Isolasi DNA

Click here to load reader

  • date post

    08-Apr-2016
  • Category

    Documents

  • view

    46
  • download

    1

Embed Size (px)

description

Politeknik AKA Bogor

Transcript of Isolasi DNA

  • Teknik Isolasi DNA

  • Dapatkah Kita Melihat DNA ?ukuran DNA terlalu kecil untuk diihat oleh mata

    Bahkan dengan menggunakan miskroskop terbaik pun, yang dapat kita lihat hanya kromosom

  • Dapatkah Kita Melihat DNA ?Meskipun demikian, banyak sekali jumlah DNA di dalam sel tubuh manusia. Bila DNA dari suatu sel dibentangkan, panjangnya sekitar 2 meter

    Bila seluruh DNA di dalam tubuh dibentangkan, panjangnya 9 juta km (jarak dari bumi ke bulan pulang pergi 13 kali)

  • Bahan (Material)1. Kita harus menyiapkan bahan yang mengandung DNA

    3. Kita akan mengisolasi DNA dari kacang hijau (kenapa? karena murah)2. Karena DNA adalah "blueprint" kehidupan, maka semua makhluk hidup mempunyai DNA

  • Bahan1. kacang hijau2. garam3. deterjen / sabun cair4. isopropil alkohol5. pelunak daging6. tabung reaksi7. batang pengaduk

  • Safety First !1. Jangan makan atau minum2. Tetap di tempat duduk3. Gunakan googles4. Hati-hati dengan bahan yang digunakan

  • Tahap 1Blender kacang hijau untuk memisahkan sel dari komponen lainnya

    Blender dengan air dan sedikit garam sampai diperoleh bentuk seperti sup

  • FiltrasiUntuk memisahkancairan berisi sel dari residu kacang hijau

  • Tahap 2Tambahkan Deterjen/ sabun cair

    Masukkan sup kacang hijau ke dalam tabung reaksi dan tambahkan deterjen

    Diaduk

  • Apa fungsi deterjen ?Setiap sel dilindungi oleh membran selDNA berada di dalam nukleus dari sel, yang juga dilindungi oleh membran

  • Apa fungsi deterjen ?Membran sel tersebut harus dipecahkan supaya DNA bisa dikeluarkan dari sel

  • DeterjenMembran Sel

  • Apa fungsi deterjen ?Deterjen memecahkan membran sel yang melindungi sel

    Bagaimana? deterjen menempel pada lipid (lemak) dan protein pada membran sel

  • Apa fungsi deterjen ?Membran di sekitar sel dan nukleus sudah dipecahkan

    Yang tersisa adalah : Protein, Karbohidrat, DNA

  • Tahap 3Tambahkan pengempuk daging (enzim) ke dalam campuran

  • Pelunak daging adalah suatu enzim

    Enzim adalah protein yang mengkatalis reaksi agar lebih cepat membentuk produk

    Enzim pada pelunak daging mempercepat reaksi pemotongan molekul protein

  • DNA di dalam nukleus dikelilingi oleh protein

    Enzim memotong protein dari DNA

  • Tahap 4Perlahan tambahkan alkoholMiringkan tabung reaksi dan perlahan masukkan satu lapisan alkohol di atas campuran sup kacang hijau

  • DNA akan mengapung di lapisan alkoholSemua residu dan protein dari sel kacang akan ada di dasar, di lapisan air

  • DNA adalah molekulpanjang yang berikatansatu sama lain

  • DNA Sequencing

  • Protein Purification

  • 1. Ammonium Sulfate Precipitation

  • 2. Column ChromatographyFlow-throughEluate

  • 3. Ion-Exchange Chromatography

  • Ion exchange chromatography

    DEAE celluloseanion exchangerCH2-CH2 -NH+(CH2CH2)CM cellulosecation exchangerCH2-COO-CH2-COO-++++Positively charged (basic) protein or enzymeCH2-CH2 -NH+(CH2CH2)

  • Ion exchange chromatography++++Positively charged protein or enzyme bind to the columnFor protein binding, the pH is fixed (usually near neutral) under low salt conditions. Example cation exchange column

  • Ion exchange chromatographyTo elute our protein of interest, add increasingly higher amount of salt (increase the ionic strength). Na+ will interact with the cation resin and Cl- will interact with our positively charged protein to elute off the column.Na+Na+Cl-Na+2Cl-Cl-Cl-Na+2+ Increasing [NaCl] of the elution buffer

  • 4. Affinity Chromatography

  • 5. Gel Filtration Chromatography

    Using SDS-PAGE to Assess Purity