Makalah Farfis KROMATOGRAFI

7/26/2019 Makalah Farfis KROMATOGRAFI

1/21

MAKALAH FARMASI FISIKA 1

KROMATOGRAFI

Diajukan untuk memenuhi salah satu tugas Farmasi Fisika1

Disusun oleh :

Gloria

3311141099

Farmasi C

Dosen Pengampu :

Dr.Fikri Alatas S.Si., M.Si., Apt.,

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS JENDERAL ACHMAD YANI

Jl. Terusan Jenderal Sudirman PO. Box 148, Cimahi 40533

Website :http://www.unjani.ac.id

2016
http://www.unjani.ac.id/http://www.unjani.ac.id/http://www.unjani.ac.id/http://www.unjani.ac.id/


2/21

KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur yang tiada terbatas penulis sampaikan kepada Tuhan Yang

Maha Esa yang telah memberikan rahmat dan karunia-Nya kepada penulis, sehinggapenulis dapat menyelesaikan penulisan Makalah dengan judul Kromatografi. Penulisan

makalah ini disusun dalam rangka memenuhi tugas mata kuliah Farmasi Fisika 1 oleh

dosen pembimbing mata kuliah Farmasi Fisika 1, Bapak Dr.Fikri Alatas S.Si., M.Si.,

Apt.,

Harapan penulis semoga makalah ini membantu menambah pengetahuan bagi

para pembaca, sehingga penulis dapat memperbaiki bentuk maupun isi makalah ini agar

kedepannya dapat lebih baik lagi.

Mohon maaf apabila ada kesalahan dalam penulisan Makalah ini. Semoga

Makalah ini dapat menjadi tambahan pengetahuan mengenai kromatografi. Terima kasih

telah membaca, memberi saran dan kritik.

Cimahi, 15 Mei 2016

Penyusun


3/21

DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR

DAFTAR ISI

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

1.2 Rumusan Masalah

1.3 Tujuan

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Definisi Kromatografi

2.2 JenisJenis Kromatografi

2.3 Kelebihan dan Kekurangan Kromatografi

2.4 Manfaat Kromatografi di Bidang Farmasi

BAB III PENUTUP

3.1 Kesimpulan

3.2 Saran

DAFTAR PUSTAKA


4/21

BAB I

PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang

Kromatografi pertama kali diberikan oleh Michel Tswett, seorang ahli dari

Botani Rusia, yang menggunakan kromatografi untuk memisahkan klorofil dari

pigmen-pigmen lain pada ekstrak tanaman. Kromatografi berasal dari bahasa Yunani

yang terdiri dari dua kata yaitu chromosyang berarti warna dan graphosyang berarti

menulis. Meskipun kromatografi diturunkan dari kata warna dan tulis, warna

senyawa-senyawa tersebut jelas hanya kebetulan saja terjadi dalam proses pemisahan

ini.Kromatografi merupakan suatu istilah umum yang digunakan untuk

bermacam-macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi sampel diantara

suatu fasa gerak yang bisa berupa gas maupun cairan dan fasa diam yang juga bisa

berupa cairan maupun padatan. Sedangkan menurut Farmakope Indonesia IV,

kromatografi adalah suatu tekhnik atau prosedur pemisahan zat terlarut oleh suatu

sistem yang terdiri dari 2 fase atau lebih yang salah satu diantarnya bergerak secara

berkesinambungan dalam arah tertentu dan didalamnya, zat zat itu menunjukkan

perbedaan yang disebabkan oleh adanya perbedaan dalam adsobsi, partisi, kelarutan,

tekanan uap, ukuran molekul atau kerapatan muatan ion. Kromatografi menurut

IUPAC adalah suatu metode yang digunakan untuk pemisahan komponen dalam

sample dimana komponen tersebut terdistribusi dalam 2 fase yang salah satunya

diam dan yang lainnya bergerak.

Meskipun dasar kromatografi adalah proses pemisahan, namun banyak

diantara cara ini yang dapat digunakan untuk analisi kuatitatif. Jenis-jenis

kromatografi yang bermanfaat dalam analisi kualitatif dan analisis kuantitatif adalah

kromatografi kertas, kromatigrafi lapis tipis (KLT), kromatografi kolom,

kromatografi gas, dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Kromatografi kertas

dan KLT pada umunya lebih bermanfaat untuk tujuan indentifikasi, karena lebih

mudah dan sederhana.

Kromatografi kolom memberikan pemilihan fase diam yang lebih luas dan

berguna untuk pemisahan campuran secara kuantitatif. Dalam indutri metode

inibanyak dipakaiuntuk menghilangkan zat-zat yang tidak diinginkandalam hasil,


5/21

misalnya pada pemurnian minyak tanah atau minyak goring dan pemurnian

hidroksida yang dihasilkan dari proses elektrolisis.

Teknik pemisahan kromatografi dilakukan untuk mendapatkan pemisahan

campuran diantara dua fase. Fase tersebut adalah fase diam dan fase gerak. Fase

diam dapat berupa zat cair dan zat padat, sedangkan fase gerak dapat berupa zat cair

atau gas.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang masalah yang telah dikemukakan, di bawah ini

dirumuskan beberapa masalah yang akan dibahas dalam makalah :

1. Apa pengertian kromatografi ?

2.

Bagaimana klasifikasi jenis kromatografi ?

3. Bagaimana kelebihan dan kekurangan kromatografi ?

4. Bagaimana manfaat kromatografi pada bidang farmasi ?

1.3 Tujuan

Adapun tujuan dari pembuatan makalah :

1. Untuk mengetahui arti kromatografi

2.

Untuk mengetahui jenisjenis kromatografi

3. Untuk mengetahui kelebihan dan kekurangan kromatografi

4. Untuk mengetahui manfaat kromatografi di bidang farmasi


6/21

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Definisi Kromatografi

Kromatografi adalah cara pemisahan campuran yang didasarkan atas

perbedaan distribusi dari komponen campuran tersebut diantara dua fase,yaitu fase

diam (stationary) dan fase bergerak (mobile). Fase diam dapat berupa zat yaitu zat

cair atau zat padat, sedangkan fase bergerak dapat berupa zat cair atau zat gas.

(Kimia Fisika untuk Paramedis, Estien Yazid,2005).

Selain pengertian kromatografi di atas, di lain sumber kromatografi di

definisikan sebagai suatu metode analitik untuk pemisahan dan pemurnian senyawaorganik dan anorganik. Metode ini berguna untuk fraksionasi campuran kompleks

dan pemisahan untuk senyawa-senyawa yang sejenis. (Konsep Dasar Kimia

Analitik,S.M.Khopkor, 2008).

Dalam teknik kromatografi, sampel yang merupakan campuran dari

berbagai macam komponen ditempatkan dalam situasi dinamis, dalam system yang

terdiri dari fase dian dan fase bergerak. Semua pemisahan pada kromatografi

tergantung pada gerkan relative dari masing-masing komponen di antara dua fase

tersebut. Senyawa atau komponen yang tertahan (terhambat) lebih lemah oleh fase

diam akan bergerak lebih cepat daripada komponen yang tertahan lebih kuat.

Perbedaan gerakan (mobilitas) antara komponen yang satu dengan yang lainnya

disebabkan oleh perbedaan dalam adsorbsi, partisi, kelarutan atau penguapan dia

antara kedua fase. Jika perbedaan-perbadaan ini cukup besar, maka akan terjadi

pemisahn secara sempurna. Oleh karena itu dalam kromatografi, pemilihan terhadap

fase bergerak maupun fase diam perlu dilakukan sedemikian rupa sehingga semua

komponen bisa bergerak dengan kecepatan yang berbeda-beda agar dapat terjadi

pemisahan.

Secara umum dapat dikatakan bahwa kromatografi adalah suatu proses

migrasi diferensial dinamis dalam system dimana komponen-komponen dalam

cuplikan ditahan secara selektif oleh fase diam.

Kromtografi dapat di golongkan dapat digolongkan berdasrkan fase yang

terlibat antar lain;


7/21

1)

Kromatografi gas-cair, bila fase geraknya berupa gas dan fase diamnya berupa

cairan yang dilapiskan pada padatan pendukung yang inert.

2) Kromatografi gas-padat, bila fase geraknya berupa gas dan fase diamnya berupa

padatan yang dapat menyerap/mengadsorpsi.

3) Kromatografi cai-cair, bila fase gerak dan diamnya berupa cairan, dimana fase

diamnya dilapiskan pada permukaan padatan pendukung yang inert.

4)

Kromatografi cair-padat, bila fase geraknya berupa gas sedangkan fase diamnya

berupa padat an yang amorf yang dapat menyerap.

Fase Gerak Fase Diam Prinsip Teknik Kerja

Gas Padat Adsorpsi Kromotografi gas-padat

Cair Padat Adsorpsi, Partisi

Kromatografi kolom, KLT,

kromatografi kertas

Cair Cair PartisiKromatografi kolom, KLT,

kromatografi kertas

Gas Cair Partisi Kromatografi gas-cair

Kromatografi juga dapat didasarkan atas prinsipnya, misalnya kromatografi

partisi (partition chromatography) dan kromatografi serapan(adsorption

chromatography). (Kimia Fisika Untuk Paramedis, Estien Yazid, 2005).

2.2 JenisJenis Kromatografi

Berdasarkan teknik kerja yang digunakan, kromatografi ada bermacam-

macam diantaranya adalah kromatografi lapis tipis, kromatografi kertas,

kromatografi kolom dan kromatografi cair-vakum.

1) Kromatografi Lapis Tipis (KLT)


8/21

Suatu teknik yang sederhana yang banyak digunakan, metode ini

menggunakan empeng kaca atau lembaran plastik yang ditutupi penyerap atau

lapisan tipis dan kering. Untuk menotolkan karutan cuplikan pada kempeng

kaca, pada dasarnya menggunakan mikro pipet atau pipa kapiler. Setelah itu,

bagian bawah dari lempeng dicelup dalam larutan pengelusi di dalam wadah

yang tertutup (Soebagio,2002).

Kromatografi lapis tipis merupakan cara pemisahan campuran senyawa

menjadi senyawamurni dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan

kromatografi juga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangat

sedikit, baik menyerap maupun merupakan cuplikan KLT dapat digunakan

untuk memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofilik seperti lipid-lipid

dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga

dapat digunakan untuk mencari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara

kromatografi dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Bahan lapis tipis

seperti silika gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksi-pereaksi

yang lebih reaktif seperti asam sulfat.( Fessenden, 2003).

KLT merupakan contoh dari kromatografi adsorpsi. Fase diam berupa

padatan dan fase geraknya dapat berupa cairan dan gas. Zat terlarut yang

diadsorpsi oleh permukaan partikel padat. Prinsip KLT adalah adsorbsi dan

partisi dimana adsorbsi adalah penyerapan pada pemukaan, sedangkan partisi

adalah penyebaran atau kemampuan suatu zat yang ada dalam larutan untuk

berpisah kedalam pelarut yang digunakan. Kecepatan gerak senyawa-senyawa

ke atas pada lempengan tergantung pada (Soebagil,2002).

Bagaimana kelarutan senyawa dalam pelarut, hal ini bergantung pada

bagaimana besar atraksi antara molekul-molekul senyawa dengan pelarut.

Bagaimana senyawa melekat pada fase diam, misalnya gel silika. Hal ini

tergantung pada bagaimana besar atraksi antara senyawa dengan gel silika.

Kromatografi lapis tipis menggunakan plat tipis yang dilapisi dengan adsorben

seperti silika gel, aluminium oksida (alumina) maupun selulosa. Adsorben

tersebut berperan sebagai fasa diam Fasa gerak yang digunakan dalam KLT

sering disebut dengan eluen. Pemilihan eluen didasarkan pada polaritas senyawa

dan biasanya merupakan campuran beberapa cairan yang berbeda polaritas,

sehingga didapatkan perbandingan tertentu. Eluen KLT dipilih dengan cara trial


9/21

and error. Kepolaran eluen sangat berpengaruh terhadap Rf (faktor retensi) yang

diperoleh (Gandjar, 2007).

Derajat retensi pada kromatografi lempeng biasanya dinyatakan sebagai

faktor resensi. Pada fase diam, jika dilihat mekanisme pemisahan, fase diam

dikelompokkan (Gritter,1991).

Nilai Rf sangat karakterisitik untuk senyawa tertentu pada eluen tertentu.

Hal tersebut dapat digunakan untuk mengidentifikasi adanya perbedaan senyawa

dalam sampel. Senyawa yang mempunyai Rf lebih besar berarti mempunyai

kepolaran yang rendah, begitu juga sebaliknya. Hal tersebut dikarenakan fasa

diam bersifat polar. Senyawa yang lebih polar akan tertahan kuat pada fasa

diam, sehingga menghasilkan nilai Rf yang rendah. Rf KLT yang bagus berkisar

antara 0,2 - 0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi

kepolaran eluen, dan sebaliknya (Gandjar, 2007).

2) Kromatografi Kertas

Kromatografi kertas adalah metode pemisahan dengan kerja dua fase

yaitu fase diam dan fase gerak yang hasil kerja kedua fase ini berupa rambatan

warna yang dapat terlihat pada kertas kromatografi dan bercak yang ada untuk

membandingkan antar totolan dari sampel dan totolan dari baku (Triwahyuni

dan Susilawati, 2003: 29).

Kromatografi kertas merupakan bentuk kromatografi yang paling

sederhana, mudah dan murah. Jenis kromatografi ini terutama banyak digunakan

untuk identifikasi kualitatif walaupun untuk analisis kuantitatif juga dapat

dilakukan. Fasa diam dalam kromatografi berupa air yang terikat pada selulosa

kertas sedangkan fasa geraknya berupa pelarut organik nonpolar. Berdasarkan


10/21

kedua hal itu kromatografi kertas dapat digolongkan kedalam kromatografi

partisi. Dalam kromatografi kertas fasa gerak merembes kedalam kertas karena

efek kapiler. Rembesan fasa gerak pada kertas karena dapat dilakukan dengan

teknik menaik (ascending) atau dengan teknik menurun (descending).

Pelaksanaan pemisahan dengan metode kromatografi kertas terbagi dalam tiga

tahap yaitu tahap penotolan cuplikan, tahap pengembangan dan tahap

identifikasi atau penampakan noda. Kromatografi kertas sangat berguna untuk

pemisahan zat anorganik, organik dan biokimia dalam jumlah yang sedikit.

Kromatografi kertas terbukti sangat berharga dalam biokimia dimana seringkali

dijumpai sampel kecil dan kompleks. Pada tahap penampakan noda atau

identifikasi. Jika noda sudah berwarna dapat langsung diperiksa dan ditentukan

harga Rfnya. Harga Rf dihitung sebagai jarak yang ditempuh oleh komponen

dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh eluen (fasa gerak) (Soebagio, dkk,

2004: 85-86).

Kromatografi kertas yang dilakukan merupakan kromatografi partisi,

yang termasuk dalam kromatografi cair-cair maka yang berperan sebagai fase

diam biasanya adalah air yang membentuk kompleks dengan serat selulosa pada

kertas, sedangakn fase gerak adalah pelarut (Azizahwati, 2007: 21).

Pada pemisahan campuran campuran dalam kolom, solut dicirikan

denagn waktu retensi dan faktor retensi yang berbanding lurus dengan nilai D.

Waktu retansi merupakan lamanya waktu yang dibutuhkan solut untuk melewati

kolom. Pemisahan kromatografi planar ini adalh pada umumnya dihentikan

sebelum semua fase gerak melewati seluruh permukaan fase diam. Solut pada

kedua kromatografi ini dikarakterisasi dengan jarak migrasi solut terhadap jarak

ujung fasa geraknya partisi merupakan proses sorpsi yang analog dengan

ekstraksi pelarut. Fasa diam cair diikatkan pada padatan lapis tipis yang lemban

(inert). Karena fase diam cair diikatkan pada padatan pendukung maka masih

diperdebatkan pakah proses sorpsinya merupakan partisi murni atau partisi yang

modifikasi karena adsorpsi juga mungkin terjadi. Dalam partisi yang sebenarnya

solut akan terdistribusi diantara fase gerak dan fasa diam sesuai dengan

kelarutan relatif diantara keduanya ( Gandjar dan Rohman, 2007: 326-331).

Dalam kromatografi kertas digunakan kertas saring. Biasanya berbentuk

pita selebar 2-5 cm., dari mana lembaran yang panjangnya diperlukan dapatdengan mudah digunting. Lembaran yang panjang diperlukan dalam teknik


11/21

kromatogarfi lapis tipis (TLC) yang lebih modern, menggunakan lembaran tipis

aluminium oksida, gel silika, selulosa atau sesuatu bahan lain yang didukung

oleh suatu lembaran logam atau suatu polimer lapisan kromatografi dapat

disiapkan dalam laboratorium dari adsorben yang tersedia dipasarn. Dalam

kromatografi lapisan tipis maupun kertas sedikit bahan (katakan larutan air yang

mengandung campuran kertas) ditaruh pada daerah terbatas didekat ujung

selembar kertas saring. Atau lapis tipis dan suatu pelarut dibiarkan berdifusi dari

ujung kertas atau lapis. Dan suatu pelarut dibiarkan berdifusi pada kondisi yang

sesuai setelah beberapa waktu (1-30) jam. Campuran akan dijumpai telah

berpindah dari daerah penotolan dan telah terpisah seluruhnya atau sebagian

menjadi komponen- komponennya sebagai zona yang jelas. Telah digunakn

sejumlah besar reagensia organik dan anorganik. Kriterias dalam memilih

reagensia untuk kromatografi kertas berbeda dengan kriteria yang biasa dipakai

untuk memilih reagewnsia uji bercak ( Svehla, 1985: 534- 539).

Teknik kromatografi kertas yaitu proses pengeluaran asam mineral dari

kertas disebut desalting. Larutan ditempatkan pada kertas dengan menggunakan

mikropipet pada jarak 2 3 cm dari salah satu ujung kertas dalam bentuk

coretan garis horizontal. Setelah kertas dikeringkan, diletakkan diruang yang

sudah dijenuhkan dengan air atau dengan pelarut yang sesuai. Penjenuhan dapat

dilakukan 24 jam sebelum analisis. Descending adalah salah satu teknik di mana

cairan dibiarkan bergerak menuruni kertas akibat gravitasi. Pada teknik

ascending, pelarut bergerak ke atas dengan gaya kapiler. Nilai Rf harus sama

baik pada descending maupun ascending. Sedangkan yang ketiga dikenal

sebagai cara radial atau kromatografi kertas sirkuler. Kondisi-kondisi berikut

harus diperhatikan untuk memperoleh nilai Rf yang reprodusibel. Temperatur

harus dikendalikan dalam variasi tidak boleh lebih dari 0,5oC. Kertas harus

didiamkan dahulu paling tidak 24 jam dengan atmosfer pelarutnya, agar

mencapai kesetimbangan sebelum pengaliran pelarutnya pada kertas. Dilakukan

beberapa pengerjaan yang parallel, Rfnya tidak boleh berbeda lebih dari 0,02

(Khopkar, 2008, hal: 163).

Suatu atomiser umumnya digunakan sebagai reagent penyemprot bila

batas permukaan pelarut dan zat terlarut dalam kertas ingin dibuat dapat dilihat.

Atomiser yang halus lebih disukai. Gas-gas juga dapat digunakan sebagaipenanda bercak, untuk karbohidrat notasi Rg digunakan untuk menggantikan Rf.


12/21

Setelah penandaan bercak batas permukaan, selanjutnya dapat dilakukan analisis

kolorimetri atau spektroskopi reflektansi bila sampel berupa logam. Materi yang

terdapat di dalam kertas dapat ditentukan secara langsung dengan pelarutan.

Kromatografi kertas selain untuk pemisahan dan analisis kuantitatif, juga sangat

bermanfaat untuk identifikasi. Hal ini dapat dilakukan misalkan dengan

membuat grafik antara Rm terhadap jumlah kation dalam suatu deret homolog,

maka memungkinkan untuk mengidentifikasi suatu anggota deret homolog

(Khopkar, 2008, hal: 163).

Susunan serat kertas membentuk medium berpori yang bertindak sebagai

tempat untuk mengalirnya fase gerak. Berbagai macam kertas yang secara

komersial tersedia adalah whatman 1, 2, 31 dan 3 MM, kertas asam asetil, kertas

kieselgurh, kertas silikon dan kertas penukar ion juga digunakan. Tersedia juga

kertas selulosa murni, kertas selulosa yang dimodifikasi dan kertas serat kaca.

Zat-zat hidrofobik dapat dipisahkan pada kedua jenis kertas terakhir ini. Kertas

asam asetil atau kertas silikon dapat digunakan untuk zat-zat hidrofobik,

sedangkan untuk reagent yang korosif, kertas serat kaca dapat digunakan. Untuk

memilih kertas, yang menjadi pertimbangan adalah tingkat dan kesempurnaan

pemisahan, difusivitas pembentukan spot, efek tailing dan pembentukan komet

serta laju pergerakan pelarut terutama untuk teknik descending (Khopkar, 2008,

hal: 161162).

3) Kromatografi Kolom

Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom

sebagai alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran.

Alat tersebut berupa pipa gelas yang dilengkapi suatu kran dibagian bawah

kolom untuk mengendalikan aliran zat cair, ukuran kolom tergantung dari


13/21

banyaknya zat yang akan dipindahkan. Secara umum perbandingan panjang dan

diameter kolom sekitar 8:1 sedangkan daya penyerapnya adlah 25-30 kali berat

bahan yang akan dipisahkan. Teknik banyak digunakan dalam pemisahan

senyawa-senyawa organic dan konstituen-konstituen yang sukar menguap

sedangkan untuk pemisahan jenis logam-logam atau senyawa anorganik jarang

dipakai (Yazid, 2005, hal: 98).

Dalam proses kromatografi selalu terdapat salah satu kecenderungan

molekul-molekul komponen untuk melarut dalam cairan, melekat pada

permukaan padatan halus, bereaksi secara kimia dan terekslusi pada pori-pori

fasa diam. Komponen yang dipisahkan harus larut dalam fasa gerak dan harus

mempunyai kemampuan untuk berinteraksi dengan fasa diam dengan cara

melarut di dalamnya, teradsorpsi atau bereaksi secara kimia. Pemisahan terjadi

berdasarkan perbedaan migrasi zat-zat yang menyusun suatu sampel. Hasil

pemisahan dapat digunakan untuk keperluan analisis kualitatif, analisis

kuantitatif dan pemurnian suatu senyawa. Dalam beberapa hal metode

pemisahan kromatografi mempunyai kemiripan dengan metode pemisahan

ekstraksi. Kedua metode ini sama-sama menggunakan dua fasa, dimana fasa satu

bergerak terhadap fasa lainnya, kesetimbangan solut selalu terjadi di antara

kedua fasa ( Alimin dkk, 2007, hal: 74-75).

Pemisahan kromatografi kolom adsorpsi didasarkan pada adsorpsi

komponen-komponen campuran dengan afinitas berbeda-beda terhadap

permukaan fase diam. Kromatografi kolom terabsorpsi termasuk pada cara

pemisahan cair padat, substrat padat bertindak sebagai fasa diam yang sifafnya

tidak larut dalam fasa cair, fasa bergeraknya adalah cairan atau pelarut yang

mengalir membawa komponen campuran sepanjang kolom. Pemisahan

bergantung pada kesetimbangan yang terbentuk pada bidang antar muka diantara

butiran-butiran adsorben dan fase bergerak serta kelarutan relatif komponen

pada fasa bergeraknya. Antara molekul-molekul komponen dan pelarut terjadi

kompetisi untuk teradsorpsi pada permukaan adsorben sehingga menimbulkan

proses dinamis. Keduanya secara bergantian tertahan beberapa saat di

permukaan adsorben dan masuk kembali pada fasa bergerak (Yazid, 2005, hal:

100).

Pada saat teradsorpsi komponen dipaksa untuk berpindah oleh aliran fasabergerak yang ditambahkan secara kontinu, akibatnya hanya komponen yang


14/21

mempunyai afinitas lebih besar terhadap adsorben akan secara selektif tertahan.

Komponen afinitas paling kecil akan bergerak lebih cepat mengikuti aliran

pelarut. Pada kromatografi adsorpsi, besarnya koefisien distribusi sama dengan

konsentrasi zat terlarut pada fasa teradsorpsi dibagi konsentrasinya pada fasa

larutan. Ketergantungan jumlah zat terlarut yang teradsorpsi terhadap

konsentrasi zat terlarut dalam larutan dinyatakan dengan isoterm adsorpsi

Langmuir (Yazid, 2005, hal: 100).

Metode pemisahan kromatografi kolom ini memerlukan bahan kimia

yang cukup banyak sebagai fasa diam dan fasa bergerak bergantung pada ukuran

kolom gelas. Untuk melakukan pemisahan campuran dengan metode

kromatografi kolom diperlukan waktu yangcukup lama, bias berjam-jam hanya

untuk memisahkan satu campuran. Selain itu, hasil pemisahan kurang jelas

artinya kadang-kadang sukar mendapatkan pemisahan secara sempurna karena

pita komponen yang satu bertumpang tindih dengan komponen lainnya. Masalah

waktu yang lama disebabkan laju alir fasa gerak hanya dipengaruhi oleh gaya

gravitasi bumi, ukuran diameter partikel yang cukup besar membuat luas

permukaan fasa diam relative kecil sehingga tempat untuk berinteraksi antara

komponen-komponen dengan fasa diam menjadi terbatas. Apabila ukuran

diameter partikel diperkecil supaya luas permukaan fasa diam bertambah

menyebabkan semakin lambatnya aliran fasa gerak atau fasa gerak tidak

mengalir sama sekali. Selain itu fasa diam yang sudah terpakai tidak dapat

digunakan lagi untuk pemisahan campuran yang lain karena sukar meregenerasi

fasa diam (Hendayana, 2006, hal: 2-3).

Untuk memisahkan campuran, kolom yang telah dipilih sesuai campuran

diisi dengan bahan penyerap seperti alumina dalam keadaan kering atau dibuat

seperti bubur dengan pelarut. Pengisian dilakukan dengan bantuan batang

pengaduk untuk memanfaatkan adsorben dan gelas wool pada dasar kolom.

Pengisian harus dilakukan secara hat-hati dan sepadat mungkin agar rata

sehingga terhindar dari gelembung-gelembung udara, untuk membantu

homogenitas biasanya kolom setelah diisi divibrasi diketok-ketok. Sejumlah

cuplikan yang dilarutkan dalam sedikit pelarut, dituangkan melalui sebelah atas

kolom dan dibiarkan mengalir ke dalam adsorben. Komponen-komponen dalam

campuran diadsorpsi dari larutan secara kuantitatif oleh bahan penyerap berupapita sempit pada permukaan atas kolom. Dengan penambahan pelarut secara


15/21

terus-menerus, masing-masing komponen akan bergerak turun melalui kolom

dan pada bagian atas kolom akan terjadi kesetimbangan baru antara bahan

penyerap, komponen campuran dan eluen. Kesetimbangan dikatakan tetap

apabila suatu komponen yang satu dengan yang lainnya bergerak ke bagian

bawah kolom dengan waktu atau kecepatan berbeda-beda sehingga terjadi

pemisahan (Yazid, 2005, hal: 200-2001).

4)

Kromatografi Cair-Vakum

Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode

fraksinasi yaitu dengan memisahkan crude extract menjadi fraksi-fraksinya yang

lebih sederhana. Pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fasa diam

dan aliran fasa geraknya dibantu dengan pompa vakum. Fasa diam yang

digunakan dapat berupa silika gel atau alumunium oksida (Ghisalberti, 2008).

Kromatografi kolom cair dapat dilakukan pada tekanan atmosfer atau

pada tekanan lebih besar dari atmosfer dengan menggunakan bantuan tekanan

luar misalnya gas nitrogen. Untuk keberhasilan praktikan di dalam bekerja

dengan menggunakan kromatografi kolom vakum cair, oleh karena itu syarat

utama adalah mengetahui gambaran pemisahan cuplikan pada kromatografi lapis

tipis (Harris, 1982).

Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan

senyawa metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel

sebagai absorben dan berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat :

metanol (elusi gradien) dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan

penarikan eluen (Helfman, 1983).

Cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi dikemas

kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT 10-40 m) dalam keadaan vakum

agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut yang

kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penjerap lalu divakumkan lagi.

Kolom dipisah sampai kering dan sekarang siap dipakai (Hostettman, 1986).

Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan dalam

KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom terbagi menjadi dua macam :

Cara Basah

Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan

melarutkan fasa diam dalam fase gerak yang akan digunakan. Campuran

kemudian dimasukkan ke dalam kolom dan dibuat merata. Fase gerak


16/21

dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan fase diam yang tetap dan rata,

kemudian aliran dihentikan.

Cara kering

Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara

memasukkan fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi.

Fase diam tersebut selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan

digunakan. (Sarker et al., 2006).

Preparasi sampel saat akan dielusi dengan KCV juga memiliki berbagai

metode seperti preparasi fasa diam. Metode tersebut yaitu cara basah dan cara

kering (Canell, 1998).

Preparasi sampel cara basah dilakukan dengan melarutkan sampel dalam

pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak dalam KCV. Larutan

dimasukkan dalam kolom kromatografi yang telah terisi fasa diam. Bagian atas

dari sampel ditutupi kembali dengan fasa diam yang sama. Sedangkan cara

kering dilakukan dengan mencampurkan sampel dengan sebagian kecil fase

diam yang akan digunakan hingga terbentuk serbuk. Campuran tersebut

diletakkan dalam kolom yang telah terisi dengan fasa diam dan ditutup kembali

dengan fase diam yang sama (Sarker et al., 2006).

2.3 Kelebihan dan Kekurangan Kromatografi

1) Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kelebihan KLT :

KLT lebih banyak digunakan untuk tujuan analisis.

Hanya membutuhkan sedikit pelarut.

Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna,

fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet.

Dapat dilakukan elusi secara mekanik (ascending), menurun (descending),

atau dengan cara elusi 2 dimensi.

Preparasi sample yang mudah

Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan

ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak.

Biaya yang dibutuhkan terjangkau.

Jumlah perlengkapan sedikit.


17/21

Dapat untuk memisahkan senyawa hidrofobik (lipid dan hidrokarbon) yang

dengan metode kertas tidak bisa (Gandjar dan Rohman, 2007).

Kekurangan KLT :

Butuh ketekunan dan kesabaran yang ekstra untuk mendapatkan

bercak/noda yang diharapkan.

Butuh sistem trial and eroruntuk menentukan sistem eluen yang cocok.

Memerlukan waktu yang cukup lama jika dilakukan secara tidak tekun

2) Kromatografi Kertas

Kelebihan Kromatografi Kertas :

Tidak diperlukan peralatan yang teliti dan mahal.

Dapat diperoleh hasil yang baik walaupun dengan peralatan dan materiyang

sederhana.

Senyawa yang terpisah dapat dideteksi pada kertas dan diidentifikasi.

Kekurangan Kromatografi Kertas :

Banyaknya permasalahan yang menyangkut cara pemasukan

fasa gerak, perambatan fasa gerak dan penggumpalan.

Membutuhkan waktu lama karena panjang kertas bisa hingga 50 cc.

Keterbatasan parameter senyawa yang di uji.

3) Kromatografi Kolom

Kelebihan Kromatografi Kolom :

Dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi preparative. Digunakan untuk

menentukan jumlah komponen campuran. Digunakan untuk memisahkan

dan purifikasi substansi.

Kekurangan Kromatografi Kolom :

Pemisahan lambat

Penjerapan linarut yang tidak bolak-balik

Tidak dapat dipakai jika partikel terlalu kecil.

4) Kromatografi Cair-Vakum

Kelebihan KCV :

Konsumsi fase gerak KCV hanya 80% atau lebih kecil dibanding dengan

kolom konvensional karena pada kolom mikrobor kecepatan alir fase gerak

lebih lambat (10-100l/menit).


18/21

Adanya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih ideal

jika digabung dengan spectrometer massa.

Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih pekat

karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas

missal sampel klinis.

Kerugian KCV :

Membutuhkan waktu yang cukup lama.

Sampel yang dapat digunakan terbatas.

2.4 Manfaat Kromatografi di Bidang Farmasi

1)Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis sangat memberikan banyak manfaat di

berbagai penelitian. Terlebih lagi dunia kerja di bidang farmasi sangat luas, tidak

hanya obat-obatan, makanan, minuman, serta kosmetik pun menjadi tanggung

jawab seorang farmasis. Sebagai contoh dalam pengujian kandungan Rhodamin-

B dalam sediaan kosmetika lipstick, uji kandungan bahan kimia obat dalam

sediaan jamu, uji pemanis dalam makanan, dan lain sebagainya.

Pengujian tersebut dilakukan karena penambahan bahan kimia dalam

sediaan tradisional seperti itulah yang bertentangan dengan Peraturan Menteri

Kesehatan RI No.246/Menkes/V/1990 yang menyatakan bahwa industri obat

tradisional dilarang memproduksi segala jenis obat tradisional yang mengandung

bahan kimia obat dan melanggar Undang-Undang Kesehatan No. 23 Tahun 1992

serta Undang-Undang No. 8 Tahun 1999, tentang perlindungan konsumen.

Sebab penambahan dengan dosis maupun cara yang tidak benar dapat

memberikan dampak yang merugikan bagi konsumen, maka dari itu Balai

Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM) hingga saat ini masih terus menguji

makanan, obat, serta kosmetik yang beredar dipasaran.

2)Kromatografi Kolom

Dalam bidang bioteknologi, kromatografi mempunyai peranan yang sangat

besar. Misalnya dalam penentuan, baik kualitatif maupun kuantitatif, senyawa

dalam protein. Protein sering dipilih karena ia sering menjadi obyek molekul

yang harus dipurified (dimurnikan) terutama untuk keperluan dalam bio-farmasi.

Kromatografi juga bisa diaplikasikan dalam pemisahan molekul-molekul pentingseperti asam nukleat, karbohidrat, lemak, vitamin dan molekul penting lainnya.


19/21

Dengan data-data yang didapatkan dengan menggunakan kromatografi ini,

selanjutnya sebuah produk obat-obatan dapat ditingkatkan mutunya, dapat

dipakai sebagai data awal untuk menghasilkan jenis obat baru, atau dapat pula

dipakai untuk mengontrol kondisi obat tersebut sehingga bisa bertahan lama.

Dalam bidang clinical (klinik), teknik ini sangat bermanfaat terutama

dalam menginvestigasi fluida badan seperti air liur. Dari air liur seorang pasien,

dokter dapat mengetahui jenis penyakit yang sedang diderita pasien tersebut.

Seorang perokok dapat diketahui apakah dia termasuk perokok berat atau ringan

hanya dengan mengetahui konsentrasi CN- (sianida) dari sampel air liurnya.

Demikian halnya air kencing, darah dan fluida badan lainnya bisa memberikan

data yang akurat dan cepat sehingga keberadaan suatu penyakit dalam tubuh

manusia dapat dideteksi secara dini dan cepat. Sekarang ini, deteksi senyawa

oksalat dalam air kencing menjadi sangat penting terutama bagi pasien kidney

stones (batu ginjal). Banyak metode analisis seperti spektrofotometri,

manganometri, atau lainnya, akan tetapi semuanya membutuhkan kerja ekstra

dan waktu yang cukup lama untuk mendapatkan hasil analisis dibandingkan

dengan teknik kromatografi.


20/21

BAB III

PENUTUP

3.1

Kesimpulan

1. Kromatografi adalah cara pemisahan campuran yang didasarkan atas perbedaan

distribusi dari komponen campuran tersebut diantara dua fase,yaitu fase diam

(stationary) dan fase bergerak (mobile). Fase diam dapat berupa zat yaitu zat cair

atau zat padat, sedangkan fase bergerak dapat berupa zat cair atau zat gas.

2. Berdasarkan teknik kerja yang digunakan, jenis kromatografi diantaranya adalah

kromatografi lapis tipis, kromatografi kertas, kromatografi kolom dan

kromatografi cair-vakum.

3.2 Saran

Penulis menyadari dalam penyusunan dan pembuatan makalah ini masih

banyak kekurangan, maka dari pada itu kritik dan saran sangat penulis harapkan

untuk mencapai kesempurnaan makalah ini agar nisa menjadi lebih baik lagi.


21/21

DAFTAR PUSTAKA

Azizahwati,dkk. 2007. Analisis Zat Warna Sintetik Terlarang untuk Makanan yang

Beredar di Pasaran. Jurnal Ilmu kefarmasian. Vol. IV, NO.1. Jakarta.

Fessenden R.J dan J.S Fessenden. 2003.Dasar - Dasar Kimia Organik. Jakarta, Erlangga.

Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta:

Pustaka Pelajar.

Gritter, R, J., 1991, Pengantar Kromatografi Edisi II, Institut Teknologi Bandung,

Bandung

Harborne, J.B. 1987.Metode Fitokimia. ITB : Bandung.

Harris, et.al. 1982.An Introduction To Chemical Analysis, Savders College Publishing

Philadelpia : Holt-Savders Japan.

Heftmann, E. 1983. Steroids Dalam Kromatografi, Fundamentals and Aplication,

Amsterdam.

Hostettmenn, K, dkk. 1986. Cara Kromatografi Preparatif. ITB: Bandung.

Khopkar, S. M. 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik.Jakarta: Universitas Indonesia.

Sarker,SD., Latif,Z and Gray .Al.2006. Natural Product Isolation. Humana Press inc .

Totowa New jersey.

Soebagio., 2002, Kimia Analitik, Universitas Negeri Makassar Fakultas MIPA, Makassar.

Svehla.1985. Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif Makro dan Semimikro. Jakarta: PT

Kalman Media Pusaka.

Yazid, Estien. 2005. Kimia Fisika untuk Paramedis. Yogyakarta: Andi.

Makalah Farfis KROMATOGRAFI

Documents

Transcript of Makalah Farfis KROMATOGRAFI