MAKALAH Bu Herlina

download MAKALAH Bu Herlina

of 24

Transcript of MAKALAH Bu Herlina

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    1/24

    BAB I

    PENDAHULUAN

    Senyawa organik alami yang dihasilkan oleh mikroorganisme

    merupakan target skrining yang penting bagi berbagai senyawa bioaktif.

    Senyawa dari actinomycetes, khususnya yang memiliki nilai di lapangan

    sebagai produk bioaktif alami. Namun, tingkat penemuan zat baru dari

    mikroorganisme, terutama dari actinomycetes, baru-baru ini mengalami

    penurunan. Produk alami dari mikroba merupakan sumber penting bagi obat-

    obatan baik yang telah ada dan yang baru. Antara penghasil metabolit

    komersial penting, actinomycetes telah terbukti menjadi sumber produktif

    dengan kelompok kecil saja dapat menghasilkan senyawa yang banyak.

    Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh actinomycetes memiliki berbagai

    aktivitas biologis seperti antibakteri, antijamur, antioksidan, antitumor dan

    antivirus. Actinomycetes adalah kelompok yang paling signifikan dari

    mikroorganisme yang dianggap sebagai produsen penting antibiotik dan zat

    bioaktif yang penting lainnya.

    Organisme ini menghasilkan keanekaragaman dan keunikan, kadang-

    kadang senyawanya sangat kompleks yang menunjukkan potensi antibakteri

    yang sangat baik dan biasanya toksisitas rendah. Genus Streptomyces

    diidentifikasi sebagai sumber utama produk bioaktif alami yang mewakili

    beberapa 70-80% dari semua senyawa terisolasi.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    2/24

    Ada bukti bahwa metabolit tertentu, seperti asam klavulanat, mungkin

    disintesis oleh strain dalam clade spesifik dan bahwa kemampuan untuk

    mensintesis, misalnya, streptomisin dan metabolit tersebut tampaknya akan

    didistribusikan secara acak di seluruh genus. Hubungan spesifik/infraspesifik

    dalam Streptomycetes dan cara mereka tercermin dalam potensi biosintesis

    untuk menghasilkan senyawa bioaktif secara signifikan dapat mempengaruhi

    strategi untuk pencarian dan penemuan, skrining dan pengembangan

    bioproses. Untuk memperluas studi genomik, Streptomycetes akan

    mengungkapkan hubungan secara komprehensif, yang akan mengaktifkan

    validasi metodologi saat ini (dari 16S rDNA Phylogenies untuk pasangan

    DNA-DNA) dan mengarah pada pemahaman baru spesiasi, hubungan

    filogenetik dan fungsi genom dalam metabolisme sekunder.

    Dalam makalah ini, dijelaskan karakterisasi taksonomi actinomycetes

    strain NSQu-25 diisolasi dari wilayah El-Quseima, wilayah Sinai, Mesir, yang

    memiliki aktivitas antimikroba dan sitotoksik.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    3/24

    BAB II

    BAHAN DAN METODE

    a. Pengumpulan sample

    Koleksi Sampel: Lima belas sampel tanah dikumpulkan pada

    periode Februari-April 2012 dari empat yang berbeda daerah (Wadi El-

    Gudirat, El-Quseima, Gebel El-Maghara dan wilayah El-Hasana) Sinai

    Utara. Sampel tanah diambil dengan kedalaman 15-20 cm ke dalam

    permukaan tanah dan dimasukkan ke pra-label kantong plastik kecil steril

    dan tertutup rapat. Sampel tersebut kemudian disimpan diudara kering

    dan dilakukan pra-treatment dengan CaCO3(10 : 1 b/b) dan diinkubasi

    pada suhu 37 C selama 4 hari .

    b. Isolasi Biakan Actinomycetes dari Sampel Tanah:

    Isolasi dan penghitungan koloni actinomycetes dilakukan dengan

    menggunakan teknik difusi agar pada dua media yang berbeda. Media ini

    adalah; actinomycetes isolation agar medium (Difco, New Jersey (NJ),

    Amerika Serikat), yang mengandung (g/L): gliserol, 5.0, natrium

    propionat, 4,0; sodium caseinate, 2.0; KH2PO4, 2.0; l-asparagin, 0.1,

    MgSO4.7H2O, 0,1 dan FeSO4.7H2O 1,0 mg, Agar, 15 dan pH 7.0 dan

    medium agar pati nitrat terdiri dari (g / L): pati larut, 20,0; NaNO3, 2.0;

    K2HPO4 (anhidrat), 1.0, KCl, 0,5; MgSO4.7H2O, 0.5; CaCO3.2H2O, 2.0,

    Agar, 15 dan pH 7,0. Isolasi media menggunakan CaCO3 and

    cycloheximide (50g/ml) untuk meminimalkan kontaminasi jamur dan

    diinkubasi pada 28C selama 7-10 hari. Satu gram tanah kering

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    4/24

    disuspensikan ke dalam tabung reaksi yang mengandung 9 ml larutan

    NaCl steril (0,85%) dan satu tetes Tween 80 dan 0,05% lauryl sulfat

    (Sodium dodecyle sulfate, SDS) dan dipanaskan pada suhu 50C selama

    10 menit.

    Pengenceran pada 10-3, 10-5 dan 10-7 dari suspensi. Kemudian

    dituang pada media isolasi kemudian diinkubasi selama 7 sampai 10 hari

    pada suhu 28 C. Koloni yang terpilih dipindahkan dari kultur campuran

    dari cawan petri ke medium agar dan masing-masing diinkubasi pada

    suhu 28 C selama 7 hari lagi. Cawan petri yang mengandung kultur

    murni yang disimpan pada suhu 4 C sampai pemeriksaan lebih lanjut

    c. Skrining untuk Senyawa Bioaktif dari actinomycetes yang diisolasi

    1. Skrining untuk Aktivitas antimikroba:

    Isolat biakan actinomycete diuji aktivitas antimikroba mereka

    terhadap organisme uji berikut; Bacillus subtilis ATCC 6633,

    Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 7839,

    Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Candida albicans ATCC

    10231, Aspergillus niger ATCC 16404 dan Aspergillus flavus ATCC

    16883.

    Nutrien agar (Merck, Darmstadt, Jerman) digunakan untuk

    bakteri pada suhu 37 C selama 24 jam, Sabarouds agar (Lab M.,

    Bury, Lancashire, Inggris) untuk khamir pada suhu 30 C selama 24

    jam dan PDA (Merck, Darmstadt, Jerman) untuk jamur pada 25 C

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    5/24

    selama 48 jam. Bioassay antimikroba dilakukan menggunakan

    metode difusi agar.

    2. Skrining untuk Aktivitas Sitotoksik:

    Ekstrak kasar isolat bioaktif (tertinggi aktivitas antimikroba)

    diuji in vitro untuk aktivitas sitotoksik terhadap sel tumor manusia

    sebagai berikut; sel-sel kanker hati manusia (HEPG2), sel-sel kanker

    usus besar manusia (HCT 116), sel-sel kanker payudara manusia

    (MCF7) dan sel kanker serviks manusia (HELA). Sel uji yang

    diperoleh dibekukan dalam nitrogen cair (-180 C) dari American Type

    Culture Collection kemudian dipertahankan pada National Cancer

    Institute (NCI), Kairo, Mesir, dengan seri sub-kultur. Uji antitumor dari

    ekstrak kasar diuji dengan metode uji MTT.

    d. Karakterisasi Taksonomi dari Isolat Actinomycete NSQu-25

    Karakterisasi dari strain isolat ini sesuai dengan ISP (International

    Streptomyces Project). Penelitian dilakukan menggunakan mikroskop

    elektron. Isomer diaminopimelic acid dalam dinding sel dianalisis dengan

    menggunakan metode Becker et al. Produksi pigmen melanin, reduksi

    nitrat, pemanfaatan sumber C dan N dan karakteristik kultur dikerjakan

    sesuai dengan pedoman yang ditetapkan oleh ISP. Karakteristik fisiologis

    dan biokimia, seperti kegiatan lipase, protease, -amilase dan katalase

    yang diuji.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    6/24

    e. Identifikasi Molekuler dan filogenetik :

    Strain NSQu-25 diinokulasi pada 50 ml medium ISP-2 broth dan

    kultur diinkubasi pada 200 rpm pada suhu 28 C selama 24 jam. Total

    DNA genomik diekstraksi sesuai dengan metode Sambrook et al. 16S

    rRNA dari strain diamplifikasi dengan PCR menggunakan sistem PCR

    GeneAMP 9700 dari PE Biosystems Terapan (Perkin Elmer, Ohio, USA).

    f. Primers yang Digunakan :

    F27, 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3' dan R1492 5'-

    TACGGYTACCTTGTTACGACTT- 3' menggunakan software BiolegioBV

    (Biolegio, Nijmegen, Belanda). Produk PCR dimurnikan menggunakan

    sebuah QIAquick PCR purification kit (Qiagen, Hilden, Jerman) dan

    dideteksi menggunakan sistem dokumentasi gel, (Alpha-Imager 2200,

    CA, USA). Produk PCR dirangkai menggunakan Unit Analisis Gene

    dalam laboratorium genetik perusahaan Mesir. Sekuen DNA ditentukan

    menggunakan ABI PRISM 377 DNA sequencer dan ABI PRISM Big Dye

    Terminator Cycle Sequencing (Perkin Elmer, Ohio, AS). BLAST

    (www.ncbi.nlm.gov) digunakan untuk mengetahui kesamaan DNA.

    Beberapa deretan sekuen dan analisis filogenetik molekuler dilakukan

    dengan menggunakan software BioEdit. Pohon filogenetik dibuat

    menggunakan program TreeView .

    g. Produksi fermentasi Metabolit bioaktif:

    Streptomyces mirabilis strain NSQu-25 dikultivasi pada suhu

    28 C dengan dikocok dengan kecepatan 200 rpm pada rotary inkubator

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    7/24

    selama 6 hari pada suhu 30oC. Kultur tersebut dimasukkan ke dalam

    Erlenmeyer 250 ml yang berisi 50 ml medium fermentasi. Medium

    tersebut mengandung (g/L): starch; 20.0, NaNO3; 2.0, K2HPO4; 1.0,; 0,5,

    MgSO4 7H2O; 0,5, KCl; 0,5, larutan garam 1,0 ml CuSO4 5H2O (0,64

    g/L), FeSO4 7H2O (0,11 g/L), MnCl2 4H2O (0,79 g/L) dan ZnSO4

    7H2O (0,15 g/L)]. Media disesuaikan pada pH 7,0. Inokulasi dilakukan

    dengan menggunakan suspensi spora dari kultur NSQu-25 pada media

    ISP-2. Dua puluh tujuh liter kultur cair dikumpulkan dan disaring melalui

    kertas saring Whatman No.1, diikuti dengan sentrifugasi pada 5000 rpm

    selama 20 menit. Filtrat jernih disterilkan dengan menggunakan saringan

    Millipore 0,22 m dan diuji untuk aktivitas antimikroba dan sitotoksik nya.

    h. Ekstraksi dan Pemurnian Senyawa Bioaktif:

    Kultur cair ( 25 L ) diperoleh setelah filtrasi dengan ekstraksi dua

    kali dengan etil asetat dan kemudian konsentrasikan pada tekanan

    tereduksi menggunakan rotary evaporator ( Bchi, R - 114, Swiss ). Suhu

    dipertahankan kurang dari 50 C untuk menghasilkan 3,6 g ekstrak

    kasar. Ekstrak kasar ini dilarutkan dalam 5 ml metanol dan menggunakan

    kromatografi kolom (2,5 i.d. x 50 cm,silika gel 60; Merck ) sebagai fase

    diam. Kolom dielusi menggunakan polaritas gradien dari sistem pelarut;

    etil asetat : metanol (10:1 sampai 1:10 ), lima puluh ml fraksi dikumpulkan

    dan proses fraksinasi dimonitor menggunakan analisis KLT. Fraksi yang

    ditunjukkan mirip dengan profil KLT memberikan total akhir 13 fraksi (S1-

    S13) dikumpulkan masing-masing pada 15, 80, 140, 75, 45, 130, 59, 150,

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    8/24

    71, 96, 125, 215 dan 520 mg. Evaluasi bioaktivitas dari fraksi yang

    diperoleh diuji aktivitas antimikrobanya terhadap B. subtilus(ATCC 6633)

    sebagai uji organisme yang paling sensitif untuk ekstrak kasar asli melalui

    metode difusi agar. Fraksi bioaktif (fraksi yang memiliki aktivitas

    antibakteri tertinggi) yang diuji lagi aktivitas sitotoksiknya terhadap sel

    kanker usus besar manusia ( HCT116 ) sebagai sel kanker yang paling

    sensitif untuk ekstrak kasar asli oleh pengujian MTT. Fraksi yang

    menunjukkan aktivitas sitotoksik yang diaplikasikan pada kolom sephadex

    LH-20 (2 x 15 cm) menggunakan metanol 100 % sebagai pelarut eluen

    (500 ml) dan terakhir, 5 ml dari fraksi dikumpulkan. Sub-fraksi, 61 ( 190

    mg ) dipisahkan sebagai single band (kanal tunggal) untuk menghasilkan

    senyawa aktif murni.

    i. Elusidasi Struktur dariSenyawa Murni yang Diisolasi:

    Elusidasi struktur dari fraksi murni yang diperoleh (190 mg)

    dicapai melalui analisis spektroskopis seperti Spektra FTIR yang dicatat

    menggunakan metode KBr dari Fourier Transform Infrared (JASCO

    FT/IR-6100). Selain itu, spektrum NMR yang juga dinilai dan dicatat pada

    spectrometer NMR Varian Mercury VX-300 beroperasi pada 300 MHz

    untuk H di CDCl3 menggunakan TMS sebagai standar internal. Selain itu,

    spektrum EIMS dari fraksi murni juga dipertimbangan dan diperoleh

    dengan bagian Direct Inlet DI-50 yang terhubung dengan massa analyzer

    Shimadzu GC/MSQP5050, di pusat mikro-analitis, Fakultas Sains,

    Universitas Kairo, Mesir.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    9/24

    BAB III

    PEMBAHASAN

    a. Karakterisasi Taksonomi dari Isolat Actinomycetes, NSQu 25

    Taksonomi Konvensional : Studi Mikro-morfologi dari isolat

    actinomycetes, NSQu - 25 melalui mikroskop cahaya ( x400 ) dan

    pemindaian mikroskop elektron ( x6.500 ) mengungkapkan bahwa , rantai

    spora strain adalah spiral dengan permukaan spora yang berduri

    (Gambar 1a , b). Seluruh sel hidrolisat dari strain ini mengandung LL-

    diaminopimelic acid ( LL - DAP ) dan glisin menunjukkan bahwa, strain

    memiliki dinding sel tipe-kemo I tetapi tidak ada gula karakteristik yang

    dapat dideteksi . Analisis komposisi dinding sel adalah salah satu metode

    utama yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi karakteristik

    kemotaksonomi Streptomyces, kehadiran LL - DAP di dinding sel juga

    menandakan bahwa strain ini adalah Streptomyces . Karakteristik kultur

    dari isolat actinomycete, NSQu - 25 ditumbuhkan pada berbagai media

    ISP dan non - ISP media (Tabel 1) menunjukkan bahwa hifa udara strain

    adalah abu-abu. Oleh karena itu, hifa tersebut ditetapkan sebagai seri

    abu-abu dengan substrat miselium sedikit kuning juga tidak ada pigmen

    terdifusi yang dicatat untuk isolat ini. Sifat fisiologis dan biokimia;

    pemanfaatan sumber C- dan N-, toleransi terhadap NaCl, pH

    pertumbuhan, suhu pertumbuhan, inhibitor pertumbuhan dan sensitivitas

    terhadap antibiotik dipelajari (Tabel 2). Kultur dan sifat fisiologis strain

    isolat dibandingkan dengan yang dilaporkan untuk actinomycetes

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    10/24

    sebagaimana yang dijelaskan dalam Bergeys Manual tentang Penentuan

    Bakteriologi.

    Tabel 1. Karakteristik kultur Streptomyces mirabilis, NSQu-25 pada media

    kultur yang berbeda

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    11/24

    Tabel 2. Karakteristik morfologi, fisiologi, dan biokimia Streptomyces

    mirabilis,NSQu-25

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    12/24

    b. Rangkaian Gen 16S rRNA dan Analisis Filogenetik:

    Untuk mengkonfirmasi identifikasi isolat strain, urutan 16S rRNA

    dari isolat lokal, NSQu-25 dibandingkan dengan urutan 10 Streptomyces

    spp. melalui beberapa penjajaran urutan (multiple sequence aligment).

    Pasangan primer, F27/R1492 digunakan untuk memperkuat fragmen dari

    ukuran yang diharapkan DNA genomik (1500 bp); DNA ini diisolasi dari

    kontrol positif strain Streptomyces griseusATCC 10137. Pasangan primer

    ini terutama digunakan untuk memperkuat 27-bp dan fragmen 1492-bp.

    Analisis eksperimental amplifikasi PCR dipelajari melalui elektroforesis

    gel agarosa (Gambar 2). Hasil yang diperoleh dalam persetujuan dengan

    Edward yang menemukan bahwa primer ini spesifik untuk bakteri.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    13/24

    Deretan dari urutan nukleotida (540 bp) Streptomyces mirabilis,

    NSQu-25 dilakukan melalui pencocokan dengan 16S rRNA gen

    melaporkan urutan gen-gen dalam bank gen. Pohon filogenetik berasal

    dari matriks jarak menggunakan metode neighbor-joining (Gambar 3).

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    14/24

    Dari hasil tersebut, urutan 16S rRNA adalah 99% identik dengan

    Streptomyces mirabilis Uz1010 dan kemudian ditetapkan sebagai

    Streptomyces mirabilis strain NSQu-25. Sistem identifikasi modern

    Streptomyces didasarkan pada data sekuen 16S rDNA, yang telah

    memberikan informasi tentang sistematis Streptomyces dan kemudian

    telah digunakan untuk mengidentifikasi beberapa isolat baru

    Streptomyces.

    Kesimpulannya, analisis filogenetik ditambah dengan identifikasi

    konvensional isolat lokal, NSQu-25 menunjukkan bahwa, strain yang

    paling dekat hubungannya adalah Streptomyces mirabilis. Oleh karena

    itu,Streptomyces mirabilisNSQu-25 diusulkan sebagai namanya.

    c. Studi Spektroskopik pada Senyawa Bioaktif Utama:

    Dalam penelitian ini, antibiotik yang diproduksi oleh isolat lokal,

    adalah unsur pemisahan bioaktif utama dari kultur filtrat dan strukturnya

    ditentukan oleh teknik spektroskopi. Senyawa diisolasi sebagai cairan

    berminyak tidak berwarna, yang larut dalam etanol, etil asetat, kloroform,

    n-heksana, tetapi tidak larut di dalam air. Senyawa isolat memberikan

    reaksi positif (warna ungu) dengan konsentrasi H2SO4 dan larutan vanillin

    0,5% dalam metanol/asam sulfur/asam asetat (2:1:1), tetapi tidak dengan

    reagen ninhidrin, FeCl3 dan SbCl3 dalam KLT. Spektrum IR. (Gbr. 4)

    memperlihatkan puncak pada v 2981, 2936, 2868, 1731, 1124 and 1074

    cm-1 yang menyatakan keberadaan dari berkas karbonil dan ikatan kuat

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    15/24

    C-O. Dalam analisis GLC menunjukkan keberadaan komponen senyawa

    utama tunggal; dengan retensi waktu 25.19 menit (Gbr. 5a). Rumus

    molekulernya adalah berdasarkan C24H38O4 dalam EIMS (Gbr. 5b)

    memperlihatkan keberadaan dari ion molekuler (M+) pada m/z 390

    Dalton, ion penting lainnya adalah terdeteksi pada m/z 279, 167 dan 149

    (titik dasar puncak). Formula kimia dari senyawa ini menyarankan

    keberadaan setara dari enam ikatan ganda. Spektrum H NMR (Gbr. 6)

    memperlihatkan proton aromatic pada 7.68 (2 H, dd, J=5.8, 3 Hz) dan

    7.54 (2 H, dd, J=5.8, 3 Hz). Adanya dua ikatan ganda masing-masing

    menunjukkan kesetaraan dua proton aromatik, menyarankan keberadaan

    substituen bantalan cincin benzen ortho-disubstitusi yang sama pada

    posisi keduanya. Ada juga 2 proton multiplet pada 4.21,untuk proton

    terikat dari sebuah hubungan C-O. Selain itu, spektrum memperlihatkan

    multiplet sekeliling 0.89-1.66 untuk angka dari kelompok metilen dan

    metil.

    Dari data spektroskopi yang disebut di atas, struktur molekuler

    dari senyawa isolat adalah ditentukan menjadi di-(2-ethylhexyl) phthalate

    (DEHP) (Gbr.7). Senyawa phthalate adalah petrokimia yang digunakan

    pada pembuatan plastik atau jenis pelarut dari produksi industri. Namun,

    banyak turunan phthalate telah diisolasi dari organisme yang hidup di

    tanah dan laut termasuk tanaman, fungi dan kultur bakteri, terutama

    termasuk juga marga Streptomyces. Di-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP)

    telah menggambarkan dari Streptomyces bangladeshiensis. Turunan

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    16/24

    phthalate lainnya telah diisolasi dari jenis Streptomyces, seperti dibutyl

    phthalate.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    17/24

    d. Aktifitas Biologi dari Spektrum Antimikroba Senyawa Isolat (DEHP):

    Konsentrasi penghambatan minimun (MIC) dari senyawa murni

    (Tabel 3) membuktikan aktif terhadap bakteri gram positif; Bacillus subtilis

    ATCC 6633 dengan MIC 3.5 g/ml, Staphylococcus aureus ATCC 6538

    dengan MIC 1.47 g/ml dan Streptococcus equosemens ATCC 12388

    dengan MIC 2.37 g/ml tetapi penghambatan terhadap bakteri gram

    negatif rendah; Escherichia coli ATCC 7839 dengan MIC 5.4 g/ml,

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    18/24

    Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 dengan MIC 6.2 g/ml dan

    Closteridium perfrigens ATCC 3626 dengan MIC >50 g/ml. Disisi lain,

    senyawa tersebut memiliki efek yang kuat terhadap C. albicanswith MIC

    1.2 g/ml sedangkanA. niger andA. flavusbahkan kurang rentan untuk

    senyawa tersebut. Aktivitas antimikroba isolat DEHP dari Streptomyces

    avidinii strain SB9 terhadap berbagai mikroorganisme sesuai dengan

    laporan sebelumnya membuktikan bahwa DEHP adalah senyawa aktif

    biologis. Kemampuan aktifitas antimikroba adalah juga berdasarkan dari

    mikroorganisme Streptomyces bangladeshiensis.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    19/24

    e. Aktifitas Sitotoksik dari Senyawa DEHP:

    Senyawa isolat dievaluasi untuk aktifitas sitotoksik terhadap jumlah sel

    kanker manusia (Gbr. 8), DEHP menunjukkan kekuatan sitotoksik

    terhadap sel kanker usus manusia (HCT 116) dengan IC50 3.681 g/ml

    dan sel kanker payudara manusia (MCF7) dengan IC50 6.941 g/ml.

    Sitotoksik menengah terhadap sel kanker hati manusia (HEPG2) dengan

    IC50 9.028 g/ml. Disisi lain, tidak aktif terhadap sel kanker serviks

    manusia (HELA).

    Senyawa DEHP dianggap sebagai agen pro inflamasi pada studi lainnya.

    Senyawa yang sama diisolasi dari tanaman Aloe vera dan ditemukan

    memiliki efek antileukimia dan antimutasi genetic. Urutan gen rRNA 16S

    dari Streptomyces mirabilis NSQu-25 dibandingkan dengan jenis

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    20/24

    Streptomyces lain. Hal itu telah memperlihatkan nilai kemiripan tertinggi

    mencapai 99% dengan jenis Streptomyces yang berbeda (Gbr. 3)

    sebagai pembeda untuk mereka dalam karakterisasi morfologi dan

    utilisasi karbon dimana batas deteksi yang berbeda dari metode

    pembuatan ada tidaknya perbandingan yang sulit. Disisi lain, nilai

    kemiripan diantara isolat dan produsen DEHP yang dikenal dari strain

    Streptomyces adalah rendah. Oleh karena itu, Streptomyces mirabilis

    NSQu-25 disarankan menjadi jenis baru Streptomyces.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    21/24

    BAB IV

    KESIMPULAN

    Kesimpulan penelitian ini adalah :

    1. di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) merupakan senyawa bioaktif utama

    yang diproduksi dalam kultur filtrat yang baru terisolasi dari tanah Mesir

    yang mengandung Streptomyces (Streptomyces mirabilis strain NSQu-

    25).

    2. Identifikasi hasil strain dilakukan menurut morfologi spora dan jenis

    dinding sel-kemo, yang menunjukkan bahwa strain ini adalah

    streptomycetes. Selanjutnya kultur, karakteristik fisiologis dan analisis

    filogenetik dari 16S rRNA gen yang diisolasi ini menunjukkan bahwa

    strain ini identik dengan Streptomyces mirabilis Uz1010 yang menunjukan

    bahwa isolat tersebut adalah Streptomycesmirabilis strain NSQu-25.

    3. Senyawa isolat memiliki aktivitas sebagai antimikroba terutama terhadap

    bakteri Gram-positif dan khamir tetapi dapat juga menghambat bakteri

    gram-negatif dengan aktivitas yang rendah serta memiliki aktivitas

    sitotoksik terhadap beberapa sel karsinoma manusia. Studi spektroskopi

    Fourier Transform Infrared (FTIR), Kromatografi Cair Gas (GLC), massa

    GC MS dan H resonansi (HNMR) menunjukkan bahwa senyawa hasil

    isolasi (rumus molekul C24 H38 O4, berat molekul 390 Dalton) dan

    ditemukan identik untuk di-(2-ethylhexyl) phthalate.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    22/24

    DAFTAR PUSTAKA

    El-Sayed, M. H. 2012. Di-(2-ethylhexyl) Phthalate, a Mayor Bioactive

    Metabolite with Antimicrobial and Cytotoxic Activity Isolated from the

    Culture Filtrate of Newly Isolated Soil Streptomyces (Streptomyces

    mirabilis Strain NSQu-25). World Applied Sciences Journal. Universitas

    Al-Azhar. Mesir.

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    23/24

    MIKROBIOLOGI TERAPAN

    MAKALAH

    OLEH :

    KELOMPOK V

    ANDI ULFAH MAGEFIRAH RASYID (P2500213411)

    ZAHIRA AMODY (P2500213412)

    JEF GISHARD KRISTO KALALO (P2500213428)

    PROGRAM PASCASARJANAFAKULTAS FARMASI

    UNIVERSITAS HASANUDDINMAKASSAR

    2013

  • 5/21/2018 MAKALAH Bu Herlina

    24/24