LAPORAN AKHIR PENELITIAN - research.unissula.ac.id
33
1 LAPORAN AKHIR PENELITIAN PENGARUH EKSTRAK BAWANG LANANG (Allium sativum var.solo garlic) TERHADAP GAMBARAN HISTOPATOLOGIK TESTIS TIKUS WISTAR (Rattus Norwegicus) TIM PENELITI : KETUA : 1. Ika Buana Januarti, M.Sc., Apt 0620018603 ANGGOTA : 2. Fadzil Latifah UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG SEMARANG OKTOBER 2019
Transcript of LAPORAN AKHIR PENELITIAN - research.unissula.ac.id
1
LAPORAN AKHIR
PENELITIAN
PENGARUH EKSTRAK BAWANG LANANG (Allium sativum var.solo garlic)
TERHADAP GAMBARAN HISTOPATOLOGIK TESTIS TIKUS WISTAR (Rattus
Norwegicus)
TIM PENELITI :
KETUA :
1. Ika Buana Januarti, M.Sc., Apt 0620018603
ANGGOTA :
2. Fadzil Latifah
UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
OKTOBER 2019
2
3
RINGKASAN
Ekstrak Etanolik Umbi Bawang Lanang (EEUBL) pada dosis 270 mg/ 200 g BB telah
diteliti memiliki efek sebagai afrodisiak. EEUBL mengandung metabolit sekunder berupa
flavonoid, alkaloid, dan saponin yang diduga berpengaruh terhadap sel Leydig dan sel Sertoli.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian EEUBL terhadap jumlah sel
Leydig dan sel Sertoli pada tikus jantan galur wistar.
Penelitian eksperimental ini menggunakan rancangan Post Test Only Control Group
Design dengan sampel tikus jantan galur wistar sebanyak 25 ekor yang dibagi menjadi 5
kelompok. Kelompok I adalah kontrol negatif yang diberi Na-CMC 0,5%, kelompok II adalah
kontrol positif yang diberi jamu pasak bumi. Kelompok III, IV, dan V diberi EEUBL dengan
dosis berturut-turut 90mg/200 g BB; 180mg/200 g BB; 270mg/200 g BB. Analisis data
menggunakan uji parametrik one way Anova dilanjutkan dengan uji Post Hoc.
Hasil jumlah sel Leydig dengan uji Mann Whitney terdapat hasil berbeda bermakna
antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif (p<0,05), kelompok kontrol
positif dengan dosis 90mg/ 200 g BB (p<0,05), kelompok negatif dengan dosis 270 mg/ 200 g
BB (p<0,05). Hasil uji One Way Anova tidak ada perbedaan bermakna untuk jumlah sel Sertoli
(p>0,05).
Kesimpulan dari penelitian ini adalah kstrak etanolik umbi bawang lanang (Allium
sativum var.solo garlic) mempunyai pengaruh terhadap peningkatan jumlah sel Leydig dan tidak
berpengaruh secara signifikan terhadap jumlah sel Sertoli pada tikus jantan galur wistar.
Kata kunci : Ekstrak etanolik umbi bawang lanang, jumlah sel Leydig, jumlah sel Sertoli.
4
PRAKATA
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala berkah dan karunia-Nya sehingga penulis
dapat menyelesaikan penelitian dengan judul “Pengaruh Ekstrak Etanolik Umbi Bawang
Lanang terhadap Jumlah Sel Leydig dan Sel Sertoli”. Sholawat dan salam tetap tercurahkan
kepada Nabi Muhammad SAW, beserta keluarga, sahabat dan para pengikutnya.
Dengan terselesaikannya laporan ini, terbuka kesempatan bagi penulis untuk
menyampaikan ucapan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada mereka yang telah membantu
tersusunnya laporan ini. Ucapan terima kasih penulis haturkan kepada:
1. Bapak Dr. Prabowo Setiyanto selaku Rektor Universitas Islam Sultan Agung Semarang
yang telah memfasilitasi penelitian ini
2. Dr. dr. H. Setyo Trisnadi, Sp.KF., SH selaku Dekan Fakutas Kedokteran Universitas Islam
Sultan Agung Semarang.
3. Bapak Dr. Heru Sulistyo, M.Si. selaku Kepala LPPM Universitas Islam Sultan Agung
Semarang dan tim LPPM yang telah memfasilitasi penelitian ini
4. Bapak Abdur Rosyid, M. Sc., Apt, selaku Kepala Prodi Farmasi Fakutas Kedokteran
Universitas Islam Sultan Agung Semarang yang telah memberikan fasilitas untuk
melaksanakan penelitian di laboratorium farmasi
5. Serta pihak – pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu per satu, terima kasih atas
bantuannya dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, karena itu saran dan kritik
bersifat membangun dari berbagai pihak sangat penulis harapkan. Akhir kata penulis berharap
semoga laporan ini dapat menjadi bahan informasi yang bemanfaat bagi pengembangan ilmu
pengetahuan dibidang farmasi.
Semarang, Oktober 2019
Penulis
5
DAFTAR ISI
RINGKASAN ............................................................................................................................................. 3
PRAKATA .................................................................................................................................................. 4 DAFTAR ISI ............................................................................................................................................... 5 DAFTAR TABEL ...................................................................................................................................... 6
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................................................. 7 BAB I. PENDAHULUAN ........................................................................................................................ 8
1.1 Latar Belakang ............................................................................................................................ 8
1.2 Rumusan Masalah ...................................................................................................................... 9
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................................................ 9 1.4 Tujuan khusus ............................................................................................................................. 9
1.5 Urgensi Penelitian ...................................................................................................................... 9
1.6 Luaran yang ditargetkan ............................................................................................................ 9 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................................................... 10
2.1 Kajian Teori .............................................................................................................................. 10
Uraian Bawang Lanang .................................................................................................................. 10 a. Klasifikasi tanaman ..................................................................................................................... 10
b. Morfologi tanaman ...................................................................................................................... 10 c. Komposisi Kimia Umbi bawang lanang ................................................................................... 11
2.2 Ekstraksi umbi bawang lanang ............................................................................................... 12
2.3 Histologi Testis ......................................................................................................................... 13
2.3.1. Tubulus Seminiferus ........................................................................................................ 13 2.3.2. Sel Leydig .......................................................................................................................... 14
2.3.3. Sel Sertoli .......................................................................................................................... 14
BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN ....................................................................... 16
3.1. Tujuan Khusus .......................................................................................................................... 16
3.2. Manfaat Penelitian.................................................................................................................... 16
BAB IV. METODE PENELITIAN ....................................................................................................... 17 3.1 Alat ............................................................................................................................................. 17
3.2 Bahan ......................................................................................................................................... 17 3.3 Metode ....................................................................................................................................... 17 3.4 Analisis Hasil ............................................................................................................................ 20
3.5 Bagan Penelitian ....................................................................................................................... 21 BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI .......................................................................... 22
5.1 HASIL PENELITIAN .................................................................................................................. 22
5.2 LUARAN YANG DICAPAI .................................................................................................. 29 BAB VI. RENCANA TAHAPAN BERIKUTNYA ........................................................................... 30
BAB VII. KESIMPULAN ...................................................................................................................... 31
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................................................. 32 LAMPIRAN .............................................................................................................................................. 33
6
DAFTAR TABEL
Tabel 4. 1. Rata-rata Jumlah Sel Leydig ................................................................ 24
Tabel 4. 2. Rata-rata Jumlah Sel Sertoli ................................................................ 26
7
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Artikel ilmiah status submission……………………………………………………33
8
BAB I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Surat An Nahl ayat 11 menyatakan bahwa tanaman dapat digunakan oleh manusia bagi yang
memikirkan artinya masih banyak manfaat yang dapat dieksplorasi dari tanaman khususnya dari
sisi pengobatan. Tanaman yang akan dieksplorasi dalam penelitian ini adalah umbi bawang
lanang (Allium sativum L. var. solo garlic). Ekstrak etanolik umbi bawang lanang mempunyai
aktivitas antioksidan yang bersifat kuat pada IC50 13,85 ppm (1). Ekstrak etanolik umbi bawang
lanang mempunyai efek afrodisiak optimal pada dosis 270 mg/200 g BB dilihat dari aktivitas
introduction sebesar 8,6 kali per 5 menit ± 1,3416 88, dan climbing 2 kali ± 9,7570 dibandingkan
dengan aktivitas introduction jamu pasak bumi sebesar 5,8 kali per 5 menit ± 0,4472, dan
climbing 2 kali 45,6 ± 1,9493 (2).
Aktivitas farmakologi umbi bawang lanang diduga karena adanya senyawa flavonoid,
alkaloid dan organosulfur. Senyawa-senyawa tersebut memungkinkan u ntuk memperlancar
aliran darah dalam alat kelamin dan juga meningkatkan produksi hormon androgenik atau
testosteron (3). Hormon androgen sangat dipengaruhi oleh keberadaan Androgen Reseptor (AR),
konsentrasi Luteinizing Homone (LH) dan Folicle Stimulating Hormone (FSH). Androgen
reseptor diketahui beraktivitas di dalam sel Sertoli dan sel Leydig. LH diperlukan di dalam sel
Leydig untuk menghasilkan testosteron dan juga FSH sebagai protein pengikat androgen (ABP)
yang menstimulus sel Sertoli untuk memberikan nutrisi terhadap perkembangan spermatozoa.
Perkembangan spermatozoa berperan dalam spermatogenesis untuk menghasilkan aktivitas
afrodisiak pada testis (4).
. Berdasarkan studi literatur belum pernah dilakukan penelitian untuk mengetahui hubungan
antara proses spermatogenesis terhadap fungsi sel leydig dan sel sertoli. Hal ini dapat dilihat dari
gambaran histopatologi sel Sertoli dan sel Leydig testis tikus yang telah diinduksi ekstrak
etanolik umbi bawang lanang, oleh karena itu penelitian ini ingin mengetahui pengaruh ekstrak
etanolik umbi bawang lanang (Allium sativum L.var. solo garlic) terhadap gambaran
histopatologik testis pada tikus galur wistar dengan melihat indeks berat testis dan jumlah sel
Leydig serta sel sertoli. Perlakuan ke hewan uji menggunakan cara penanganan hewan uji yang
9
sesuai syariat Islam. Sisa pelarut ekstrak yaitu etanol dicek dengan analisis sisa pelarut untuk
memastikan bahwa tidak ada sisa pelarut.
1.2 Rumusan Masalah
Bagaimana pengaruh ekstrak etanolik umbi bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo
garlic) terhadap gambaran histopatologi testis tikus dilihat dari jumlah sel Leydig dan sel
sertoli)?
1.3 Tujuan Penelitian
Untuk mengetahui pengaruh ekstrak bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo garlic)
terhadap gambaran histopatologi testis tikus
1.4 Tujuan khusus
1. Mengetahui jumlah sel Leydig pada gambaran histopatologi testis tikus yang diberi
ekstrak bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo garlic)
2. Mengetahui jumlah sel sertoli pada gambaran histopatologi testis tikus yang diberi
ekstrak bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo garlic)
1.5 Urgensi Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan memberikan data ilmiah penting tentang gambaran
histopatologik testis tikus yang diinduksi ekstrak etanolik umbi bawang lanang (Allium sativum
L. varietas solo garlic). Penelitian ini sejalan dengan renstra Unissula bidang klaster penelitian
kesehatan tahun 2016-2020 yang mengarah pada pengembangan obat herbal berbasis bahan alam
dan bahan alami kaya gizi. Obat alam untuk afrodisiak masih terbatas jumlahnya dan banyak
dipalsukan sehingga diperlukan penelitian untuk mencari alternatif obat dari bahan alami
tumbuhan yang dibuktikan secara saintifikasi.
1.6 Luaran yang ditargetkan
Publikasi ilmiah dalam jurnal lokal yang mempunyai ISSN atau jurnal nasional terakreditasi/
prosiding pada seminar ilmiah yang berskala lokal, regional maupun nasional
10
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Kajian Teori
Uraian Bawang Lanang
a. Klasifikasi tanaman
Klasifikasi Allium sativum L. var.solo garlic adalah sebagai berikut :
Regnum : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Monocotyledonae
Ordo : Liliales
Famili : Liliaceae
Genus : Allium
Species : Allium sativum L.
b. Morfologi tanaman
Bawang lanang merupakan bawang putih Allium sativum yang tumbuh tunggal.
Bawang lanang ini gagal tumbuh membentuk umbi yang tersusun atas 10-15 siung
sehingga disebut dengan bawang lanang. Istilah lanang sering kali dipakai untuk
menggambarkan kondisi tertentu pada umbi atau biji dengan kriteria tunggal, bulat dan
tidak terbelah. Kandungan senyawa aktif dalam bawang lanang relatif lebih tinggi
dibandingkan bawang putih biasa, karena semua zatnya terkumpul dalam siung tunggal
tersebut (Rukmana, 1995).
Morfologi tanaman bawang lanang terdiri atas akar, batang utama, batang semu,
tangkai bunga yang pendek atau sama sekali tidak ke luar dan daun. Akar bawang
terbentuk di pangkal bawah batang sebenarnya. Sistem perakaran tanaman ini menyebar
ke segala arah, namun tidak terlalu dalam sehingga tidak tahan kekeringan. Tangkai
bunga bawang umumnya berukuran pendek sehingga membengkak pada bagian batang
semu yang dapat berubah bentuk dan fungsinya sebagai tempat penyimpanan cadangan
atau disebut ”umbi”. Umbi bawang lanang dapat dilihat pada gambar 1.
11
Gambar 1. Umbi bawang lanang
Bawang lanang merupakan umbi tunggal (utuh) yang ukurannya kecil-kecil dan
diduga terbentuk pada kondisi lingkungan (ekologi) yang kurang cocok untuk bawang
putih sehingga menghasilkan umbi kecil-kecil yang tidak bersiung. Pada batang semu
yang berada di atas permukaan tanah, tersusun pelepah daun yang saling menutupi satu
sama lain. Batang semu ini dapat mencapai ketinggian hingga 30 cm. Daun bawang
bentuknya pipih, rata, agak melipat dan arahnya membujur. Tiap batang tanaman bawang
berdaun 10 helai atau lebih (Rukmana, 1995).
c. Komposisi Kimia Umbi bawang lanang
Bawang lanang mempunyai kandungan kimia tannin, alkaloid, saponin, dua
senyawa organosulfur yang kadarnya 82% dari keseluruhan senyawa organosulfur di
dalam umbi ditunjukkan pada gambar 2 yaitu asam amino non volatil Ɣ-glutamil-S-
alk(en)-il-L-sistein (1) dan minyak atsiri S-alk-(en)il-sistein sulfoksida atau alliin (2)
(Hernawan dan Setyawan, 2003), selain itu juga mengandung enzim allinase, peroxidase
dan myrosinase serta kandungan lain protein, mineral, vitamin, lemak dan asam amino
(Nugroho, 2015).
12
Gambar 2. Struktur senyawa Ɣ-glutamil-S-alk(en)-il-L-sistein dan alliin (Hernawan dan
Setyawan, 2003)
Senyawa di dalam di dalam umbi bawang putih dan umbi bawang lanang yang diduga
dapat berkhasiat sebagai afrodisiak adalah kelompok ajoene. Kelompok ajoene diperkirakan
dapat menghambat masuknya ion kalsium ke dalam sel membran otot polos sehingga
mengalami penurunan potensial menjadi bernilai negatif yang menyebabkan tertutupnya
kanal kalsium dan terjadi hiperpolarisasi, diikuti relaksasi otot polos dan vasodilatasi otot
pembuluh darah di alat kelamin (Hernawan dan Setyawan, 2003). Senyawa lain yang juga
bermanfaat sebagai vasodilator adalah enzim allinase, peroksidase dan myrosinase sehingga
aliran darah menjadi lancar (Nugroho, 2015).
2.2 Ekstraksi umbi bawang lanang
Pembuatan ekstrak etanolik umbi bawang lanang sama seperti cara ekstraksi pada
bawang putih karena sebenarnya umbi bawang lanang dan umbi bawang putih berasal dari
satu tanaman yang sama. Ekstraksi dilakukan menggunakan pelarut etanol 96% yang bersifat
non polar. Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi. Metode ini dipilih karena tidak
menggunakan panas dan diharapkan menghasilkan ekstrak yang mengandung allisin dan
ajoene.
Ekstraksi umbi bawang dengan etanol pada suhu di bawah 00C akan menghasilkan alliin.
Ekstraksi dengan etanol dan air pada suhu 250C akan menghasilkan allisin dan tidak
menghasilkan alliin. Adapun ekstraksi dengan metode distilasi uap (1000C) menyebabkan
seluruh kandungan alliin berubah menjadi senyawa allil sulfide. Allisin merupakan prekursor
pembentukan allil sulfida, misalnya diallil disulfida (DADS), diallil trisulfida (DATS), diallil
13
sulfida (DAS), metallil sulfida, dipropil sulfida, dipropil disulfida, allil merkaptan dan allil
metil sulfida. Kelompok allil sulfida memiliki sifat larut dalam minyak sehingga untuk
mengekstraksinya digunakan pelarut non polar. Pembentukan kelompok ajoene, misalnya E-
ajoene dan Z-ajoene serta kelompok dithiin misalnya 2-vinil -4-(H)-1,3-dithiin dan 3-vinil-
(4H)-1,2-dithiin juga berawal dari pemecahan allisin (Hernawan dan Setyawan, 2003).
Apabila kita ingin mendapatkan senyawa allisin maka ekstraksi dapat dilakukan pada
suhu kamar karena proses pemanasan dapat menyebabkan hilangnya 90% kerja enzim
allinase sehingga reaksi pembentukan senyawa allil-sulfur terhenti (Hernawan dan Setyawan,
2003). Minyak bawang hasil maserasi mengandung kelompok vinyl-dithiin 0,8 mg/g dan
ajoena 0,1 mg/g sedangkan ekstrak eter mengandung vinyl-dithiin 5,7 mg/g, allil sulfida 1,4
mg/g dan ajoena 0,4 mg/g (Hernawan dan Setyawan, 2003).
2.3 Histologi Testis
Testis dikelililingi oleh jaringan ikat, tunica albuginea, yang menebal pada sisi
posterior untuk membentuk mediastinum testis. Dari septa terbagi sekitar 250
kompartemen piramidal atau lobus testis. Setiap testis memiliki satu hingga empat lobulus
yang berbentuk berbelit-belit untuk memproduksi sperma, dan setiap lobulus terdapat
tubulus seminiferus dan jaringan ikat atau interstitial (sel Leydig) untuk mensekresi
hormon testosteron dan tubulus seminiferus yang dihuni oleh sel Spermatogonia, sel
Sertoli, sel Spermatosit, dan sel Spermatid (Mescher, 2013).
2.3.1. Tubulus Seminiferus
Saat dewasa tubulus seminiferus menghasilkan sperma dengan laju 2 x 108
per hari (Mescher, 2013). Tubulus seminiferus terdiri beberapa lapisan epitel
germinal (epitel seminiferus) secara khusus dan kompleks, terdiri jaringan ikat
fibrosa, dan lamina basalis. Jaringan ikat fibrosa melapisi membran epitel basal
yang didalamnya mengandung sel-sel mioid gepeng. Sel-sel interstitial (sel Leydig)
terletak di ruang antara tubulus seminiferus. Pada epitel tubulus seminiferus terdiri
atas dua jenis sel yaitu sel penyokong (sel Sertoli) dan sel-sel proliferatif dari
turunan spermatogenik (Mescher, 2013).
14
2.3.2. Sel Leydig
Sel Leydig berada di daerah segitiga antara tubulus seminiferus yang terdiri
atas jaringan ikat tipis mengandung fibroblast, limfatik, dan pembuluh darah. Sel sel
Leydig secara mikroskopik cahaya umumnya berukuran besar dengan sitoplasma
yang bervakuola. Inti sel Leydig tampak jelas dan mengandung butiran-butiran
kromatin kasar. Selain itu dijumpai jenis sel yang memiliki dua anak inti. Sel-sel
tersebut menghasilkan hormon testosteron steroid. Sekresi hormon testosteron dipicu
oleh gonatropin hipofisis, hormon LH, yang disebut juga Interstitial Cell Stimulating
Hormon (ICSH) (Mescher, 2013). Sel-sel Leydig letaknya berkelompok memadat
pada daerah segitiga yang dikelilingi oleh bagian tubulus seminiferus (Mescher,
2013). Gambar sel Leydig dapat dilihat pada gambar 5 dibawah ini.
Gambar 5. Jaringan Interstisial ( sel Leydig ) (Guyton and Hall, 2011)
2.3.3. Sel Sertoli
Sel Sertoli merupakan sel seperti piramid dengan permukaan memanjang
yang membungkus sel-sel dari garis keturunan spermatogenik. Sel Sertoli dasarnya
melekat pada lamina basalis dan apeks ujungnya meluas ke lumen tubulus
seminiferus. Gambar sel Sertoli dapat dilihat pada gambar 6 dibawah ini.
15
Gambar 6. Tubulus Seminiferus ( sel Sertoli ) (Mescher, 2013).
Keterangan : Sel Sertoli (SC), Late spermatid (LS), Spermatid awal
(ES),Spermatosit primer (PS), Spermatogonia (SG), Sel Myoid (M),
Fibroblast (F).
Dilihat secara mikroskop cahaya bentuk sel Sertoli terlihat kurang jelas karena
sel spermatogenik dikelilingi banyaknya jalur lateral. Fungsi utama sel Sertoli
melibatkan blood-testis barrier untuk menunjang, melindungi dan memberi nutrisi
untuk perkembangan sel spermatogenik karena spermatosid, spermatid, dan sperma
yang terisolasi dikembangkan dari protein plasma dan nutrisi sebagai transferin
protein transport-besi. Hal ini untuk melindungi sel spermatogenik dari sirkulasi
komponen imun, faktor plasma yang banyak memasok pada sel Sertoli diperlukan
untuk pertumbuhan sel. Selain itu Sel Sertoli terlepas ke tubulus seminiferus
mengeluarkan sperma sebagai fungsi untuk mensekresi eksokrin dan endokrin.
16
BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN
3.1. Tujuan Khusus
a. Mengetahui jumlah sel Leydig pada gambaran histopatologi testis tikus yang diberi
ekstrak bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo garlic)
b. Mengetahui jumlah sel sertoli pada gambaran histopatologi testis tikus yang diberi
ekstrak bawang lanang (Allium sativum L. varietas solo garlic)
3.2. Manfaat Penelitian
Memberikan data ilmiah penting tentang pengaruh ekstrak bawang lanang (Allium
sativum L. varietas solo garlic) terhadap gambaran histopatologi testis tikus
17
BAB IV. METODE PENELITIAN 3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu blender, pengayak, rotary evaporator
rotavapor (Heidolph WB 2000), neraca analitik (ANP dan Mettler Teledo), kertas saring,
corong plastik, alumunium foil, kandang, sarung tangan, tempat air minum dan makan
hewan, pinset steril, cup steril, inkubator, korek api, rak tabung, swab kapas steril, pinset,
sonde, akuarium, camera recorder, timbangan hewan uji, tanur, destilasi
3.2 Bahan
Umbi bawang lanang, etanol 95%, tikus betina bobot 200-300 gram, CMC-Na 1 %, silika
gel GF 254, aquadest.
3.3 Metode
Metode penelitian ini merupakan penelitian laboratorium dengan metode post test only
control group design
1. Identifikasi umbi bawang lanang (Allium sativum. L varietas solo garlic)
Umbi bawang lanang yang akan digunakan dalam penelitian diidentifikasi di
Laboratorium Biologi, Universitas Negeri Semarang.
2. Ekstraksi Umbi Bawang Lanang
Umbi bawang lanang disortasi basah secara manual `untuk menghilangkan bagian-bagian
yang tidak diinginkan. Umbi bawang sebelum di blender dilakukan pencucian dengan
tujuan untuk menghilangkan zat pengotor yang masih ada. Umbi bawang di blender
dengan menggunakan pelarut etanol 95 %. Etanol dipilih berdasarkan tingkat
toksisitasnya yang rendah dan sifatnya mampu menyari dengan polaritas yang lebar
mulai dari senyawa non polar hingga polar (Setyorini et al., 2016). Umbi bawang lanang
setelah diblender dimasukan ke dalam toples kaca yang telah di isi sisa etanol. Maserasi
dilakukan selama 3 x 24 jam. Selama proses perendaman sampel terjadi perbedaan
tekanan antara di dalam dan di luar sel sehingga menyebabkan pemecahan dinding dan
membran sel. Akibatnya, metabolit sekunder yang ada di dalam sitoplasma akan terlarut
dalam pelarut (Lenny, 2006). Dilakukan pengadukan 24 jam sekali selama 20 menit
bertujuan untuk meningkatkan lama kontak antar pelarut dengan sampel sehingga
senyawa aktif dapat tersari secara maksimal dalam larutan penyari dan saat didiamkan
kembali selama 24 jam senyawa aktif akan berdifusi keluar sel (Khopkar, 2008). Tahap
18
selanjutnya dilakukan penyarian yang bertujuan untuk menghilangkan bahan yang
berukuran besar dari larutan (Rimajuna et al., 2017). Setelah dilakukan penyarian ekstrak
dievaporasi dengan Rotary Evaporator pada suhu 500 C untuk menghasilkan ekstrak
kental (Sa‟adah et al., 2017). Penggunaan suhu 500 C dikarenakan relatif aman untuk zat
tertentu khususnya flavonoid. Flavonoid memiliki cincin aromatik yang terkonjugasi
yang mudah rusak apabila dikenai panas suhu tinggi (Sa‟adah et al., 2017). Hasil ekstrak
kental kemudian dihitung nilai rendemenya dengan rumus sebagi berikut:
3. Pembuatan Larutan Uji
a. Kontrol negatif (Kelompok I) : Timbang 1 gram Na-CMC 0,5 %, larutkan dalam 100
ml air panas, masukan Na-CMC sedikit demi sedikit, aduk hingga homogen.
b. Kontrol positif (Kelompok II) : dosis 10,8 mg/ 200 g BB jamu pasak bumi
c. Pembuatan suspensi kelompok III: timbang 3 gram EEUBL untuk dosis 90 mg/ 200
g BB, larutkan dalam suspensi 100 ml Na-CMC 0,5%.
d. Pembuatan suspensi kelompok IV: timbang 6 gram EEUBL untuk dosis 180 mg/ 200
g BB, EEUBL larutkan dalam 100 ml suspensi Na-CMC 0,5 %.
e. Pembuatan suspensi kelompok V: timbang 9 gram EEUBL` untuk dosis 90 mg/ 200 g
BB, EEUBL larutkan dalam 100 ml suspensi Na-CMC 0,5 %.
4. Penyiapan Hewan Uji
Kelompok tikus yang digunakan sebagai kontrol negatif berupa kelompok 1, kontrol
positif kelompok 2, sedangkan kelompok perlakuan digunakan kelompok 3, 4, 5. Hewan
uji yang digunakan adalah tikus jantan dengan bobot ± 200 g sebanyak 25 ekor dengan
pembagian kelompok seperti berikut :
a) Kelompok I diberi pakan dan minum standar dalam larutan Na-CMC 0,5 % 3 ml /
200 gr.
b) Kelompok II diberi pakan dan minum standar + jamu pasak bumi “herba tunggal‟
dosis 10,8 mg/ 200 g.
c) Kelompok III diberi pakan dan minum standar + ekstrak etanolik bawang lanang
dosis 90 mg/ 200 g BB dalam larutan Na-CMC 0,5%.
19
d) Kelompok IV diberi pakan dan minum standar + ekstrak etanolik bawang lanang
dosis 180 mg/ 200 g BB dalam larutan Na-CMC 0,5%.
e) Kelompok V diberi pakan dan minum standar + ekstrak etanolik bawang lanang
dosis 270 mg/ 200 g BB dalam larutan Na-CMC 0,5 %.
5. Pembuatan Preparat Histologi
Pembuatan preparat histologi testis dengan cara sebagai berikut :
1. Tahap Fiksasi yaitu Organ testis difiksasi dengan formalin 10 % selama 24 jam.
2. Tahap Triming yaitu memotong jaringan menjadi lebih kecil supaya dapat
dimasukkan dalam tissue cassate.
3. Tahap Dehidrasi menggunakan alkohol secara berurutan mulai alkohol 70 % (60
menit), alkohol 95% (60 menit), alkohol 100 % (60 menit), selanjutnya tahap
Clearing dimasukkan ke dalam xylol 1 30 menit, xylol II 30 menit, Xylol III 30
menit.
4. Tahap impregnasi menggunakan parafin cair 1 selama 2 jam lebih 30 menit
selanjutnya parafin II selama 4 jam.
5. Tahap Embeding + Bloking yaitu jaringan dimasukkan ke dalam blok parafin.
Selanjutnya dilakukan infiltrasi, Blok parafin yang berisi potongan testis diletakkan
pada holder dengan parafin cair dan dimasukkan dalam kulkas.
6. Tahap Cutting menggunakan alat mikrotom. Pemotongan diatur secara melintang.
Pisau mikrotom ditata sejajar dengan holder yang sudah di jepitkan pada mikrotom.
Penyayatan dimulai dengan mengatur ketebalan 5 µm lalu pita hasil irisan diambil
kemudian dimasukkan ke dalam air hangat dan ditempel pada obyek glass lalu
dikeringkan dalam suhu kamar, kemudian dimasukkan dalam inkubator sebelum
diwarnai.
7. Tahap Staining yaitu pewarnaan Hematoksilin-eosisn (HE), tetesi dengan Hematoksin
pada preparat selama 3 menit atau sampai didapatkan hasil warna terbaik. Kemudian
dicuci dengan air mengalir 10 menit lalu dengan aquadest 5 menit. Obyek glass
dicelupkan dalam larutan xylol sampai parafin larut (15 menit) lalu dikeringkan.
Selanjutnya dimasukkan dalam alkohol bertingkat mulai dari alkohol 96%, 90 %, 80
%, 70 %, dan bilas aquadest masing-masing 1 menit. Masukkan ke dalam alkohol
asam lalu bilas dengan aquadest 5 - 15 menit, selanjutnya dimasukkan kedalam Eosin
20
1 – 2 menit, kemudian bilas menggunakan alkohol bertingkat dari konsentrasi 70 %,
80 %, 96 % dan alkohol absolut masing-masing 1 menit. Selanjutnya dimasukkan ke
dalam larutan xylol (10 menit). Sediaan dikeringkan lalu dimountaining dan ditutup
dengan deckglass.
8. Tahap Pembacaan menggunakan Mikroskop cahaya dengan optilab untuk melihat
histologi sel.
(Berata, 2018; Harlis et al., 2008).
6. Pengamatan Jumlah Sel Leydig dan Sel Sertoli
Pada pengamatan dilakukan menggunakan parameter kuantitatif. Paramater sel Leydig
dapat dilihat dengan karakteristik selnya berbentuk bulat dan poligonal, memiliki inti
dipusat dan sitoplasma eosinofilik dengan banyak tetesan lipid halus. Sel Sertoli dilihat
selnya berbentuk piramid yang terjulur dalam lumen tubulus seminiferus (Merches,
2013).
Jumlah sel Leydig dihitung pada daerah jaringan interstitial dalam 5 lapang pandang
dengan perbesaran 400x. jumlah sel Sertoli dihitung pada 5 lapang pandang dan dalam
tiap lapang pandang terdiri dari 1 tubulus seminiferus dengan perbesaran 400x.
Perhitungan jumlah sel Leydig dan sel Sertoli menggunakan aplikator Image J, kemudian
hasil sampel dari masing-masing kelompok yang diperoleh dihitung dan direrata.
3.4 Analisis Hasil
Hasil perhitungan jumlah Sel Leydig dianalisis menggunakan uji normalitas dengan uji
Saphiro-Wilk dan uji homogenitas dengan uji Levene test. Sel Leydig dianalisis dengan
menggunakan metode non parametrik dikarenakan data terdistribusi normal dan data tidak
homogen. Metode non parametrik yang digunakan adalah uji Kruskal-Wallis dan dilanjutkan
uji Mann-Whitney. Sel Sertoli dianalisis dengan menggunakan metode parametrik yaitu One
Way Anova dikarenakan data terdistribusi normal dan homogen. Hasil uji One Way Anova
tidak signifikan maka tidak dilanjut uji Post Hoc.
21
3.5 Bagan Penelitian
Gambar 7. Alur penelitian
Ekstrak etanolik umbi bawang lanang
Tikus jantan galur wistar 25 ekor diaklimasi
7 hari
Pengelompokan secara random ( 5 kelompok) 1
kelompok terdapat 5 ekor tikus jantan galur wistar
Kelompok III
( 5 ekor, pakan
dan minum
standar +
EEUBL dosis 90
mg/ 200 g BB
dalam 3 ml
larutan CMC-Na
0,5 %)
Kelompok V
(5 ekor, pakan
standar+
EEUBL dosis
270 mg/ 200 g
BB dalam 3 ml
larutan CMC-Na
0,5 %)
Kelompok IV
(5 ekor, pakan
dan minum
standar +
EEUBL dosis
180 mg/ 200 g
BB dalam 3 ml
larutan CMC-Na
0,5%)
Kelompok I
( 5 ekor, pakan
dan minum
standar dalam
larutan Na-CMC
0,5 % 3 ml / 200
g BB)
Kelompok II
( 5 ekor, pakan
dan minum
standar + jamu
pasak bumi
dosis 10,8 mg/
200 g BB dalam
3 ml larutan
CMC-Na 0,5 %)
Determinasi
Tanaman
Selama 14 hari
Hari ke 15 tikus didislokasi untuk pengambilan organ testis + Formalin 10 % buffer
Pembuatan Preparat Testis
Dilihat dan dihitung jumlah sel Leydig dan sel Sertoli
Interpretasi hasil pengamatan
22
BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI
5.1 HASIL PENELITIAN
1. Identifikasi ekstrak etanolik umbi bawang lanang
Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Jurusan Biologi-
FMIPA Universitas Negeri Semarang. Hasil determinasi diperoleh sebagai berikut:
Divisio : Magnoliophyta
Classis : Liliopsida
Sub Classis : Liliidae
Ordo : Liliales
Familia : Liliaceae
Genus : Allium
Species : Allium sativum L.
Varietas : Allium sativum L. Var. Sativum
Cultivar : Allium sativum L. Ctv. Solo
Umbi bawang lanang sebanyak 4 kg diblender dengan menggunakan pelarut etanol 95 %
dengan perbandingan simplisia : pelarut yaitu 1 : 10. Bejana yang telah di siapkan
ditambahkan sisa pelarut yang digunakan. Maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam dan di
peroleh maserat sebanyak 38,40 L. Hasil ekstrak kental umbi bawang lanang diperoleh
sebesar 237,78 gram. Hasil rendemen diperoleh sebesar 5,94%.
23
2. Hasil Kualitatif Sel Leydig dan Sel Sertoli
A. Kelompok Kontrol Negatif B. Kelompok Kontrol Positif
C. Dosis 90 mg/ 200 g BB D. Dosis 180 mg/ 200 g BB.
E. Dosis 270 mg/ 200 g BB.
Gambar 12. Tubulus Seminiferus Tikus
24
3. Hasil Kuantitatif Sel Leydig dan Sel Sertoli
a. Hasil Sel Leydig
Rata-rata hasil perhitungan jumlah sel Leydig masing-masing kelompok ditunjukkan
pada tabel 1.
Tabel 1. Rata-rata Jumlah Sel Leydig
Kelompok Lapang Pandang
Jumlah rerata
sel Leydig
I II III IV V
Kelompok I
22 27 26 29 28
27,2±1,36
26 28 30 28 30
28 23 25 24 26
29 34 20 28 30
26 25 23 31 34
Kelompok II
36 34 33 30 29
32,24±1,29
40 35 27 32 37
28 25 28 33 39
31 37 26 37 30
38 36 30 25 30
Kelompok III
31 25 28 29 30
32,24±1,29
27 26 30 25 35
29 34 31 22 31
22 23 26 31 34
22 25 30 33 39
Kelompok IV
14 18 21 26 32
25,8±6,25
22 25 28 29 31
14 20 23 24 33
13 15 20 26 30
28 30 33 44 46
Kelompok V
45 28 25 28 31
31,16±2,90
35 35 38 30 40
28 27 25 28 32
26 25 28 33 34
27 50 22 28 31
Keterangan :
Kelompok I = Pemberian Na-CMC 0,5%
Kelompok II = Pemberian pasak bumi dosis 10,8mg/200g BB
Kelompok III = Dosis EEUBL 90 mg/ 200 g BB
Kelompok IV = Dosis EEUBL 180 mg/ 200 g BB
Kelompok V = Dosis EEUBL 270 mg/ 200 g BB
25
Dari tabel 1 diketahui bahwa pengaruh pemberian ekstrak etanolik umbi bawang
lanang terhadap jumlah sel Leydig pada kelompok dosis 270mg/ 200 g BB lebih tinggi
yaitu 31,16 sedangkan kelompok kontrol negatif sebesar 27,2. Kedua kelompok tersebut
memiliki perbedaan bermakna dengan nilai p sebesar 0,015 (p<0,05) yang berarti pada
kelompok dosis 270mg/ 200 g BB didapati pengaruh yang signifikan dalam
meningkatkan jumlah sel Leydig.
Jumlah sel Leydig pada kelompok kontrol positif lebih tinggi dari kelompok dosis 90
mg/ 200 g BB dan berbeda secara bermakna dengan nilai p=0,008 (p<0,05). Jumlah sel
Leydig kelompok dosis 180 mg/ 200 g BB dan 270mg/ 200 g BB lebih rendah dengan
dengan kelompok kontrol positif namun tidak memiliki perbedaan bermakna dengan
p>0,05. Pada kelompok dosis 270 mg/ 200 g BB jumlah sel Leydig lebih tinggi dari
kelompok dosis 90mg/ 200 g BB dan 180mg/ 200 g BB namun tidak secara signifikan.
Hal ini menunjukkan bahwa peningkatan jumlah sel Leydig tidak berbanding lurus
dengan peningkatan dosis ekstrak etanolik umbi bawang lanang.
Pada perbandingan antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok dosis 90 mg/
200 g BB dan kelompok dosis 180mg/ 200 g BB diperoleh nilai p>0,05 yang berarti
bahwa pada kelompok dosis 90mg/ 200 g BB dan 180 mg/ 200 g BB tidak didapati
pengaruh yang signifikan. Hal ini menunjukkan bahwa pada dosis tersebut belum mampu
meningkatkan jumlah sel Leydig pada hewan uji. Menurut penelitian yang dilakukan oleh
Nurferawati et al. (2018) bahwa pada uji afrodisiak dengan ekstrak etanolik umbi bawang
lanang terjadi penurunan coitus pada dosis 180mg/ 200 grBB. Menurunnya coitus
dipengaruhi oleh kurangnya produksi hormon testosteron yang mempengaruhi testis
sehingga berpengaruh terhadap penurunan sel Leydig (Chen dan zirkin, 2000). Hormon
lain yang berperan menstimulasi fungsi fisiologis sel Leydig adalah LH. Fungsi utama
LH menstimulasi sel Leydig untuk memproduksi hormon testosteron. Kurangnya
stimulasi LH pada sel Leydig menyebabkan menurunnya sekresi hormon testosteron
(Olayaki et al., 2008).
Ekstrak etanolik umbi bawang lanang memiliki metabolit sekunder berupa saponin.
Saponin memiliki mekanisme dalam meningkatkan sel Leydig melalui mekanisme
peningkatan hormon LH, FSH, dan testosteron melalui aksi sentral dan periferal. Menurut
Andini (2014) diduga mekanisme saponin mampu meningkatkan hormon testosteron
26
melalui biosintesis DHEA. Hormon tersebut diproduksi oleh sel Leydig, sehingga sel
Leydig meningkat (Gauthaman, 2008). Peningkatan sel leydig disebabkan adanya
stimulus dari hormon LH. Sel Leydig dirangsang oleh LH yang akan membentuk cAMP
dengan cara mengaktifkan enzim adenilat siklase. Aktifnya enzim adenilat siklase akan
mempengaruhi semua proses di dalam sel, salah satunya adalah meningkatnya kadar
cAMP. Pregnenolon akan terbentuk dengan mengaktifkan protein kinase akibat dari
cAMP. Didalam mitokrondria akan membentuk pregnenolon yang nantinya akan diubah
menjadi hormon steroid (testosteron) dan bermacam-macam steroid lainnya (Ganong,
2001).
b. Hasil Sel Sertoli
Rata-rata hasil perhitungan jumlah sel Sertoli masing-masing kelompok ditunjukkan pada
tabel 2.
27
Tabel 2.. Rata-rata Jumlah Sel Sertoli
Kelompok Lapang Pandang
Jumlah rerata sel
Sertoli
I II III IV V
Kelompok I
Na-CMC 0,5%,
33 40 30 25 28
33,76±3,03
41 40 42 28 30
35 27 30 37 28
36 38 37 40 38
33 40 28 30 30
Kelompok II
30 38 37 40 38
34,84±2,32
30 28 28 35 38
28 40 33 35 40
30 28 40 30 38
30 39 40 38 40
Kelompok III
40 38 28 30 26
34,12±1,92
42 32 30 40 38
37 30 30 38 34
35 30 28 40 28
40 38 26 35 40
Kelompok IV
34 32 30 33 40
35,32±1,80
30 38 33 32 33
38 42 33 30 36
40 38 38 42 30
35 31 40 45 30
Kelompok V
30 40 35 31 40
37,36±1,91
45 41 43 37 30
35 38 32 35 38
40 30 38 40 40
39 35 39 35 48
Keterangan : Kelompok I = Pemberian Kelompok II = Pemberian, Kelompok III = Dosis EEUBL 90 mg/
200 g BB, Kelompok IV = Dosis EEUBL 180 mg/ 200 g BB, Kelompok V = Dosis EEUBL 270 mg/ 200 g BB
Hasil uji One way Anova jumlah sel Sertoli pada kelima kelompok diperoleh nilai p
sebesar 0.119 (p>0.05) yang berarti bahwa tidak ada perbedaan jumlah sel Sertoli yang
signifikan pada kelima kelompok.Berdasarkan penelitian terhadap jumlah sel Sertoli
menunjukkan adanya peningkatan jumlah sel Sertoli setelah diberi ekstrak etanolik umbi
bawang lanang. Peningkatan jumlah sel Sertoli paling tinggi terdapat pada kelompok
dosis 270 mg/ 200 g BB dan yang paling rendah adalah kelompok kontrol negatif tanpa
diberi perlakuan. Pada kelompok kontrol negatif diperoleh jumlah sel Sertoli sebesar
33,76, berbeda dengan jumlah sel Sertoli pada kelompok kontrol positif sebesar 34,84.
Pada perlakuan dosis 90 mg/ 200 g BB, 180 mg/ 200 g BB, dan 270 mg/ 200 g BB
terdapat kenaikan jumlah sel Sertoli masing-masing sebesar 34,12; 35,33; dan 37,36.
28
Pada ekstrak umbi bawang lanang terdapat metabolit sekunder yang berupa
senyawa saponin. Menurut (Gauthaman et al., 2008) saponin dapat meningkatkan
hormon FSH melalui aksi sentral. Peningkatan sekresi hormon FSH dipengaruhi oleh
neuron hipotalamus. Hipotalamus ini berfungsi untuk mensekresi hormon GnRH yang
nantinya akan merangsang sekresi hormon FSH dan LH, hormon FSH bekerja pada sel
Sertoli. Hormon FSH akan mengaktifkan sel Sertoli untuk melakukan aktivitas
pembelahan (Dawn et al., 2000). Adanya aktivitas ini yang menyebabkan jumlah sel
Sertoli meningkat setelah pemberian ekstrak etanolik umbi bawang lanang.
Ekstrak etanolik umbi bawang lanang juga mengandung senyawa Alkaloid yang
memiliki mekanisme untuk meningkatkan kadar hormon kolesterol dalam testis yang
dibutuhkan dalam pembentukan hormon steroid (Yakubu, 2011). Hormon steroid akan
digunakan dalam proses spermatogenesis yang distimulasi oleh hormon LH, FSH, dan
testosteron. Testosteron bekerja dengan FSH pada sel Sertoli untuk menghasilkan
berbagai macam protein yang dibutuhkan untuk diferensiasi, metabolisme, dan poliferasi
sel (Musfirah, 2016).
Hasil analisis One Way Anova menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh yang
signifikan dari pemberian ekstrak etanolik umbi bawang lanang terhadap jumlah sel
Sertoli dengan nilai p= 0,119 (p>0,05), namun secara rerata jumlah paling tinggi terdapat
pada kelompok dosis 270 mg/ 200 g BB dan yang terendah terdapat pada kelompok
kontrol negatif.
Hasil perhitungan jumlah sel Sertoli antar kelompok tidak menunjukkan
perbedaan yang signifikan kemungkinan dikarenakan adanya senyawa flavonoid yang
dapat mengganggu hipotalamus, dengan fungsi mensekresikan GNRH untuk merangsang
hipofisa dan mensekresi hormon FSH yang bekerja pada sel Sertoli. Hal ini dapat
mengurangi aktivitas pembelahan sel Sertoli sehingga, mengurangi dari aktivitas senyawa
saponin dan alkaloid (Febrianti dan Sukarjati, 2015).
Keterbatasan dalam penelitian ini adalah pengamatan jumlah sel Leydig dan sel
Sertoli baru dihitung dalam beberapa lapang pandang, sehingga sulit untuk
membandingkan dengan standar sel Leydig dan sel Sertoli tikus dalam tiap gram testis.
Belum dilakukan uji kuantitatif metabolit sekunder dalam ekstrak etanolik umbi bawang
lanang yang mampu meningkatkan jumlah sel Leydig dan sel Sertoli.
29
5.2 LUARAN YANG DICAPAI
Submitted di jurnal nasional terakreditasi yaitu Jurnal Farmasi Sains dan Praktis
Universitas Muhammadiyah Magelang
30
BAB VI. RENCANA TAHAPAN BERIKUTNYA
Penelitian aktivitas farmakologi umbi bawang lanang sebagai afrodisiak dilanjutkan
dengan uji toksisitas melalui pengamatan histopatologi organ ginjal untuk mengetahui pengaruh
pemberian ekstrak umbi bawang lanang pada dosis tinggi pada organ ginjal.
31
BAB VII. KESIMPULAN
1. Dosis ekstrak etanolik umbi bawang lanang (Allium sativum L.var. solo Garlic) 270
mg/ 200 g BB memiliki jumlah sel Leydig paling tinggi yaitu 31,16±2,90 dan
mempunyai perbedaan signifikan dibandingkan dengan kelompok lain.
2. Dosis ekstrak etanolik umbi bawang lanang (Allium sativum L.var. solo Garlic)
berpengaruh meningkatkan jumlah sel Sertoli seiring dengan meningkatnya dosis
namun tidak ada perbedaan signifikan antar kelompok.
32
DAFTAR PUSTAKA
Amin, S., 2015, Uji Aktivitas Antioksidan Umbi Bawang Lanang (Allium sativum) terhadap
Radikal Bebas DPPH, Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada, 3 (1).
BPOM. 2014. Pedoman Uji Toksisitas Non Klinik In Vitro. Jakarta: Bada Pengawas Obat dan
Makanan.
Hernawan, U. E & Setyawan, A. D., 2003, Review: „Senyawa Organosulfur Bawang Putih
(Allium sativum L.) dan Aktivitas Biologinya‟, Biofarmasi, vol. 1, no. 2.
Lifah, N. A., Januarti, I. B., & Latifah, F. (2018). Pengaruh Ekstrak Etanolik Umbi Bawang
Lanang (Allium sativum Var.Solo Garlic) Terhadap Viabilitas dan Motilitas Sperma
Tikus Jantan Galur Wistar. Semarang: Prodi Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas
Islam Sultan Agung
Nugroho, Sri Hananto Ponco. 2015. Pengaruh Pemberian Bawang Putih Tunggal (Allium sativum
Linn) Terhadap Penurunan Tekanan Darah Pada Penderita Hipertensi Di Dusun Juwet
Desa Magersari Kecamatan Plumpang Kabupaten Tuban. Surya. Vol.07 No.03
Desember 2015.
Nurfaat Diantika L., Indriyati Wiwiek. 2016. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Benalu Mangga
(Dendrophthoe petandra) Terhadap Mencit Swiss Webster. Journal IPJTS 3 (Juni
2016), 54-65
Rukmana, R. 1995. Budidaya Bawang Putih. Kanisius. Yogyakarta
Supriningrum, R., Nurhasnawati, H., Medina, P., 2017, Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak
Etanol Umbi Bawang Tiwai (Eleutherine palmifolia (L.) Merr) Berdasarkan Ukuran
Serbuk Simplisia, Media Sains (X)1,43-44.
Wajha, A. I., Januarti, I. B., & Latifah, F. (2018). Efek Stimulansia Ekstrak Etanolik Umbi
Bawang Lanang (Allium sativum var.solo garlic) Pada Mencit Galur Swiss.Skripsi.
Semarang: Prodi Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung
Zuraida., Sulistiani., Sajuthi, D., Irma H. S., 2017, Fenol, Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan
pada Ekstrak Kulit Batang Pulai (Alstonia scholaris R.Br), Penelitian Hasil Hutan Vol.
35 No. 3.
33
LAMPIRAN
Lampiran 1. Artikel ilmiah status submission
