Lampiran 1. Perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari...
Transcript of Lampiran 1. Perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari...
38
Lampiran 1. Perhitungan seri konsentrasi hidrokuinon dari larutan baku
hidrokuinon
a. Ditimbang 10 mg, dilarutkan dengan etanol 96% hingga 25 ml
10 mg / 25 ml = 10.000 µg / 25 ml = 400 µg/ml
b. Dari 400 ppm dibuat seri konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 ppm. Masing-
masing seri konsentrasi dilarutkan hingga 10 ml = 10.000 µl
Konsentrasi 10 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 10
400 X = 100.000
X = 100.000 : 400
X = 250 µl
Konsentrasi 20 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 20
400 X = 200.000
X = 200.000 : 400
X = 500 µl
Konsentrasi 30 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 30
400 X = 300.000
X = 300.000 : 400
X = 750 µl
39
Konsentrasi 40 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 40
400 X = 400.000
X = 400.000 : 400
X = 1000 µl
Konsentrasi 50 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 50
400 X = 500.000
X = 500.000 : 400
X = 1250 µl
Konsentrasi 60 µg/ml : V1 x C1 = V2 x C2
X x 400 = 10.000 x 60
400 X = 600.000
X = 600.000 : 400
X = 1500 µl
40
Lampiran 2. Perhitungan Uji Ketelitian Hidrokuinon
a. Perhitungan presisi kadar hidrokuinon
Replikasi 1 (absorbansi 0,509)
Y = BX + A
0,509 = 0,0103X + 0,1091
0,509 – 0,1091 = 0,0103X
0,3999 = 0,0103X
X = 38,83 µg/ml
Replikasi 2 (absorbansi 0,515)
Y = BX + A
0,515 = 0,0103X + 0,1091
0,515 – 0,1091 = 0,0103X
0,4059 = 0,0103X
X = 39,41 µg/ml
Replikasi 3 (absorbansi 0,511)
Y = BX + A
0,511 = 0,0103X + 0,1091
0,511 – 0,1091 = 0,0103X
0,4019 = 0,0103X
X = 39,02 µg/ml
41
Replikasi 4 (absorbansi 0,513)
Y = BX + A
0,513 = 0,0103X + 0,1091
0,513 – 0,1091 = 0,0103X
0,4039 = 0,0103X
X = 39,21 µg/ml
Replikasi 5 (absorbansi 0,51)
Y = BX + A
0,51 = 0,0103X + 0,1091
0,51 – 0,1091 = 0,0103X
0,4009 = 0,0103X
X = 38,92 µg/ml
Replikasi 6 (absorbansi 0,506)
Y = BX + A
0,506 = 0,0103X + 0,1091
0,506 – 0,1091 = 0,0103X
0,3999 = 0,0103X
X = 38,53 µg/ml
42
b. Perhitungan nilai RSD
x x 100%
Keterangan :
RSD = Standar deviasi relative
SD = Standar deviasi
x = Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel
x 100%
RSD = 0,78%
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Hidrokuinon dengan Standard
Addition Method
1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,311
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,60 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,507
43
Absorbansi total analit 2 = 0,511
Absorbansi total analit 3 = 0,509
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 38,63 µg/mL
Kadar total analit 2 = 39,02 µg/mL
Kadar total analit 3 = 38,83 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 99,06%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 101,04%
c. Analit 3
% perolehan kembali =
= 100,05%
2. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 100% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
44
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,408
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 29,01 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,606
Absorbansi total analit 2 = 0,604
Absorbansi total analit 3 = 0,606
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 48,24 µg/mL
Kadar total analit 2 = 48,04 µg/mL
Kadar total analit 3 = 48,24 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 100,03%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 99,36%
c. Analit 3
45
% perolehan kembali =
= 100,03%
3. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 120% dari target kadar
analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,307
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 19,21 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
1) Absorbansi hidrokuinon = 0,509
2) Kadar hidrokuinon berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103X + 0,1091
adalah 38,82 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Absorbansi total analit 1 = 0,709
Absorbansi total analit 2 = 0,707
Absorbansi total analit 3 = 0,706
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 0,0103x + 0,1091 maka :
Kadar total analit 1 = 58,24 µg/mL
Kadar total analit 2 = 58,04 µg/mL
Kadar total analit 3 = 57,95 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
46
a. Analit 1
% perolehan kembali =
= 100,53%
b. Analit 2
% perolehan kembali =
= 100,03%
c. Analit 3
% perolehan kembali =
= 99,78%
Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ hidrokuinon dengan
Spektrofotometri Visibel
No X Xi² i-
( i-
)² Yi Yc
(Yi-
Yc) (Yi-Yc)²
1 10 100 -25 625 0,207 0,2121 -
0,0051 2,601E-05
2 20 400 -15 225 0,322 0,3151 0,0069 4,761E-05
47
3 30 900 -5 25 0,426 0,4181 0,0079 6,241E-05
4 40 1600 5 25 0,525 0,5211 0,0039 1,521E-05
5 50 2500 15 225 0,621 0,6241 -
0,0031 9,61E-06
6 60 3600 25 625 0,735 0,7271 0,0079 6,241E-05
35 9100 1750 0,00022326
Keterangan :
Yc diperoleh dari persamaan regresi linier dimana
Y = 0,0103 X + 0,1091
Yc = 0,0103 x kadar masing-masing larutan + 0,1091
1. 10 µg/ml = 0,0103 x 10 + 0,1091 = 0,2121
2. 20 µg/ml = 0,0103 x 20 + 0,1091 = 0,3151
3. 30 µg/ml = 0,0103 x 30 + 0,1091 = 0,4181
4. 40 µg/ml = 0,0103 x 40 + 0,1091 = 0,5211
5. 50 µg/ml = 0,0103 x 50 + 0,1091 = 0,6241
6. 60 µg/ml = 0,0103 x 60 + 0,1091 = 0,7271
∑
{
}
1/2
= 0,007471
48
⁄ √∑
∑
= 0,007471 x √
= 0,007471 x 0,93094
= 0,006955
Perhitungan LOD
Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 3SB
Y = 0,1091 + 3 (0,006955)
= 0,1091 + 0,020865
= 0,129965
Maka nilai LOD :
Y = 0,0103 X + 0,1091
0,129965 = 0,0103 X + 0,1091
X = 2,026 µg/ml
Perhitungan LOQ
Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 10SB
Y = 0,1091 + 10 (0,006955)
= 0,1091 + 0,06955
= 0,17865
49
Maka nilai LOQ :
Y = 0,0103 X + 0,1091
0,17865 = 0,0103 X + 0,1091
X = 6,572 µg/ml
Lampiran 5. Penetapan kadar hidrokuinon dalam sediaan krim dengan
metode Spektrofotometri Visibel
Persamaan regresi linier kurva baku adalah :
Y = bx + a
Y = 0,0103X + 0,1091
Replikasi I
Y = 0,0103X + 0,1091
0,316 = 0,0103X + 0,1091
0,2069 = 0,0103X
X = 20,09 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,087 µg/ml x 50
X = 1004,37 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1004,36 x 50 ÷ 1000 = 50,22 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,218 x 15 = 753,28 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
50
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 100,44 %
Replikasi II
Y = 0,0103X + 0,1091
0,317 = 0,0103X + 0,1091
0,208 = 0,0103X
X = 20,18 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,18 µg/ml x 50
X = 1009,0 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1009,0 x 50 ÷ 1000 = 50,45 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,45 x 15 = 756,92 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
51
= 100,92 %
Replikasi III
Y = 0,0103X + 0,1091
0,313 = 0,0103X + 0,1091
0,204 = 0,0103X
X = 19,80 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 19,80 µg/ml x 50
X = 989,81 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
989,81 x 50 ÷ 1000 = 49,49 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
49,49 x 15 = 742,35 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 98,98 %
Replikasi IV
Y = 0,0103X + 0,1091
0,314 = 0,0103X + 0,1091
0,205 = 0,0103X
X = 19,89 µg/ml
52
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 19,89 µg/ml x 50
X = 994,66 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
994,66 x 50 ÷ 1000 = 49,73 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
49,73 x 15 = 745,99 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 99,47%
Replikasi V
Y = 0,0103X + 0,1091
0,318 = 0,0103X + 0,1091
0,209 = 0,0103X
X = 20,28 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,28 µg/ml x 50
X = 1014,08 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1014,08 x 50 ÷ 1000 = 50,70 mg
53
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
50,70 x 15 = 750,56 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 101,41 %
Replikasi VI
Y = 0,0103X + 0,1091
0,32 = 0,0103X + 0,1091
0,211 = 0,0103X
X = 20,48 µg/ml
Faktor pengenceran 50x, sehingga kadar hidrokuinon adalah :
X = 20,48 µg/ml x 50
X = 1023,79 µg/ml
Kadar hidrokuinon sebelum pengenceran dalam 1 gram sampel :
1023,79 x 50 ÷ 1000 = 51,19 mg
Kadar hidrokuinon dalam 15 gram sampel :
51,19 x 15 = 767,84 mg
Kadar hidrokuinon sebenarnya dalam 15 gram sampel :
5% x 15 gram = 0,75 gram
= 750 mg
54
% kadar hidrokuinon =
x 100%
= 102,38 %
Kadar rata-rata hidrokuinon dalam sampel :
Rata-rata =
=
= 100,59 %
Lampiran 6. Hasil scanning optimasi panjang gelombang maksim
55
56
Lampiran 7. Certificate of Analysis hidrokuinon
57
Lampiran 7. Gambar alat yang digunakan dalam penelitian
Spektrofotometri UV-Vis (1800 Shimadzu)
58
Lampiran 8. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di
Laboratorium Kimia, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid
Hasyim