium

chlorida (Na Cl), asam chlorida (HCl), aquadest pH 7-7,5 (H2O), ammonium

oxalat (NH4)2 C2O4.H2O (Merck), kain kassa steril, alkohol bertingkat, alkohol

absolut, parafin, gliserin, albumin, HE (Hematoxylin - eosin), xylol, entelan.

3.3 Pelaksanaan penelitian

1. Persiapan Hewan Uji

Subjek penelitian ini terdiri dari 120 ekor mencit betina strain Swiss

Webster ovariektomi umur 90 hari yang dipelihara dan diadaptasikan padakandang plastik dan penutup ram kawat berukuran 34 cm x 25 cm x 12 cm beralas

sekam padi dan serbuk gergaji kayu. Kandang pemeliharaan ini diletakkan pada

ruangan dengan suhu 27C dan kelembaban relatif 77 % RH sebagai kondisi

umumnya. Mencit diberi pakan standart berupa pellet (CP 511), dengan

pemberian per hari 1/10 berat badan mencit (gram) dan minum aquades secara ad

libitum.

2. Pembuatan Mencit Ovariektomi (OVX)

Ovariektomi dilakukan dengan mengambil kedua ovarium mencit. Mencit

usia 90hari dengan berat rata-rata 28 gram dianastesi dengan ketamin 10% dan

xyla dengan perbandingan 1:1 sebanyak 0,05 ml per mencit secara intramuskular.

Kemudian mencit diletakkan terlentang diatas papan operasi, diolesi air sabun anti

bakteri dan dicukur rambut bagian medial perut. Dioleskan povidone iodinedan

diinsisi untuk membuka lapisan muskulus daerah abdomen (M. obliquus

abdominis eksternus 1,5 cm danM. oblikus abdominis internus 1 cm. Dikeluarkan

ovarium dan dipotong pada daerah antara oviductdan ovarium dengan cara dijepit

pada daerah ujung oviductdengan klem arteri, kemudian diikat benang silkbagian

pangkal batas klem arteri dan dipotong dengan gunting matzenbaum. Setelah

ovarium diangkat, selanjutnya arteri clamp dilepas, organ direposisi, dan diberi


10/26

6

cairan infus 0,5 ml. Selanjutnya bagian muskulus oblikus abdominis internus

dijahit dengan benang cat gut chromic no.3, sedangkan pada bagian muskulus

oblikus abdominis eksternus dijahit dengan benang silkno. 3, dilakukan desinfeksi

menggunakan povidone iodine pada daerah insisi, dan diinjeksi antibiotik

Levofloxacin 0,05 ml. Perawatan luka pada masa penyembuhan dilakukan dengan

paracetamol (1 sendok teh / 200 ml aquades) selama 1 minggu secara ad libitum.

3. Pembuatan Ekstrak Tepung Tempe Kedelai

Tempe murni umur fermentasi 2 hari dicacah, ditimbang berat basah,

kemudian dioven dalam suhu 40-45 C selama 2 hari, selanjutnya di grinderdan

diayak dengan ayakan 60 mesh. Setelah di timbang berat kering, selanjutnya

tepung tempe dimaserasi dalam alkohol 70% dengan perbandingan 1:4, distirer

elektrik 500 rpm selama 15 menit dan didiamkan selama 2 x 24 jam. Langkah

berikutnya disaring untuk mendapatkan filtrat, dimasukkan ke dalam rotaryevaporator selama 4-5 jam dengan suhu 80C hingga didapatkan filtrat alami

tanpa etanol lalu diletakkan dalam cawan porselen dan dimasukkan pada water

bath suhu 70C selama 8 jam untuk menghasilkan ekstrak tepung tempe dengan

hasil konstan dan tidak mengandung air.

4. Perlakuan Hewan Percobaan

Perlakuan dalam penelitian ini adalah pemberian ektrak tepung tempe

kedelai secara oral (metode gavage) menggunakan jarum sonde lambung. Dosis

perlakuan ditentukan berdasarkan penelitian Safrida (2008), yaitu dosis hariantikus ovariektomi diberi tepung tempe kedelai 10 gram berat kering/100 gram

berat badan yang dikonversi menurut kebutuhan harian mencit dalam bentuk

ekstrak (pasta) disesuaikan dengan masing-masing berat badan yang dirata-rata/

kelompok uji. Berdasarkan sumber diatas, didapatkan dosis perlakuan untuk

penelitian ini adalah D0 sebagai kontrol tanpa pemberian ekstrak tepung tempe

kedelai, D1 menggunakan dosis 0,21 gram/hari, D2 menggunakan dosis 0,42

gram/hari, dan D3 menggunakan dosis 0,63 gram/hari. Selain kelompok perlakuan

diatas, penelitian ini juga menggunakan kontrol negatif yaitu mencit normal tanpa

ovariektomi dan tanpa pemberian ekstrak tepung tempe, serta kontrol positif yaitu

mencit yang diovariektomi tanpa pemberian ekstrak tepung tempe yang berfungsi

untuk mengetahui terjadinya menopause pasca ovariektomi. Pengambilan hasil

berupa sampel organ dilakukan pada kelompok pertama yaitu kelompok masa

recovery 1 bulan pasca ovariektomi dilakukan pada hari ke-0 (30 hari pasca

ovariektomi) dan hari ke-20 (20 hari masa perlakuan pemberian bahan uji dimulai

pada hari ke 30 ovariektomi), dan kelompok ke-2 yaitu kelompok masa recovery

2 bulan pasca ovariektomi dilakukan pada hari ke-0 (60 hari pasca ovariektomi)

dan hari ke-20 (20 hari masa perlakuan pemberian bahan uji dimulai pada hari ke-

60 ovariektomi)


11/26

7

5. Pembuatan Sediaan Preparat Histologi Tulang Femur

Pada setiap l0 hari perlakuan, tiga mencit dari masing-masing kelompok

perlakuan dieuthanasiamenggunakan cairan kloroform, kemudian dilakukan

pembedahan dan diambil femur sebelah kanan. Membuat preparat tulang harus

dilakukan dekalsifikasi untuk menghilangkan Ca2+ yang ada di dalam jaringan

tulang, sehingga jaringan menjadi lunak dan dapat diproses dengan metode

parafin (Handari, 1983). Pembuatan preparat histologi tulang dapat dilakukan

dengan prosedur sebagai berikut:

5.1 Fiksasi danDekalsifikasi

Femur mencit yang telah diambil dicuci dengan Nacl 0,9%, direndam dalam

botol flakon berisi larutan fiksatif PBS formalin pH 7,4 selama 3 jam kemudian

dicuci alkohol 70 %. Setelahitu, dimasukkan dalam wadah yang berisi 200 ml

larutan Von Ebners, kemudian didiamkan dalam suhu kamar selama 24 jam. Padahari berikutnya dilakukan uji proses dekalsifikasi dengan cara mengambil 5 ml

larutan perendam, ditambah 1 ml larutan ammonium oksalat 5%, dan diamati ada

atau tidak adanya endapan putih. Jika masih terlihat adanya endapan putih, maka

proses dekalsifikasi belum sempurna dan harus diulangi sampai dekalsifikasi

sempurna.Setelah dekalsifikasi berhasil sempuna, jaringan tulang dipindahkan

dalam larutan Von Ebners baru yang ditambah dengan HCl sama seperti volume

penambahan terakhir dan didiamkan selama 24 jam. Jaringan tulang yang selesai

didekalsifikasi dibungkus dengan kain kassa, dicuci pada air mengalir minimal

selama 2 jam, dibilas jaringan tulang dengan aquades dan selanjutnya difiksasiulang menggunakan PBS formalin pH 7,4 selama 2 jam (Sumaryati, 2012).

5.2Dehidrasi, Clearing, Embedding, Sectioning

Proses dehidrasi dilakukan dengan merendam jaringan tulang pada alkohol

bertingkat konsentrasi 70% hingga 95% masing-masing 1-2 jam. Selanjutnya

digunakan alkohol absolut dan xylol dengan perbandingan 3:1, 1:1 dan 1:3 selama

30 menit lalu dilakukan penjernihan dengan larutan xilol selama 3 jam.Sampel

diinfiltrasi dengan hard parafin pada suhu 48-550C secara bertingkat

menggunakan xylol:parafin selama 30 menit dan parafin I, II, III selama 1 jam.

Berikutnya, sampel direkatkan pada holder menggunakan skalpel dan bunsen

yang kemudian dipotong menggunakan mikrotom dengan ketebalan 8-10 m.

Selanjutnya, sayatan direkatan pada gelas objek yang telah dilapisi gliserin dan

albumin, disimpan dalam inkubator 40C selama 24 jam, lalu dilakukan pewarnaan

menggunakanHarris Hematoxylin-Eosin (HE).

5.3 Pewarnaan (Staining), Penutupan (Mounting), dan Pengamatan

Pewarnaan dilakukan setelah sediaan preparat dideparafinisasi dengan cara

direndam dalam larutan xylol I dan xylol II selama 30 menit, selanjutnya

dicelupkan dalam alkohol bertingkat yang dimulai dari alkohol absolut, 95%,


12/26

8

80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% masing-masing 2 menit, lalu dicuci pada

air mengalir. Sediaan preparat dimasukkan dalam pewarna hematoxilin selama 15

detik, dicuci kembali dengan air mengalir, dibilas dengan alkohol bertingkat

hingga konsentrasi 70%, dimasukkan dalam eosin selama 10 menit, lalu

dicelupkan dalam alkohol bertingkat. Selanjutnya preparat dimasukkan dalam

xylol. Preparat histologi ditetesi entellan kemudian ditutup dengan cover glass,

dikeringkan dalam hot plate, dilabeli, dan dilanjutkan dengan pengamatan jumlah

osteoblas dan osteoklas pada preparat menggunakan mikroskop binokuler

(Olympus) perbesaran 400x dan aplikasi optik lab v2.1.

3.4 Parameter Uji

Parameter yang diamati meliputi jumlah sel osteoblas dan osteoklas dalam

sediaan preparat femur mencit yang dihitung manual menggunakan mikroskop

binokuler (Olympus) dengan ciriciri :a. Osteoblas : sel berbentuk kubus atau kolumnar atau pipih pada bagian tulang

yang sedang mengalami aktifitas remodeling.

b. Osteoklas : sel berukuran besar, bentuknya tidak beraturan, dan berinti

banyak pada bagian yang sedang mengalami aktifitas remodeling.

3.5 Analisi Data

Data hasil penelitian akan ditabulasi dan dilakuakan analisis statistik secara

kuantitatif menggunakan uji two way ANOVA dengan taraf kepercayaan 99%

atau nilai sig. = 0,01. Selanjutnya, dilakukan uji F dan untuk mengetahui bedanyata antar kelompok uji dilakukan analisis Duncan (Steel and Torrie, 1993).

BAB 4. BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

4.1 Anggaran Biaya

Anggaran biaya dan Perincian:

No Jenis Pengeluaran Biaya Biaya (Rp)

1. Peralatan Penunjang Rp. 3.055.000,-

2. Bahan Habis Pakai Rp. 4.277.000,-

3. Perjalanan Rp. 3.055.000,-

4. Lain-lain Rp. 1.833.000,-

Jumlah Rp. 12.220.000,-

4.2 Jadwal Kegiatan

Penelitian akan dilaksanakan mulai bulan Januari-Mei 2016 di

Laboratorium Zoologi, Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Jember,

Laboratorium Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran Umum, Universitas Gadjah

Mada, Yogyakarta, dan Laboratorium Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran

Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.


13/26

9

No Macam KegiatanBulan Ke

1 2 3 4 5

1.Persiapan ekstrak tepung tempe

kedelai dan pemeliharaan hewan uji

2. Perlakuan hewan uji

3. Analisis Data

4. Penulisan Laporan

5. Publikasi Ilmiah

DAFTAR PUSTAKA

Ang-sy, S. 1994. Menopausal Hormone Replacement Therapy: Current

Developments. Medicine Digest, January Special Issue: 2-7

Cassidy, A. 2003. Potensial Risk and Benefit Phytoestrogens. Rich Diets.

International Journal for Vitamin and Nutrition Research; Vol. 73 (2): 120-

126.

Dawson-Hughes, B. 1996. Calcium and Vitamin D Nutritional Needs of Elderly

Woman.J. Nutr. Vol. 126, 165S-1167S.

DeeGroot, L. J. 1995.Endokrinology Third edition. Philadelphia: W.B. Saunders

Company, Vol. 3 2128-2136.

Djojosoebagio, S. 1996. Fisiologi Kelenjar Endokrin.Jakarta: UI Press.

Djoko, R. H. 1997. Diagnosis dini osteoporosis pada wanita menopause. Tidak

Diterbitkan. Disertasi. Surabaya: Universitas Airlangga.

Duffy, C., Perez, K., and Partridge, A. 2007. Implications of Phytoestrogen Intake

for Breast Cancer.A CancerJournal for Clinicians; Vol. 57 (5): 260-277.

Erabaru News. Senin 3 November 2008 www.erabaru.or.id [9 Sep 2015].

Genneser, F. 1994.Buku teks Histologi.Jilid I. Jakarta: Binapura Aksara.

Guyton dan Hall, 2008. Fisiologi Kedokteran Edisi 11. Buku Kedokteran. Jakarta:

EGC.

Hafez, B. dan Hafez, E. S. E. 2000. Reproduction in Farm Animal 7thEdition.

USA: Lippincott William & Wilkins.

Isbagio, H. 1995. Cermin Dunia Kedokteran Nomor 101, Jakarta : 54.

Junqueira, L. C., and Carneiro, J. 2007. Histologi Dasar:Teks & Atlas.

(Tambayong, J., and Pentj) Ed 10. Jakarta: EGC.


14/26

10

Messina, M. J. 1999. Legumes and Soybeans: Overview of Their Nutritional

Profiles and Health Effects.Am J Clin Nutr; Vol. 60 : 439S.

Monroe, D. G., Getz, B. J., Johnsen, S. A., Riggs, B. L., Khosla, S., and

Spelsberg, T. C. 2003. Estrogen Receptor Isoform-specific Regulation ofEndogenous Gene Expression in Human Osteoblastic Cell Lines Expressing

Either ERalpha or ERbeta.Journal of Cellular Biochemistry. Vol. 90 :315

26.

Naim, M., Gestetner, B., Zilkah, S., Birk, Y., and Bondi, A. 1974. Soybean

isoflavones. Characterization, determination, and antifungal activity. J. Agr.

F. Chem.. Vol. 22 : 806-810.

Norman, H. B. 2003. RANK ligand and the regulation of skeletal remodeling.

J Clin Invest. Apr 15; Vol. 111 (8): 11201122.

Nurdiana. 2011. Efek Ekstrak Kacang tunggak Terhadap Osteoblas dan Osteoklas

pada Tikus dengan Ovariektomi.Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. 26 (3).

Februari 2001.

Nurrochmad, A., Levianan, F. Wulancarsari, C. G., and Lukitaningsih, E. 2010.

Phytoestrogens of Pachyrhyzuz erosus prevent Bone Loss in an

Ovariectomized Rat Model of Osteoporosis. International Journal Of

Phytomedicine. Vol. 2 : 363-372.

Quaedackers, M. E., Van Den Brink, C. E., Wissink, S., Schreurs, R. H.,

Gustafsson, J. A.

, Van Der Saag, P. T.

, and Van Der Burg, B. B. 2001. 4-

hydroxytamoxifen trans-represses nuclear factor-kappa B activity in human

osteoblastic U2-OS cells through estrogen receptor (ER) alpha, and not

through ER beta.Endocrinology. Vol. 142 (3) : 1156-66.

Sennang, A.N., Mutmainnah, R.D.N., Pakasi, dan Hardjoeno. 2006. Analisis

Kadar Osteokalsin Serum Osteopenia dan Osteoporosis. Indonesian Journal

Of Clinical Pathology and Medical Laboratory, Vol. 12 (2) : 49 dan 52.

Silvia, M. 2012. Uji Aktivitas Antiosteoporosis Ektrak Ethanol 70% Buah Kacang

Panjang (Vigna unguiculata L.) Walp.) Berdasarkan Penurunan JumlahOsteoklas pada Growth Plate Tulang Tikus yang Diovariektomi. Tidak

Diterbitkan. [Skripsi]. Depok: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan

Alam. Universitas Indonesia.

Singer F. R. 1997. Metabolic Bone Disease in : Endocrinology and Metabolism.

Eds : Felig, P., Baxter, J. D., Broadus, A. E., and Frohman, L. A., 2nd

edition. New York: Mc Graw-Hill Book Co.

Steel, R., Torrie J. 1993. Prinsip dan Prosedur Statistik. Terjemahan dari

Principles and Procedures of Statistic. Jakarta: Gramedia Pustaka.


15/26

11


16/26

12


17/26

13


18/26

14

Biodata Dosen Pendamping

1. Nama Lengkap (dengan gelar) Dra. Mahriani, M.Si

2. Jenis Kelamin P

3. Jabatan Fungsional Lektor Kepala

4. NIP 195703151987022001

5. NIDN 0015035702

6. Tempat dan Tanggal Lahir Banjarmasin, 15 Maret 1957

7. E-mail [email protected]

8. Nomor Telepon/HP 081249294539

9. Alamat Kantor FMIPA Jl.Kalimantan III/25

10. Nomor Telepon/fax 0331330225

11. Lulusan yang Telah Dihasilkan S1 = 28 orang

12. Mata Kuliah yang Diampu

1. Biologi Umum

2. Biologi Sel3. Fisiologi Hewan

4. Endokrin

5. Reproduksi Hewan

A. Riwayat Pendidikan

S-1 S-2

Nama Perguruan Tinggi Universitas Gadjah Mada Universitas Brawijaya

Bidang Ilmu Biologi Biologi Reproduksi

Tahun Masuk-Lulus 1977-1983 1999-2002

Judul Skripsi/Tesis Pengaruh Ukuran BenihJagung (Zea Mays,L)Terhadap Perkecambahan

dan Pertumbuhannya.

Respon ImunisasiDengan Protein ZonaPellusida Sapi (bZP),

Studi Terhadap

Histologi Ovarium

Kelinci

Nama Pembimbing Ir. Margono Partodidjoyo Prof. Drs. Sutiman

Bambang Sumitro,

PhD

B. Pengalaman Penelitian dalam 5 Tahun Terakhir

No Tahun Judul PenelitianPendanaan

SumberJumlah

(Juta RP)

1. 2009

Kajian Pemanfaatan Genestein

untuk Mencegah Gangguan

Reproduksi Akibat Paparan

Dioksin pada Mencit (Mus

musculus L)

DIPA-

UNIV

(Anggota)

45.000.000

2. 2009

Kajian Pemanfaatan Likopen

untuk pemulihan gangguan

reproduksi akibat paparan

DIPA-

UNIV

(Anggota)

45.000.000


19/26

15

Methoxychlor pada mencit

(Mus musculus L)

3. 2013

Uji Sitotoksik Ekstrak Biji

Kakao (Theobroma cacao L.)

terhadap Sel Kanker PayudaraMCF-7 (Michigan Cancer

Foundation-7)

Mandiri

(Anggota) 20.000.000

4. 2014

Kajian Pemanfaatan

Phytoestrogen dari Biji Kedelai

untuk Pencegahan Kanker

Payudara pada Mencit Strain

C3H (Hiber Tahun Pertama)

DIPA-Univ.

Jember

(Ketua)

32.500.000

5. 2014

Pengembangan Senyawa

Antosianin dari Buah Duwet

sebagai Pangan Fungsional dan

Nutraseutikal yang MemilikiKemampuan Antioksidatif,

Hipokolesterolemik dan

Hipoglikemik (Hikom Tahun

Pertama)

DIPA-Univ.Jember

(Anggota)

100.000.000

6. 2015

Kajian Pemanfaatan

Phytoestrogen dari Biji Kedelai

untuk Pencegahan Kanker

Payudara pada Mencit Strain

C3H (Hiber Tahun Kedua)

DIPA-Univ.

Jember

(Ketua)

52.500.000

7. 2015

Pengembangan SenyawaAntosianin dari Buah Duwet

sebagai Pangan Fungsional dan

Nutraseutikal yang Memiliki

Kemampuan Antioksidatif,

Hipokolesterolemik dan

Hipoglikemik (Hikom Tahun

Kedua)

DIPA-Univ.

Jember

(Anggota)

110.000.000

C. Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 Tahun Terakhir

No Tahun Judul Penelitian

Pendanaan

SumberJumlah

(Juta RP)

1. 2010

Pembelajaran Pertumbuhan dan

Perkembangan Hewan

dengan Preparat Awetan pada

Siswas Kelas III SMPN I

Jember

Mandiri 5.000.000

2. 2011

Keanekaragaman Jenis

Tumbuhan Berkhasit Obat di

Kawasan Bandalit, Taman

Nasional Meru Betiri,

Mandiri 5.000.000


20/26

16

Kab. Jember

D. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 Tahun Terakhir

No Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal

Volume/Nomor/

Tahun

1.

Pengaruh Paparan Senyawa

Dioksin terhadap Implantasi

Blastosis Mencit (Mus

musculus L) Strain BalbC

Jurnal Ilmu-ilmu

Biologi/BIOMA

Vol. 3 No.1

April 2008

2.

Efek Kondisi Hiperglikemik

terhadap Struktur Ovarium

dan Siklus Estrus Mencit

(Musmusculus L.)

Jurnal Ilmu Dasar

(Terakreditasi B)

Vol. 10. No.

2 Juli 2009

3.

Kajian Ekspresi Protein Bax

pada gangguanSpermatogenesis Pasca

Pemaparan 2,5 Hexanedion,

pada Tikus putih (Rattus

norvegicus)

Jurnal Biologi(Journal of

Biology)

Vol. XII No.1

Juni 2008

4.

Efek Pemberian Estrogen

Sintetis (Diethylstilbestrol)

terhadap Struktur Hepar serta

Kadar SGOT dan SGPT pada

Mencit (Mus musculus)

Betina Strain BalbC

Jurnal Ilmu Dasar

(Terakreditasi B)

Vol. 11 No. 1

Januari 2010

E. Pemakalah Seminar Ilmiah dalam 5 Tahun Terakhir

NoNama Pertemuan

Ilmiah/SeminarJudul Artikel Ilmiah

Waktu dan

Tempat

1.

Seminar nasional dan

kongres Indonesian Protein

Society

Identifikasi protein

spermatozoa dan cairan

lumen pada epididimis

sapi kaitannya dengan

maturasi spermatozoa

6-7 Juli 2012

F. Karya Buku dalam 5 Tahun Terakhir

No Judul Buku TahunJumlah

HalamanPenerbit

- - - -

G. Perolehan HKI dalam 5-10 Tahun Terakhir

No Judul/Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID

- - - -


21/26

17


22/26

18

Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan

1. Peralatan Penunjang

Material JustifikasiPemakaian Kuantitas HargaSatuan (Rp) Jumlah (Rp)

Bak plastik,

ram kawat,

botol minum

(sewa)

Pemeliharaan

hewan uji@12 buah

30 hari

[email protected]

Pisau Pembuatan

ekstrak tepung

tempe

3 buah 10.000 30.000

Telenan Pembuatan

ekstrak tepung

tempe

3 buah 9.000 27.000

Ayakan Pembuatan

ekstrak tepung

tempe

3 buah 5.000 15.000

Grinder dan

oven (sewa)

Pembuatan

ekstrak tepung

tempe

1 set7 hari

[email protected]

Peralatan

ektraksi

(sewa)

Pembuatan

ekstrak tepung

tempe

1 set14 hari

[email protected]

Alat Bedah Proses OVX

dan

pengambilan

organ

3 Set 200.000 600.000

Sonde

lambung

20gauge 5cm

Perlakuan

hewan uji 4 biji 31.250 125.000

Jarum jahit

no.2

Proses OVX 20 pack 12.500 250.000

Spuit injection

1 ml (One

med)

Proses OVX

dan gavage

hewan uji

2 pack 200.000 400.000

Cup sampel Wadah

sampel60 biji 300 18.000

Gloves Ekstraksi,

perlakuan, dan

pengambilan

sampel

3 box 50.000 150.000

Masker Ekstraksi,

perlakuan, dan

pengambilan

sampel

3 box 50.000 150.000

SUB TOTAL (Rp) 3.055.000


23/26

19

2. Bahan Habis Pakai

MaterialJustifikasi

PemakaianKuantitas

Harga

Satuan (Rp)Jumlah (Rp)

Mencit Hewan uji 60 ekor 20.000 1.200.000Pellet CP511 Pemeliharaan

hewan uji

5 kg 10.000 50.000

Aquades Pemeliharaan

hewan uji

10 liter 5.000 50.000

Tempe

kedelai

Bahan uji 100 bungkus 2.000 200.000

Sekam dan

serbuk gergaji

kayu

Pemeliharaan

hewan uji

@1 karung 25.000 50.000

Phosphate

Buffer Saline(PBS)

Pencuci organ 1 sachet 290.000 290.000

Paracetamol Pemeliharaanhewan uji

pasca OVX

2 lembartablet

8.500 17.000

Chloroform Nekropsi

hewan uji

25 ml 350.000 350.000

Kapas Nekropsi

hewan uji

2 pak 10.000 20.000

Tisu Pembersih 1 pak 1kg 25.000 25.000

Alkohol 70 % Sterilisasi,ekstraksi

tepung tempe,

penyimpanan

organ

20 liter 30.000 600.000

Povidone

iodine

Antibakteri 120 ml 80.000 80.000

Levofloxacin Antibiotik

oral

5 mg/ml 150.000 150.000

Ketamine

10%

Anastesi 10 ml 325.000 325.000

Xylazine 20 Anastesi 25 ml 350.000 350.000Formalin Pengawet

organ

2 liter 45.000 90.000

Alumunium

foil

Pembungkus

ekstrak

2 gulung 30.000 60.000

Kasa steril

(One med)

Ovariektomi

dan

pembuatan

preparat

10 pack 5.000 50.000

Benang silk

no.3 (One

med)

Proses

ovariektomi

20 biji 8.000 160.000


24/26

20

Benang cat

gut no.3 (One

med)

Proses

ovariektomi

20 biji 8.000 160.000


3. Transportasi

MaterialJustifikasi

PemakaianKuantitas

Harga


Transport

Jember-

Yogyakarta

Pembuatan

preparat dan

pembacaan

hasil

3 orang 540.000 1.620.000

Penginapan di

Yogyakarta

Pembuatan

preparat danpembacaan

hasil

3 orang (8

hari)

105.000/hari 840.000

Pengiriman

Mencit

Yogyakarta-

Jember

Pembelian

hewan uji

40 ekor 595.000 595.000


4. Lain-lain

MaterialJustifikasi

PemakaianKuantitas

Harga


Dokumentasi Cetak foto

preparat

30 lembar 1.000 30.000

Alat tulis Penulisan

laporan dan

tahapan

Penelitian

3 orang 25.000 75.000

Pembuatan

laporan

Pengetikan,

fotocopy, danbendel

5 eksemplar 45.600 228.000

Sewa

laboratorium

PA FKU

UGM

Pembuatan

preparat

6 hari 150.000 900.000

Sewa

laboratorium

resident PA

FKH UGM

Pembacaan

preparat

2 hari 300.000 600.000


TOTAL (Keseluruhan) 12.220.000


25/26

21

Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas

1. Susunan Organisasi Tim Peneliti

2. Pembagian Tugas

No. Nama/NIM

Program

Studi

Bidang

Ilmu

Alokasi

Waktu

(jam/

minggu)

Uraian Tugas

1. Nurul Aini

Afifatus Solehah

Biologi Biologi 8 jam /

minggu

-Koordinasi

anggota,

perencanaan

kegiatan

penelitian, dan

administrasi

2. Arlina Mustika

Sari


minggu

-Pencatatan hasil

dan pengolahan

data hasil

penelitian

3. Nindita Fitria

Primasari


minggu

-Pencatatan

penggunaan

dana dan alokasi

pendanaan

-Dokumentasi

kegiatan dan

pelaporan hasil

dokumentasi

Dosen Pembimbing

(Dra.Mahriani, M. Si)

Ketua Pelaksana

(Nurul Aini Afifatus Solehah)

Anggota Pelaksana(Arlina Mustika Sari; Nindita Fitria Primasari)


26/26

Pemanfaatan Tepung Tempe Kedelai Sebagai Pencegah Osteoporosis, Kajian Histologi Femur Mencit...

Documents

Transcript of Pemanfaatan Tepung Tempe Kedelai Sebagai Pencegah Osteoporosis, Kajian Histologi Femur Mencit...