Isolasi DNA

Uswatunnisa (105040200111114)Senin, 11.00 (Ass. Gita)

Pengertian Isolasi DNA

Pemisahan materi DNA dari komponen-komponen sel lainnya

Tujuan Isolasi DNA

Visualisasi DNA dengan elektroforesis gel, Peninjauan pola fragmen DNA hasil

pemotongan secara enzimatik melalui teknik Hibridisasi Southern,

Isolasi DNA genomik dalam rangka pembuatan pustaka genomik,

Isolasi DNA yang diperlukan sebagai cetakan (template) dalam prosedur perbanyakan DNA secara in vitro melalui teknik PCR

   

Alat dan Bahan Isolasi DNA AlatMortar dan pestleGelas ukur Oven Pipet tetes Tube Sentrifuse Kulkas

Bahan

Daun KakaoNitrogen cair dan PVPCTAB dan β

mercaptoetanol CIA/CHISAM IsopropanolBuffer pencuciTERNA se Ethanol

Cara Kerja Isolasi DNA

Siapkan alat dan bahan

Timbang bahan (daun cacao) 0,3 gr. Tambahkan N2 cair (suhu -168ᵒC), tumbuk hingga halus menggunakan mortar & pestle

Masukkan CTAB 1ml terlebih dahulu ke dalam tipTambahan bahan yang sudah ditumbuk halusTambahkan β mercaptoetanol

vortex bahan agar semua bahan larut dan menjadi homogen

Inkubasi dengan suhu ± 65ᵒC selama 30 menit

Balik tabung tiap 15 menit agar bahan tercampur rata.

Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroLiter lalu kembali di VortexSentrifugasi pertama dengan 6000 rpm selama 10 menit

Tambahkan CIA/CHISAM 700 mikroliter pada supernatan DNA

Supernatan ditambahkan isopropanol dingin 300 mikroliter

Inkubasi freezer selama 30 menit

DNA pellet ditambahi buffer pencuci 2x. Masing-masing 300 mikroliter

Inkubasi kurang lebih 37ºC selama 30 menit

Tambahkan ethanol dingin 300 mikroliter

Elektroforensis

Uji Kualitas DNA

ElektroforesisPrinsip Dasar: memisahkan molekul

berdasarkan berat molekulnya menggunakan aliran listrik (lewat pori-pori gel Elektroforesis)

Kualitas DNA 1. Berat Molekul2. Kemurnian Molekul

SpektrofotometerMenggunakan serapan gelombangKomponen akan mengendap sesuai

beratnya.

Proses PCR (Polymerase Chain Reaction)

Denaturasi. Dilakukan pada suhu 92-95ºC. Proses ini merupakan perombakan ikatan hidrogen (double-single)

Annealing. Dilakukan pada suhu 50-55ºC. Proses ini merupakan penempelan primer

Elongation. Dilakukan pada suhu 72ºC. Proses ini merupakan pemanjangan rantai DNA sesuai urutan basa primernya

Komponen Proses PCR

DNA template Enzim Tag dNTP Primer NFW (Nuclease Free

Water) Buffer PCR MgCL2

Uswatunnisa (105040200111114)Senin, 11.00 (Ass. Gita)

Isolasi DNA