LAPORAN PENELITIAN MANDIRI - COnnecting REpositories · 2020. 9. 2. · laporan penelitian mandiri...

LAPORAN

PENELITIAN MANDIRI

INDUKSI KALUS JARINGAN ENDOSPERM JERUK KALAMANSI PADA BEBERAPA JENIS MEDIA DAN ZAT PENGATUR TUMBUH UNTUK

MEMPEROLEH JERUK TRIPLOID TANPA BIJI

Tim Pengusul:

Dr. Ir. Reny Herawati, MP

Dr. Hesti Pujiwati, SP, M.Si

UNIVERSITAS BENGKULU

Desember 2016

MANDIRI

iv

DAFTAR ISI

Hal

HALAMAN PENGESAHAAN .................................................................... ii

DAFTAR ISI .............................................................................................. iii

RINGKASAN ........................................................................................................ iv

BAB I. PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1. Latar Belakang ...................................................................... 2

1.2. Tujuan Penelitian ................................................................... 3

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................... 4

BAB III. METODE PENELITIAN ...................................................................... 6

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................ 8

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 11

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 11

LAMPIRAN-LAMPIRAN ................................................................................... 14

1. Biodata Ketua dan Anggota Peneliti …................................................... 15

v

RINGKASAN

Jeruk Kalamansi (Citrus mitis) merupakan jenis buah jeruk yang berkembang

pesat di Bengkulu, berbau harum, dan memiliki rasa yang asam ketika sudah masak,

dan pahit ketika masih mentah. Jeruk Kalamansi dicanangkan sebagai produk

unggulan di Bengkulu karena tingginya daya jual dan cepatnya masa produksi buah,

yaitu enam bulan setelah masa tanam. Jeruk kalamansi banyak dibudidayakan di

Bengkulu, dan diproduksi secara besar-besaran untuk dijual dalam hasil olahan

bernama sirup kalamansi. Oleh karena itu, pemacuan produksi jeruk lokal akan

memiliki urgensi penting karena disamping untuk meningkatkan pendapatan

masyarakat, kesempatan kerja, konsumsi buah dan juga meningkatkan pendapan

daerah setempat. Namun demikian jenis jeruk tersebut masih mempunyai biji yang

relatif banyak (6-13 biji per buah), sehingga menyulitkan dalam proses pengolahan

terutama sirup kalamansi sebagai salah satu produksi khas daerah Bengkulu. Salah

satu cara yang dapat dilakukan adalah membuat tanaman triploid jeruk lokal tipe baru

tanpa biji (seedless) dengan warna yang menarik, dapat meningkatkan produktivitas,

mutu buah, dan daya saing di pasar global (Khan, 2008). Salah satu cara

pembentukan buah jeruk tanpa biji dapat dilakukan dengan kultur endosperm melalui

kalus (Gmitter et al., 1990; Raza et al., 2003).

Tanaman triploid akan menghasilkan buah tanpa biji karena

ketidakseimbangan perpasangan kromosom saat meiosis (Hoshino et al., 2011).

Keberhasilan embriogenesis somatik yang diinduksi dari jaringan endosperma

ditentukan oleh berbagai faktor (Hoshino et al., 2011). Faktor penentu

keberhasilannya antara lain tahap perkembangan jaringan endosperma dan formulasi

media. Embriogenesis somatik pada jaringan diploid jeruk Siam Simadu sudah

dikuasai dengan eksplan embrio nuselar pada media dengan penambahan BA dan

bahan organik (Husni et al., 2010), dan embriogenesis dari jaringan endosperma

triploid jeruk Siam Simadu juga telah dilaporkan oleh Kosmiatin et al. (2014), namun

embriogenesis somatik pada jeruk Kalamansi belum pernah dilaporkan, oleh karena

itu penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan formulasi media induksi kalus

embrionik jeruk Kalamansi menjadi tanaman baru triploid tanpa biji melalui metode

embriogenesis somatik pada jaringan endosperm. Jika protokol untuk induksi

embriogenesis somatik dapat diperoleh dari penelitian ini, maka pengembangan

planlet melalui bioreaktor dapat segera dikembangkan untuk menghasilkan planlet

dalam jumlah besar dan dalam waktu yang relatif singkat.

Percobaan telah dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian

Universitas Bengkulu, mulai September 2016-Januari 2017. Media yang digunakan

dalam peneltian ini adalah media dasar MS dan MT (Murashige dan Tucker 1969)

dengan perlakuan berbagai jenis dan konsentrasi ZPT (GA dan BAP). Pengamatan

dilakukan terhadap jumlah dan persentase kultur yang steril, jumlah eksplan dan

persentase eksplan yang dapat membentuk kalus, dan tipe kalus yang dihasilkan.

Komposisi media MT yang diberi perlakuan 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP,

kemudian diikuti oleh media MT yang diberi perlakuan 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP merupakan formula terbaik untuk produksi kalus. Perlu dilakukan pelelitian

lanjutan untuk regenerasi kalus embrionik pada media tanpa zat pengatur tumbuh

(ZPT) dengan formulasi berbagai vitamin dan bahan organik.

1

BAB I. PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Jeruk Kalamansi (Citrus mitis) merupakan jenis buah jeruk yang berkembang

pesat di Bengkulu, berbau harum, dan memiliki rasa yang asam ketika sudah masak,

dan pahit ketika masih mentah. Jeruk Kalamansi dicanangkan sebagai produk

unggulan di Bengkulu karena tingginya daya jual dan cepatnya masa produksi buah,

yaitu enam bulan setelah masa tanam. Jeruk kalamansi banyak dibudidayakan di

Bengkulu, dan diproduksi secara besar-besaran untuk dijual dalam hasil olahan

bernama sirup kalamansi. Oleh karena itu, pemacuan produksi jeruk lokal akan

memiliki urgensi penting karena disamping untuk meningkatkan pendapatan

masyarakat, kesempatan kerja, konsumsi buah dan juga meningkatkan pendapan

daerah setempat. Dengan makin meningkatnya jumlah penduduk, meningkatnya

pendapatan, dan kesadaran kebutuhan gizi masyarakat, maka permintaan buah jeruk

yang kaya mineral dan vitamin ini akan terus meningkat. Pada tahun 2010, kebutuhan

produksi buah jeruk diprediksi sebesar 2.355.550 ton dan jika produktivitasnya 17 -

20 ton per ha, maka pada tahun tersebut diperlukan luas panen kurang lebih 127.327

ha dari 67.883 ha luas panen yang tersedia pada tahun 2005. Penambahan luas areal

untuk mencapai total produksi yang telah ditetapkan hingga tahun 2010 diprediksikan

minimal 27.327 ha di luar tanaman yang belum berproduksi saat itu. Hingga tahun

2010 diperkirakan kebutuhan pengembangan areal baru seluas 30.060 ha. Dari luasan

ini, maka keperluan bibit jeruk yang bebas penyakit diperkirakan sebanyak

15.030.000 (populasi 500 bibit/ha) (Litbang Pertanian, 2005).

Buah jeruk kalamansi dapat dibekukan secara keseluruhan dan digunakan

sebagai es batu dalam minuman seperti teh atau ginger ale. Jus diekstraksi dengan

menghancurkan buah utuh untuk membuat minuman beraroma mirip dengan limun.

Minuman keras juga bisa dibuat dari buah utuh, dalam kombinasi dengan vodka dan

gula. Selanjutnya FEI (Rahman Said, 2010) mengemukakan Kalamansi umumnya

digunakan sebagai bumbu untuk masakan seperti bihon. Namun demikian jenis jeruk

tersebut masih mempunyai biji yang relatif banyak (6-13 biji per buah), sehingga

menyulitkan ketika akan digunakan sebagai jeruk peras atau produksi sirup.

Perbaikan mutu secara teknologi perlu dilakukan untuk meningkatkan kualitas

buah jeruk lokal sehingga dapat bersaing di pasar global. Salah satu cara yang dapat

2

2

dilakukan adalah membuat tanaman jeruk lokal tipe baru tanpa biji (seedless) dengan

warna yang menarik (pigmented). Tidak terbentuknya biji dalam buah dapat

meningkatkan produktivitas, mutu buah, dan daya saing di pasar global (Khan, 2008).

Pembentukan buah jeruk lokal tanpa biji dapat dilakukan dengan cara perlakuan suhu

dingin, suhu panas, kultur endosperm melalui kalus (Gmitter et al., 1990; Raza et al.,

2003), hibridisasi somatik (Spiegel-Roy, 1996; Grosser dan Gmitter, 2005), radiasi

sinar Gamma (Spiegel-Roy, 1996), hibridisasi antarploidi (Spiegel-Roy, 1996; Raza

et al., 2003), dan rekayasa genetik (Spiegel-Roy, 1996; Raza et al., 2003).

Aplikasi metode regenerasi dan mikropropagasi tanaman jeruk telah banyak

dilakukan untuk mendapatkan tanaman jeruk tanpa biji, bebas virus, penyelamatan

embrio (Grosser dan Gmitter, 2005; Ali dan Mirza, 2006). Embriogenesis somatik

merupakan salah satu proses regenerasi tanaman dari sel somatik melalui serangkaian

proses pertumbuhan dan perkembangan yang menyerupai embriogenesis zigotik

melalui pentahapan proembrio, embrio tahap globular, tahap hati, tahap torpedo, tahap

kotiledon, pematangan dan perkecambahan (Gray, 2005). Jenis eksplan, genotipe,

keadaan fisiologi, dan komposisi media merupakan faktor yang menentukan dalam

regenerasi tanaman melalui embriogenesis somatik (Ozcan et al., 2001). Media MS

dan MT merupakan media kultur yang banyak digunakan dalam induksi kalus dan

regenerasi kalus menjadi tunas pada tanaman jeruk dengan penambahan 2,4-D, BA,

NAA, GA3, atau kombinasinya (Ali dan Mirza, 2006).

Endosperma merupakan jaringan tanaman yang bersifat triploid, karena

berasal dari fertilisasi dua inti polar (♀) dan satu sperma (♂) (Berger, 2003).

Endosperma jeruk siam bertipe inti bebas (nuclear endosperm), dimana endosperma

primer hasil fertilisasi ganda melakukan pembelahan inti tetapi tidak langsung

membentuk dinding sel. Selulerisasi sel endosperma berlangsung bertahap sehingga

perkembangan sel-sel endosperma tidak seragam. Keberagaman ini juga terjadi

karena endosperma berfungsi sebagai nourishing cell dan pelindung kehidupan

embrio. Pada jeruk Siam Simadu, setelah fertilisasi ganda, sel-sel haploid antipodal

tidak terdegradasi dan perkembangan embrio nuselar yang tidak bersamaan dengan

embrio zigotik dapat mengkontaminasi jaringan triploid endosperma (Kosmiatin,

2013). Metode untuk meregenerasikan satu sel triploid menjadi tanaman triploid

diperlukan untuk menghindarkan terbentuknya regeneran yang miksoploid.

Tanaman triploid akan menghasilkan buah tanpa biji karena

ketidakseimbangan perpasangan kromosom saat meiosis (Hoshino et al., 2011).

3

3




media. Pada jeruk manis (C. sinensis) dan mandarin (C. reticulata), kultur

endosperma yang diisolasi dari buah umur 12 minggu setelah antesis berhasil

menginduksi pembentukan kalus, tetapi regenerasi tunas triploidnya belum dilaporkan

(Usman et al., 2008).

Embriogenesis somatik pada jaringan diploid jeruk Siam Simadu sudah

dikuasai dengan eksplan embrio nuselar pada media dengan penambahan BA dan

bahan organik (Husni et al., 2010), dan embriogenesis dari jaringan endosperma

triploid jeruk Siam Simadu telah dilaporkan oleh Kosmiatin et al. (2014). Embrio

genesis somatik pada jeruk Kalamansi belum pernah dilakukan, oleh karena itu

penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan formulasi media induksi kalus dan

regenerasi eksplan tanaman jeruk RGL menjadi tanaman baru triploid tanpa biji

melalui metode embriogenesis somatik pada jaringan endosperm. Metode tersebut

dapat diaplikasikan dalam perbaikan tanaman jeruk untuk merakit tanaman jeruk

unggul tanpa biji yang memiliki nilai ekonomi yang tinggi.

1.2. Tujuan Penelitian

Tujuan Umum Penelitian

Mendapatkan tanaman baru triploid tanpa biji hasil induksi embriogenesis

somatik

Menghasilkan formula baru sebagai protokol untuk menginduksi kalus dan

regenerasi embrio somatik melalui kultur endosperm jeruk Kalamansi tanpa

biji

.

4

4

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

Jeruk kalamansi berasal dari Republik Rakyat Tiongkok, kemudian menyebar

luas hingga ke wilayah Asia Tenggara, Malaysia, Indonesia, dan wilayah-wilayah lain

hingga ke Florida, Panama. Jeruk kalamansi memasuki wilayah Florida pada tahun

1900 atau akhir tahun 1800 melalui Chile. Negara yang paling besar memproduksi

jeruk kalamansi saat ini adalah Filipina (International Development And

Manufacturing, 2006). Para ahli tanaman holtikultura percaya bahwa jeruk kalamansi

adalah perpaduan (hibrida) dari jeruk keprok dan jeruk mandarin, atau jeruk keprok

dan kumquat, atau kumquat dan jeruk mandarin (International Development And

Manufacturing, 2006). Secara teknis, para ahli di Tiongkok pernah mengatakan

bahwa jeruk kalamansi adalah perpaduan antara Citrus reticulata dan Citrus japonica.

Namun, menurut penelitian, perpaduan antara sub-spesies sitrus (sitrat) itu telah

dibudidayakan begitu lama sehingga membuat asal-usul jeruk tersebut kabur. Nama

awal dari jeruk kalamansi ini adalah Citrus madurensis Loureiro, sebuah nama yang

diberikan oleh seorang pria bernama Loureiro yang menemukan buah ini di pulau

Madura, dekat Pulau Jawa. Namun ia mengklarifikasinya setelah diketahui asal-usul

aslinya di kemudian hari.

Gambar 1. Jeruk Kalamansi Bengkulu

Buah jeruk kalamansi memiliki kulit dengan permukaan halus dan berpori

minyak, berwarna kuning, atau berwarna hijau kekuning-kuningan. Besar jeruk

kalamansi berdiameter antara 3–4 cm. Buah tersebut sangat kaya akan bulir-bulir

sitrat yang mudah dipisahkan dan mengandung vitamin C. Satu buah jeruk kalamansi

memiliki kandungan karbohidrat 3%, mineral 1%, asam askorbat 0,1%, dan asam

sitrat 3%. Kulitnya kaya akan minyak esensial dan asam askorbat (0,15%)

5

5

(International Development And Manufacturing, 2006), namun kandungan biji dalam

buah masih cukup tinggi yaitu 6-13 butir.

Pembentukan tanaman triploid untuk produksi buah tanpa biji dapat dihasilkan

dari jaringan endosperma yang diregenerasi secara embriogenesis somatik.

Embriogenesis somatik adalah proses regenerasi tanaman melalui pembentukan

struktur seperti embrio yang diinduksi dari sel-sel somatik atau gamet (Dodeman et

al., 1997). Embrio somatik secara fisiologi dan morfologi memiliki tahapan

perkembangan embrio yang sama dengan embrio zigotik (Deo et al., 2010). Dalam

pemuliaan modern, embriogenesis somatik sangat penting karena dapat

meregenerasikan satu sel tanaman yang sudah dimanipulasi baik dengan transformasi

maupun mutasi menjadi tanaman lengkap, sehingga sel tanaman tersebut dapat

diregenerasikan menjadi tanaman lengkap (Manrique-Trujillo et al., 2013; Gray,

2005), dan mengekspresikan perubahannya. Hampir seluruh sel kompeten tanaman

dapat diinduksi menjadi sel embriogenik karena sel tanaman memiliki kemampuan

totipotensi sel (Mujib et al., 2005).

Endosperma merupakan jaringan tanaman yang bersifat triploid, karena berasal

dari fertilisasi dua inti polar (♀) dan satu sperma (♂) (Berger, 2003). Endosperma

jeruk siam bertipe inti bebas (nuclear endosperm), dimana endosperma primer hasil

fertilisasi ganda melakukan pembelahan inti tetapi tidak langsung membentuk dinding

sel. Selulerisasi sel endosperma berlangsung bertahap sehingga perkembangan sel-sel

endosperma tidak seragam.

Keberagaman ini juga terjadi karena endosperma berfungsi sebagai nourishing

cell dan pelindung kehidupan embrio. Pada jeruk Siam Simadu, setelah fertilisasi

ganda, sel-sel haploid antipodal tidak terdegradasi dan perkembangan embrio nuselar

yang tidak bersamaan dengan embrio zigoti dapat mengkontaminasi jaringan triploid

endosperma (Kosmiatin, 2013). Metode untuk meregenerasikan satu sel triploid

menjadi tanaman triploid diperlukan untuk menghindarkan terbentuknya regeneran

yang miksoploid. Tanaman triploid akan menghasilkan buah tanpa biji karena

ketidakseimbangan perpasangan kromosom saat meiosis (Hoshino et al., 2011;

Chaturvedi et al., 2008).




media. Pada jeruk manis (C. sinensis) dan mandarin (C. reticulata), kultur

6

6

endosperma yang diisolasi dari buah umur 12 minggu setelah antesis berhasil

menginduksi pembentukan kalus, tetapi regenerasi tunas triploidnya belum dilaporkan

(Usman et al., 2008). Embriogenesis somatik pada jaringan diploid jeruk Siam

Simadu sudah dikuasai dengan eksplan embrio nuselar pada media dengan

penambahan BA dan bahan organik (Husni et al., 2010), tetapi embriogenesis dari

jaringan endosperma triploid jeruk keprok Kalamansi belum pernah dilakukan. Secara

khusus penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan formulasi media untuk induksi

kalus embriogenik, pendewasaan dan perkecambahan serta pemanjangan planlet dari

jaringan endosperma jeruk Kalamansi.

BAB III. METODA PENELITIAN

Penelitian akan dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Fakultas Pertanian

Universitas Bengkulu, mulai September 2016 - Januari 2017 (Tahun I). Bahan

tanaman yang digunakan sebagai sumber eksplan ialah endosperm jeruk Kalamansi

yang diambil dari buah jeruk muda berumur ± 4-6 minggu setelah anthesisi. Media

yang digunakan dalam peneltian ini adalah media dasar MS dan MT (Murashige dan

Tucker 1969) yang dimodifikasi dengan perlakuan berbagai jenis dan konsentrasi ZPT

(Husni et al., 2010; Sunyoto et al, 2010; Kosmiatin et al., 2014). Kombinasi

perlakuan disajikan pada Tabel 1 berikut ini.

Tabel 1. Kombinasi perlakuan untuk induksi kalus embrionik

No Jenis Media ZPT

1 MS 2 mL-1

GA3

2 MS 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP

3 MS 2 mL-1

GA3 + 0,5 mL-1

BAP

4 MT 2 mL-1

GA3

5 MT 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP

6 MT 2 mL-1

GA3 + 0,5 mL-1

BAP

Buah jeruk muda yang berumur 6 minggu, 8 minggu, dan 12 minggu setelah

anthesis digunakan sebagai sumber eksplan endosperm. Sterilisasi bahan tanaman

dilakukan dengan cara mencelup dalam larutan alkohol 70% setelah dicuci bersih

menggunakan detergen. Kemudian dibakar dengan api bunsen sampai apinya mati.

Cara tersebut dilakukan sebanyak tiga kali dan diletakkan di cawan petri. Endosperm

diisolasi dari biji di bawah mikroskop untuk memisahkannya dari embrio zigotik dan

7

7

nuselar. Endosperm ditanam dalam botol, masing masing jenis jeruk yang digunakan

dikulturkan dalam 10 botol media, 3 endosperm setiap botol. Semua kultur disimpan

di ruang kultur dengan penyinaran 100 μmol/m2/s selama 16 jam dengan suhu 23-

27oC. Pengamatan dilakukan terhadap jumlah dan persentase kultur yang steril,

jumlah eksplan dan persentase eksplan yang dapat membentuk kalus, dan tipe kalus

yang dihasilkan. Penentuan tipe kalus yang dihasilkan dilakukan dengan cara

mengamati kalus secara mikroskopik menggunakan mikroskop (zoom stereo),

sehingga struktur kalus yang dihasilkan dapat dibedakan yang bersifat embriogen.

8

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

Induksi Pembentukan Kalus Embriogenik dari Jaringan Endosperma Jeruk

Kalamansi

Jaringan endosperma yang diisolasi dari buah jeruk Kalamansi adalah 12-14

minggu setelah antesis, sel-selnya sudah mulai membentuk dinding sel dan

membentuk jaringan endosperma yang kompak (Kosmiatin, 2013). Respon

endosperma pertama kali terlihat melalui perubahan warna eksplan dari bening

menjadi putih susu pada umur 8 minggu setelah dikulturkan. Sel-sel endosperma

kemudian membelah yang ditandai dengan bertambah besarnya volume eksplan,

kemudian membentuk kalus. Respon pembentukan kalus embriogenik pertama kali

pada umur 14 minggu setelah kultur ditampilkan pada gambar 2.

Gambar 2. Induksi kalus embrionik jaringan endosperm (A. Jaringan endosperm 8

minggu setelah dikultur; B. Inisiasi pembentukan kalus pada umur 14 minnggu

setelah kultur; C. Kalus embrionik telah berkembang; D. Beberapa kalus

embrionik telah berwarna hijau)

Komposisi media tumbuh terbaik untuk merangsang terjadinya pembentukan

kalus ialah media MT yang diberi perlakuan 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP,


GA3 + 0,25 mL-1

BAP. Kalus yang terbentuk pada MT bersifat kompak dan berwarna putih kuning

muda (Tabel 1). Komposisi media MS dan MT yang hanya diberi GA tanpa

9

9

memberikan respons terendah. Eksplan yang dikulturkan pada media MT yang hanya

diperkaya GA membentuk kalus yang secara morfologi kelihatan kurang kompak,

tidak berwarna hijau, jumlahnya sedikit, dan hanya tumbuh dari jaringan di tepi

eksplan. Pada media yang diperkaya dengan BAP dan GA menunjukkan pertumbuhan

kalus lebih kompak dan berwarna hijau. George dan Sherrington (1984), Wang dan

Chang (1987), Sunyoto et al. (1997), dan Sunyoto et al. (2002) menyatakan bahwa

penggunaan ZPT dari golongan dan media yang sama berdampak lebih baik jika

dibandingkan dengan pemakaian ZPT secara tunggal. Bila konsentrasi antara auksin

dan sitokinin di dalam jaringan eksplan yang dikulturkan berada dalam keadaan

seimbang, maka kalus terbentuk lebih cepat. Hal ini terbukti pada perlakuan yang

diberi GA dan BAP, yang secara seimbang dapat menginduksi kalus lebih cepat.

Tabel 2. Kombinasi perlakuan untuk induksi kalus embrionik

No Jenis

Media ZPT

Waktu

terbemtuk

(MST*)

Warna

kalus

Struktur

Kalus

1 MS 2 mL-1

GA3 18 putih agak

kompak

2 MS 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP 13 kuning remah

3 MS 2 mL-1

GA3 + 0,5 mL-1

BAP 14 kuning remah

4 MT 2 mL-1

GA3 16 putih remah

5 MT 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP 13 Hijau

kuning

agak

kompak

6 MT 2 mL-1

GA3 + 0,5 mL-1

BAP 13 putih remah

Selama pembentukan kalus, sel-sel yang belum terdiferensiasi mengalami

pembelahan secara cepat hingga terbentuk kalus yang kompak dan berwarna kuning

kehijauan. Lamanya pembentukan kalus dan jumlah kalus yang terbentuk pada jeruk

kalamansi diduga karena pembentukan endosperm tidak sempurna atau endosperm

sudah tua sehingga kuran tidak dapat berdifrensiasi dengan baik. Menurut Mu dan

Liu (1979), endosperm tidak terbentuk secara utuh pada persilangan interspesies,

karena kuantitas dan atau kualitas DNA penyusun genotip kedua spesies yang

disilangkan pun berbeda.

Pertumbuhan dan perkembangan kalus endosperm diawali dengan

pemanjangan atau elongasi sel-sel endosperm yang secara berangsurangsur

membentuk klorofil pada umur 3 minggu setelah kultur (MSK). Proses tersebut

diduga disebabkan karena pengaruh laju serapan ZPT oleh kalus embrioid yang

bersentuhan dengan media. Zat pengatur tumbuh tersebut selanjutnya ditranslokasikan

10

10

ke seluruh jaringan eksplan untuk merangsang pertumbuhan kalus embrioid.

Memasuki minggu ke-4, sel-sel endosperm mulai berproliferasi di bagian pinggir

eksplan membentuk kalus dengan cepat. Semua sel-sel endosperm berubah menjadi

sel-sel kalus setelah umur 6 minggu. Perkembangan kalus ke arah pembentukan

embrio terjadi pada umur kultur 10 minggu. Sel-sel kalus yang kompak berubah

menjadi bulatan-bulatan yang bergerombol menyerupai telur ikan. Bhojwana dan

Razdana (1983) menyebutnya sebagai fase pembentukan embrio globular yang

selanjutnya berubah menjadi tonjolan-tonjolan yang menjulur ke berbagai arah, tetapi

dari tonjolan-tonjolan itu belum jelas apakah akan terbentuk tunas atau akar. Pada

endosperm yang berasal dari kalus spesies yang berbeda mulai terbentuk pada 5 MSK,

tetapi tidak semua endosperm yang dikulturkan membentuk kalus dan membentuk

globular dan embrio. Menurut Graitter et al. 1990, endosperm jeruk manis kurang

respons terhadap media dasar MT atau MS yang hanya ditambah BAP, tetapi sangat

respons terhadap kedua media dasar tersebut apabila ditambah dengan kinetin atau

GA3 dan ME. Kinetin berperan mendorong morfogenesis sel. Adanya kinetin yang

ditambahkan ke media tumbuh mengakibatkan fase transkripsi dan translasi RNA

berlangsung lebih cepat (Duncan dan Widhom 1990 dalamWijayani 2002).

Sepuluh MSK, kalus yang terbentuk semakin banyak terutama pada

endosperm yang terbentuk berwarna lebih hijau dan mampu memproduksi embrio.

Dengan berjalannya waktu, embrio yang terbentuk membesar yang diikuti dengan

tumbuhnya tunas dan akar (Gambar 2).

Berdasarkan Tabel 1, pembentukan kalus embriogenik yang diinduksi dari

jaringan endosperma cukup tinggi. Hal ini menunjukkan bahwa keragaman dalam

eksplan tinggi, karena endosperma merupakan jaringan yang mempunyai tahapan

perkembangan sel dan fungsi sel yang berbeda sehingga setiap sel memberikan respon

yang berbeda terhadap formulasi media. Perbedaan respon juga terjadi karena

keberadaan proembrio nuselar (diploid) dengan ukuran kurang dari 16 sel dan sel-sel

haploid antipodal yang ikut terkulturkan dengan jaringan endosperma yang diisolasi

dari buah yang berumur 11-13 minggu setelah antesis.

Ketersediaan bahan organik yang tinggi dalam medium dapat meningkatkan

akumulasi asam amino sebagai penyusun protein, sehingga akumulasi protein juga

turut meningkat. Pembentukan protein terutama protein simpanan dalam sel

dibutuhkan untuk membentuk ES (Deo et al., 2010). Penambahan bahan organik (CH

11

11

dan ME) pada tanaman Dianthusdapat meningkatkan 1.5 kali pembentukan embrio

somatik (Pareek dan Kothari, 2003).

Perbedaan respon juga terjadi karena keberadaan proembrio nuselar (diploid)

dengan ukuran kurang dari 16 sel dan sel-sel haploid antipodal yang ikut terkulturkan

dengan jaringan endosperma yang diisolasi dari buah yang berumur 11-13 minggu

setelah antesis. Keberadaan proembrio dan antipodal ini dapat diamati pada preparat

kering endosperma dengan bantuan mikroskop invertedperbesaran 200x, tetapi tidak

teramati dengan mikroskop binokular perbesaran 40x (Kosmiatin, 2013).

Kalus yang telah terbentuk perlu dipindahkan ke media regenerasi untuk

mengecambahkan dan mendewasakan sehingga terbentuk planlet.

V. KESIMPULAN DAN SARAN

Komposisi media MT yang diberi perlakuan 2 mL-1

GA3 + 0,25 mL-1

BAP,


GA3 + 0,25 mL-1

BAP merupakan formula terbaik untuk produksi kalus. Formula media tersebut dapat

menginduksi saat pembentukan kalus lebih cepat, persentase pembentukan kalus lebih

banyak, struktur kalus kompak, dan kalus yang terbentuk berwarna hijau.

Kalus yang telah terbentuk perlu dipindahkan ke media regenerasi untuk

mengecambahkan dan mendewasakan kalus embrionik sehingga terbentuk planlet.

Perlu dilakukan pelelitian lanjutan untuk regenerasi kalus embrionik pada media tanpa

zat pengatur tumbuh (ZPT) dengan formulasi berbagai vitamin dan bahan organik.

DAFTAR PUSTAKA

Ali, S. and B. Mirza. 2006. Micropropagation of rough lemon (Citrus jambhiriLush.):

Effect of explant type and hormone concentration. Acta Bot. Croat.

65(2):137-146.

Badan Litbang, 2005. Prospek dan arah pengembangan Agribisnis jeruk. Badan

Litbang Pertanian. Kementerian Pertanian.

Berger, F. 2003. Endosperm: the crossroad of seed development. Curr. Opin. Plant

Biol, 6:45-50.

12

12

Chaturvedi, R., M.K. Razdan, S.S. Bhojwani. 2008. An efficient protocol for the

production of triploid plants from endosperm callus of neem,Azadirachta

indicaA. Juss. J. Plant Physiol. 160. 557–564.

Deo, P.C., A.P. Tyagi, M. Taylor, R. Harding, D. Becker. 2010. Factors affecting

somatic embryogenesis and transformation in modern plant Breeding. The

South Pacific J. Nat. Appl. Sci. 28:27-40.

Dodeman, V.L., G. Ducreux, M. Kreis. 1997. Zygotic embryogenesis versus somatic

embryogenesis. J. Exp. Bot. 48:1493-1509.

Gmitter, F.G., Jr., X.X. Deng, and C.J. Hearn. 1990. Induction of triploid citrus plants

from endosperm calli in vitro. Theor. Appl. Genet. 80:785-790.

Grosser, J.W. and F.G. Gmitter. 2005. Application of somatic hybridization and

cybridization in crop improvement, with citrus as a model. In Vitro Cell Dev.

Biol. Plant 39:360-364.

Gray, D.J. 2005. Propagation from nonmeristematic tissues: Nonzygotic

embryogenesis. p. 187-200. InR.N. Trigiano and D.J. Gray (eds.) Plant

Development and Biotechnology. CRC Press LLC.

Husni, A., M. Kosmiatin, I. Mariska, dan C. Martasari. 2008. Studi isolasi protoplas

pada jeruk siam. Prosiding Seminar Nasional Jeruk. Yogyakarta, 13-14 Juni

2007. 472 hlm.

Husni, A., A. Purwito, I. Mariska, Sudarsono. 2010. Regenerasi tanaman jeruk siam

melalui embryogenesis somatic. J. Agrobiogen 6:79-83.

Hoshino, Y., T. Miyashita, T.D. Thomas. 2011. In vitroculture of endosperm and its

application in plant breeding: Approaches to polyploidy breeding. Sci. Hort.

130:1-8.

International Development And Manufacturing. 2006. Kalamansi. http://www.in-

cosmetics.com/__novadocuments/2520.

Khan, S.R.A. 2008. Citrus quality to meet global demand (Agri Overview).

Website:http:www.pakissan.com. [7 Agustus 2008].

Kosmiatin, M. 2013. Pembentukan tanaman triploid jeruk siam simadu (Citrus

nobilisLour) melalui kultur endosperma. Disertasi. Sekolah Pascasarjana.

Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Kosmiatin, M., A. Purwito., GA. Wattimena, I. Mariska. 2014. Induksi

Embriogenesis Somatik dari Jaringan Endosperma Jeruk Siam (Citrus

nobilisLour.) cv Simadu. J. Agron. Indonesia 42 (1) : 44 – 51.

Manrique-Trujillo, S., D. Díaz, R. Reano, M. Ghislain, J. Kreuze. 2013. Sweetpotato

plant regeneration via an improved somatic embryogenesis protocol. Sci.

Hort. 161:95-100.

13

13

Mujib, A., S. Banerjee, P.D. Ghosh. 2005. Origin, development and structure of

somatic embryos in selected bulbous ornamentals: BAP as inducer.p. 15-24.

InA. Mujib, J. Samac (Eds.). Somatic Embryogenesis, Plant Cell Monogr (2).

Springer, Verlag-Berlin Heidenbergh.

Ozcan, S., Babaoglu, and M. Sancak. 2001. Somatic embryogenesis, Bitki

Biyoteknoloji. Doku Kulturu ve Uygulamari, Selcuk Univ. 5:71-88.

Raza, H., M.M. Khan, and A.A. Khan. 2003. Sedlessness in citrus. Int. J. Agri. Biol.

5(3):388-391.

Spiegel-Roy, P. and E.E. Goldschmidt. 1996. Biology of Citrus. Cambridge

University Press. 221 p.

Sunyoto, S. Purnomo, dan Makful. 2010. Formula Media Kultur Endosperm Jeruk

Hasil Persilangan Antarklon Siem dengan Keprok dan Jeruk Besar. J.

Hort.20(4):332-34.

Usman, M., B. Fatima, K.A. Gillani, M.S. Khan, M.H. Khan. 2008. Exploitation of

potential target tissues to develop polyploids in citrus. Pak. J. Bot.40:1755-

1766.

14

14

LAMPIRAN-LAMPIRAN

15

15

Lampiran 1. Biodata ketua dan anggota Tim Pengusul

1. Ketua Peneliti

A. Identitas Diri

1 Nama lengkap dan gelar Dr. Ir. Reny herawati, MP

2 Jenis Kelamin Perempuan

3 Jabatan Fungsional Lektor/IVa

4 NIP 19650101 198903 2 002

5 NIDN 0001016527

6 Tempat dan tanggal lahir Peringsewu, 1 Januari 1965

7 email [email protected]

8 Nomor Telepon/Faks/HP 0811190863

9 Alamat Rumah Perum Unib Permai, Blok III No.30, Jl. WR.

Supratman, Bengkulu

10 Alamat Kantor Fakultas Pertanian UNIB

Jl. Raya Kandang Limun Bengkulu 38371

11 Nomor telepon/ Faks (0736) 21170-psw 216

12 Lulusan yang telah dihasilkan S1=27 orang

13 Mata Kuliah yang diampu 1. Kultur Jaringan Tanaman

2. Bioteknologi Tanaman

3. Fisiologi Pasca Panen

4. Pengendalian Gulma

5. Dasar-dasar Agronomi

6. Fisiologi Tanaman

B. Riwayat Pendidikan

Uraian S1 S2 S3

Nama Perguruan

Tinggi

Universitas Bengkulu Universitas

Padjadjaran

IPB

Bidang Ilmu Agronomi Ekofisiologi Bioteknologi

Tanaman

Tahun Masuk-

Lulus

1984-1988 1991-1994 2005 - 2010

Judul Skripsi/Tesis/

Disertasi

Pengaruh tingkat

kemasakan buah,

kadar air, dan

fungisida terhadap

viabilitas benih

kakao (Theobroma

cacao L.)

Pertumbuhan

gulma,

pertumbuhan

dan hasil

kedelai (Glycine

max L.) pada

tanah ultisol

yang diaplikasi

zeolit dan

Pembentukan

galur padi gogo

tipe baru toleran

Al dan tahan blas

melalui kultur

antera

16

16

Uraian S1 S2 S3

metolaklor

Nama

Pembimbing/

Promotor

1. Ir. Teddy Suparno,

M.Sc.

2. Ir. Puji Harsono

1. Dr. Ir. Oktap

Ramlan

Madkar, M.Sc

2.Dr. Ir. Amir

Hamzah S.

3.Prof. Dr. Ir.

Husen S, M.Sc

1. Prof.Dr.Ir. Bambang S.

Purwoko, M.Sc

2. Dr.Ir.Nurul Khumaida, MSi

3. Dr.Ir.Iswari S. Dewi

4. Dr.Ir. Buang Abdullah, M.Sc

C. Pengalaman Penelitian dalam 5 Tahun Terakhir

No Thn Judul Penelitian PENDANAAN Jabatan

pada

penelitian Sumber Jumlah

2 2010 Perakitan galur padi gogo

toleran kekeringan dan tahan

blas berdaya hasil tinggi

varietas lokal Bengkulu

melalui kultur antera

Hibah

Bersaing I

DP2M

Rp 36.960.000,- Ketua

Peneliti






Hibah

Bersaing II

DP2M

Rp 38.000.000,- Ketua

Peneliti






Hibah

Bersaing III

DP2M

Rp 38.000.000,- Ketua

Peneliti

5 2012 Perakitan galur padi sawah

toleran tanah masam hasil

persilangan padi lokal

Bengkulu Pendek x IR 78581

Hibah

Bersaing I

DP2M

Rp 40.000.000,- Anggota

Peneliti

6 2013 Seleksi galur dari populasi

hasil persilangan Pendek x IR

78581 dalam rangka

perbaikan sifat padi gogo

adaptif lahan masam

Hibah

Bersaing II

DP2M

Rp 36.000.000,- Anggota

Peneliti

7 2014 Seleksi galur dari populasi

hasil persilangan Pendek x IR

78581 dalam rangka

perbaikan sifat padi gogo

adaptif lahan masam

Hibah

Bersaing III

DP2M

Rp 50.000.000,- Anggota

Peneliti

17

17

D. Pengalaman Pengabdian Masyarakat dalam 5 Tahun terakhir

No Tahun Judul Penelitian PENDANAAN

Sumber Jumlah

1. 2011 Pengembangan Varietas unggul

tahan untuk pengendalian penyakit

kresek (blas) pada pertanaman padi

sawah

Mandiri Rp.1.500.000,-

E. Pengalaman Penulisan Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 Tahun terakhir

NO JUDUL ARTIKEL ILMIAH NAMA

JURNAL

VOLUM

E,

NOMOR,

TAHUN

1. Pembentukan galur haploid ganda padi gogo dengan sifat-sifat tipe baru melalui kultur antera.

(Herawati, R., B.S. Purwoko, N. Khumaida, I. S.

Dewi, B. Abdullah)

Bulletin

Agronomi

(Terakreditas

i B)

Vol.36

No. 3

Th. 2008

2. Keragaman genetik dan karakterisasi morfologi galur haploid ganda padi gogo dengan sifat-sifat

tipe baru hasil kultur antera.

(Herawati, R., B.S. Purwoko, I. S. Dewi)

Jurnal

Agronomi

Indonesia

(Terakreditas

i B)

Vol.37

No. 2

Th. 2009

3. Characterization of Doubled Haploid Derived from Anther Culture for New Type Upland Rice

(Herawati, R., B.S. Purwoko, I. S. Dewi)

Jurnal

Agronomi

Indonesia

(Terakreditas

i B)

Vol. 38 No.3

Th. 2010

4. Penyaji Poster pada IPB-Ku Seminar on ”Food, Energy, and Water” 11 Februari 2011, by Director

International Studies Centre, Kasetsart University,

Bangkok, Thailand

Poster 2011

5. Poster 3rd International Seminar Regional Network on Poverty Eradication

Poster 2011

6. Induksi kalus dan Regenerasi Tanaman pada Kultur Antera Persilangan Padi Indica Varietas Lokal

Bengkulu. (Herawati, R, Rustikawati, Inoriyah, E)

Jurnal Akta

Agrosia

(ISSN)

Vol 18, N0.1

Th. 2015

7. Keragaman Genetik dan Karakter Agronomi Galur Haploid Ganda Hasil Kultur Antera untuk Padi

Sawah dengan Sifat-sifat Tipe Baru” (Reny

Herawati).

Jurnal Akta

Agrosia

(ISSN)

Vol 18, N0.2

Th. 2015

8. Development of New Type Upland Rice Lines for Resistance to Blast Desease through Anther

Culture” (Reny Herawati, Bambang S. Purwoko,

Iswari S. Dewi)

Proceeding

Internasional

Seminar and

Expo on

ISBN.978602

9071184

Th. 2016

18

18

NO JUDUL ARTIKEL ILMIAH NAMA

JURNAL

VOLUM

E,

NOMOR,

TAHUN

“Promoting

Local

Resources for

Food and

Health” 12-

13 October

2015

F. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation) dalam 5 Tahun terakhir

No Nama Pertemuan Ilmiah/Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu dan

Tempat

1. Internasional Seminar and Expo on

“Promoting Local Resources for

Food and Health”

Development of New Type

Upland Rice Lines for

Resistance to Blast Desease

through Anther Culture”

12-13

October 2015

di Universitas

Bengkulu

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai

ketidaksesuain dengan kenyataan, saya sanggup menerima resikonya.

Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi persyaratan

dalam pengajuan Penelitian Mandiri

Bengkulu, September 2016

Ketua Pengusul

(Dr. Ir. Reny Herawati, M.P)

NIP. 19650101 198903 2 002

19

19

A. Identitas Diri

1. Nama Lengkap (dengan gelar) Hesti Pujiwati, SP. MSi

2. Jenis Kelamin Perempuan

3. Jabatan Fungsional Lektor

4. NIP 1197711212006042001

5 NIDN 0021117703

6. Tempat dan Tanggal Lahir Magelang, 21 November 1977

7. E-mail [email protected]

8. Nomor Telepon/HP 085379043434

9. Alamat kantor Fakultas Pertanian UNIB

Jl WR Supratman, Bengkulu

10. Nomor Telepon/Faks 0736-21170/0736-21290

11. Lulusan yang telah dihasilkan S1=7 orang

12. Mata kuliah yang diampu 1. Dasar-dasar Agronomi

2. Ekologi Tanaman

3.Fisiologi dan Penanganan Pasca Panen

4. Produksi Tanaman Pangan

5. Budidaya Tanaman Pagan Alternatif

B. Riwayat Pendidikan

S1 S2 S3

Nama Perguruan

Tinggi

Universitas Bengkulu Institut Pertanian

Bogor

-

Bidang Ilmu Agronomi Agronomi -

Tahun Masuk 1996 2001 -

Tahun lulus 2000 2004 -

Judul Skripsi/Tesis/

Disertasi

Pengaruh Pemberian Pupuk

Sulfomug dan Pupuk

Kandang Terhadap

Pertumbuhan dan Hasil

Kedelai (Glycine max (L.)

Merril) pada Tanah Ultisol

Studi Penerapan Sistem

Budidaya dan Cara

Pengendalian Gulmab

pada Pola Pertanaman

Tumpangsari Kacang

Hijau (Vigna radiata)

dan Padi (Oryza sativa

L.)

-

Nama Pembimbing/

Promotor

Ir. Dotti Suryati, M.Sc

Ir. Kanang S Hindarto,

M.Sc

Dr. Munif Ghulamahdi

Dr. Sandra Arifin Aziz

Dr. Harris Burhan

-

C. Pengalaman Penelitian

Tahun Judul Penelitian

Ketua/

anggota

Tim

Sumber

Dana

Besarny

a Dana

2006 Jenis Bahan Tanam dan

Pemupukan P Pada

Anggota Dipa

Universitas

5 jt

mailto:[email protected]

20

20

Pertumbuhan dan Hasil Jarak

Pagar (Jatropa curcas L.)

Bengkulu

2007 Pertumbuhan dan Hasil Jarak

Pagar Pada Berbagai Pola

Tanam di Lahan Marginal

Anggota PHK A2 30

2009 Peningkatan Produktivitas

Genotipe Baru Kedelai Berbasis

Mekanisme Adaptasi

Mendapatkan hara Fosfor

Anggota Hibah

Kompetitif

Sesuai

Prioritas

Nasional

40 jt

2009 Pengembangan Galur Mandul

Jantan dalam Rangka

Mendukung Produksi Benih

Padi Hibrida Nasional

(Pemanfaatan Plasma Nutfah

Lokal dan Penggunaan Teknik

Iradiasi Sinar Gamma) Tahun I

Ketua Hibah

Bersaing

Dikti

44 jt

2009 Keragaan Pertumbuhan

Vegetatif dan Generatif Padi

Lokal di Propinsi Bengkulu

Ketua Dipa

Universitas

Bengkulu

7 jt


Jantan dalam Rangka





Iradiasi Sinar Gamma) Tahun II

Ketua Hibah

Bersaing

Dikti

44 jt

2010 Pemurnian Padi Kultivar Lokal:

Pertumbuhan dan Hasil Padi

Lokal

Ketua Dipa

Universitas

Bengkulu

9 jt


Jantan dalam Rangka





Iradiasi Sinar Gamma) Tahun

III

Ketua Hibah

Bersaing

Dikti

50 jt

2012 Seleksi galur dari populasi hasil

persilangan Pendek x IR 78581

dalam rangka perbaikan sifat

padi gogo adaptif lahan masam

Ketua Hibah

Bersaing

Dikti

46,5 jt

D. Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat

Tahun Jenis/Nama Kegiatan Tempat

2010 Pemanfaatan Produk Pertanian Dengan

Pembuatan Kue-kue yang Bergizi dan

Sehat Guna Menunjang Pendapatan

Keluarga di Desa Harapan Makmur

Kabupaten Bengkulu Tengan

Desa Harapan Makmur

Kabupaten Bengkulu Tengah

2010 Peningkatan Produktivitas Lahan Sawah Desa Tanjung Terdana Kec.

21

21

dengan Sistem Budidaya Padi Intensif di

Desa Tanjung Terdana Kec. Pondok

Kubang Kabupaten Bengkulu Tengah

Pondok Kubang Kabupaten

Bengkulu Tengah

2009 IbM Kelompok Tani Jarak Pagar di Desa

Padang Serai Bengkulu

Desa Padang Serai, Bengkulu

2009 Pelatihan Pengolahan Ubi kayu pada

Petani di Desa Pekik Nyaring

Kecamatan Pondok Kelapa Kabupaten

Bengkulu Utara

Desa Pekik Nyaring Kecamatan

Pondok Kelapa Kabupaten

Bengkulu Utara

2009 Penerapan Aneka Olahan Beras Ketan

untuk Meningkatkan Keterampilan

Petani di Desa Rimbo Recap Kabupaten

Rejang Lebong

Desa Rimbo Recap Kabupaten

Rejang Lebong

2008 Teknologi Penyediaan Bibit Okulasi

Karet Untuk Meningkatkan Ketrampilan

dan Pengetahuan Petani di Desa

Kembang Seri, Kec. Talang Empat, Kab.

Bengkulu Utara

Desa Kembang Seri, Kec.

Talang Empat, Kab. Bengkulu

Utara

2007 Teknologi pengolahan cabe dan tomat

menjadi saos untuk meningkatkan nilai

ekonomi dan pendapatan petani di desa

sumber urip, kec. Selupu rejang

Desa Sumber Urip, kec. Selupu

rejang

E. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal

No Judul Artikel Ilmiah Volume, Nomor,

Tahun

Nama

Jurnal

1. Pertumbuhan dan Hasil Jarak Pagar

pada Berbagai Pola Tanam di Lahan

Marjinal

Edisi Khusus

Dies Natalis ke-

26 UNIB No. 3,

2007

Jurnal

Ilmu-ilmu

Pertanian

2. Produktivitas Lahan dan NKL pada

Tumpang Sari Jarak Pagar dengan

Tanaman Pangan

Vol. 12 No. 1

Januari-Juni 2009

Jurnal Akta

Agrosia

3. Studi Keragaan Padi Lokal di Propinsi

Bengkulu pada Vase Vegetatif dan

Generatif

Edisi September

2009-Februari

2010 Vol. VII

No.1

Jurnal

Saintifik

4 The Application of Peaty Mineral Soil

Water in Improving the Adaptability of

Black Soybean toward Aluminium

Stress on Tidal Mineral Soil with

Saturated Water Culture

Volume 17 No 3,

Oktober 2015

Journal

Agrivita ,

22

22

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggung jawabkan secara hukum. Apabila dikemudian hari ternyata dijumpai

ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima sanksi.

Demikianlah biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu

persyaratan dalam pengajuan Penelitian Mandiri

Bengkulu, September 2016

Pengusul,

Hesti Pujiwati, SP.MSi

NIP. 197711212006042001

Laporan Cover_2016.pdf (p.1-5)Laporan Penelitian Mandiri 2016.pdf (p.6-27)

LAPORAN PENELITIAN MANDIRI - COnnecting REpositories · 2020. 9. 2. · laporan penelitian mandiri...

Documents

Transcript of LAPORAN PENELITIAN MANDIRI - COnnecting REpositories · 2020. 9. 2. · laporan penelitian mandiri...