ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID...

SKRIPSI

SRI HENDAH MRIH LESTARI

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID DARI DAUN BAUHINIA PURPUREA LINN

F A K U L TA S FARM ASI U N IV ER S ITA S AIR LANG GA

S U R A B A Y A

1989

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SKRIPSI ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN ..... SRI ENDAH MRIH LESTARI

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID DARI DAUN BAUHI.NIA PURPUREA LINN

SKRIPSIDIBUAT UNTUK MEMENUHI SYARAT MENCAPAI GELAR

SARJANA FARMASI PADA FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

1989

olehSRI HENDAH MRIH LESTARI

058410681

Disetujui oleh Pembimbing

DR.NOOR IFANSYAH Dra. MANGESTUTI A. MS



KATA PENGANTAR

Segala puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah Su- bhanahu wata’ala atae segala rahmat dan hidayah-Nya yang telah dilimpahkan kepada saya, sehingga berhasil menyusun skripsi ini sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

Pada skripsi ini, saya mengambil judul: Isolasi dan identifikasi senyawa golongan flavonoid dari daun Bauhinia purpurea Linn.

Pada kesempatan ini perkenankanlah saya mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang sedalam-dalamnya kepada Bapak DR. Noor Xfansyah dan Dra. Mangestuti A, MB selaku pembimbing saya, yang telah banyak meluangkan v/aktu untuk memberikan bimbingan, nasehat serta dorongan semangat dalam menyelesaikan skripsi saya ini.Para penguji yang telah berkenan memeriksav dan. menerima skripsi saya ini.Serta semua pihak yang'telah membantu dalam penyelesaian skripsi saya.Khusus terima kasih yang sebesar-besarnya saya sampaikan kepada Ayah dan Ibu serta saudara-saudaraku tercinta atas segala bantuan dan dorongan semangat sehingga tugas akhir ini dapat saya selesaikan.Ucapan terima kasih yang dalam juga saya sampaikan kepada 6Uami tercinta atas dorongan moril dan bimbingannya selama penyusunan skripsi. Semoga budi baik dari semua pihak yang telah saya terima, mendapat balasan dari Allah Subhanahu wata*ala.

i



Saya sadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna, te- tap! harapan saya, semoga penelitian ini dapat berraanfaat untuk penelitian selanjutnya dan berguna pula bagi kita semua.

Juli,1989 Penyusun



HalamanKATA PENGANTAR.................................... iDAFTAR ISI ........................................ iiiDAFTAR TABEL ...................................... viiDAFTAR GAMJBAR ..................................... ixBAB I. PENDAHULUAN ............................. '1BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ....................... 3

1. Tinjauan tentang tanaman Bauhinia pur purea Linn. ................... ....... 3

1 .1 . Klasifikasi ..................... 31 .2. Uraian tentang tanaman ......... 3

2. Tinjauan umum tentang flavonoid .... k

2.1. Pembagian senyawa golongan fla -- v o n o i d ............... •......... 5

2.2. Sifat fisika kimia ............. 6

2.3. Kegunaan flavonoid ............. 72i.J*. Isolasi flavonoid.............. 72.4*1* Isolasi flavonoid dengan pela-

rut alkohol .................. 7

2.4.2. Isolasi flavonoid dengan pela-rut a i r ....................... 8

2.4*3* Isolasi flavonoid dengan raeto-de CHARAUX-PARIS.............. 8

2.5* Identifikasi flavonoid 92.5*1* Reaksi warna ....... .......... 92.5*1*1* Reaksi Wilstater...... . 92.5*1*2. Reaksi Bate Smith-Metcalfe.. 10

iii .M I L I K

PERPUSTAKAAN *UNIYERSlTA£ A*JUAN$0A*

S U R A B A Y A

DAFTAR ISI



Halaman2.5 :2. Krornatografi lapisan tipis ... 10 2.5.3* Identifikasi dengan spektrofo-

to meter ultra lembayung berd& sarkan metode pergeseran pan -Jang gelombang................ H

2.5*3*1* Identifikasi senyawa golonganflavon dan flavonol .»*•••.. 12

2.5*3*2* Identifikasi senyawa golonganisoflavon .................. ^

2.5-3*3* Identifikasi senyawa golonganflavanon dan dihidro flavonol.. •. 15

2.5*3*4* Identifikasi senyawa golonganKalkon dan A u r o n ........... 13

2.6. Hidrolisa flavonoid ............ 21BAB III. METODE PENELITIAN ...................... 27

1. Bahan penelitian, bahan kimia dan - alat-alat........................... 2?1.1. Bahan penelitian.......... .... 271.2. Bahan k i m i a ........... 221.3. Alat-alat...................... JO

2. Cara k e r j a ............. ............ 302.1. Penyiapan bahan penelitian •••• 30

2.2* Isolasi-senyawa golongan flavo«n o i d ......................... . 30

2.2.1.,Pembuatan ekstrak ........... 302.2.2. Identifikasi senyawa hasil i-

solasi ...................... 33

iv



V

2.3. Pemisahan dan pemurnian ....... 332.3.1. Kromatografi cepat cara vakuns.2.3.2. Identifikasi senyawa golongan

flavonoid hasil kromatograficepat cara v a k u m ............ 33

2.3-3» Kromatografi kertas preparatif. 36

2.3.4. Identifikasi senyawa golongan flavonoid hasil kromatografikertas preparatif ........... 37

2.4* Hidrolisa a s a m ................ 382.4.1. Identifikasi senyawa golongan

flavonoid hasil hidrolisa.... 382.4.2. Identifikasi senyawa gula da

ri hasil hidrolisa.......... 392.5* Identifikasi dengan spektrofoto

meter lembayung u l t r a ......... 40BAB IV. HASIL PENELITIAN........................

1. Bahan penelitian .................... 432. Isolasi senyawa golongan flavonoid.. 4-2

2.1. Pembuatan ekstrak.............. ^32.2. Pemisahan dan pemurnian....... 452.3. Identifikasi senyawa hasil iso-

Iasi................ ......... *. ^2.3*1* Reaksi warna ................2.3.2. Kromatografi lapisan tipis .. ^9

2.3*3. Spektrofotometer ultra lemba-ji

yung.......................... ^9- 2.4. Hidrolisa dengan a s a m ......... 59

Halanan



2.5* Identifikasi senyawa hasil hidrclisa............................. 59

2 .5*1 *iri»£ii warna.»#*•*•••*•••*•*••« 592*5*2 Ki-omatografi lapican tipis.... 592.5*3 Spektrofotometer ultra lemba

yung.......................... ^02.5*-4 Identifikasi senyav/a gula..... 7®

BAB V . PEMBAHASAN................................. 7/*BAB. VI. KSSIMPULAN- DAN SARAN...................... 82BAB VII .DAFTAR PUSTAKA............................ 8ifRINGKASAN.......................................... 83

vi

Halaman



BAFTAR TABEL

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

halamanI. Ringkasan identifikasi senyawa golong

an flavon dan flavonol dengan spektro** fotometer ultra lembayung dengan metode pergeseran panjang gelombang maksimum....................... ........ ..... 23

II.’ Ringkasan identifikasi senyawa golongan isoflavon dengan spektrofotometer ultra lembayung dengan metode pergesexan panjang gelombang maksimum......... 24

III. Ringkasan identifikasi senyawa golong- . an flavanon dan dihidroflavonol dengan spektrofotometer ultra lembayung dengan metode pergeseran panjang gelombang : maksimum..... .......................... 25

IV. Ringkasan identivikaci senyawa golongan kalkon dan auron dengan spektrofoto meter ultra lembayung dengan metode pergeseran panjang gelombang maximum..* 26

V. Hasil kromatografi lapisan tipis dari- fase petroleum eter,fase eter,fase etil asetat,face n—butanol........... .

VI. Hasil kromatografi lapisan tipis dari fase etil asetat setelah dilakukan pemisahan dengan kromatografi cepat earn vaku............. ...................... 46

vii



Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

Tabel

viiiHalaman

VII. Hasil krornatografi lapisan tipis dari fase n-butanol setelah dilakukan pemisahan dengan krornatografi cepat cara - vacum ...................... ........... k?

VIII. Hasil krornatografi lapisan tipis se -k9

IX. Data hasil spektrofotometer ultra lem-50

X. Data hasil spektrofotometer ultra lern-55

XI. Data hasil spektrofotometer ultra lem~56

XII. Hasil krornatografi lapisan tipis senya,60

XIII. Data hasil spektrofotometer ultra lem-61

XIV. Data hasil spektrofotometer ultra lembayung dari senyawa A 1 ............... 6*t

XV. Data hasil spektrofotometer siltra lem-67

XVI. Hasil identivikasi senyav/a gula hasil70



Gambar 1. Gambar 2*

Gambar 3 .

Gambar 4.

Gambar 5*

Gambar 6*

Gambar 7.

Gambar 8.

Gambar 9»

Gambar 10.

Gambar 11.

Gambar 12.

Gambar 1 3 .

Ha]amanTanaman Bauhinia purpurea Linn.... . 2T

Spektra ultra lembayung dari senyawa E ..................................... 51Spektra ultra lembayung dari senyawaE ..................................... 52Spektra ultra lembayung dari senyawaA ..................................... 5t.Spektra ultra lembayung dari senyawaA ..................................... 55

Spektra ultra lembayung dari senyawaB ................................... . 57Spektra ultra lembayung dari senyaeaB ...................................... 58Spektra ultra lembayung dari senyawaEj ............................ *...... 62

Spektra ultra lembayung dari senyawaE, ................................. 63Spektra ultra lembayung dari senyawaAj .................................... 65Spektra ultra lembayung dari senyawaA 1 .................................... S6

Spektra ultra lembayung dari senyawaB, .................................... 68Spektra ultra lembayung dari senyawa

DAFTAR GAMBAR

B 1 ............................................................................................................................................................................................................................................... 6 9

M I L I tCPERPUSTA.KAAN

*UNIV£itS]TAS AiftLANGGVS U R A B A Y A



Gambar lif. Kromatogram .senyawa liasil isolasi (E)dan senyawa hasil hidrolisa(E1)...... 71

Gambar 15« Kromatogram senyawa hasil isolasi (A)dan senyawa hasil hidrolisaCA^)....... 72

Gambar 16. Kromatogram senyawa hasil isolasi (B)dan senyav/a hasil hidrolisa(B^)....... 73

Halaman



BAB I PBNDAHULUAN

Indonesia sangat kaya akan sumber alara yang dapat di. gunakan sebagai obat terraasuk bahan~bahan obat tradisio - nal yang telah 4igun&kan oleh sebagian besar rakyat Indonesia secara turun temurun berdasarkan pengalaman, Oleh

ikarena itu dengan langkah yang tepat perlu dilakukan upaya perabinaan dan pengembangannya agar bahan-bahan terse - but semaksimal mungkin dapat dimanfaatkan untuk penyeleng garaan upaya-upaya kesehatan masyarakat.

Disamping itu upaya-upaya penelitiannya harus terus digalakkan agar setapak demi setapak poteasi obat alam i- ni dapat diungkapkan semuanya. Dengan meningkatnya hasil- hasil penelitian tersebut, akan meningkat pula pengungka£ an khasiat obat alam. Dengan demikian makin mantap pula peranan obat alam tersebut dalam upaya-upaya kesehatan ma syarakat.

Pemanfaatan obat tradisional yang sebagian besar ber asal dari .tanaman obat perlu ditingkatkan dan dikernbang - kan karena bahannya raudah didapat, tanamannya dapat dita- nain sendiri ol«h masyarakat di pekarangan-pekarangan, murah dan dapat diramu sendiri di rumah.

Bauhinia purpurea Linn adalah salah satu turabuhan o- bat yang digunakan untuk obat tradisional di Indonesia,dalam masyarakat dikenal dengan naraa daun kupu-kupu.(2,5)

tBiji dari tanaman ini dapat digunakan untuk mengobeti diare dan ulcus, sedangkan getah daunnya dapat digunakan un tuk mengobati batuk, batuk rejan.(5)

1



2

Dari hasil skrining yang telah dilakukan terhadap Bauhini a purpurea'Linn dengan menggunakan kromatografi kertas di temukan adanya noda flavonoid.Melihat kegunaan tanaman tersebut dan melihat adanya kan-' dungan flavonoid serta banyaknya tanamnn obat tersebut di daerah Madiun maka dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa golongan flavonoid dari tanaman Bauhinia purpurea Linn.

Flavonoid mempunyai banyak kegunaan antara lain se - bagai anti peradangan, diuretik, anti spasmodik.17,10)

Dengan demikian maka penelitian ini bertujuan untuk mencoba mengisolasi dengan metode Charaux-Paris dan meng- identifikasi dengan reaksi warna, kromatografi lapisan ti

✓pis dan s£>ektrofotometer ultra lembayung senyawa golongan flavonoid dari daun Bauhinia purpurea Linn.

Semoga hasil penelitian yang telah kami lakukan ini dapat bermanfaat untuk penelitian selanjutnya.



BAB II TINJAUAN PUSTAKA

1. Tinjauan tentang tanaman Bauhinia rurpurea Linn.1.1 Klasi fikasi.(5.4*9)

Divisi j Spermatophyta.Anak divisi '• Angiospermae.Kelas : Dicotyledoneae.Anak kelas Dialypetalae.Bangsa •* Leguminosae.Suku : Caesalpiniaceae.Karga •• Bauhinia.Jenis ; Bauhinia purpurea Linn

1.2 Uraian tentang tanaman.Tanaman ini turabuh liar di hutan dan di la

dang-ladang sampai setinggi kira-kira 800 m dari permukaan laut. Ada juga yang ditanam orang di halaman-halaman sebagai tanaman hiasan.(5)Kama daerahnya: Daun lilin, areuy kupu-kupu, ati -

lil, ping-keping.(2,5)Morfologi tanaman.(1 ,9)Habitus : perdu tegak atau pohon dengan tinggi

2 - 6 meter.Ranting : pucuk ranting dengan bulu-bulu berwar

na gelap.Daun : daunnya berbentuk ginjal terbalik, ber

bulu kasar pada permukaan atas, brgian bav.ah berbulu halus.

3



4

Bunga : bunganya berkelopsk daun 5 lembar, da - un bunga obovatus sampai lanset, ungu dengan dasar pucat, tabung kelopak 7-10 mm. Panjang mayang 2-12 cm dengan 5-25 kuntura, tangkai 7-15 mm, Benang sari 3*

Buah : buahnya buah polong panjangnya sampai 25 era berisi 6-16 biji.

Untuk keperluan pengobatan dipakai:- Bijinya untuk raengobati diare, ulcus de -

ngan ramuan sebagai berikut: Arabil 11 biji tanaman yang sudah tua, disangrai, ka- lau sudah renyah ditumbuk sampai halus di beri air dan garam sedikit. Untuk yang terserang diare ha6il ramuan tadi diminum dan untuk yang terserang ulcus hasil ramu an tadi ditempelkan diterapat luka.

- Getah daunnya untuk batuk, batuk rejani^ Menurut penelitian yang dilakukan: Alex Pinsky dan Veronica II. Schwimmer (1973); H.P.Bhartiya, P Du- bey, S.B.Katiyar dan P.C.Gupta (1978 dan 1980) , tanaman ini mengandung enzim tripsin dan kherao tripsin, butein V-O-beta arabino-O-beta-dextro - galactoside, 3 ,4-dihydroxychalcone 4-0-beta- leavus-srabinopyranosyl-O-beta-dextro-galactopyra noside dalam bijinya,

2. Tinjauan umum tentang flavonoid,(10,11,12,13)Flavonoid adalah suatu pigmen yang terdapat dalam

tumbuhan dengan 15 atom karbon dalam inti dasarnya , yang tersusun dalam konfigurasi G6”^3~C6r ya^tu ^Ua



5

cincin aromatik yang dihubungkan oleh satuan tiga karbon yang dapat atau tak dapat raembentuk cincin ketiga.

Istilah flavonoid sendiri sebenarnya borasal dari kelorapok senyawa yang paling umum dari golongan terse-- but yaitu flavon atau 2-phenylbenzopyron atau -phenyl benzopyron dengan rumus bangun 6ebagai berikut:

Flavonoid banyak terdapat dalam tumbuhan sebagai bentuk glikosida baik dalam bentuk O-glikosida atau C-glikosida umuranya didalara bunga, buah, daun, dalam bentuk bebas banyak diketemukan pada jaringan kayu.2.1 Pembagian senyawa golongan flavonoid.(10,12.15)

Flavonoid dapat digolongkan menjadi beberapagolongan:a. Flavon

b. Flavonol

c. Flavanon



6

d... Isoflavon

e. Dihidroflavonol

f. Kalkon

g. Auron

f. Antoeianin

i. Leukoantosianin

2.2 Sifat fisika kimia.Kelarutan.(15)

Pada umumnya semua flavonoid baik dalam bentuk glikosida maupun flavonoid bentuk bebas dapat larut d.alam pelarut metanol dan etanol.

M I L I KPERPUSTAKAAN

’UNIVERS1TAS a IRI.ANQCU'S U R A B A Y A



7

•Untuk memisahkan senyawa golongan flavonoid ada - lah berdasarkan si fat kelarutannya dalam berbagai raacam pelarut dengan polaritas yang meningkat yaitu:

- untuk flavonoid bentuk bebas atau bentuk aglikon umuranya larut dalam pelarut eter.

- untuk flavonoid bentuk O-glikosida banyak larut dalara pelarut etil asetat.

- untuk flavonoid bentuk C-glikosida larut dalam pelarut n-butanol, amil alkohol.

2.3 Kegunaan flavonoid.Kegunaan flavonoid didalam klinik antara la

in ditemukan sebagai turunan dari flavonoid yaitu vitamin P. Vitamin P mempunyai fungsi terhadap permeabilita6 dan kerapuhan pembuluh darah kapi - ler. Antosianin, kalkon dan auron bersifat bakte- riostatik sedangkan polihidroksiflavon dalam bentuk eternya bersifat sebagai insektisida. Akhir - akhir ini dilaporkan bahwa flavonoid mempunyai ak tivitas sebagai anti virus, anti peradangan dan anti spasmodik.(7,10,11,14)

2*4 Isolasi flavonoid.2.4.1 Isolasi flavonoid dengan pelarut alkohol.(13,14)

Untuk bahan yang masih segar diekstraksi dengan etanol 95% dididihkan selama 5“10 menit, sedangkan serbuk tanaman yang t-elah dikeringkan dapat diekstraksi dengan etanol 80# pada tempe- ratur karaar selama 8-24 jam. Ekstrak yang didapat diuapkan, kemudian ditambah air panas de-



8

ngan tujuan memisahkan klorofil, lemak dan li - lin dari senyawa golongan flavonoid, Setelah di pisahkan, filtrat yang diperoleh dapat langsung dipakai untuk isolasi.

2.4.2 Isolasi flavonoid dengan pelarut air.(14tl6)Isolasi dengan menggunakan pelarut air me

rupakan prosedur umum untuk mengisolasi glikosi . da flavonoid dari daun, bunga dan buah, Selain itu ekstraksi dengan air panas dari ekstrak ken tal alkohol dapat menghilangkan klorofil, leraak dan lilin. Kemudian ekstrak air yang encer diekstraksi dengan pelarut etil asetat atau n-butanol. Fase etil asetat atau n-butanol dipekat- kan, raaka kadang-kadang akan timbul kristal gli kosida flavonoid secara langsung.

2.4.3 Isolasi flavonoid dengan metode CHARAUX-PARISp Serbuk tanaman diekstraksi dengan metanol,

kemudian ekstrak metanol diuapkan sehingga di - dapatkan ekstrak kental. Ekstrak kental yang di peroleh ditambahkan air panas dalam jumlah yang sama sehingga akan didapatkan ekstrak air yang encer. Kemudian ekstrak air ditambah eter dan dilakukan ekstraksi kocok. Selanjutnya fase eter dipisahkan dari fase airnya.

Faso eter diuapkan maka akan diperoleh eks trak eter yang kering. Dari ekstrak kering ini kemungkinan didapatkan flavonoid dalam bentuk bebas. Sedang fase air dari hasil pemisahan ter sebut ditambah pelarut etil asetat dan dilaku -



9

kan ekstraksi kocok, kemudian kedua fase dipi - sahkan.Fase etil asetat diuapkan sampai kering dan kemungkinan didapatkan flavonoid dalam bentuk 0 - glikosida. Sedangkan fase air ditambah pelarut

• n-butanol dan dilakukan ekstraksi kocok, kemudi an kedua fase dipisahkan.

Fase n-butanol diuapkan maka akan didapatkan ekstrak n-butanol yang kering dan kemungkin an di dalam ekstrak tersebut terdapat flavonoid dalam bentuk C-glikosida dan leukoantosianin. Dari ketiga fase yang didapatkan tersebut dapat langsung dilakukan pemisahan dari komponen-komponen yang ada dalam tiap' fasenya dengan memper gunakan kromatografi kolom. Metode ini sangat ' baik dipakai untuk mengicolasi flavonoid dalam tanaman, karena dapat dilakukan pemisahan flavo noid berdasarkan sifat kepolarannya.(1 5 )

2*5 Identifikasi flavonoid.2.5*1 Reaksi warna.(10,11 )2.5.K1 Reaksi Y.'ilstater.

Reaksi warna ini digunakan untuk berba - gai golongan flavonoid. Reaksi Wilstater ini biasa disebut reaksi cyanidin, dimana untuk mengetahui senyawa yang mempunyai inti benzo- piron. Reaksi Wilstater adalah penambahan KC1 pekat dan serbuk Mg, dimana dengan flavonoid akan memberikan warna sebagai berikut:



10

- warna merah tua, kemungkinan adalah golongan flavon*

- warna merah krimson, kemungkinan adalah golongan flavonol,

- warna jingga merah, kemungkinan adalah go - longan flavanon.

2.5*1.2 Reaksi Bate Smith-Metcalfe.Reaksi warna ini digunakan untuk menun -

jukkan adanya senyawa leukoantosianin. Reaksi positif jika terjadi warna merah yang inten - sif atau warna ungu.

2.5*2 Krornatografi lapisan tipis.(6,16,18)Krornatografi adalah suatu metode analisa

untuk pemisahan komponon 'zat dari campurannya dengan cara melewatkan campuran tersebut melalu i sistem dua fase yaitu fase diam dan fase ge - rak.

Mekanisme terjadinya pemisahan pada kroma- ;tografi dapat berdasarkan atas prinsip adsorpsi, partisi, pertukaran ion dan filtrasi.

Pada umumnya pemisahan komponen dari cara - puran zat dilakukan berdasarkan proses adsorpsi atau proses partisi.Proses adsorpsi.Proses ini terjadi bila suatu campuran zat dite teskan pada lempeng fase diam, maka mula-mula semua zat akan diadsorpsi. Karena kekuatan ad - sorpsi antara molekul zat dengan fase diam ber-



11

beda-beda, maka apabila kemudian dilewatkan larutan fase gerak arah keatas maka untuk molekul zat yang paling lemah diadsorpsi oleh fase diam akan terlarut lebih dahulu, sehingga akan mem -■ bentuk noda yang paling atas. Noda ini kemudian

- diikuti noda-noda dari molekul zat lainnya yang teradsorpsi lebih kuat oleh fase diam dan akan membentuk noda yang lebih rendah.Proses partisi.Proses ini terjadi bila suatu campuran zat yang akan dipisahkan didistribusikan antara 2 fase yang saling tidak campur. Hal ini berdasarkan - perbedaan kelarutan relatif dari masing-masing komponen di dalam fase di&m dan fase gerak.

Kromatografi lapisan tipis adalah salah sa tu tekhnik kromatografi, dimana dapat digunakan untuk identifikasi 6erta test kemurnian suatu komponen dari campuran zat. Untuk menunjukkan a danya komponen dari campuran zat, dapat digunakan sinar ultra lembayung atau penampak noda yang sesuai, sehingga didapat kromatogram. Dari kromatogram yang diperoleh dapat diketahui warna dari masing-masing komponen dari campuran zat dan harga Rf nya.Rf adalah perbandingan jarak yang ditempuh oleh zat dengan jarak yang ditempuh oleh fase gerak.

2«5»3 Identifikasi dengan spektrofotometer ultra lem bayung berdasarkan metade pergeseran panjang gelombang.(1 3 ,1 7 )



2.5*3*1 Identifikasi senyav/a golongan flavon dan fla vonol.

2.5*3*1*1 Dalam pelarut metanol p.a.Secara umum spektra yang dihasilkan

dari flavon dan flavonol memberikan 2 puncak absorbs! pada Band I dengan panjang ge lorabang maksimum 300-380 nm dan Band II de ngan panjang gelombang maksimum 240-280 nm. Band I berfungsi untuk membedakan flavon dari flavonol, dimana untuk flavon terle - tak pada panjang gelombang maksimum antara 304-350 nm dan untuk flavonol antara 352 - 385 nm.

2.5*3*1*2 Zat dalam metanol p.ar ditambah NaOH padat.2.5*3*1.2.1 Adany gugus OH pada atom C nomor 4' di -

tunjukkan oleh pergeseran bathokromik da ri Band I sebesar 40-65 nm, bila diban - dingkan dengan hasil spektra ultra lemba yung dalam metanol p.a.

2.5*3*1*2.2 Adanya gugus OH pada atom C nomor 3 dan4 * ditunjukkan oleh pergeseran bathokro-. mik dari Band I sebesar 50-60 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*1*3 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal.Adanya gugus OH pada atom C nomor 7 ditun* jukkan oleh pergeseran bathokromik dari Band II sebesar 5-20 nm, bila dibandingkan



13

dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3.1*4 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal dan H-^BO^ kristal,Adanya gugus orto-dihidroksi pada atom C nomor 3 1 dan V ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik dari Band I sebesar 12-30 nm bi la dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*1*5 Zat dalam metanol p.a ditambahkan AlCl^

kristal.Spektra hasil penambahan AlCl^ kristal dicatat panjang gelombang maksimumnya untuk digunakan pada langkah berikutnya.

2.5*3*1 *6 Zat dalain metanol p.a ditambahkan AlCl^ kristal dan HC1 pekat.

2.5*3*1*6*1 Adanya gugus orto-dihidroksi pada atom C nomor 3 ' dan V dapat ditunjukkan oleh pergeseran hipsokromik pada Band I sebe - sar 30-40 nm, bila dibandingkan dengan h& sil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a ditambah AlCl^*

2.5.3*1.6*2 Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 dapat ditunjukkan dengan pergeseran bathokromik pada Band I sebesar 35“55 nm, bila diban- ..dingkan dengan hasil spektra ultra leinbs- yung dalam metanol p.a.

2.5-*3.1.6.2 Adanya gugus OH pada atom C nomor 3 dan 5



14

dapat ditunjukkan dengan pergeseran batho kromik pada Band I sebesar 50-60 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

Hasil identifikasi senyawa golongan flavon dan flavonol dengan spektrofotometer ultra lembayung dapat dilihat pada tabel I.

2.5*3*2 Identifikasi senyawa golongan isoflavon.2.5*3.2.1 Zat dalam metanol p.a.

Spektranya mempunyai bentuk yang spesifik t dimana.Band II mempunyai intensitas lebih tinggi dibandingkan dengan Band I, bentuk Band I agak mendatar..Band II mempunyai paivjang gelombang maksi - mum antara 245-270 nm.

2.5*3.2.2 Zat dalam metanol p.a ditanbahkan NaOH padat.Adanya gugus OH pada atom C nomor 3* dan 4 f dapat ditunjukkan dengan terjadinya penurun an intensitas yang besar pada spektra dari Band II dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*2.3 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal.Adanya gugus OH pada atom C nomor 7 ditun - jukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 6-20 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.



2.5.3.2

2.5.3.2

2.5.3.3

2.5^3.3

4 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAckristal dan H,BO, kristal.3 3Adanya gugus OH pada atom C nomor 6 dan 7 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band I sebesar 10-15 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung da lam metanol p.a.

5 Zat dalam metanol p.a ditambahkan AlCl^ kristal.Dengan pereaksi ini tidak spesifik untuk i- soflavon.

6 Zat dalam metanol p,a ditambahkan AlCl^

kristal dan HC1 pekat.Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 ditun - jukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 10-14 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

Hasil identifikasinya dapat dilihat pada ta - bel II.Ideptifikasi senyawa golongan flavanon dan di hidroflavonol..1 Zat dalam metanol p.a.

Flavanon dan dihidroflavonol mempunyai bentuk spektra ultra lembayung yang spesifik , seperti dari isoflavon dalam pelarut meta - nol p.a, dimana pada Band II mempunyai in - tensitas lebih tinggi dibandingkan dengan



Band I. Perbedaan terletak pada besar panjang gelombang maksimum yaitu pada flava - non dan dihidroflavonol ditunjukkan oleh panjang gelombang maksimum Band II sebesar270-295 nm.

2.5*3-3*2 Zat dalam metanol p.a ditambahkan MaOH pa—

dat.Adanya gugus OH pada cincin A akan terjadi pergeseran panjang gelombang maksimum pada Band II, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5.3*3-2.1 Untuk senyawa golongan flavanon.- Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 dan

7 ditunjukkan olefi pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 35 nm, bila di

4l.

bandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p-a.

- Adanya gugus OH pada atom C nomor 7 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II aebesar 60 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*3-2.2 Untuk senyawa golongan dihidroflavonol.- Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 dan

7 akan ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 34-40 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.



X?

- Adanya gugus OH pada atom C nomor 7 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 5°"60 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra ■ lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*3*3 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal

2.5*3*3*3»1 Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 dan 7 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 34-37 nm, bila diban dingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*3*3-2 Adanya gugus OH pada atom C nomor 7 ditun jukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band II sebesar 51-58 nm, bila dibandingkan dengan spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3*3*4 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal dan H^BO^ kristal.Adanya gugus OH pada cincin A yaitu pada a- tom C nomor 6 dan 7 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band I sebesar 10-15 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

2.5.3.3.5 Zat dalam metanol p.a ditambahkan A1C13 kristal.Dengan pereaksi ini tidak spesifik untuk flavanon dan dihidroflavonol.



18

2.5*3*3*6 Zat dalam metanol p.a ditambahkan AlCl^ kristal dan HC1 pekat,Adanya gugus OH pada atom C nomor 5 ditun - jukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band I sebesar 20-26 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a,

Hasil identifikasi senyawa golongan flavonon dan dihidroflavonol dengan spektrofotometer ultra lembayung dapat dilihat pada tabel III*

2.5*3*4 Identifikasi senyawa golongan, Kalkon dan Au « ron.

2.5*3*4*1 Zat dalam metanol p.a.Keduanya mempunyai bentuk spektra yang spesifik, dimana Band I intensitasnya lebih tinggi bila dibandingkan dengan Band II, y^ itu Band I terletak pada panjang gelombang maksimum antara 340-390 nm dan Band II anta ra 220-270 nm.Sedangkan untuk Auron Band I terletak pada panjang gelombang maksimum antara 370-430

nm.2.5*3*4*2 Zat dalam metanol p.a ditambahkan dengan

kristal NaOH.2.5*3*4*2.1 Untuk golongan Kalkon.

Adanya gugus OH pada atom C nomor 4 ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik pada Band 1 sebesar 60-100 nm, dengan meningkatnya intensitas puncak, bila diban~



19

dingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dari metanol p.a.

Adanya gugus OH pada aton C nomor 2 atau nomor 4* ditunjukkan dengan pergeser. an bathokromik pada Band I sebesar 60-100 nra, tanpa peningkatan intensitas puncak , bila dibandingkan dengan hasil spektra ul tra lembayung dalam metanol p.a.

2.5*3-4*2.2 Untuk golongan Auron.Adanya gugus OH pada atom C nomor 4'

ditunjukkan dengan pergeseran bathokromik pada Band I sebesar 80-95 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

Adanya gugus OH pada atom C nomor 6i

dan 4 ' ditunjukkan dengan pergeseran ba - thokromik pada Band I yang lebih kecil, bila dibandingkan dengan hasil spektra ul tra lembayung dalam metanol p.a.

2-5*3*4*3 Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal.

2.5*3*4*3*1 Untuk golongan Kalkon,Adanya gugus OH pada atom C nomor 4

atau gugus OH pada atom C nomor 4 dan 4 1

ditunjukkan dengan pergeseran bathokromik Band I, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalarn metanol p.a.

2-5-3*4*3*2 Untuk golongan Auron.Adanya gugus OH pada atom C nomor 4



20

atau gugus OH pada atom C nomor 4 dan 6'# ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik Band I, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a..

2 . 5 * Zat dalam metanol p.a ditambahkan NaOAc kristal dan H^BO^ kristal.

Adanya gugus orto-dihidroksi pada cincin B ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik Band I sebesar 28-36 nm, bila dibanding kan dengan hasil spektra ultra lembayung da lam metanol p.a.

Adanya gugus orto-dihidroksi pada cincin A ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik yang lebih kecil bila dibandingkan de - ngan hasil spektra ultra lembayung dalam rne tanol p.a.

2.5*3*4.5 Zat dalam metanol p.a ditambahkan AlCl^ kristal.

Adanya gugus orto-dihidroksi pada cincin B untuk Kalkon dan Auron ditunjukkan o- leh pergeseran bathokromik pada Band I sebe ear 40-70 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

Adanya gugus orto-dihidroksi pada cincin A ditunjukkan oleh pergeseran bathokro*- mik pada Band I yang lebih kecil, bila di - bandingkan dengan hasil spektra ultra lembci yung dalam metanol p.a.



21

2.5-3-4-6 Zat dalam metanol p.a ditambahkan AlCl^ kristal dan HC1 pekat.

2.5-3-4.6.1 Untuk golongan Kalkon.Adanya gugus OH pada atom C nomor 2 1

ditunjukkan oleh pergeseran bathokromik Band I sebesar 48*64 nra, bila dibanding. - kan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p,a.

Adanya gugus tri-hidroksi pada-atom C nomor 2', 3* dan 4' ditunjukkan dengan pergaeeranvbathokromik pada Band I seki - tar 40 nm, bila dibandingkan dengan hasil spektra ultra lembayung dalam metanol p.a.

Hasil identifikasi senyawa golongan Kalkon dan Auron dengan spektrofotometer ultra lem - bayung dapat dilihat pada tabel IV.

2.6 Hidrolisa flavonoid.(13.17*20)Hidrolisa flavonoid dapat digunakan asam

atau enzim, dimana kedua cara hidrolisa ini digunakan untuk mengetahui flavonoid bentuk aglikon dan senyawa gula yang terdapat dalam glikosida flavonoid.

Hidrolisa dengan asara umumnya digunakan asam sulfat 2 N atau asam klorida 2 N. Caranya sejum - lah sampel ditambah air dan larutan asam, kemudian dipanaskan selama 30 tnenit# Setelah dingin diekstraksi dengan eter, kemudian dilakukan pemisah an, Fase eter dilakukan identifikasi senyawa flavonoid dan fase air dilakukan identifikasi senya-



22

wa gula.Sedangkan hidrolisa dengan enzim umumnya diguna - kan enzim j$, glukoeidase, y3-glukoronidase dan an- thosianase. Gugus gula yang dijumpai dalam bentuk. glikosida flavonoid kemungkinan dapat berupa mono sakarida, disakarida dan trisakarida.



TABEL I

IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAW FLAVON DAN FLAVONOL DENGAN SPLCKTROFOTOMETER ULTRA LEKBAYUNG DENGAN. MET ODE PERGESERAN PANJANG GELOMBAUG MAKSIMUM.

,'Panjang gclombang 'maksimum(nm)

Pergoseran panjang golombanr; rnaks.(nm)

Pereaksi Intcrprctaoi•Band I Band II Band I Band II

MeOH 30^-350352-385

250-275- - iflavon

flavonolMeOH+NaOH

*

*fO-65 ■

50-60

OH pada atom C nomor VOH pada atom C nomor 3&V

MeOH+NaOAc 5 - 2 0*

OH pada atom C nomor 7

MeOH+NaOAc+HzBOz 3 3

12 -30 OH pada atom C nomor 3 f&V

MeOH+AlCl,MeOH+AlCl^

+HC1 p.30 -/f0 OH pada atom

C nomor 3'&V

MeOH+AlCl^ +HC1 p. * 4^

35-55 OH pada atom C nomor 5

.50-60-

I

OH pada atom C nomor 3&5

23



TABEL II

IDENTIFIKASI S2NYAWA GOLONGAN ISOFLAVON DENGAN SPEKTROFUTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DENGAN METCDJ1* PERGESERAN PANJAHG GELCMRANG MAKSIMUM.

Panjang gelombang maksimum (nm)

Pergeseran panjang gelombr.ng muks.(nm)

Pereaksi InterpretasiBand I Band II Band I Band II

MeOH intensitas ren-dah

2if5-370 - isoflavon

XeOH+NaOH reduksi intensity as ' -

OH p:-da atom C nomor 3 1 &V

MeOH+NaCAc ✓ 6 - 20 CH pada atom V. nomor?

KeOH+NaOAc+HzBO-z D D

1 0 -15 - OH p;;da atom ' C nomor 6&7

MeOH+AlCl^ - _

MeOH+AlCl, " +HC1 p. ^

io-i^ OH pada atom C nomor 5

Zk



TABEL III

IDENTIFIKASI SEKYAWA GOLONGAN FLAVANON DAN DIHIDROFLA- VONOL DENGAN ' S PE KTRO FOT 0 MET 3 R ULTRA L3MBAYUNG . DENG A ftMETODE PERGESERAN PANJANG G*SLQtfBAHG MAKSIMUM

Pereaksi


Pergeseran panjang gelombang maks.(nm)

InterpretasiBand I Band II Band I Band II

MeOH - 270-295 -m

flavanon/di-hidroflavonol

MeOH+NaOH 35

60

OH pada atom C nomor 5-7 (flavanon)OH pada atoi:1. C nomor 7 (flavanon)

* ty

y OH pada atom C nomor 5&7 (dihidroflavonol)

• 50-60i

OH pada atom C nomor 7(di hidroflavonol)

MeOH+NaOAc

,

3^-37

51-58

OH pada atom C nomor 5&7OH pada atom C nomor 7

MeOH+NaOAc+h3bo3

10-15i

OH pada atom C nomor 6&7

MeOH+AlCl^ - - -

MeOH+AlCl- +HC1 p.^

20-26 OH pada ato.m C nomor p

25



TABEL IV

IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN KALKON PAN AURON DENGAN SPSKTROFOTOMETUS ULTRA LSKBAYUNG DENGAN MjITODE P^RGS-.SERAN PANJANG G&LOMBANG MAKSIMUi*..

Pereaksi

Panjang gelombang makcimum (nm)

Pcrgiseran p a n j a n g ^•clomban^ mak/3.(nm)

Band I ' Band II Band I Band IIinLcrproxasi

MeOH 340-390370-430 220-270 - -

KalkonAuron

MeOH+NaOH - 60-100 OH pada C nomor (kalkon)

atom4

60-100 — OH pada C nomor (kalkon)

atom2&4'

80-95 •* Oil pada C nomor (auron)

atom4'

70 OH pada C nomor (auron)

atom6

MeOH+NaOAc - -

MeOH+NaOAc+H,BO,3 3

28-36♦

OH pada C nomor

atom3f&V

MeOH+AlCl*3MeOH+AlCl*3+HC1 p.

40-70 - OH pada C nomor

atom3'&4'

MeOH+AlCl, +HC1 p<

48-64 Oil pada C nomor (kalkon)

atom2'

\

-+4° OH pada

C nomor dan 4 1 (kalkon)

atom 2-, 3'

26



BAB III METODE PENELITIAN

1• Bahan penelitian. bahan kimia dan alat-alat.1•1 Bahan penelitian.

Sebagai bahan penelitian digunakan daun Bauhini £ purpurea Linn yang telah dideterminasi dengan bantuan kunci determinasi. (9)

Bahan dikumpulkan mulai bulan Desember 1988 dari Madiun Jawa Timur.

Gambar 1. Tanaman Bauhinia purpurea Linn.

27



28

1.2 Bahan kimla.Kecuali dinyatakan lain, seraua bahan kimia yang di gunakan berderajat pro analisa (p.a)Untuk ekstraksi : metanol teknis petroleum eter eteretil asetat teknis n-butanol teknisUntuk kromatografl lapisan tipis : lapisan tipis selulosa: Art. 5552

DC Alufolien cellulose n-butanol : asam asetat : air = 4 : 1 : 5

aeam asetat : air = 15 s 85

pereaksi sitrat borat dalam metanol amonium hidroksida Untuk kromatografi kertasKertas Whatman : Whatman chromatography paper 1 m£

dium flow rate Untuk reaksi warna : metanolasam klorida pekat serbuk magnesium n-butanolUntuk kromatografi kolom cepat cara vakum : mikrokristal selulose: Art* 2250

cellulose mikrokristal campuran air-metanol dengan berbagai macam perbandingan:



29

air-metanol = 100 : 0




air-metanol = 60 : k0


air-metanol = ifO : 60 air-metanol = 30 : 70

air-metanol = 20 : 80 air-metanol = 10 : 90


Untuk hidrolisa: asam sulfat 2 N eternatrium sulfat eksikatus barium karbonat pereaksi Molisch pereaksi Barfoed pereaksi Luff ' pereaksi FehlingPntuk pemeriksaan dengan spektrofotomgter ultra lemba- m :metanolnatrium hidroksida natrium asetat asam borat aluminium klorida asam klorida



30

1*3 Alat-alat :labu alas bulat pendingin balik penyaringrotary evaporator Buchi tipe KRV 65/45 corong pisah sintered glass pipa kapilerspektrofotoraeter ultra lembayung: Hitachi 557

Double wavelength, Doublebeam Spectrophotg, meter

bejana kroraatografi2. Cara ker.la

2*1 Penyiapan bahan penelitianDaun Bauhinia purpurea Linn dikumpulkan dalam

keadaan segar, kemudian dibersihkan dari kotoran yang melekat, kemudian dikeringkan dengan bantuan sinar matahari* Setelah kering bahan ditUmbuk dan diayak dengan pengayak B^q .

2*2 Isolasi senyawa golongan flavonoid2.2.1 Pembuatan ekstrak dengan metode CHARAUX~PARIS

Bahan yang sudah kering ditumbuk, diayak ke - mudian ditimbang (500 g) diekstraksi dengan meta - nol 80 Ekstraksi dilakukan dengan penangas air dalam labu alas bulat yang dibari pendingin balik selama 2 jam, dinginkan dan disaring, Pada residu dilakukan ekstraksi berulang-ulang sampai didapatkan ekstrak yang negatif terhadap uji kromatografi



31

lapisan tipis senyawa golongan flavonoid. Ekstrak yang didapat diuapkan dengan tekanan rendah, sampai didapatkan ekstrak yang kental.Ekstrak kental tersebut ditambah dengan air panas lebih kurang 200 ml, kemudian diaduk sampai homogen dan didinginkan. Fase air dilakukan ekstraksi kocok dengan berbagai macam pelarut antara lain:1. Ekstrak air yang didapat diekstraksi dengan p£

troleum eter sampai fase petroleum eter tidak berwarna, kemudian fase petroleum eter dipisah kan dan diuapkan sampai kering.

2. Fase air hasil pemisahan (1) diekstraksi kemb^ bali dengan eter sampai fase eter tidak berwa£ na.Fase eter dipisahkan dan diuapkan sampai kering.

3. Fase air hasil pemisahan (2)diekstraksi kemba- 1 1 dengan etil asetat sampai fase etil asetat tidak berwarna, kemudian fase etil asetat dipi sahkan dan diuapkan sampai kering.

if. Fase air hasil pemisahan (3) diekstraksi kemb& li dengan n-butanol sampai fase n-butanol ti - dak berwarna, kemudian fase n-butanol dipisahf-' kan dan diuapkan sampai kering.

Semua fase yang didapat diuji kandungan flavonoid nya dengan kromatografi lapisan tipis. Lapisan ti pis yang digunakan adalah lapisan tipis selulose, fase geraknya n-butanol:asam asetatiair = if: 1 :5 * dengan penampak noda pereaksi sitrat borat dalam metanol. Skema isolasi pada halaman berikutnya.



Skema isolasiBahan

metanol | refluk

saringIekstrak metanol diuapkan

ekstrak kentaKditimbang)

air panasdidinginkan

ekstrak air

petroleum eter Fase petroleum"eter Fase air

diekstraksi dengan eterFase eter

diuapkanekstrak kering

I

Fase air +

etil asetatekstraksi kocok

tes KLT Fase etil asetat diuapkan

ekstrak kering 1

tes KLT

Fase air +

n-butanolekstraksi kocok

Fase n-butanol Faseair

diuapkanekstraksi kering

1tes KLT

32



33

2.2 .2 Identifikasi senyawa golongan flavonoid dari masing-masing fase hasil isolasi*

2.2.2.1 Reaksi warna- Reaksi Wiletater.(10)

Masing-masing fase hasil isolasi yang telah didapat dilarutkan dalam metanol p.a , kemudian ditambah 0,5 rol HC1 pekat dan sedikit demi sedikit serbuk Mg sampai jenuh. Pe- rubahan warna yang terjadi diamati setelah 10 menit, kemudian diencerkan dengan air su~ ling sama banyak dan ditambah 1 ml n-butanol. Kemudian perubahan warna ysng terjadi pada kedua lapisan tersebut diamati.

- Reaksi Bate Smith-Metealfe.Masing-masing fase hasil isolasi yang

telah didapat dilarutkan dalam metanol p.a, kemudian ditambah 0,5 ml HC1 pekat. Perubahan warna yang terjadi diamati. Setelah itu dipanAskan 15 menit diatas penangas air, perubahan warna yang tejadi diamati.

2.2.2.2 Kromatografi lapisan tipisBahan : Masing-masing fase hasil isolasi.Lempeng : selulose ^25^Eluen : n-butanol-asamasetat-air = 1+ : 1 : 5

asam asetat-air = 15 • 85

Penampak noda : citrat borat dalam metanol2.3 Pemisahan dan pemurnian2.3 Kromatografi cepat cara vakum

Kromatografi kolom adalah salah satu cara



yang banyak digunakan untuk memisahkan komponen zat dari campurannya* Pemisahan dieini dilaku - kan dengan kromatografi cepat cara vakum. Seba- gai fase diam digunakan mikrokristalin selulose,. sedang fase geraknya digunakan campuran air-metanol dengan berbagai macam perbandingan, yaituair-metanol 100 • 0air-metanol 90 • 10air-metanol = 80 20air-metanol = 70 • 30air-metanol = 60 • 40air-metanol - 50 •

• 50air-metanol k0 • 60air-metanol 30 *• 70air-metanol = 20 •

• 80air-metanol = 10 •

• 90air-metanol 0 •

• 100Volume masing-masing adalah 20 ml.Cara ker.la:- Fase diam dalam keadaan kering dimasukkan ke -

dalam sintered glass, ditekan sarabil dihisap dengan pompa vakum dan permukaannya diratakan.

- Zat yang akan dikromatografi cepat cara vakum dilarutkan dalam sedikit pelarut (metanol) ke* mudian dicampur dengan fase diam sampai rata > dikeringkan, dimasukkan ke dalam sintered glass di atas fase diam yang telah dimarapatkan, kemudian bagian ataBnya ditutup dengan kertassaring*



35

- Fase gerak pertama yaitu air-metanol (100 : 0) sebanyak 20 ml dituangkan ke dalam sintered glass. Untuk merapercepat aliran fase geraknya, fase gerak ditarik dengan pompa hisap sampai cairan tidak raenetes lagi. Cairan tersebut di~ tarapung, diberi kode pada wadahnya.Perlakuan tersebut diulang kembali dengan fase gerak yang sama.

- Sesudah itu fase gerak yang kedua yaitu air-me tanol (90 : 10) dimasukkan ke dalam : sintered glass, kemudian fase geraknya ditarik . dengan pompa hisap lagi sampai cairan tidak rcenetes lagi. Cairan yang diperoleh ditampung, diberi kode pada wadahnya* Begi'tu seterusnya . aampai fase gerak yang terakhir yaitu air-metanol(0 : 100).

- Setelah semua selesai, masing-masing fraksi di lakukan uji kromatografi lapisan tipis.

2 .3*2 Identifikasi senvawa golongan flavonoid hasil kromatoprrafi cepat cara vakum.

2*3*2.1 Reaksi warnaReaksi wilstater

Senyawa yang telah dilarutkan dalam metanol ditambah 0,5 ml HC1 pekat dan sedikit serbuk Mg. Perubahan warna diamati setelah 10 menit, kemudian diencerkan dengan air suling sama banyak dan ditambah 1 ml n-butanol. Perubah an wasma yang terjadi pada kedua lapisan diama ti.



36

2*3»2.2 Krornatografi lapisan tipisBahan : senyawa hasil krornatografi cepat cara

vakum*Fase diam : letnpeng selulose ^254

Eluen : n-butanol-asamasetat-air asam asetat-air = 15 : 85

Penampak noda : pereaksi sitrat borat dalammetanol

2.3*3 Krornatografi kertas preparatlfFraksi yang didapat dari krornatografi ce

pat ca-ra vakum ternyata masih berupa noda yang tak terpisahkan, sehingga dipakai cara kromatografi kertas preparatif. untuk memisahkan noda tersebut.Bahan yang dipakai : fraksi-fraksi hasil kroma-

tografi cepat cara vakum. Fase diam : kertas whatman no 1 Eluen : n-butanol-asam asetat-air = 4 : 1 : 5

asam asetat-air = 15 i 85 Cara kerja- Dasar bejana krornatografi diisi dengan fase

gerak,.didiamkan semalam supaya jenuh.- Larutan zat dalam metanol, kemudian ditotol- -

kan sebagai garis tipis memanjang raulai dari• tepi kertas sampai tepi yang lain dan dibiar- kan kering.

- Fase gerak dimasukkan ke dalam bak pelarut , kemudian fase diam digantungkan dalam bejana dengan batang kaca sebagai penahan ujung atas



37

kertas di dalam bak polarut.Eluasi dihentikan bila fase gerak telah menc& pai batas bawah tertentu.

- Kromatogram yang telah dieluasi dikeringkan untuk menghilangkan sisa-sisa larutan fase ge rak.

- Setelah kromatogram kering kemudian ditentu - kan letak noda-nodanya dengan memakai uap amo nia. Noda-noda yang tampak diberi tanda de-i ngan pensil, kemudian digunting.

- Guntingan kromatogram diekstraksi dengan meta nol untuk melarutkan zat yang raenempel pada kromatogram tersebut, kemudian disaring dan dilakukan identifikasi senyawa flavonoid dengan reaksi warna, kromatografi lapisan tipis dan spektrofotometer lerabayung ultra.

2.3.^ Identifikasi senyawa golongan flavonoid hasilkromatografi kertas preparatif•

2.3.4.1 Reaksi warna- Reaksi Wiletater

Senyawa hasil kromatografi kertas preparatif yang telah dilarutkan dalam metanol p.a ditambah 0,5 ml HC1 pekat dan sedikit serbuk Mg. Perubahan warna diamati setelah 10 menit, kemudian ditambah air suling sama banyak dan 1 ml n-butanol, perubahan warna yang terjadi pada kedua lapisan diamati.



38

2.3*^*2 Krornatografi lapisan tipisBahan : senyawa hasil krornatografi kertas pre

paratif.Fase diam : lempeng seluloseEluen : n-butanol-asam asetat-air = 4 : 1 : 5

asam asetat-air = 15 • 85 Penampak noda : sitrat borat dalam metanol

2.4 Hldrolisa asam Cara kerja

Ditimbang + 50 rag zat hasil krornatografi ke£ tas preparatif, dimasukkan dalam Erlenmeyer, kemu dian ditambah campuran metanol-air (1 : 1) sampai larut dan 10 ml H^SO^ 2N kemudian dipanaskan JO

menit di atas penangas air. Setelah itu didinginkan dan kemudian diekstraksi dengan eter* Dalam corong pisah fase eter dipisahkan dan pada fase eter tersebut ditambah natrium sulfat eksikatus , kemudian disaring dan filtratnya diuapkan sampai kering. Dalam fase eter ini terkandung flavonoid dalam bentuk bebae sedang senyawa gulanya terda - pat dalam fase air. Fase eter yang kering dilakukan identifikasi senyawa golongan flavonoid. Fase air dinetralkan dengan barium karbonat. Endapan barium sulfat yang terjadi disaring dan filtrat - nya diuapkan sampai 1/3 bagian. Pada fase air ini dilakukan identifikasi senyawa gula*

2-4*1 Identifikasi senyawa golongan flavonoid liasil hidrolisa.



39

2.1+.1.1 Reaksi warna- Reaksi Wilstater

. Senyawa hasil hidrolisa dilarutkan dalam metanol p.a kemudian ditambah 0,5 ml HC1 pekat dan sedikit serbuk Mg. Perubahan warna diamati setelah 10 menit, kemudian di tambah dengan air suling sama banyak dan 1 ml n-butanol, perubahan warna yang terjadi pada kedua lapisan diamati.

2.if. 1.2 Kromatografi lapisan tipisBahan : senyawa hasil hidrolisa.Fase diam : lempeng seluloseEluen : n-butanol-asam asetat-air = 4 : 1 : 5

asam asetat-ail* = 15 * 85 Penampak noda : sitrat borat dalam metanol.

2.if.2 Identifikasi senyawa gula dari hasil hidrolisa- Reaksi Molish .

Ke dalara larutan zat dalam air ditambah alfa- naftol 3# dalam etanol dan asam sulfat pekat perlahan-lahan melalui dinding tabung reaksi. Warna cincin yang terjadi diamati.

- Reaksi LuffKe dalam larutan zat dalam air ditambah pere aksi Luff, kemudian dipanaskan diatas pena - ngas air, endapan yang terjadi diamati.

- Reaksi FehlingKe dalam larutan zat dalam air ditambah pere aksi Fehling A dan Fehling B, kemudian dipanaskan di atas penangas air, endapan • yang



terjadi diamati.- Reaksi Barfoed

Ke dalam larutan ditambahkan pereaksi Barfoed, kemudian dipanaskan dlatas penangas air. Endapan yang terjadi diamati.

2.5 Identifikasi dengan spektrofotometer lembayung ultra Bahan: senyawa hasil krornatografi kertas preparatif

dan senyawa hasil hidrolisa.Pelarut dan pereaksi:

- metanol p.a- NaOH padat- NaOAc kristal- H^BO^ kristal- HC1 pekat

Cara kerjaLangkah-langkah yang dilakukan untuk mendapat -

kan enam spektra pada metode ini adalah- Spektra MeOH p. a

Senyawa dilarutkan dalam metanol p.a, kemudian am£ ti dengan spektrofotometer lembayung ultra pada panjang gelombang maksimum 24O-4OO nm, panjang gelombang maksimum yang dihasilkan dicatat

- Spektra NaOMeSenyawa yang dilarutkan dalam metanol p.a, kemudian ditambah natrium hidroksida, panjang gelombang maksimum yang dihasilkan dicatat. Pergeseran panjang gelombang maksimum diamati dengan cara membafi dingkan panjang gelombang maksimum hasil spektra dalam metanol.

40ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA


- Spektra NaOAcSenyawa yang dilarutkan dalam metanol p.a ditambah natrium asetat kristal, panjang gelombang maksimum yang dihasilkan dicatat. Pergeseran pan jang gelombang maksimumnya diamati dengan cara membandingkan panjang gelombang maksimum hasil spektra.tersebut dengan panjang gelombang maksimum hasil spektra dalam metanol.

■ - Spektra NaOAc + H^BO^Senyawa yang dilarutkan dalam metanol p.a ditambah natrium asetat kristal, kemudian ditambah a- sam borat kristal, panjang gelombang maksimum yang dihasilkan dicatat. Pergeseran panjang ge - lombang maksimumnya diamati dengan cara memban - dingkan panjang gelombang maksiraum hasil spektra tersebut dengan panjang gelombang maksimum hasil spektra dalam metanol.

- Spektra AlCl^ + HC1Senyawa yang dilarutkan dalam metanol p.a ditambah aluminium klorida kristal, kemudian ditambah aeam klorida pekat, panjang gelombang maksimum yang dihasilkan dicatat. Pergeseran panjang ge - lombang maksimumnya diamati dengan cara memban - dingkan panjang gelombang maksimum hasil spektra tersebut dengan panjang gelombang maksimum hasil spektra dalam metanol maupun dengan panjang ge - lombang maksimum hasil spektra dalam metanol ditambah aluminium klorida kristal.

Dari keenam spektra tersebut dapat ditentukan go -

klADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA


longan flavonoid dan adanya gugus OH pada atom C tertentu yang terdapat pada golongan flavonoid ter sebut.

42ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA


BAB IV HASIL PENELITIAN

1• Bahan penelitianSebagai bahan penelitian adalah daun dari tanaman Bauhl- nia -purpurea Linn, seeuai dengan yang tercantum pada kun ci determinasi.

2* Isolasi senyawa golongan flavonoid*2.1 Pembuatan ekstrak

Dari ekstraksi yang telah dilakukan dengan pelarut me - tanol, didapat ekstrak kental berwarna hijau kehitaman. Setelah dilakukan ekstraksi kocok dengan metode Charaux -Paris diperoleh hasil sebagai berikut:- Pada fase petroleum eter didapat ekstrak kental ber -

warna hijau kehitaman* (12,5 g)- Pada fase eter didapat ekstrak kental berwarna hijau

kehitamam. ( 1 g )- Pada fase etil asetat didapat ekstrak kental berwarna

merah coklat* (1,7 g)- Pada fase n-butanol didapat ekstrak kental berwarna

merah coklat. (12,4 g)Masing-masing fase diatas dilakukan uji krornatografi 1& pisan tipis untuk memdeteksi kandungan flavonoidnya. Fase diam : lapisan tipis selulose Fase gerak : n-butanol:asam asetat:air = 4 : 1 : 5 Penampak noda : pereaksi sitrat borat dalam metanol. Haoil yang didapat ©operti torlihat pada tabel berikut

43



TABEL V

HASIL KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS DARI FASE PETROLEUM ETER,FASE ETER,FASE E- TIL ASETAT,FASE N-BUTANOL

Fase Penampak noda Warna noda RfPetroleum eter EterEtil asetat N-butanol

sitrat borat sitrat borat sitrat borat sitrat borat

kuningkuning

0,610,59



2.2 Pemisahan dan nemurnianDari hasil kromatografi lapisan tipis di atas terlihat bahwa pada fase petroleum eter dan fase eter tidak di dapatkan noda flavonoid. Noda flavonoid didapatkan pada fase etil asetat dan fase n-butanol* Untuk proses selanjutnya dalam penelitian ini diamni.l fase etil ase tat dan fase n-butanol*Terhadap kedua fase tersebut dilakukan pemisahan rtti- ngan kromatografi kolom cepat cara vakunw Dengan cara tersebut pada masing-masing fase diperoleh 22 fraksi, kemudian dilakukan uji kromatografi lapisan tipis selulose, fase gerak n-butanol~asam asetat-air = k • 1 '• 5 i penampak noda pereaksi sitrat borat dalam

✓

metanol*Hasil yang diperoleh seperti yang terlihat pada tabel VI dan tabel VII.



46

HASIL KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS DARI FASE ETIL ASETAT SETELAH DILAKUKAN PEMISAHAN DE NGAN KROMATOGRAFI CEPAT CARA VAKUM

TABEL VI

Fraksi ke Jumlah noda Warna Harga Rf1 MeOH:air a <1 : 100 1 kuning 0 ,6 2

2 MeOH:air a 0 : 100 3 kuning 0,750,660,58

3 MeOH: air = 10 : 90 3 kuning 0,750,660,53

k MeOH: air. = 10 : 90 3 kuning 0,75

'/

0,660,58

5 MeOH:air « 20 : 60 \ kuning 0,75 '6 MeOH:air = 20 : 80 1 kuning 0,757 MeOH:air * 30 : 70 1 kuning 0,75 !8 MeOH: air = 30 : 70 1 kuning 0,759 MeOH: air a 1*0 : 60 1 kuning 0,7510 MeOH: air = i*0 : 60 1 kuning 0,7511 MeOH:air = 50 : 50 1 kuning 0,7112 MeOH:air . 50 : 50 1 kuning 0,6^13 MeOH:air s 60 : 50 \ kuning 0,60H MeOH: air * 60 : 1,0 1 kuning 0,5915 MeOH:air = 70 : 30 1 kuning 0,14516 MeOH:air = 70 : 30 1 kuning 0,1*517 MeOH:air * SO : 20 1 kuning 0,1*5

16 MeOH:air = 80 : 20 1 kuning 0,4519 MeOH:cir s 90 : 10 1 kuning 0,1*520 MeOH:air = 90 : 10 - - -

21 MeOHtair = 100 : 0 .

22 MeOH:air = 100 : 0 1 * ‘ - -



h7

HASIL KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS DARI FASE N - BUTANOL SETELAH DILAKUKAN PEMISAHAN DE NGAN KROMATOGRAFI CEPAT CARA VAKUM

TABEL VII

F r a k o i ke Jum lah noda Warna Harga

1 MeOIhair = 0 : 100 2 ku n in g 0 ,6 7

0 ,5 9

2 MeOHralr =* 0 : 100 2 ku n in g 0 ,6 7

0 ,5 9

3 MeOIhair ss 10 : 90 2 k un in g 0 ,6 7

0 ,5 9

h MeOHsair = 10 : 90 2 k u n in g 0 ,6 7

0 ,5 9

5 KeOH:air s .20 : 80 2✓

ku n in g 0 ,6 7

0 ,5 9

6 MeOHralr — 2 0 : 80 2 k u n in g 0 ,6 7

0 ,5 9

7 MeOIhair = 30 : 70 - - -

8 MeOHsair = 30 ! 70 - - -

9 MeOIhair = i»0 : 60 - - -

10 MeOIhair * t i 0 : 60 - - -

11 MeOIhair = 50 : 50 - - -

12 MeOIhair = 50 : 50 - - -

13 MoOHsair s 60 : 1*0 - - -

l*f MeOIhair = 60 : k 0 - - -

15 MeOIhair = 70 : 30 - - -

16 MeOIhair = 70 : 30 - - -

t7 MeOIhair = 80 : 20 - - -

18 MeOHtalr = 80 : 20 - - -

19 MeOIhair = 90 : 10 - - -

20 MeOH:air - 90 : 10 - - -

21 MeOIhair = 100 : 0 - - -

22 MeOIhair = 100 : 0 - - -



48

Pada fase etil asetat, fraksi yang mempunyai 3 noda dikumpulkan jadi satu dan fraksi yang mempunyai satu noda dengan harga R^ yang sama juga dikumpulkan jadi' satu.Untuk identifikasi senyawa golongan flavonoid selanjutnya digunakan fraksi 6,7 dan 8 karena pada fraksi yang mempunyai 3 noda, nodanya sulit dipi - sahkan dan fraksi lain yang mempunyai 1 noda konsentrasinya terlalu kecil. Untuk memisahkan koto - ran yang terdapat dalam fraksi 6-8 digunakan kro - matografi kertas preparatif. Hasil pemisahan de ngan krornatografi kertas preparatif tersebut untuk selanjutnya disebut senyawa E.Pada fase n-butanol, untuk identifikasi senyawa go longan flavonoid selanjutnya digunakan fraksi 2 dan .3 yang mempunyai konsentrasi yang lebih besar dibandingkan dengan fraksi lain. Karena fraksi 2 dan 3 mempunyai lebih dari satu noda, maka untuk memisahkannya digunakan krornatografi kertas preparatif. Dari hasil pemisahan dengan krornatografi kertas preparatif didapatkan 2 fraksi, yaitu fraksi bawah yang untuk selanjutnya disebut senyawa A dan fraksi atas yang untuk selanjutnya disebut senyawa B.

2.3 Identifikasi senyawa hasil isolasi2.3.1 Reaksi warna

Dengan pereaksi Wilstater memberikan warna merah yang dapat ditarik dengan metanol.



2.3.2 Krornatografi lapisan tipisDengan menggunakan lapisan tipis selulosa, beberapa fase gerak dan penampak noda pereaksi sitrat borat dalam metanol, hasil yang diperoleh adalah seperti terlihat pada Tabel VIII.

49

TABEL VIII HASIL KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS SENYAWA HASIL ISOLASI

Fase gerak Senyawa Warna noda Hargan-butanol-asam E kuning 0,84

asetat-air = A kuning 0,654 : 1 : 5 ■ B kuning 0,72asam asetat-air E kuning 0,38= 15 : 85 A kuning 0,00

B kuning 0,68

Penampak noda : pereaksi sitrat borat dalam metanol 2*3»3 Spektrofotometer ultra lembavung

Identifikasi senyawa hasil isolasi dengan spektrofotometer ultra lembayung dengan metode pergeseran pan Jang gelombang maksimum, hasil yang diperoleh adalah seperti terlihat pada Tabel IX, X dan XI serta Gam- bar 2;3 ;4;5;6;7 .



50

TABEL IX

DATA HASIL SPEKTR0F0T0METER ULTRA

LEMBAYUNG DARI SENYAWA E

Panjang gelombang Pergeseran panjang

Pereaksimaksimum (nm) gelombang maks.(nm)


MeOH 33k 252 - - FIavo n/Flano- nol 3 OH tersubstitusi

MeOH+NaOH 380 272 k6 OH pada atomC nomor k f (& |

i

MeOH+NaOAc 32k 268 16 OH pada atom i C nomor 7 :

MeOH+NaOAc+H^BO^ 332 25*t 2 OH pada atom

C nomor 3'&k\zi

MeOH+AlCl^MeOH+AlCl,+ HC1 ^

33k

336268

27k2 OH pada atom

C nomor 3'&4\3

MeOH+AXCl,+ HC1 *

336 27k ! 2I

1

OH pada atom C nomor 3&5 0



Gambar 2. Spektra ultra lembayung dari senyawa E(a). Spektra dalam MeOH(b), Spektra dalam NaOMe(c). Spektra dalam NaOAc



52

Gambar 3* Spektra ultra lembayung dari senyawa ESpektra dalam NaOAc+H^BO- * j jSpektra dalam AlCl^ Spektra dalam A1C1^+HC1

(d). (e).

•• if).



53

TABEL X

DATA HASIL SPEKTROFOTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DARI SENYAWA A

Panjang gelombang Pergeseran panjang

Pereaksimaksimum (nm) gelombang maks.(nm)

InterpretasiiBand I Band II Band I Band II

MeOH 353 255 - - FlavonolMeOH+NaOH 398 272 45 OH pada atom

C nomor 4' ©MeOH+NaOAc 372 267 12 OH pada atom

C nomor 7 ©MeOH+NaOAc+H3B03

372 262 \9-

OH pada atom C nomor 3'&4t3

MeOH+AlCl3MeOH+AlCl-+ HC1 ^

392398

270270

6 OH pada atom C nomor 3'&4!S

MeOH+AlCl,+ HCX ^

398i

270.

45j ---------------------

OH pada atom C nomor 5 ©



CA

Gambar i|. Spektra ultra lembayung dari senyawa A(a)* Spektra dalam MeOH(b). Spektra dalam NaOMe(c). Spektra dalam NaOAc



Gambar 5. Spektra ultra lembayung dari senyawa(d). Spektra dalam NaOAc+H^BO^(e). Spektra dalam AlCl^(f)« Spektra dalam AlAl-^+HCl



56

TABEL XI

DATA HASIL SPEKTROFOTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DARI SENYAWA B



PereaksiBand I Band.II Band I Band II

Interpretasi

MeOH y*? 255 — , • Flavon/Flavon- ol 3 OH tersub stitusi

MeOH+NaOH 273 37-

.OH pada atom C nomor V ®

MeOH+NaOAc 366 27if 19 OH apda atom C nomor 7 &

MeOH+NaOAc+H^BO^

352 257 5 OH pada atom C nomor 3 *&V &

MeOH+AlCl^MeOH+AlCl,+ HC1 *

396396

272273

0 OH pada atom C nomor 3 l&ztl &

MeOH+AlCl,+ HC1 5

396 273I . . . . . .

k9 OH pada atom C nomor 5 ©



57

Gambar 6. Spektra ultra lerobayung dari senyawa B(a). Spektra dalara MeOH(b). Spektra dalara NaOMe(c). Spektra dalam NaOAc



!>8

Gambar 7. Spektra ultra lerabayung dari seayav/a B(d). Spektra dalam NaOAc+H-jBO^

j 3(e). Spektra dalam AlCl^(f). Spektra dalam AlCly-HCl



59

Dari Tabel IX dan Gambar 2;3 dapat diketahui bahwa se nyawa E merupakan golongan flavon yang mempunyai gu - gus OH pada atom C nomor 7,3* dan if1.Dari Tabel X dan Gambar **;5 dapat diketahui bahwa senyawa A merupakan golongan flavonol yang mempunyai gu gus OH pada atom C nomor 5>7»3' dan V *Sedang dari Tabel XI dan Gambar 6;7 dapat diketahui bahwa senyawa B merupakan golongan flavon yang mempunyai gugus OH pada atom C nomor 5,7 dan V

2*k Hidrolisa dengan asamPada senyawa E, X maupun B dilakukan hidrolisa dengan asam sulfat 2N. Dipanaskan selama 15 menit, setelah itu dilakukan ekstraksi kocok dengan eter untuk menarik aglikonnya. Setelah fase eter diuapkan pada senyawa E didapatkan serbuk amorf berwarna kuning ( senyawa E j K Pada senyawa A didapatkan serbuk amorf ber warna kuning (senyawa A^)« Pada senyawa B didapatkan serbuk amorf berwarna kuningC senyawa B^}.Fase air yang mengandung asam sulfat dinetralkan de - ngan barium karbonat, kemudian endapan barium sulfat yang terjadi disaring. Fase air yang mengandung gula digunakan untuk identifikasi senyawa gula*

2*5 Identifikasi senyawa hasil hidrolisa 2*5*1 Reaksi warna Wilstater

Dengan pereaksi Wilstater memberikan v/arna merah yang dapat ditarik dengan n-butanol.

2.5.2 Kromatografi lapisan tipisDengan menggunakan lapisan tipis selulosa, beberapa



60

fase gerak dan penampak noda pereaksi sitrat borat dalam metanol, hasil yang didapat adalah seperti terlihat pada Tabel XII*

TABEL XII

HASIL KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS SENYAWA HASIL HIDROLISA

Fase gerak Senyawa Warna noda Harga Rn-butanol-asam E1 kuning 0,85asetat-air = A. kuning o , a e

4 : 1 : 5 B. kuning 0,85asam asetat-air E kuning 0,01*= 15 : 85' Ai kuning 0,00

B1 kuning 0,02

Penampak noda : pereaksi sitrat borat dalam metanol*2.5*3 Spektrofatometer ultra lemba.yung

Identifikasi senyawa hasil hidrolisa dengan spektrofotometer ultra lembayung dengan inetode pergeseran panjang gelombang maksimum, diperoleh hasil seperti terlihat pada Tabel XIII,XIV,XV dan Gambar 8;9;10;114

12;13-



61

TABEL XIII

DATA HASIL SPEKTROFOTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DARI SENYAWA

Panjang gelombang Pergeseran panjangmaksimum (nm) gelombang maks.(nm)

Pereaksi InterpretasiBand I Band II Band I Band II

MeOH 364 254 - - FlavonolMeOH+NaOH 410 276 ^6 OH pada atom

C nomor 4 ’ €■MeOH+NaOAc 376 272 18 OH pada atom

C nomor 7 0MeOH+NaOAc+H^BO^

364 269 0 ' OH pada atom C nomor

MeOH+AlCl^MeOH+AlCl,+ HC1 ^

422

424270270

2 OH pada atom C nomor 3*^4 ‘6

MeOH+AlCl,+ HC1 ^ 424 270 60 OH pada atom

C nomor 3&5



62

Gambar 8* Spektra ultra lerabayung dari senyawa(a). Spektra dalam MeOH(b). Spektra dalam NaOMe(c). Spektra dalam NaOAc

I



TABEL XXV

DATA HASIL SPEKTROFOTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DARI SENYAWA A

P.ereaksi




MeOH 364 269 - - FlavonoXMeOH+NaOH 400 272 36 OH pada atom

C nomor 4'MeOH+NaOAc 380 273 4 OH pada atom

C nomor 7 Q)

MeOH+NaOAc+ H,BO- 3 3

347 270 17 ' OH pada atom C nomor 3'&4!(+

MeOH+AlCljMeOH+AlCl,+ HC1 3

424426

269271

2*

OH pada atom C nomor 3'&4!&

MeOH+AlCX3+ 426 271 62

4---------------------------------------------------------------

OH pada atom C nomor 3&5 G



65

Gambar 10. Spektra ultra lembayung dari senyawa(a ).« Spektra dalam MeOH(b). Spektra dalam NaOMe

. (c). Spektra dalam NaOAc

A.



66

! i:

II

tiILi_U

iii

i.i

Ip

I.:.

Qambar 11. Spektra ultra lembayung dari senyawa(d). Spektra dalara NaOAc+H,BO,(e)« Spektra dalam AlCl-(f). Spektra dalam AlCly-HCl



67

TABEL XV

DATA HASIL SPEKTROFOTOMETER ULTRA LEMBAYUNG DARI SENYAWA B1

• Panjang gelombang maksimum (nm)

Pargeaeran panjang gelombang maks#(nm)

InterpretasiPereaksiBand I Band II Band I Band II

MeOH 362 254 - - FlavonolMeOH+NaOH 412 273 50 OH pada atom

C nomor 3&4'(+)MeOH+NaOAc 374 272 18 OH pada atom

C nomor 7 ©MeOH+NaOAc+h3bo5

362 266 0 " OH pada atom C nomor 3'&4t

MeOH+AlCl^MeOH+AlCl,+ HCX ^

424424

270

2700 OH pada atom

C nomor 3 f&413

MeOH+AlCl,+ HCI ^ , 424 270 62 OH pada atom

C nomor 3&5 @



68

Gambar 12. Spektra ultra lembayung dari senyawa B 1

(a). Spektra dalam MeOH(b)* Spektra dalam NaOMe(c). Spektra dalam NaOAc



69

Gambar 13* Spektra ultra lembayung dari senyawa B(d). Spektra dalam NaOAc+H^BO^(e). Spektra dalam AlCl^(f). Spektra dalam'AlCl^+HCl



70

2.5*4 Identifikasi senyawa gulaHaeil identifikasi senyawa gula hasil hidrolisa seperti terlihat pada Tabel XVI

TABEL XVI

HASIL IDENTIFIKASI SENYAWA GULA HASIL HIDROLISA

Pereaksi Senyawa HasilMolisch E (?) cincin warna ungu

A (±) cincin warna unguB (+) cincin warna ungu

Luff E © endapan merah bata. A G> endapan merah bata

‘ B <3' endapan merah bataFehling E © endapan merah bata

A @ endapan merah bataB ® endapan merah bata

Barfoed E @ endapan merah bataA 0

B © endapan merah bata



71

O 0

Gambar 14* Kromatogram senyawa hasil isolasi (2) dan senyawa hasil hidrolisa (£^)Lapisan tipis : selulosaFaeo gerak : n-butanol~asam acetat-

air = 4 : 1 : 5 Penampak noda : pereaksi sitrat borat

dalam metanol.



72

0

0

A A ,

Gambar 15* Kromatogram senyawa hasil isolasi (A) dan senyawa hasil hidrolisa (A^)Lapisan tipis : selulosaFase gerak : n-butanol-af^masetat-air =

4 : 1 : 5Penampak noda : pereaksi sitrr.t borat dalam

metanol.



75

0 0

I

&

Gambar 16. Kromatogram senyawa hasil isolasi (B) dan senyawa hasil hidrolisa (B^)Lapisan tipis : selulosaFase gerak : n-butanol-asam asetat-air =

4 : 1 : 5Penampak noda : pereaksi sitrat borat dalam

metanol



BAB V

PEMBAHASAN

Bauhinia purpurea Linn adalah salah satu tumbuhan obat yang digunakan untuk obat tradisional di Indonesia karena getah daunnya yang dapat digunakan untuk mengobati batuk ( batuk rejan. Karena daun Bauhinia purpurea Linn ini dapat digunakan sebagai bahan pengobatan, maka dalam penelitian X ni dipilih daun sebagai bahan penelitian.Dari hasil skrining yang telah dilakukan terhadap Bauhinia purpurea Linn dengan menggunakan kromatografi kertas ditemu kan adanya noda flavonoid.Berdasarkan hal tersebut penelitian ini dilakukan untuk mengetahui senyawa golongan flavonoid yang dapat diisolasi d& ri daun Bauhinia purpurea Linn.

Untuk isolasi senyawa golongan flavonoid dipilih metode Charaux-Paris oleh karena pada metode ini hasil isolasi senyawa flavonoid dapat dipisahkan berdasarkan kelarutannya. Larutan pengekstraksi yang riigunakan adalah metanol karena senyawa golongan flavonoid mudah larut dalam cairan pengek^ traksi tersebut, selain itu metanol harganya relatif lebih murah juga hasilnya cukup baik.

Ekstraksi dengan petroleum eter dilakukan terlebih dahulu sebelum dilakukan pemisahan dengan eter, etil asetat, dan n-butanol bertujuan agar senyawa lain misal lemak-lemak zat lilin dan klorofil yang ikut terekstraksi oleh metanol dapat ditarik oleh petroleum eter sehingga tidak mengganggu tahap selanjutnya dan juga bertujuan untuk menarik aglikon yang mungkin ada.

7k



75

Uji kromatografi lapisan tipis dengan fase diara lapisan tipis selulosa dan fase gerak n-butanol:asam asetat:air= if : 1 : 5» untuk mendeteksi senyawa golongan flavonoid da - lam fase eter, etil asetat dan n-butanol.

Dari hasil kromatografi lapisan tipis fase petroleum eter, fase eter, fase etil asetat, fase n-butanol, ternyata yang menunjukkan hasil positif adalah fase etil asetat dan fase n-butanol dengan warna noda kuning dengan harga R^0,6l dan 0,59* Maka untuk tahap selanjutnya dalam penelitian ini digunakan kedua fase tersebut,

Untuk pemurnian dilakukan kromatografi kolom cepat cara vakum yang memerlukan waktu relatif lebih cepat dalam pe ngerjaannya* Fase diam yang digunakan mikrokristal selulosa

«dan fase gerak metanol-air dalam berbagai perbandingan.Pada fase etil asetat dan fase n-butanol masing-masing did^ patkan 22 fraksi. Fraksi-fraksi yang mempunyai harga Rfyang sama dan mempunyai konsentrasi yang cukup besar, dikumpul - kan dan digunakan untuk proses selanjutnya.Pada fase etil asetat, identifikasi senyawa golongan flavonoid selanjutnya digunakan fraksi 6-8, karena pada fraksi 2 -4 yang mempunyai noda lebih dari satu, nodanya sulit dipi sahkan dan fraksi lain yang mempunyai 1 noda konsentrasinya terlalu kecil.Pada fase n-butanol, identifikasi senyawa golongan flavonoid selanjutnya digunakan fraksi 2 dan 3 > karena konsentrasi nya lebih besar dibandingkan dengan fraksi lain* Karena fraksi 2 dan 3 mempunyai lebih dari satu noda , maka untuk meraisahkannya digunakan kromatografi kertas preparatif.Dari hasil pemisahan dengan kromatografi kertas preparatif



76

didapatkan..2 .frakai, yaitu fraksi atas dan fraksi bawah.Setelah dilakukan identifikasi dengan reaksi warna dan

kromatografi lapisan tipis terhadap zat hasil isolasi yang belum dihitlrolisa raaupun yang sudah dihidrolisa, dilakukan juga identifikasi dengan spektrofotometer ultra lembayung dengan mengamati panjang gelombang maksimum serta pergeser- annya yang disebabkan penambahan pereaksi-pereaksi tertentu

Pada senyawa E, spektra MeOH menunjukkan bahwa zat teT sebut memiliki puncak pada panjang gelombang 334 nm (Bandl) dan 252 nm (Band II). Hal ini menunjukkan bahwa senyawa E merupakan golongan flavon /flavonol 3 OH tersubstitusi* Pada spektra NaOMe menunjukkan bahwa senyawa E mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 46 nm pada Band I dibanding dengan spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 4'-pada senyawa E. Spektra NaOAc menunjukkan bahwa senyawa E mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 16 nm pada Band II dibanding dengan spektra dalam- MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa E mempunyai . t*. gugus OH pada atom C nomor 7* Spektra NaOAc dan H^BO^ pada senyawa E menunjukkan adanya pergeseran hipsokromik sebesar 2 nm pada Band I dibanding dengan spektra dalam MeOH. Hal ini me nunjukkan tidak adanya gugus OH pada atom C nomor 3 l&4,pada senyawa E. Spektra AlCl^ dan HC1 pada senyawa E menunjukkan adanya pergeseran bathokromik sebesar 2 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan tidak ad& nya gugus OH pada atom C nomor 3 dan 5*

Pada senyawa E^, spektra MeOH menunjukkan bahwa zat tersebut mempunyai panjang gelombang maksimum 364 nm pada Band I dan 254 nm pada Band II. Hal ini menunjukkan



77

bahwa senyawa E^ merupakan golongan flavonol yang umumnya mempunyai panjang gelombang maksimum pada Band I terletak antara 352-385 nm dan pada Band XI terletak antara 250-275 nm. Spektra NaOMe pada senyawa E 1 menunjukkan adanya perge seran bathokromik sebesar 46 nm pada Band I bila dibanding spektra dalarc MeOH* Hal ini menunjukkan .bahwa senyawa E

mempunyai gugus OH pada atom C nomor Spektra NaOAc pada senyawa E^ menunjukkan adanya pergeseran bathokromik se besar 18 nm pada Band II bila dibandingkan spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa E^ mempunyai gugus OH pada atom C nomor 7. Spektra NaOAc dan H^BO^ pada senyawa E^ tidak menunjukkan adanya pergeseran panjang gelom - bang maksimum pada Band I bila dibandingkan spektra dalam MeOH* Hal ini menunjukkan bahwa senyawa E 1 tidak mempunyai gugus OH pada atom C nomor 3 ,& V « Spektra AlCl^ dan HC1 p£ da senyawa E-j menunjukkan adanya pergeseran bathokromik se besar 60 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 3 dan 5 pada senyawa E^.Berdasarkan hasil spektra diatas menunjukkan bahwa"senyawa E merupakan/senyawa-golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada atom C nomor 7 dan if* dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3 dan 5*

Pada senyawa A, spektra MeOH menunjukkan zat tersebut memiliki puncak pada panjang gelombang 353 nm (Band I) dan 255 nm (Band II). Hal ini menunjukkan bahwa senyawa A meru pakan golongan flavonol yang umumnya mempunyai panjang gelombang maksimum pada Band I terletak antara 352-385 nm dan pada Band II terletak antara 250-275 nm.



78

Pada spektra NaOMe menunjukkan bahwa senyawa A mempunyai per geseran bathokromik sebesar 45 nm pada Band I bila dibanding 6pektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 4' pada senyawa A. Pada spektra NaOAc menunjukkan bahwa senyawa A mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 12 nm pada Band II bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal i- ni menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 7 pada se - nyawa A* Pada spektra NaOAc dan H^BO^ mentonjukkan bahwa se - nyawa A mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 19 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 3* & 4 1 pada senyawa A. Pada spektra AlCl^ dan HC1 menunjukkan bahwa senyawa A mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 45 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor **5 pada senyawa A*

Pada senyawa A^, spektra MeOH menunjukkan bahwa zat ■ tersebut memiliki puncak pada panjang gelombang 364 nm pa - da Band I dan 269 nm pada Band II. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa A 1 merupakan senyawa golongan flavonol. Pada spektra NaOMe menunjukkan bahwa senyawa Aj mempunyai per - geseran bathokromik sebesar 36 nm pada Band I bila diban - ding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 4' pada senyawa A 1 • Pada spektra NaOAc ... menunjukkan bahwa senyawa A^ mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 4 nm pada Band II bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor7 pada senyawa A^ . Pada spektra NaOAc dan H^BO^ menunjukkan bahwa senyawa Aj mempunyai pergeseran hipsokromik sebesar 17 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH.



79

Hal ini menunjukkan bahwa senyawa A^mempunyai gugus OH pada atom C nomor 3 1 & V * Pada spektra AlCl^ dan HC1 menunjuk - kan bahwa senyawa A 1 mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 62 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH.Hal ini menunjukkan bahwa eenyawa A^ mempunyai gugus OH pada atom C nomor 3 <*an 5*Berdasarkan hasil spektra diatas menunjukkan bahwa senyawaA merupakan senyawa golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada atom C nomor 5*7>3' & 4' dengan mengikat senyawa gij la pada atom C nomor 3*

Pada senyawa B, spektra MeOH menunjukkan bahwa zat tersebut memiliki puncak pada panjang gelombang 347 nm ( Band I ) dan 255 nm ( Band II ). Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B merupakan golongan flavon/flavonol 3 OH tersub stitusi. Pada spektra NaOMe menunjukkan bahwa senyawa B merg punyai pergeseran bathokromik sebesar 37 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B mempunyai gugus OH pada atom C nomor 4'. Pada spektra NaOAc menunjukkan bahwa senyawa B mempunyai perge - seran bathokromik eebesar 19 nm pada Band II bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B mem punyai gugus OH pada atom C nomor 7. Pada spektra NaOAc dan H^BO^ menunjukkan bahwa senyawa B mempunyai pergeseran ba - kromik sebesar 5 nm pada Band I bila dibanding spektra da - lam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B tidak mempu - nyai gugus OH pada atom C nomor 3' & 4 1* Pada spektra AlCl^ dan HC1 menunjukkan bahwa senyawa B mempunyai pergeseran ba thokromik sebesar49 nm pada Band I bila dibanding dalam .



80

spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 5 pada senyawa B.

Pada senyawa Bj, spektra MeOH menunjukkan bahwa zat tersebut memiliki puncak pada panjang gelombang 362 nm (Band I) dan 254 nm (Band II), Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B^ merupakan golongan flavonol. Pada spektra NaOMe menunjukkan bahwa senyawa B^ mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 50 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B^ mempunyai gugus OH pada atom C nomor 3 dan 4*• Pada spektra NaOAc menunjukkan bahwa senyawa B^ mempunyai pergeseran bathokromik sebe- sarl8 nm pada Band II bila dibanding spektra dalam MeOH.Hal ini menunjukkan adanya gugus OH pada atom C nomor 7 Pa da senyawa B 1# Pada spektra NaOAc dan H^BO^ menunjukkan baij wa senyawa B^ tidak mempunyai pergeseran panjang gelombang maksimum pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH.Hal ini tidak menunjukkan adanya adanya gugus.OH pada atom C nomor 3* & .4* pada senyawa B^. Pada spektra AlCl^ dan HC1 menunjukkan bahwa senyawa B^ mempunyai pergeseran bathokromik sebesar 62 nm pada Band I bila dibanding spektra dalam MeOH. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa B^ mempunyai gugus OH pada atom C nomor 3 dan 5*Berdasarkan hasil spektra diatas menunjukkan bahwa senyawa B merupakan senyawa golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada atom C nomor 5>7 dan 4' dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3*

Senyawa gula hasil hidrolisa dari senyawa E, A dan B dengan reaksi warna memberikan hasil positif. Dengan pere - aksi Molisch senyawa E, A dan B memberikan hasil positif



81

yaitu cincin warna ungu, demikian juga dengan pereaksi Feh ling dan pereaksi Luff senyav/a E, A dan B memberikan haeil positif berupa endapan merah bata. Dengan pereaksi Barfoed hanya senyawa E dan B yang menunjukkan hasil positif beru^ pa endapan merah bata. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa gula hasil hidrolisa merupakan gula mereduksi.



BAB VI

KESIMPULAN DAN SARAN

Berdasarkan hasil.penelitian yang didapat dapat disimpulkan sebagai berikut:1• Dari tanaman Bauhinia purpurea Linn dapat diisolasi se

nyawa golongan flavonoid dalam bentuk glikosida.2. Identifikasi dengan spektrofotometer ultra lembayung me

nunjukkan bahwa senyawa hasil isolasi adalah:Senyawa E merupakan 3enyawa golongan flavonol yang mem - punyai gugus OH pada atom C nomor 7 & V dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3 danSenyawa A merupakan senyawa golongan flavonol yang mem - punyai gugus OH pada atom C nomor 5»7*3'&V dengan mengi. kat senyawa gula pada atom C nomor 3*Senyawa B merupakan senyawa golongan flavonol yang mem - punyai gugus OH pada atom C nomor 5>7&V dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3*

Untuk kelanjutan dari penelitian diatas disarankan:Penentuan struktur senyawa gula pada hasil isolasi seny& wa golongan flavonoid dari daun p^hin^^ purpurea Linn.

82



RINGKASAN

Bauhinia purpurea Linn adalah salah satu tjunbuhan obat yang digunakan untuk obat tradisional di Indonesia karena getah daunnya yang dapat digunakan untuk mengobati batuk, batuk reJan.Dari hasil penelitian pendahuluan tanaman ini mengandung se nyawa golongan flavonoid.Isolasi dilakukan dengan raetode CHARAUX^PARIS. Pda fase e - til asetat dan fase n-butanol mengandung senyawa golongan . flavonoid.Untuk pemurnian dilakukan krornatografi kolom cepat cara vakum yang menggunakan fase diam mikrokristalin selulosa se - dang fase geraknya campuran metanol-air dalam berbagai perbandingan.Dari fase etil asetat didapat serbuk amorf berwarna kuning yang selanjutnya disebut senyawa E.j.Dari fase n-butanol didapat serbuk amorf berwarna kuning yang selanjutnya disebut senyawa A^ dan senyawa • Identifikasi dengan spektrofotometer ultra lembayung menunjukkan bahwa senyawa E merupakan senyawa glikosida flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada atom C no mor 7 dan V dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3 dan 5* Senyawa A merupakan senyawa golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada atom G nomor 5>?>3'&V dengan mengi kat senyawa gula pada atom C nomor 3* Senyawa B merupakan senyawa golongan flavonol yang mempunyai gugus OH pada a - tom C nomor 5j7 8c V dengan mengikat senyawa gula pada atom C nomor 3*

83 '



BAB VII DAFTAR PUSTAKA

1. Corner, E.J.H. 1940* Wayside Trees of Malaya; Volume.I; Printed at the Government Printing Office; Singa - pore; hal: 380*

2. Sudarman Mardieiswoyo dan Harsono Radjakmangunsudarso 1968. Cabe Puyang Wariean Nenek Mo.yang: jilid I. ce- takan kedua; Prapanca; Jakarta; hal: 22.

3. Darnley Gibbs, 1950. Botany A Phylogenetic Approach ; The Blakiston Company; Toronto-Philadelphia; hal:377*

4. Prof.DR.E.D.Merril. 1949* De Plantengroei Van de Ma- leise Archiphel: A.W Sijthoff's Vitgeversmij N.V.Leiden; hal: 205-206.

5. Sudarman Mardisiswoyo dan Harsono Radjakmangunsudarso 1968. Cabe Puyang Warisan Nonek Moyang; jilid III. ce takan kedua; Prapanca; Jakarta; hal: 29.

6. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1979. Farma- " kope Indonesia: Edisi III; Jakarta; hal: 780-784.

7. Treas, E.G and Evans, W.C. 1978. Pharmacognosy: 11th- edition; Bailliere Tindall; London; p. 401-404*

8. Heyne,K. 1950. De Nuttlge Pflanten Van Indonesia.Peel1.3 e Druk; N.V. uitgeverijw Van Hoeve's Gravenhage ; Bandung; hal: 226.

9. Backer, C.A and R.C. Bakhuizen Van den Brink. 1963 Flora of Java. Vol I; N.V.P.Noordhoff. Groningen; The Netherlands, p. 533*

10. Fong, H.H.S. et. &1. Phytochemical Screening. College of Pharmacy; University of Illionis at The Medical -

84



85

Centre; Chicago, p. 30-34, 44-45, 55-60.11* UST. Research Centre Staff. 1978- PIvytochemical Micro

biological and Pharmacological Screening of Medicinal plants: University of Santo Thomas; Manila, Philippi -■ ne, p. 13 -1 6 .

12. Ikan, Raphael. 1969# Natural Product; A. Laboratory Ba sic academic Press; London; New York, San Fransisco , p. 1 -2 2.

13- Harborne. J.B. and T. Swain. 1969. Perspective in Phytochemistry: Academic Press; London and New York, p . 1-30.

14- Peach, K and Tracey. 1975* Moderne Methoden der Plan - zenalvse. Dritter band; Springer Verlag; Berlin; p . 450-458.

15* Noor Ifansyah. 1982. Recccherches Phytochimiques et PharmacologiQues sur les Principes actifs de vegetaux utilises comme antih.ypertenseurs en medicine traditio- nelle; Thesis Doctor; Universitss Paul Sabaties; Tou - louse; France, hal: 89-90.

16. Stahl, E. 1969. Thin Layer Chromatography. A Laboratory Hand Book. 2nd edition; Springer Verlag; Berlin , Heidelberg, New York, p. 687-697.

17. Mabry, T.J, Markham, K.R and Thomas, M*B. 1970. The Systematic Identification of flavonoid: Springer V e r lag; New York - Heidelberg Berlin.

18. Zainudin, M. 1982. KromatograTi lapisan tipis* disusun dalam rangka Kursus Instrumental Bagian Farmasi; Fakul tas Kedokteran Universitas Airlangga; Surabaya.



86

19* Acta Pharmaceutica Indonesia* vol. XI, Maret 1986; Ju- rusan Farmasi FMIPA - Institut Tehnologi Bandung; hal;28-31*

20. Vogel, A.I. 1971* A Text-Book of Practical Organic Che mistry including Qualitative Organic Analysis. Third E dition; English language book society and Longman group liraitet, p. 453-454*

21. Macek, K. 1972. Pharmaceutical Aplication of Thin La - yer and Paper Chromatography; Elsevier Publishing Company; Amsterdam - London - New York, p. 569-576.



ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID...

Documents

Transcript of ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID...