Lap Prak Biokim Faktor -Faktor Enzim

7/22/2019 Lap Prak Biokim Faktor -Faktor Enzim

1/18

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 TujuanMembuktikan bahwa aktivitas suatu enzim dapat dipengarihu oleh beberapa faktor diantaranya

adalah suhu, pH, dan konsentrasi enzim.

1.2 Landasan Teori

Enzim

Reaksi kimia yang terjadi dalam sistem biologis selalu melibatkan katalis. Katalis ini dikenal

sebagai katalis biologis (biokatalisator) berupa protein yang sangat spesifik yang disebut enzim.

merupakan katalis yang sedang dikembangkan dalam industri kimia. Pengembangan katalis biologis

ditujukan untuk mengurangi konsumsi energi proses serta menghilangkan terikutnya senyawa-

senyawa pengotor dalam produk suatu proses. Katalis ini digunakan sebagai alternatif katalis

anorganik seperti natrium, kalium atau kalsium hidroksida.

Enzim merupakan biokatalisator yang sangat efektif yang akan meningkatkan kecepatan reaksi

kimia spesifik secara nyata, dimana reaksi ini tanpa enzim akan berlangsung lambat. Sifat-sifat

istimewa enzim adalah kapasitas katalitik dan spesifisitasnya yang sangat tinggi. Disamping itu enzim

mempunyai peran dalam transformasi berbagai jenis energi.

Kata enzim berasal dari bahasa Yunani enzyme yang berarti di dalam sel. Willy Kuchne

(1876) mendefinisikan enzim sebagai fermen (ragi) yang bentuknya tidak tertentu dan tidak teratur,yang dapat bekerja tanpa adanya mikroba dan dapat bekerja di luar mikroba. Definisi tersebut berubah

setelah dilakukan penelitian lanjutan oleh Buchner pada tahun 1897. Enzim dapat diproduksi oleh

mikroba atau bahan lainnya seperti hewan dan tumbuhan. Enzim juga dapat diisolasi dalam bentuk

murni.

Enzim merupakan senyawa protein yang dapat mengkatalisis seluruh reaksi kimia dalam sistem

biologis. Semua enzim murni yang telah diamati sampai saat ini adalah protein. Aktivitas katalitiknya

bergantung kepada integritas strukturnya sebagai protein. Enzim dapat mempercepat reaksi biologis,

dari reaksi yangsederhana, sampai ke reaksi yang sangat rumit. Enzim bekerja dengan cara menempel

pada permukaan molekul zat-zat yang bereaksi sehingga mempercepat proses reaksi. Percepatan

reaksi terjadi karena enzim menurunkan energi pengaktifan yang dengan sendirinya akan

mempermudah terjadinya reaksi. Enzim mengikat molekul substrat membentuk kompleks enzim

substrat yang bersifat sementara dan lalu terurai membentuk enzim bebas dan produknya.

E = S ES E + P

E = enzim S = substrat P= Produk


2/18

2

Enzim memiliki keunggulan sifat, antara lain mempunyai aktivitas yang tinggi, efektif, spesifik

dan ramah lingkungan, enzim memiliki sifat yang khas, yaitu sangat aktif walaupun konsentrasinya

amat rendah, sangat selektif dan bekerja pada kondisi yang ramah (mild), yaitu tanpa temperatur atau

tekanan tinggi dan tanpa logam yang umumnya beracun. Hal inilah yang menyebabkan reaksi yang

dikatalisis secara enzimatik menjadi lebih efisien dibandingkan dengan reaksi yang dikatalisis oleh

katalis kimia.

Enzim mempunyai kekhususan aktivitas, yaitu peranannya sebagai katalis hanya terhadap satu

reaksi atau beberapa reaksi yang sejenis saja. Jadi dapat melibatkan beberapa jenis substrat. Sifat

spesifik (spesifisitas enzim) didefinisikan sebagai kemampuan suatu enzim untuk mendiskriminasikan

substratnya berdasarkan perbedaan afinitas substrat-substrat untuk mencapai sisi aktif enzim. Sifat

spesifinitas ini dapat dimanfaatkan untuk tujuan reaksi atau jenis produk yang diharapkan. Sifat ini

sangat menguntungkan karena tidak akan dijumpai reaksi-reaksi samping, sehingga lebih ramah

lingkungan.

Aktivitas Enzim

Aktivitas enzim ternyata dipengaruhi banyak faktor. Faktor-faktor tersebut menentukan

efektivitas kerja suatu enzim. Apabila faktor pendukung tersebut berada pada kondisi yang optimum,

maka kerja enzim juga akan maksimal.

Beberapa faktor yang mempengaruhi kerja enzim:

1) SuhuEnzim merupakan makromolekul yang peka terhadap lingkungannya. Dengan demikian

harus ditangani dengan sangat hati-hati agar sifat-sifatnya dapat dipertahankan, kecuali enzim

termostabil yang dapat aktif pada suhu tinggi. Pengaruh suhu terhadap aktivitas enzimatik

disajikan pada Gambar 2.1

Pada prakteknya, aktivitas enzimatik diukur pada berbagai suhu (sebagai contoh antara

150C dan 400C). Umumnya, semakin tinggi temperatur, semakin naik laju reaksi baik yang

tidak dikatalisis maupun yang dikatalisis oleh enzim. Namun demikian, enzim merupakan

senyawa protein yang sangat peka terhadap perubahan temperatur. Semakin tinggi temperatur


3/18

3

akan terjadi perubahan struktur enzim yang diikuti oleh hilangnya aktivitas katalitik dari

enzim tersebut. Pada temperatur rendah, laju inaktivasi enzim berjalan lambat dan sangat

kecil, sehingga boleh diabaikan.

Di Indonesia, temperatur optimum bagi proses enzimatis dilakukan pada temperatur

kamar. Hampir semua enzim memiliki aktivitas optimum pada temperatur sekitar 30oC dan

denaturasi dimulai pada temperatur 45oC.

2) Pengaruh pHUmumnya enzim bersifat amfolitik, yang berarti enzim mempunyai konstanta disosiasi

pada gugus basanya, terutama pada gugus residu terminal karboksil dan gugus terminal

aminonya. Perubahan aktivitas enzim akibat perubahan terjadinya perubahan ionisasi enzim,

substrat atau kompleks enzim substrat, serta perubahan kemampuan peningkatan dan

pengaruh laju reaksi. Bila aktivitas enzim diukur pada pH yang berlainan, maka sebagian

besar enzim didalam tubuh akan menunjukan aktivitas optimum antara pH 5,0 - 9,0, kecuali

beberapa enzim misalnya pepsin(pH optimum = 2). Ini disesbabkan oleh :

1. Pada pH rendah atau tingi, enzim akan mengalami denaturasi.

2. Pada pH rendah atau tinggi, enzim maupun substrat dapat mengalami perubahan muatan

listrik dengan akibat perubahan aktivitas enzim.

Misalnya suatu reaksi enzim dapat berjalan bila enzim tadi bermuatan negatif (Enz-) dan

substratnya bermuatan positif (SH+) :

Enz-

+ SH+

EnzSH

Pada pH rendah Enz-akan bereaksi dengan H

+menjadi enzim yang tidak bermuatan.

Enz-

+ H+

Enz-H

Demikian pula pada pH tinggi, SH+

yang dapat bereaksi dengan Enz-, maka pada pH

yang extrem rendah atau tiggikonsentrasi efektif SH+

dan enz akan berkurang, karena itu

kecepatan reaksinya juga berkurang. Seperti pada gambar berikut. Di sekitar pH optimum

enzim mempunyai stabilitas yang tinggi. Dalam hal ini, enzim yang sama sering kali pH

optimumnya berbeda tergantung antara aktivitas enzimatik dengan pH secar Gambar 2.2


4/18

4

Berdasarkan gambar diatas : (a) kurva aktivitas menyajikan secara umum nilai pH

optimum yang mempunyai bentuk lonceng, (b) nili pH optimum tergantung pada enzim dan

ketergantungan ini dapat lebih kurag tajam, (c) untuk beberapa enzim, aktivitasnya tidak

bergantung pada suatu pH tertentu.

3) Pengaruh konsentrasi enzimKecepatan rekasi enzim (v) berbanding lurus dengan konsentrasi enzim (Enz). Makin

besar jumlah enzim makin cepat reaksinya. Lihat pada gambar. Dalam reaksinya Enz akan

mengadakan ikatan dengan substrat S dan membentuk kompleks enzim-substrat, Enzs. EnzS

ini akan dipecah menjadi hasil reaksi P dan enzim bebas Enz.

Enz + S EnzS Enz + P

Enz + S Enz + P

Makin banyak Enz terbentuk, makin cepat reaksi ini berlangsung. Ini terjadi sampai batas

tertentu.

4) Pengaruh konsentrasi subtratBila konsentrasi substrat (S) bertambah, sedangkan keadaan lainya tetap sama, kecepatan

reaksi juga akan meningkat sampai suatu batas maksimum V. Pada titik maksimum ini enzim telah


5/18

5

jenuh dengan subtrat. Seperti pada gambar. Pada titik-titik A dan B belum semua enzim bereaksi

dengan subtrat, maka pada A dan B penambahan subtrat S akan menyebabkan jumlah EnzS

bertambah dan kecepatan reaksi v akan bertambah, sesuai dengan penambahan S. Pada titik C semua

enzim telah bereaksi denagn subtrat, sehingga penambahan S tidak akan menambah kecepatan reaksi,

karena tidak ada lagi enzim bebas. Pada titik B kecepatan reaksi tepat setengah kecepatan maksimum.

Konsentrasi subtrat yang menghasilkan setengah kecepatan maksimum dinamakan harga Km

atau

konstanta Michaelis.

Mekanisme kerja enzim

a) Prinsip umumPembicaraan tentang mekanisme yang digunakan untuk mempercepat kecepatan reaksi

melalui 3 contoh yang akan diberikan : katalis asam dan basa pada umumnya, katalis oleh

ion-ion logam, dan katalis oleh enzim yang mengandung piridoksal fosfat.

b) Katalisis asam-basa umumReaksi yang kecepatanya berubah-ubah akibat perubahan konsentrasi ion hidrogen atau

konsentrasi ion hidronium dalam larutan, tetapi tidak tergantung pada konsentrasi asam atau

basa lainya yang terdapat dalam larutan, dikatakan dapat mengalami katalisis asam spesifik

atau katalisis basa spesifik. Reaksi yang kecepatanya tergantung pada semua asam dan basa

yang terdapat dalam larutan dikatakan dapat menglami katalisis asam umum (general acid)

atau katalisis basa umum (general base). Mutarotasi glukosa adalah salah satu rekasi yang

tunduk pada katalisis asam-basa umum.

c) Peranan ion logamIon logam melaksanakan peranan katalisi dan struktural yang penting pada protein.

Sebenarnya, lebih dari seperempat dari semua enzim yang dikenal mengandung ion logam


6/18

6

yang berikatan erat atau memerlukan ion logam untuk beraktivitasnya. Fungsi ion logam ini

diselidiki dengan cara fisika, lebih-lebihdengan kristalografi sinar-X, nuclearmagnetic (ESR).

Keterangan ini digabungkan dengan pengetahuan pembentukan dan kerusakan kompleks

logam dan reaksi dalam lingkaran koordinasi ion logam untuk memberi pengertian tentang

peranan ion logam pada reksi yang dikatalisi oleh enzim.

Enzim amylase

Enzim amylase dihasilkan oleh kelenjar ludah (parotis) di mulut dan kelenjar pancreas, amilum

sering dikenal dengan sebutan zat tepung atau pati. Amilum merupakan karbohidrat atau sakarida

yang memiliki molekul kompleks. Enzim amylase memecah molekul amilum ini menjadi sakarida

dengan molekul yang lebih sederhana yaitu maltose. Amylase mengubah amilum menjadi disakarida.

Enzim amylase yaitu pada reaksi hidrolisisi amilum menjadi maltose. Enzim ini dibagi menjadi 3

macam yaitu : amylase-, amylase , dan amylase . Yang terdapat dalam ludah hanya amylase ,

enzim ini memecah amilum pada ikatan 1-4 glikosidanya bukan pada ikatan 1-6 yang merupakan

cabang dari molekul amilum ( poedjiadi: 1994 ) karena enzim merupakan biokatalis dan sebagian

besar enzim tersusun atas protein maka kerja enzim dipengaruhi secara langsung pada aktivitas enzim

tersebut.

Kelenjar ludah, terdapat 3 pasang kelenjar ludah didalam rongga mulut, yaitu glandula parotis,

glandula submaksilaris, dan glandula sublingualis atau glandula submandi bularis. Air ludah berperan

penting dalam proses perubahan zat makanan secara kmiawi yang terjadi didalam mulut. Setelah

makanan dilumatkan secara mekanis oleh gigi, air ludah berperan secara kimiawi dalam proses

membasahi dan membuat makanan menjadi lembek agar mudah ditelan. Ludah terdidi atas air (99%)

dan enzim amylase. Enzim ini menguraikan pati dalam makanan menjadi gula sederhana (glukosa dan

maltose). Makanan yang telah dilumatkan dengan dikunyah dan dilunakan didalam mulut oleh air liur

disebut bolus. Bolus ini diteruskan kesistem ke system pencernaan selanjutnya.

Klasifikasi enzim amylase

1. -amilase

(alpha-amilase, 1,4-alpha-D-glucan glucanohydrolase, pancreatic alpha-amilase, -amilasePA), adalah salah satu enzim yang berperan dalam proses degradasi pati, sejenis makromolekul

karbohidrat. Struktur molekuler enzim ini adalah -1,4-glukanohidrolase. Bersama dengan enzim

pendegredasi pati lain, pulpulanase, -amilase termasuk kedalam golongan enzim kelas 13 dlikosil

hidrolase (E>C.3.2.1.1) -amilase ini memiliki beberapa sisi aktif yang dapat mengikat 4-10

molekulsuntrat sekaligus.

2. -amilase (E.C.3.2.1.2)

Merupakan enzim golongan hidrolase kelas 14 yang digunakan dalam proses sakarifikasi pati

(sejenis karbohidrat). Sakarifikasi banyak berperan dalam pemecahan makromolekul karbohidrat.


7/18

7

Pemecaha makromolekul karbohidrat ini akan menghasilkanb molekul karbohidrat rantai pendek

(sederhana).

3. glukoamilase (E.C.3.2.1.3)

Salah satu enzim kelas 15 yang berperan dalam proses sakarifikasi pati (sejenis karboidrat).

Serupa dengan enzim beta-amilase, glukoamilase dapat memecah struktur pati yang merupakan

polisakarida kompleks berukuran besar menjadi molekul yang berukuran kecil. Pada umumnya, enzim

ini berkerja pada suhu 4560 C dengan kisaran pH 4,55,0.

Tempat kerja dan cara kerja enzim amylase

1. -amilase

Pada umumnya aktif berkerja pada kisaran suhu 25 C 95 C. penambahan ion kalsium dan

klorida dapat meningkatkan aktivitas kerja dan menjaga kestabilan enzim ini. Alfa-amilase akan

memotong ikatan glikosidik -1,4 pada molekul.

2. -amilase

Akan memotong ikatan glikosidik pada gugus amilosa, amilopektin, dan glikogen. Amilosa

merupakan struktur rantai dari pati, sedangkan amilopektrin metrupakan struktur percabangan dari

pati. Hasil pemotongan oleh enzim ini akan didominasi oleh molekul maltose beta limit dekstrin

sering kali dihindari karna membentuk viskositas atau kekentakan terlalu pekat.

3. glukoamilosa

Glukoamilasa akan memotong ikatan alfa-1,4 pada molekul pati. Enzim ini juga dapat

memecah ikatan alfa-1,6, tetapi pada frekuensi yang lebih rendah. Hasil utama pemecahan adalah

glukosa, suatu bentuk sederhana dari molekul kerbohidrat berjumlah atom C 6.

Cara mendapatkan enzim amylase

lfa-amilase dapat diperoleh dari berbagai macam sumber diantaranya: bisa dalam bentuk

tepung malt, gandum yang berkecambah, bisa dari bakteri bacillus bacillus subtilis,bisa berasal dari

cacing tanah, pakai cendawanaspergillus sp,bisa berasal dari pancreas sapid an babi, banyak terdapat

di air liur dan pencernaan manusia.

Beta-amilase banyak ditemukan pada tanaman tingkat tinggi, seperti gandum, ubi, dan kacangkedelai. Disamping itu beta-amilase juga dapat ditemukan pada beberapa mikroorganisme, antara lain

pseudomonas sterpilococcus, basillus, dan clostridium thermosulfurigines. Enzim yang berasal dari

C.thermosulfurigines umumnya lebih disukai karena memiliki toleransi suhu dan pH yang lebih

tinggi.

Glukoamilase enzim ini memiliki peranan yang cukup besar didalam metabolism energy

diberbagai jenis organism. Oleh karena itu, enzim banyak ditemukan dalam berbagai jenis tanaman

dan mikroorganisme, seperti saccharomyces, endomycopsis, aspergillus, penicillium, mucor, dan

clostridium.


8/18

8

BAB II

SKEMA KERJA, HASIL, DAN PEMBAHASAN

2.1 Skema Kerja

A.Bahan Amilase liur, 1 ml dalam 100 ml aqua dest (pengenceran 100 X) Larutan pati 0,4 mg/L dan larutan iodium

B.Cara kerja1. Pengaruh suhu

A B C D E

B U B U B U B U B U

+ larutan pati 1 mL

diinkubasi selama 5 menit

Pada suhu 100

(A), 250(B), 37

0(C), 68

0(D), dan 100

0(E)

Ditambahkan dengan 200 L air liur 100X

Didiamkan selama 1 menit

Ditambahkan iodium 1 ml

Diencerkan dengan 8 mL aqua dest


9/18

9

Dibaca serapan tiap tabung pada panjang gelombang 680 nm

2. Pengaruh pHBahan :

Amilase liur yang telah diencerkan 100 X Larutan pati 0,4 mg/mL pada berbagai pH (3, 5, 7, 11) Larutan iodium

Bagan kerja :

A B C D

B U B U B U B U

Ditambahkan dengan pati 0,4 mg/mL pada pH 3 (A), 5 (B), 7 (C), 11 (D)

Diinkubasi pada suhu 37

0

selama 5 menit







10/18

10

3. Pengaruh konsentrasi enzimBahan :

Liur yang telah diencerkan 100X, 200X, 400X, 800X Larutan pati 0,4 mg/mL dan larutan iodium

Bagan kerja :

A B C D

B U B U B U B U

Ditambahkan liur dengan berbagai konsentrasi 100X (A), 200X (B), 400X (C), 800X (D)

Diinkubasi pada suhu 370selama 5 menit







11/18

11

2.2 Hasil

Tabel hasil perhitungan pengaruh suhu terhadap aktivitas enzimSuhu (

OC) AB AU A/menit (V)

0 0,000 0,000 0,000

25 0,000 0,008 0,008

37 0,000 0,001 0,001

60 0,000 -0,036 0,036

100 0,000 -0,003 0,013

Tabel hasil perhitungan pengaruh pH terhadap aktivitas enzimpH AB AU A/menit (V)

1 0,474 0,473 0,001

3 0,839 0,704 0,135

5 0,044 0,018 0,026

7 0,037 0,025 0,012

11 0,201 0,167 0,034

0

0.008

0.001

0.036

0.013

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0 25 37 60 100

A/menit(V)

Suhu 0C

Pengaruh Suhu

Pengaruh Suhu


12/18

12

Tabel hasil perhitungan pengaruh konsentrasi terhadap aktivitas enzimPengenceran

Liur

AB AU A/menit (V)

100 0,032 0,056 -0,024

200 0,032 0,064 -0,032

400 0,032 0,064 -0,032800 0,032 0,074 -0,042

-0.045

-0.04

-0.035

-0.03

-0.025

-0.02

-0.015

-0.01

-0.005

0

100x 200x 400x 800x

A

/menit(V)

Pengenceran Liur

Pengaruh Konsentrasi

0.001

0.135

0.026

0.012

0.034

0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0.14

0.16

1 3 5 7 11

Pengaruh pH

Pengaruh pH


13/18

13

2.3 Pembahasan

Pada praktikum kali ini, kami melakukan praktikum tentang faktor-faktor yang mempengaruhi

reaksi enzimatik. Enzim yang kami gunakan adalah enzim amylase yang terdapat dalam air liur

manusia, sedangkan substratnya adalah larutan amilum dan iod sebagai pendeteksi adanya

karbohidrat. Larutan pati merupakan larutan yang tidak berwarna, sehingga untuk melakukan

pengukuran absorbansi menggunakan spektrofotometer larutan pati harus dijadikan larutan kompleks

agar menjadi berwarna dan dapat diukur absorbansinya. Jika larutan pati tidak dikomplekskan maka

tidak dapat diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer, karena larutan pati tersebut tidak

menyerap warna komplementer dari sinar putih sehingga tidak ada warna yang diteruskan.

Pada percobaan ini untuk pengukuran absorbansi semuanya dilakukan pada panjang gelombang

680 nm. Pada panjang gelombang tersebut yang diserap larutan pati terkomplekskan untuk

mengahasilkan warna Biru-Hijau (yang dilihat oleh mata kita) terletak pada rentang = 620-750 nm

Pada teorinya faktor-faktor yang dapat mempengaruhi kerja enzim adalah suhu, pH, konsentrasi

substrat dan enzim dan inhibitor, tetapi yang kami lakukan hanya pengaruh suhu( 00,25

0,37

0,60

0dan

1000c), pH( 3, 5, 7 ,11), dan konsentrasi enzim(100,200,400,600 dan 800x pengenceran).

Pengaruh suhu

Pengujian pertama adalah pengaruh suhu terhadap kerja enzim. Suhu yang kami gunakan adalah

00,250,370,600dan 1000c. Pada praktikum ini kami menggunakan 10 tabung reaksi, dimana 5 tabung

reaksi digunakan untuk blanco yaitu tanpa enzim dan 5 selanjutnya untuk uji yaitu dengan

menggunakan enzim. Hasil yang kami dapatkan pada pengaruh suhu terhadap kerja enzim tidak

sesuai dengan teorinya, yaitu seharusnya pada suhu 370c terjadi puncak kecepatan enzim mengkatalis

reaksi karena suhu optimum dari enzim amylase adalah pada suhu tubuh yaitu pada suhu 370c dan

pada suhu kurang dan lebih dari 370c, yaitu suhu 25

0c seharusnya menghasilkan adsorbansi yang lebih

kecil karena ketika suhu sangat rendah yang kami pakai adalah suhu 00c akan menyebabkan

terhentinya kerja enzim secara reversible, karena dalam keadaan tersebut tidak terjadi benturan antara

molekul enzim(E) dan substrat (S) akibatnya kompleks E-S yang sangat penting dalam reaksi

enzimatik tidak terbentuk, sehingga produk(P) juga tidak terbentuk.

Sedangkan pada suhu yang jauh lebih tinggi dari suhu optimum akan menyebabkan enzimterdenaturasi (rusaknya bentuk tiga dimensi enzim yang menyebabkan enzim tidak dapat lagi

berikatan dengan substratnya) secara ireversibel(tidak dapat kembali lagi), akibatnya meskipun

benturan E dan S semakin sering , kompleks E-S tidak terbentuk karena enzim terdenaturasi,

akibatnya pembentukan P berkurang.

Hasil yang kami peroleh dari peraktikum ini terjadinya pucak reaksi pada suhu 600c, padahal

seharusnya pada suhu segitu mulai terjadi penurunan reaksi, karena enzim nya sudah mulai

terdeanturasi. Hal ini disebabkan dari kesalahan praktikan dalam melakukan pembacaan serapan

menggunakan spektrofotometer ultraviolet-visible, seharusnya blanko yang digunakan berupa


14/18

14

aquadest bukan blanko yang sudah kami perlakukan yaitu campuran amilum dengan iod, sehingga

hasil ini mengalami kesalahan sehingga tidak sesuai dengan teori yang ada.

Pengaruh pH

Percobaan yang kedua adalah pengaruh pH terhadap aktivitas enzim, Ph yang kami gunakan

adalah 1,3,5,7,dan11. Pada praktikum ini kami menggunakan 10 tabung reaksi, dimana lima tabung

digunakan untuk blanco dan lima tabungnya lagi digunakan untuk uji. Perbedaannya blanco tidak

ditambahakan air liur dimana air liur inilah yang menjadi enzimnya karena mengandung enzim

amilasse.

Hal pertama yang kami lakukan adalah menginkubasi pati sesuai Ph selama kurang lebih lima

menit, hal ini bertujuan agar pati terdegradasi secara sempurna, kemudian untuk blanco langsung

ditambahkan iodium sedangkan tabung uji ditambahkan air liur terlebih dahulu kemudian baru

ditambahkan iodium. Fungsi iodium adalah sebagai indicator adanya amilum. Berdasarkan teori,

enzim yang kami gunakan yaitu enzim amylase mempunyai aktivitas optimum pada kisaran pH 5-7,

sehingga seharusnya pada kisaran pH tersebut warna larutan uji menjadi warna kuning dan nilai

absorbansinya lebih tinggi dibandingkan dengan larutan uji dengan ph yang lainnya karena pada saat

rentang ph tersebut enzim amilase bekerja secara optimum, larutan uji menjadi kuning dikarenakan

amilum sudah dihidrolisis oleh enzim amylase menjadi maltose, karena pada teorinya iodium akan

menghasilkan warna biru jika terdeteksi amilum.

Hasil praktikum yang kami dapatkan adalah untuk perubahan warna mempunyai kesamaan

dengan teori yaitu menghasilkan warna kuning pada rentang ph 5-7 sedangkan nilai absorbansi reaksi

enzimatik tidak sesuai teori yaitu pada kisaran ph 5-7 aktivitas enzim tidak bekerja secara optimum.

Hal ini terjadi mungkin disebabkan oleh ketidak cermatan praktikan saat melakukan pembacaan

serapan menggunakan spektrofotometer ultaraviolet-visibel, seperti tidak bersih saat pencucian kuvet

sehingga hasilnya sedikit menyimpang dari teori yang ada.

Pengaruh konsentrasi

Pada percobaan yang ketiga untuk mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim

amilase yang terdapat pada saliva dalam memecah amilum menjadi maltosa. Salah satu faktor yang

mempengaruhi kerja dari enzim adalah konsentrasi, yaitu baik dari konsentrasi enzim itu sendirimaupun dari konsentrasi substrat. Namun, kali ini kelompok kami hanya menguji pengaruh

konsentrasi enzim dengan cara pengenceran bertingkat.

Hal pertama yang dilakukan adalah pengenceran terhadap saliva. Saliva diencerkan 100x, 200x,

400x, dan 600x kali pengenceran. Cara pengencerannya :

- Pengenceran 100 kali : 1 mL saliva diencerkan pada labu ukur 100 mL- Pengenceran 200 kali : Diambil 1 mL saliva dari pengenceran 100 kali lalu ditambahkan 1 mL

aquades

- Pengenceran 400 kali : Diambil 1 mL saliva dari pengenceran 100 kali lalu ditambahkan 3 mLaquades


15/18

15

- Pengenceran 600 kali : Diambil 1 mL saliva dari pengenceran 100 kali lalu ditambahkan 5 mLaquades

a. BlankoDiambil 1 mL pati dan dimasukkan ke dalam 4 tabung reaksi, dalam percobaan ini pati

(amilum) berperan sebagai substratnya. Selanjutnya pati didiamkan 5 menit, hal ini bertujuan agar pati

terdegradasi secara sempurna. Lalu ditambahkan 1 mL iodium dan larutan menjadi kuning

kecoklatan. Penambahan iodium berfungsi sebagai indikator untuk menentukan adanya amilum dan

ditambahkan 8 mL aquades, dimana aquades ini berfungsi agar larutan tidak terlalu pekat dan dapat

diukur aborbansinya pada Spektronik-20, karena pada Spektronik-20 jika larutan terlalu pekat maka

tidak dapat terbaca absorbansi pada larutan. Pada larutan blanko tidak diberi penambahan enzim,

karena larutan blanko disini sebagai pembanding larutan uji. Larutan blanko hanya berisi larutan pati

dan iodium sehingga menghasilkan warna kuning kecoklatan. Pada percobaan ini akan dihasilkan

nilai absorbansi blanko yang berfungsi sebagai larutan sebenarnya yang tanpa adanya pengotor-

pengotor.

b. Larutan ujiDiambil masing-masing 1 mL pati pada 4 tabung reaksi, dalam percobaan ini pati (amilum)

berperan sebagai substratnya. Selanjutnya pati didiamkan 5 menit, hal ini bertujuan agar pati

terdegradasi secara sempurna. Selanjutnya ditambahkan 0,2 mL saliva pada semua tabung, dan

didiamkan selama 1 menit. Dimana pada keadaan ini akan terjadi hidrolisis parsial. Larutan pati

merupakan polisakarida yang dapat dihidrolisis oleh enzim amilase pada saliva sehingga menjadi

glukosa. Lalu ditambahkan 1 mL iodium juga ke semua tabung reaksi. Penambahan iodium

iniberfungsi sebagai indikator untuk menentukan adanya amilum dan ditambahkan 8 mL aquades.

Konsentrasi enzim mempengaruhi kecepatan reaksi enzimatik. Pengaruh konsentrasi enzim

ini yaitu pembentukan produk, dimana makin besar konsentrasi enzim makin banyak pula produk

yang dihasilkan sehingga dapat dinyatakan bahwa laju reaksi berbanding lurus dengan konsentrasi

enzim. Jadi jika di lakukan sesuai dengan teori maka kurva akan linier dengan seiring dengan

pengenceran yang bertingkat tersebut.

Hasil yang didapat dalam praktikum kali ini menunjukan gravik yang tidak liner padakonsentrasi 200x 400x pengenceran yang seharusnya absorbansi emnunjukan gerafik menurun

tetapi menunjukan grafik yang statis shingga ada kemungkinan bahwa ada kesalahan dalam

pembuatan dan preparasi sampel seperti pengotor atau kesalahan dalam pengenceran amilum atau

penambahan pati. Grafik 100x-200x pengenceran dan 400x-800x pengenceran menunjukan grafik

yang bagus karena memang seperti itu grafik yang seharunya. Ketika konsentrasi amilum berkurang

maka absorbansi dari sampel tersebut akan juga berkurang karena berkurangnya kompleks substart

dan enzim yang terbentuk.


16/18

16

BAB III

KESIMPULAN DAN SARAN

3.1 KesimpulanDari hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa laju reaksi enzim dipengaruhi oleh beberapa

faktor yaitu, suhu, pH, dan konsentrasi. Laju reaksi enzim semakin meningkat seiring bertambahnya

suhu. tetapi aktivtasnya menurun setelah melewati suhu optium. Dari hasil diketahui bahwa suhu

optimum enzim amilase adalah 60oC. sama dengan suhu, laju reaksi enzim semakin meningkat seiring

meningkatnya pH, tetapi laju reaksinya menurun setelah melewati pH optimum. Suhu optimum enzim

amylase adalah 3. Factor terakhir adalah konsentrasi. Dari hasil terlihat bahwa laju reaksi mencapai

titik tertinggi pada pengenceran 100x, konsentrasi -0,024 dan titik terendah pada pengenceran 800x,

konsentrasi -0,042. Hasil tersebut membuktikan teori bahwa aktivitas enzim berbanding lurus dengan

konsentrasi enzim.

3.2 Saran

Karena didapatkan hasil yang berbeda dengan teori sebaiknya praktikan lebih teliti lagi dalam

melakukan percobaan.


17/18

17

DAFTAR PUSTAKA

Champe P C PhD , Harvey R A PhD. Lippincotts Illustrated Reviews: Biochemistry 2nd

.1994 : 47-60

Colbi, S.D (1985). Biochemistry : A synopsis. California : Lange medical publikations

Lehninger A, Nelson D , Cox M M .Principles of Biochemistry 2nd

1993 : 198-236

Murray R K, et al. Harpers Biochemistry 25th

ed. Appleton & Lange. America 2000 : 67-113

Stryer L .1995. Biochemistry 4th

: 181-237

BIOKIMIA Eksperimen Laboratorium. Penerbit Widya Medika. 2000. Bagian Biokimia FK-UI.

Jakarta; 50-65.


18/18

18

LAMPIRAN

Blanko Blanko aquadest Uji aquadest

Uji air liur Uji iodium inkubasi

Spektro ambil pati ber pH Uji blanko pH 5

Uji blanko pH 7 Uji Uji blanko pH 3

Lap Prak Biokim Faktor -Faktor Enzim

Documents

Transcript of Lap Prak Biokim Faktor -Faktor Enzim

bahan laporan biokim

apklin biokim enmet

laporan biokim

Jurnal Biokim II

Lapak Biokim

Perubahan Biokim Pascapanen

biokim makalah

biokim asam basa

Modul Biokim

disee mikroo biokim

KARBOHIDRAT BIOKIM

biokim empedu

Lap Biokim Protein

biokim enzaim.pptx

Lapres Biokim Prak. Karbo

I UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURABAYA FAKUI,:TAS ILMU · 2020. 7. 29. · Prak. Biokim & Gizi 2 J I 1 2 1,f 4 l. KBS (Kur. Biologi Sekolah) 2. Prak. KBS (Kur. Biologi Sekolah) 3. Pengembangan

Biokim Protein Plasma

Biokim Isi

biomolekul biokim

perhitungan biokim