18

LAMPIRAN

Lampiran 1. Tahapan Penelitian

PembuatanTepung Talas (Nuraida, 2006)

SterilisasiAlat (Hadioetomo, 1990)

EkstrakTepungTalas (Muchtadi, 1989)

Pembuatan media MRSA/MRSB

(Bridson, 1998)

PeremajaanIsolat Bifidobacterium sp.

Pembuatan kultur Isolat

Bifidobacterium sp.

EkstrakTalas (Colocasia esculenta) dengan konsentrasi berbeda

Pembuatan kurva pertumbuhan

Bifidobacterium sp.

Inokulum Bifidobacterium sp. pada media MRSB di fase eksponensial

Inokulasi Bifidobacterium sp. pada media MRSB

MRSB + ekstrak

Konsentrasi 2 %

MRSB + ekstrak Konsentrasi

3 %

MRSB + ekstrak Konsentrasi

1 %

MRSB + ekstrak Konsentrasi 0 %

(kontriol)

Inkubasi 96 jam

Inkubasi 48 jam

Inkubasi 144 jam

Pengamatan

Total AsamLaktat (Apriyanto et al., 1989)

Parameter yang diamati

Jumlah Sel dengan Menggunakan Total Plate Count (TPC)

(Lay, 1994) Derajat Keasaman (pH) Medium

(Hadioetomo, 1990)

Kadar gula reduksi dilakukan dengan metode Nelson-Somogyi

(Sudarmadji et al., 1989)

19

Lampiran 2. Komposisi dan Cara Pembuatan Media MRSA (Bridson, 1998)

Peptone 10 gram/liter

Lab-Lemco’powder 8 gram/liter

Yeast extract 4 gram/liter

Glucose 20 gram/liter

Sorbitan mono-oleate 1 ml

Dipotassium hydrogen phospate 2 gram/liter

Sodium acetate 3H2O 5 gram/liter

Triammonium citrate 2 gram/liter

Magnesium sulphate 7H2O 0,2 gram/liter

Magnesium sulphate 4H2O 0,05 gram/liter

Agar 10 gram/liter

Cara kerja :

Semua bahan (lampiran 1) ditimbang sebanyak 62 gram, lalu dilarutkan menggunakan

akuades sebanyak 1000 ml, lalu dipanaskan agar media homogen dengan menggunakan

hot plate magnetic stirer. Setelah homogen, pH media diatur hingga 6,2 (ditambahkan

NaOH jika terlalu asam, dan ditambahkan HCl jika terlalu basa). Media MRSA yang sudah

jadi dituang ke dalam labu erlenmeyer, lalu disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu

121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

20

Lampiran 3. Komposisi dan Cara Pembuatan Media MRSB (Bridson, 1998)

Peptone 10 gram/liter

Lab-Lemco’powder 8 gram/liter

Yeast extract 4 gram/liter

Glucose 20 gram/liter

Sorbitan mono-oleate 1 ml

Dipotassium hydrogen phospate 2 gram/liter

Sodium acetate 3H2O 5 gram/liter

Triammonium citrate 2 gram/liter

Magnesium sulphate 7H2O 0,2 gram/liter

Magnesium sulphate 4H2O 0,05 gram/liter

Cara kerja :

Semua bahan (lampiran 2) ditimbang sebanyak 52 gram (tanpa penambahan agar), lalu

dilarutkan menggunakan akuades sebanyak 1000 ml, lalu dipanaskan agar media homogen

dengan menggunakan hot plate magnetic stirer. Setelah homogen, pH media diatur hingga

6,2 (ditambahkan NaOH jika terlalu asam, dan ditambahkan HCl jika terlalu basa). Media

MRSA yang sudah jadi dituang ke dalam labu erlenmeyer, lalu disterilisasi menggunakan

autoclave pada suhu 121oC dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

21

Lampiran 4. Klasifikasi tanaman talas (Dalimarta, 2000)

Divisi : Spermatophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledoneae

Bangsa : Arales

Suku : Araceae

Marga : Colocasia

Jenis : C. esculenta L Schott

22

Lampiran 5. Kandungan gizi talas per 100 gram

Kandungan Gizi Satuan Talas Mentah Talas Rebus

Energi Protein Lemak

Hidrat Arang total Serat Abu

Kalsium Fosfor

Besi Vitamin B1 Vitamin C

Air Bagian yang dimakan

Kal g g g g g

mg mg mg mg mg g %

120 1,5 0,3

28,2 0,7 0,8 31 67 0,7

0,05 2

69,2 85

108 1,4 0,4 25 0,9 0,8 47 67 0,7

0,06 4

72,4 100

Sumber : Slamet D.S dan lg. Tarkotjo (1990), majalah gizi jilid 4, hal 26. Pusat penelitian dan pengembangan kesehatan Depkes RI dalam Amirudin (2013).

23

Lampiran 6. Spesifikasi Peralatan dan Bahan

No Nama Bahan Spesifikasi Kegunaan

1 Alkohol 70% Disinfeksi meja kerja

2 Buffer Tris- HCl 0,05 M Larutan buffer

3 HCl 0,1 M Pelarut dalam pembuatan larutan standar

4 Buffer fosfat 0,5 M Larutan buffer

5 NaOH 1 N Uji titrasi asam laktat

6 Fenolftalin 0,1% Indikator warna uji asam laktat

7 MRSB Oxoid Media tumbuh BAL

8 Akuades - Pelarut

9 Etanol 96 % Pelarut untuk ekstraksi

No Nama Alat Merk/Type Kegunaan Tempat

1 Autoklaf HL36E (Hirayama Manufacturing Corp.)

Sterilisasi Alat dan Bahan

Lab. Mikrobiologi

2 pH meter Thermo Electron Corporation (RL060P)

Mengukur pH medium dan Larutan

Lab. Mikrobiologi

3 Tangkai drugalsky Iwaki Pyrex Meratakan suspensi Lab. Mikrobiologi

5 UV- Vis Spektrophotometer

Shimadzu UV mini 1240

Mengukur nilai OD Lab. Lingkungan

7 Hot plate & stirrer Ika C-Mag HS7 Memanaskan medium Lab. Mikrobiologi

8 Mikropipet & tip Ep. Research park Mengambil suspensi Lab. Mikrobiologi

9 Inkubator Memmert Menginkubasi bakteri Lab. Mikrobiologi

10 Anaerobic jar Oxoid anerojar Menginkubasi bakteri anaerob

Lab. Mikrobiologi

11 Buret & statif PTFE stopcock Titrasi Asam Laktat Lab. Fiosiologi Tumbuhan

12 Cawan petri Iwaki Pyrex Kultivasi bakteri Lab. Mikrobiologi

13 Tabung Reaksi Iwaki Pyrex Uji Biokimiawi & peremjaan bakteri

Lab. Mikrobiologi

14 Labu Erlenmeyer Iwaki Pyrex Wadah medium Lab. Mikrobiologi

15 Gelas Ukur Iwaki Pyrex Mengukur larutan Lab. Mikrobiologi

16 Pipet Ukur Iwaki Pyrex Mengambil larutan Lab. Mikrobiologi

18 Beaker glass Iwaki Pyrex Wadah medium & larutan

Lab. Mikrobiologi

Filler - Menyedot larutan Lab. Mikrobiologi

14. Kulkas standar National (B22AF) Menyimpan media Lab. Mikrobiologi

10. Kompor gas Rinnai Memanaskan media Lab. Mikrobiologi

11. Timbangan analitik Ohaus tipe EO 2140 Menimbang media Lab. Mikrobiologi

19. Prayer alkohol Nagata Untuk kerja aseptis Lab. Mikrobiologi

20. Baki Nagata Tempat ala Lab. Mikrobiologi

24

10 Reagen Arsenomolibdat

- Uji gula reduksi

11 Reagen Nelson - Uji gula reduksi

12 Glukosa - Kurva standar gula reduksi

13 Talas C. esculenta Bahan untuk diekstrak

14 Alumunium foil - Penutup tabung

15 Spirtus - bahan pengisi bunsen

16 Kapas Mawar Biru Pembuat sumbat

17 Tissue Nice Alat kebersihan

18 Label - Labeling

19 Wrapping - Pelapis

20 Isolat Bifidobacterium sp. Isolat yang di uji

25

Lampiran 7. Analisis ANOVA.

Jumlah Bakteri jumlah Yi

rata-rata 0% 1% 2% 3%

K1

8,51 8,71 8,58 8,87 34,67 8,67

8,53 8,12 8,46 8,89 34,00 8,50

8,50 8,60 8,37 8,75 34,23 8,56

K2

8,98 9,02 8,73 8,92 35,65 8,91

9,18 8,92 8,63 8,89 35,62 8,90

9,02 9,20 8,99 8,73 35,93 8,98

K3

8,34 8,48 8,70 8,19 33,71 8,43

8,48 8,73 8,53 8,46 34,19 8,55

8,03 8,34 8,39 8,73 33,49 8,37

Jumlah 77,56 78,11 77,37 78,42 311,47 77,87

Faktor Koreksi = 2694,82

JK Total = 2,85

JK Galat A = 0,078305

JK Galat B = 1, 5174394

JK(AB) = 0,496404

JKG = 0,7559953

Analisis

Sumber Ragam DB JK KT F.HITUNG F .05 F .01

Konsentrasi (A) 3 0,078305 0,026101664 0,828629 3,49 5,95

inkubasi (B) 2 1,517439 0,758719706 24,08649 3,88 6,93

AXB 6 0,496404 0,082734003 2,626492 3 4,82

Galat 6 0,755995 0,031499806

Total 17 2,848144

Ket : Konsentrasi : F. Hitung < F. Tabel non signifikan Inkubasi : F. Hitung > F. Tabel signifikan Konsentrasi dan inkubasi : F. Hitung < F. Tabel non signifikan

26

Lampiran 8. Data penelitian

Inkubasi Perlakuan Jumlah log Bifidobacterium

sp.

Jumlah total Bifidobacterium

sp.

pH Total Asam Laktat

Gula Reduksi

48 Jam I0K1 8,52 3,28 x 108 4,39 1,2 0,12

I1K1 8,54 3,47 x 108 3,83 1,58 0,11

I2K1 8,48 3,01 x 108 3,84 1,5 0,1

I3K1 8,84 6,92 x 108 4,47 1,05 0,08

96 Jam I0K2 9,07 1,17 x 109 4,11 1,5 0,08

I1K2 9,06 1,15 x 109 3,42 1,65 0,08

I2K2 8,81 6,45 x 108 3,40 1,65 0,03

I3K2 8,85 7,15 x 108 3,90 1,35 0,01

144 Jam I0K3 8,32 2,07 x 108 3,96 1,65 0,14

I1K3 8,55 3,51 x 108 3,38 1,95 0,07 I2K3 8,56 3,62 x 108 3,35 1,95 0,06

I3K3 8,51 3,25 x 108 3,94 1,95 0,05

Reduksi Gula (Kurva Standar)

Konsentrasi 0 2 4

Abs 0,02 1,43 2,25

y = 0.5575x + 0.1183 R² = 0.9772

0

1

2

3

4

5

0 2 4 6 8 10

abso

rbas

i

konsentrasi

Series1

Linear (Series1)

27

Lampiran 9. Jumlah Bifidobacterium sp. Rata-Rata pada Medium MRSB yang Ditambah Ekstrak Talas dengan Konsentrasi dan Waktu Inkubasi Berbeda

Lampiran 10. Kadar Asam Laktat Rata-Rata pada Medium MRSB yang Ditambah Ekstrak

Talas dengan Konsentrasi dan Waktu Inkubasi Berbeda

8.52

9.07

8.32

8.54

9.06

8.55 8.48

8.81

8.56

8.84 8.85

8.51

7.80

8.00

8.20

8.40

8.60

8.80

9.00

9.20

I0K1 I0K2 I0K3 I1K1 I1K2 I1K3 I2K1 I2K2 I2K3 I3K1 I3K2 I3K3

1.20

1.50 1.65 1.58 1.65

1.95

1.50 1.65

1.95

1.05

1.35

1.95

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

I0K1 I0K2 I0K3 I1K1 I1K2 I1K3 I2K1 I2K2 I2K3 I3K1 I3K2 I3K3

28

Lampiran 11. pH Rata-Rata yang Diukur pada Medium MRSB yang Ditambah Ekstrak Talas dengan Konsentrasi dan Waktu Inkubasi Berbeda

Lampiran 12. Kadar Gula Reduksi Rata-Rata pada MRSB dengan Konsentrasi Ekstrak Talas dan Waktu Inkubasi Berbeda

Keterangan : I0 = Penambahan ekstrak talas konsentrasi 0% (kontrol) I1 = Penambahan ekstrak talas konsentrasi 1% I2 = Penambahan ekstrak talas konsentrasi 2% I3 = Penambahan ekstrak talas konsentrasi 3% K1 = waktu inkubasi selama 48 jam K2 = waktu inkubasi selama 96 jam K3 = waktu inkubasi selama 144 jam

4.39 4.11

3.96 3.83

3.42 3.38

3.84

3.40 3.35

4.47

3.90 3.94

0.00

0.50

1.00

1.50

2.00

2.50

3.00

3.50

4.00

4.50

5.00

I0K1 I0K2 I0K3 I1K1 I1K2 I1K3 I2K1 I2K2 I2K3 I3K1 I3K2 I3K3

0.12

0.08

0.14

0.11

0.08 0.07

0.1

0.03

0.06

0.08

0.01

0.05

0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

0.14

0.16

I0K1 I0K2 I0K3 I1K1 I1K2 I1K3 I2K1 I2K2 I2K3 I3K1 I3K2 I3K3

29

Lampiran 13. Dokumentasi Penelitian

Gambar hasil ekstrak talas (C.

esculenta)

1

%

2

%

3

%

Gambar koloni

Bifidobacteriu

m sp. dalam

MRSA

Gambar pengukuran gula

reduksi

Gambar tepung talas (C.

esculenta)

Gambar MRSB dengan

penambahan

ekstrak talas

(C.esculenta)

Gambar hasil inkubasi pada

medium MRSB

dengan

penambahan

ekstrak talas

(C. esculenta)

30

Gambar pengukuran kadar

asam laktat

Gambar pengukuran pH

medium

Gambar hasil

pengukur

an kadar

asam

laktat