PEMERIKSAAN LABORATORIUM PADA INFEKSI BAKTERIdr. Gara Samara B., SE, MMR

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

Tujuan pembelajaranMenjelaskan pemeriksaan laboratorium pada penyakit infeksi bakteriMenjelaskan jenis sampel dan persiapan penderitaMenjelaskan cara pemeriksaanMenjelaskan interpretasi hasil

Santosa E. 2008. Pemeriksaan antigen Salmonella Typhi dalam tinja. PBPK. Jakarta. Departemen PK FK UI.Sonja JO, et al. 2004. Evaluation of rapid diagnostic tests for typhoid fever. Journal of Clinical Microbiology. 42(5)Manual Pemberantasan Penyakit Menular. Depkes RI. 2005Pedoman Nasional Penanggulangan Tuberkulosis. Depkes RI. 2007.Gandasoebrata R. 2001. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta. Dian RakyatAstrawinata DAW. 2008. Diagnosis laboratorik E.coli patogen pada diare. PBPK. Jakarta. Departemen PK FK UILoho T. 2007. Diagnosis laboratorium pada infeksi H.pylori. PBPK. Jakarta. Departemen PK FK UILoho T. 2009. Penanda laboratorium dan profil kuman penyebab sepsis neonatorum di RSCM. PBPK. Jakarta. Departemen PK FK UI

Referensi

Pemeriksaan Umum1. Lekosit- Jumlah leukosit Radang proses inflamasi leukositosis- netrofilia >>- granulasi toksik, vakuolisasi2. LEDRadang proses inflamasi LED meningkat3. CRP

- Protein fase akut Kadar me pd infeksi akut, kerusakan jaringan tidak spesifik Cara kerja opsonisasi CRP melapisi bakteri shg mudah dikenali & dimakan oleh makrofag fagositosis >> CRP + Ca 2+ aktifkan komplemen jalur klasik

CRP

Pemeriksaan CRP bermacam-macam :Tes presipitasiAglutinasi pasifELISAImunokromatografiImunoturbidimetri

Prinsip pemeriksaan :CRP dianggap sbg antigen yg akan ditentukan dgn menggunakan suatu antibodi spesifik yg telah diketahui

PemeriksaanPersiapan penderita puasa 8 10 jam sebelumnya (menghindari serum lipemik)Bahan serumPengiriman & pemeriksaan bahan secepatnya

Nilai rujukanUji aglutinasi lateks titer < 1:40ELISA 0,068 8,2 mg/LUji imunokromatografi 6 mg/L

PEMERIKSAAN DEMAM TIFOIDDeteksi infeksi S.typhi bermacam cara kelebihan dan kekuranganCara Deteksi :Kultur & identifikasi kumanDeteksi DNA dgn PCRDeteksi antibodi dg pem. serologiDeteksi antigen S.typhi

Kultur & Identifikasi S.typhi1. Kultur & Identifikasi S.typhi dalam darahBaku emas (mahal, waktu lama)Waktu pengambilan: mg I demamProsedur pem isolasi kuman, identifikasi dgn biokimia, tes serologik(-) palsu : waktu tdk tepat, pemakaian antimikroba, spesimen sedikit

Kultur & Identifikasi S.typhi cont2. Kultur & Identifikasi S.typhi dalam tinjaWaktu pengambilan: mg II & III demamSpesimen : tinja segar, tdk tercampur urin, wadah steril, px < 2 jamProsedur pem isolasi kuman, identifikasi dgn biokimia, tes serologikHasil (+) mendukung dx jika gejala klinis (+)

Kultur & Identifikasi S.typhi cont3. Kultur & Identifikasi S.typhi dalam urinWaktu pengambilan: mg II & III demamSpesimen : urin porsi tengah, pagi, wadah sterilProsedur pem isolasi kuman, identifikasi dgn biokimia, tes serologik

Deteksi DNA dengan PCRSpesimen : darah, tinja, urin (carrier)Tahap pem denaturasi (970C), annealing (560C), extention (720C)Sensitivitas PCR > kultur darahKeterbatasan mahal, teknik & tenaga, mudah terkontaminasi(-) palsu salah ambil spesimen, volume

Deteksi antibodi dengan pemeriksaan serologi1. Tes WidalCara paling tua, banyak dilakukanPraktis & cepatSpesimen : darahPrinsip pem aglutinasiCara : tabung atau slide serum diencerkan scr serial + suspensi antigen S.typhi aglutinasi dilaporkan pengenceran tertinggi aglutinasi (+)Kelemahan efek prozone(-) palsu efek prozone, stadium penyakit, tx Ab, respon imunologi(+) palsu daerah endemik, riwayat infeksi, reaksi silang

Nilai rujukan : (+) jika : aglutinin O titer 1:160 aglutinin H titer 1:160 aglutinin PA titer 1:160 aglutinin PB titer 1:160 (+) peningkatan 4x pd pem serialDaerah endemik ??

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

Deteksi antibodi dengan pemeriksaan serologi2. Tes ELISA dan imunokromatografiSpesimen : darahPrinsip pem ikatan antigen-antibodi Deteksi IgM dan/atau IgGSaat ini rapid tes utk S.typhi dgn sensitivitas & spesifisitas bervariasi

Deteksi antigen S.typhiPrinsip pem ikatan antigen antibodiMetode Elisa, imunokromatografi (>>)Spesimen : urin (px serial tiap minggu selama 4 minggu), tinja (segar, tidak RT)Kelebihan dpt mendeteksi antigen meski telah mendapat antimikroba, cepat, murah, mudah

Uji tuberkulin/tes MantaouxBTA 3. Kultur- sampel cara penampungan- media tanam4. Uji fiksasi komplemen, aglutinasi, aglutinasi dilapisi antibodi, hemaglutinasi, presipitasi, imunofluoresens, RIA- Nilai rujukan : (+) : TB paru titer 1: 3200TB di luar paru titer 1 : 26005. ELISAPEMERIKSAAN TUBERKULOSIS

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

Uji Tuberkulin ( Mantoux )

Anak >>, dewasa 10 mm ( pada gizi baik ), atau >5 mm pada gizi buruk.Bila uji tuberkulin (+) pada anakinfeksi TBC & kemungkinanTBC aktif. Uji tuberkulin (-) pada anak anergi ( malnutrisi , penyakit sangat berat pemberian imunosupresif, dll ).Dewasa indurasi > 5 mm dianggap positif untuk mereka yang kontak dengan penderita TB aktif

BTASampel sputum S-P-SCara pengambilan sampel !! sputum, bukan ludah, tempat penampungan bersih/steril, bermulut lebarPengecatan ZN BTA berwarna merah

Interpretasi hasil:(-) bakteri (-)Ragu-ragu 1-2 bakteri/sediaan(+1) 3-9/sediaan(+2) > 10/sediaan(+3) 1 bakteri/lap pandang

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

KULTURSpesimen sputum konsentrasi & dekontaminasi dgn standar protokol n-acetylcystein-NaOH dikultur pada media Lowenstein Jensen diinkubasi 8 minggu dalam inkubator CO2 Identifikasi koloni: - visualisasi morfologi koloni dan pengecatan ZN- uji-uji biokimia uji katalase, uji niacin dan uji reduksi nitrat.

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

EIA ELISA, Dot-EIA, imunoperoksidase TB DOT- Prinsip px : reaksi ELISA- Tujuan : deteksi IgG spesifik thd M.tuberculosis- Reagen : antigen polimer dr sitoplasma M. tuberculosis- Sampel : serum- (+) dot merah

ELISA

UJI ICT TB Prinsip px : imunokromatografi Reagen : antigen M. tuberculosis yg diimobilisasi dlm bentuk 4 grs di kertas selulose astetat, garis ke 5 sbg kontrol Sampel : serum (+) terbentuk garis merah

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

Spesimen : feses (>>), apusan RTPx dalam 1 2 jam, atau + media transpor (cary-blair, amies, stuart) pada suhu 40CPemeriksaan:mikroskopikbiakan & identifikasites serologikdeteksi antigen deteksi toksindeteksi cepatdeteksi penanda lain

PEMERIKSAAN E.COLI

MikroskopikSediaan basah NaCl + metilen blue tutup cover glass 2 3 mnt lihatHasil : lekosit, eritrosit (+)Pengecatan gramE.coli batang gram negatif

Lab Infeksi Bakteri_Tropmed09

KulturKultur koloni

Identifikasi biokimiawimotilitas (+), rx indol (+), rx dekarboksilasi lisin (+), urease (-), methyl red (+), Voges Proskauer (-)

Tes lainSerologik dgn antisera monovalen / polivalenDeteksi antigen EIA O157:H7Deteksi toksin ELISA heat labile toxin (LT), heat stable toxin (ST) LT-GM1-ELISA, ST-GM1-ELISADeteksi cepat ICT (ab monoklonal O157)

H.pylori gram negatif, spiral, flagel, enzim urease, oksidase, katalaseInfeksi dispepsia, gastritis kronik, ulkus gaster, ulkus duodenum, Ca gaster, limfoma gaster non HodgkinPEMERIKSAAN H.PYLORI

Pemeriksaan

Invasif endoskopi, biopsi biakan, histologi, tes urease jar biopsi, PCRNon invasif tes nafas urea, tes ekskresi NH4, serologi IgG & IgA, antigen h.pylori feses, PCR feses

Histologi jaringan biopsi

Biakan morfologi koloni, pewarnaan gram, tes urease (+), oksidase (+), katalase (+)

IgG & IgA spesifikTes penyaring (>>), lebih murah >< endoskopi & biopsiSpesimen: serumMetode ELISA (>>>)Sensitivitas & spesifisitas baik (Cutler, 1995)Reagen antigen crude: sel utuh / dihancurkan fraksi sel : ekstraksi glisin, ag tahan panas antigen diperkaya: urease, ag 120-kDa

Antigen H.pylori dan PCR di fesesAntigen ICT, EIA (+): garis merah di zona pemeriksaan & kontrolPCR primer sekuens DNA dr antigen spesifik BM 27.000kD

Sepsis adalah kondisi medis yang berpotensi berbahaya atau mengancam nyawa, yang ditemukan dalam hubungan dengan infeksi yang diketahui atau dicurigai

Tanda & gejala memenuhi min 2 dari kriteria-kriteria berikut (systemic inflammatory response syndrome (SIRS)): Tachycardia >90 /menit waktu istirahat Suhu >100.4F/38C atau 20 /menit atau PaCO2 12000 sel/L atau 10% batang

PEMERIKSAAN pada SEPSIS

Penanda hematologi:LekositosisIT rasio > 0.2

Penanda biokimia: Sitokin proinflamasi IFN -, IL-1, IL-6, TNF- Sitokin antiinflamasi IL-4, IL-10, TGF- KemokinProtein fase akut CRP, prokalsitonin, AmiloidCD 11b, CD64

Pemeriksaan