1

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Sejak dahulu, banyak tanaman yang digunakan sebagai tanaman obat. Hal

ini dikarenakan banyaknya zat aktif yang terkandung di dalam tanaman tersebut

yang berkhasiat dapat menyembuhkan berbagai penyakit. Biasanya untuk

mengobati penyakit diambil bagian tanaman seperti batang, akar, biji, bunga,

daun, atau kulit batang untuk direbus dan diminum.

Tembelekan (Lantana Camara) merupakan salah satu tanaman yang

berkhasiat obat. Tumbuhan tembelekan digunakan masyarakat secara empiris

untuk mengobati beberapa macam penyakit seperti batuk, luka, peluruh air seni,

peluruh keringat, peluruh haid, penurun panas, obat bengkak, encok dan bisul.

Ekstrak daun Lantana camara mengandung senyawa yang termasuk alelokimia

yaitu lantaden A dan lantaden B yang termasuk golongan terpenoid serta 14

senyawa fenolik. Disebutkan juga bahwa genus Lantana camara mengandung

triterpenoid, flavonoid, fenilpropanoid, furanophthaquinon dan beberapa senyawa

hidrokarbon.

Untuk mengetahui kandungan kimia pada tembelekan maka dilakukan

Penarikan zat aktif dengan metode maserasi dan identifikasi senyawanya dengan

menggunakan pereaksi kimia dan metode KLT.

I. 2 Maksud dan Tujuan Percobaan

I. 2. 1 Maksud Percobaan

Maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui dan memahami

cara ekstraksi dan identifikasi komponen kimia yang terdapat dalam suatu

tumbuhan dengan menggunakan metode tertentu.

2

I. 2. 2 Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengekstraksi daun

tembelekan (Lantana camara) secara maserasi dan mengidentifikasi

komponen kimia yang terkandung di dalamnya dengan menggunakan

pereaksi kimia dan metode kromatografi lapis tipis (KLT)

I. 3 Prinsip Percobaan

I. 3. 1 Prinsip Ekstraksi

Prinsip ekstraksi secara maserasi dilakukan dengan cara

merendam simplisia ke dalam cairan penyari selama 3 x 5 hari dengan

menggunakan pelarut yang sesuai lalu disaring.

I. 3. 2 Prinsip Ekstraksi cair-cair

Prinsip ekstraksi cair cair yaitu pemisahan komponen kimia

diantara 2 fase pelarut yang tidak saling bercampur di mana komponen

kimia akan terpisah ke dalam kedua fase tersebut sesuai dengan tingkat

kepolarannya dengan perbandingan konsentrasi yang tetap.

I. 3. 3 Prinsip Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Prinsip kromatografi lapis tipis yaitu metode pemisahan bahan

alam secara fisikokimia berdasarkan prinsip adsorbsi (penyerapan pada

permukaan sel) dan partisi (penyerapan zat dalam fase diam).

3

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 URAIAN TANAMAN

II.1.1 Klasifikasi Tembelekan

Regnum : Plantae

Subkingdom : Trachebionta

Superdivision : Spermatophyta

Division : Magnoliophyta

Class : Mangnoliopsida

Subclass : Asteridae

Order : Lamiales

Family : Verbenaceae

Genus : Lantana

Spesies : Lantana camara Linn

II.1.2 Sinonim

Nama Daerah : Di Indonesia, tanaman ini dikenal dengan nama

kembang satek, saliyere, tahi ayam, tahi kotok, cente

(jawa), tamanjho (madura), kembang telek, oblo,

puyengan, tembelek, tembelekan, teterapan (sunda)

(Hariana, 2008).

Nama Asing : we se mei (china) (Hariana, 2008)

II. 1. 3 Morfologi Tembelekan

Perdu tegak atau setengah merambat, bercabang banyak, ranting

bentuk segi empat, ada varietas berduri dan ada varietas yang tidak

berduri tinggi + 2 m. Terdapat sampai 1.700 m di atas permukaan laut, di

tempat panas, banyak dipakai sebagai tanaman pagar, bau khas. Daun

tunggal, duduk berhadapan bentuk bulat telur ujung meruncing pinggir

bergerigi tulang daun menyirip, permukaan atas berambut banyak terasa

4

kasar dengan perabaan permukaan bawah berambut jarang. Bunga dalam

rangkaian yang bersifat rasemos mempunyai warna putih, merah muda,

jingga kuning. Buah seperti buah buni berwarna hitam mengkilat bila

sudah matang (Anonim, 2013).

II. 1. 4 Kandungan Kimia dan Efek Farmakologis

Daun tembelekan mengandung lantadene A (0,31-0,68 %), lantadene

B (0,2 %), lantanolic acid, lantic acid, humulene (mengandung minyak

menguap 0,16-0,2 %), -caryophyllene, -terpidene, -pinene, dan p-

cymene. Akar berkhasiat sebagai penurun panas, penawar racun, dan

penghilang sakit. Sementara daun bersifat pahit, sejuk, berbau, dan agak

beracun. Faedah daun untuk menghilangkan gatal (antipruritus),

antitoksik, dan menghilangkan pembengkakan. Adapun bunganya bersifat

manis dan sejuk. Khasiatnya sebagai penghenti pendarahan (hemostatik)

(Hariana, 2008).

II. 1. 5 Bagian Tanaman Yang Digunakan dan Pemanfaatannya

Digunakan daun, batang dan bunga dalam keadaan kering. Tanaman

ini berkhasiat menyembuhkan TBC paru dengan batuk berdarah dan

asmatis, rematik, influenza, TBC kelenjar, keputihan, gatal-gatal, bisul,

bengkak dan memar (Hariana, 2008).

II. 2 EKSTRAKSI

Ekstraksi merupakan proses pemisahan dua zat atau lebih dengan

menggunakan pelarut yang tidak saling campur. Berdasarkan fase yang terlibat,

terdapat dua jenis ekstraksi, yaitu ekstraksi cair-cair dan ekstraksi padat-cair.

Pemindahan komponen dari padatan ke pelarut pada ekstraksi padat-cair melalui

tiga tahapan, yaitu difusi pelarut ke pori-pori padatan atau ke dinding sel, di

dalam dinding sel terjadi pelarutan padatan oleh pelarut, dan tahapan terakhir

adalah pemindahan larutan dari pori-pori menjadi larutan ekstrak. Ekstraksi

padat-cair dipengaruhi oleh waktu ekstraksi, suhu yang digunakan, pengadukan,

dan banyaknya pelarut yang digunakan (Harborne, 1987 ). Tingkat ekstraksi

5

bahan ditentukan oleh ukuran partikel bahan tersebut. Bahan yang diekstrak

sebaiknya berukuran seragam untuk mempermudah kontak antara bahan dan

pelarut sehingga ekstraksi berlangsung dengan baik (Sudarmadji & Suhardi

1996).

Terdapat dua macam ekstraksi padat-cair, yaitu dengan cara sokhlet dan

perkolasi dengan atau tanpa pemanasan (Sabel & Warren 1973 dalam Muchsony

1997). Menurut Brown (1950) dalam Muchsony (1997), metode lain yang lebih

sederhana dalam mengekstrak padatan adalah dengan mencampurkan seluruh

bahan dengan pelarut, lalu memisahkan larutan dengan padatan tak terlarut.

Menurut Harborne (1987), metode maserasi digunakan untuk mengekstrak

jaringan tanaman yang belum diketahui kandungan senyawanya yang

kemungkinan bersifat tidak tahan panas sehingga kerusakan komponen tersebut

dapat dihindari. Kekurangan dari metode ini adalah waktu yang relatif lama dan

membutuhkan banyak pelarut. Ekstraksi dengan metode maserasi menggunakan

prinsip kelarutan.

Prinsip kelarutan adalah like dissolve like, yaitu :

1. Pelarut polar akan melarutkan senyawa polar, demikian juga sebaliknya

pelarut nonpolar akan melarutkan senyawa nonpolar.

2. Pelarut organik akan melarutkan senyawa organik. Ekstraksi senyawa aktif

dari suatu jaringan tanaman dengan berbagai jenis pelarut pada tingkat

kepolaran yang berbeda bertujuan untuk memperoleh hasil yang optimum,

baik jumlah ekstrak maupun senyawa aktif yang terkandung dalam contoh uji.

Prosedur klasik untuk memperoleh kandungan senyawa organik dari

jaringan tumbuhan kering adalah dengan proses ekstraksi berkesinambungan atau

bertingkat dengan menggunakan beberapa pelarut yang berbeda tingkat

kepolarannya (Harborne 1987). Ekstraksi berkesinambungan dilakukan secara

berturut-turut dimulai dengan pelarut nonpolar (misalnya n-heksan atau

kloroform) dilanjutkan dengan pelarut semipolar (etil asetat atau dietil eter)

kemudian dilanjutkan dengan pelarut polar (metanol atau etanol). Pada proses

6

ekstraksi akan diperoleh ekstrak awal (crude extract) yang mengandung berturut

- turut senyawa nonpolar, semipolar, dan polar (Hostettmann et al. 1997). Hasil

ekstrak yang diperoleh tergantung pada beberapa faktor, yaitu kondisi alamiah

senyawa tersebut, metode ekstraksi yang digunakan, ukuran partikel contoh uji,

kondisi dan waktu penyimpanan, lama waktu ekstraksi, dan perbandingan jumlah

pelarut terhadap jumlah contoh uji (Shahidi & Naczk 1991).

II. 2.1 Maserasi

Maserasi merupakan proses perendaman sampel dengan pelarut

organik yang digunakan pada temperatur ruangan. Proses ini sangat

menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena dengan

perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membran

sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel, sehingga

metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut

organik. Selain itu ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur

waktu perendaman yang dilakukan.

Pemilihan pelarut untuk proses maserasi akan memberikan efektifitas

yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan senyawa bahan alam pelarut

tersebut. Secara umum pelarut metanol merupakan pelarut yang paling banyak

digunakan dalam proses isolasi senyawa organik bahan alam karena dapat

melarutkan seluruh golongan metabolit sekunder. Kelemahan isolasi dengan

maserasi adalah waktu pengerjaan lama dan penyarian kurang sempurna.

Macam-macam Maserasi :

a. Digesti

maserasi dengan pemanasan 40-500C

hanya untuk senyawa tahan panas

keuntungan : kekentalan kurang, daya larut naik, kecepatan difusi naik

b. Maserasi dengan pengaduk kontinue

mengurangi waktu hingga menjadi 6-24 jam

7

c. Remaserasi

maserasi beberapa kali

d.Maserasi melingkar

cairan penyari selalu bergerak dan menyebar

e. Maserasi melingkar bertingkat

untuk mendapatkan penyarian yang sempurna

Keuntungan dari metode ini :

1. Unit alat yang dipakai sederhana, hanya dibutuhkan bejana perendam

2. Biaya operasionalnya relatif rendah

3. Prosesnya relatif hemat penyari

4. Tanpa pemanasan

Kelemahan dari metode ini :

1. Proses penyariannya tidak sempurna, karena zat aktif hanya mampu

terekstraksi sebesar 50% saja

2. Prosesnya lama, butuh waktu beberapa hari.

II. 3 KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

Istilah kromatografi berasal dari kata latin chroma berarti warna dan

graphien berarti menulis. Kromatografi pertama kali diperkenalkan oleh

Michael Tsweet (1903) seorang ahli botani dari Rusia. Michael Tsweet dalam

percobaannya ia berhasil memisahkan klorofil dan pigmen-pigmen warna lain

dalam ekstrak tumbuhan dengan menggunakan serbuk kalsium karbonat yang

diisikan ke dalam kolom kaca dan petroleum eter sebagai pelarut. Proses

pemisahan itu diawali dengan menempatkan larutan cuplikan pada permukaan

atas kalsium karbonat, kemudian dialirkan pelarut petroleum eter. Hasilnya

berupa pita-pita berwarna yang terlihat sepanjang kolom sebagai hasil

pemisahan komponen-komponen dalam ekstrak tumbuhan (Alimin, 2007).

Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau

kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak

8

mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat

dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang

berbeda. Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis

silika atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau

plastik yang keras. Jel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam

untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana

dapat berpendar dalam sinar ultra violet. Fase gerak merupakan pelarut atau

campuran pelarut yang sesuai (Clark, 2007).

Kromatografi lapis tipis dikembangkan tahun 1938 oleh Ismailoff dan

Schraiber. Adsorbent dilapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai

penunjang fase diam. Fase bergerak akan merayap sepanjang fase diam dan

terbentuklah kromatogram, ini dikenal juga sebagai kromatografi kolom

terbuka. Metode ini sederhana, cepat dalam pemisahan dan sensitive. Kecepatan

pemisahan tinggi dan mudah untuk memperoleh kembali senyawa-senyawa

yang terpisahkan. Biasanya yang sering digunakan sebagai materi pelapisnya

adalah silika gel, tetapi kadang kala bubuk selulosa dan tanah diatome,

kieselgurh juga dapat digunakan. Untuk fase diam hidrofilik dapat digunakan

pengikat seperti semen Paris, kanji, disperse koloid plastic, silika terhidrasi.

Untuk meratakan pengikat dan zat pada pengadsorpsi digunakan suatu

aplikator. Sekarang ini telah banyak tersedia kromatografi lapis tipis siap pakai

yang dapat berupa gelas kaca yang telah terlapisi, kromatotube dan sebagainya.

Kadar air dalam lapisan ini harus terkendali agar didapat hasil analisis yang

reprodusibel (Khopkar, 2008, hal: 163 164).

Pemilihan sistem pelarut dan komposisi lapis tipis ditentukan oleh

prinsip kromatografi yang akan digunakan. Pada penetesan sampel yang akan

dipisahkan digunakan suatu mikro-syringe (penyuntik berukuran mikro).

Sampel diteteskan pada salah satu bagian tepi pelat kromatografi (sebanyak

0,01 10 g zat). Pelarut harus nonpolar dan mudah menguap. Kolom-kolom

dalam pelat dapat diciptakan dengan mengerok lapisan vertikal searah gerakan

9

pelarut. Teknik ascending digunakan untuk melaksanakan pemisahan yang

dilakukan pada temperature kamar, sampai permukaan pelarut mencapai tinggi

15 18 cm. Waktu yang diperlukan antara 20 40 menit. Semua teknik yang

digunakan untuk kromatografi kertas dapat dipakai juga untuk kromatografi

lapis tipis. Resolusi KLT jauh lebih tinggi dari pada kromatografi kertas karena

laju difusi yang luar biasa kecilnya pada lapisan pengadsorpsi (Khopkar, 2008,

hal: 164).

Zat-zat berwarna dapat terlihat langsung, tetapi dapat juga digunakan

reagent penyemprot untuk dapat melihat bercak suatu zat. Asam kromat sering

digunakan untuk zat organik. Demikian juga penandaan secara radiokimia juga

dapat digunakan, untuk menempatkan posisi suatu zat, reagent dapat juga

disemprotkan pada bagian tepis saja. Bagian yang lainnya dapat diperoleh

kembali tanpa pengotoran dari reagent dengan pengerokan setelah pemisahan

selesai (Khopkar, 2008, hal: 164 165)

Jarak antara jalannya pelarut bersifat relatif. Oleh karena itu, diperlukan

suatu perhitungan tertentu untuk memastikan spot yang terbentuk memiliki

jarak yang sama walaupun ukuran jarak plat nya berbeda. Nilai perhitungan

tersebut adalah nilai Rf, nilai ini digunakan sebagai nilai perbandingan relatif

antar sampel. Nilai Rf juga menyatakan derajat retensi suatu komponen dalam

fase diam sehingga nilai Rf sering juga disebut faktor retensi. Nilai Rf dapat

dihitung dengan rumus berikut:

Rf =

Semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak

bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. Saat

membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang

sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang polar dan berinteraksi

dengan adsorbent polar dari plat kromatografi lapis tipis. Nilai Rf dapat

dijadikan bukti dalam mengidentifikasikan senyawa. Bila identifikasi nilai Rf

10

memiliki nilai yang sama maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki

karakteristik yang sama sedangkan, bila nilai Rfnya berbeda, senyawa tersebut

dapat dikatakan senyawa yang berbeda (Wikipedia, 2012)

II.4 EKTRAKSI CAIR CAIR

Ekstraksi cair-cair (liquid extraction, solvent extraction): cairan

dipisahkan dari cairan pembawa (diluen) menggunakan pelarut cair. Campuran

zat pembawa dan pelarut ini adalah heterogen (tidak saling campur), jika

dipisahkan terdapat 2 fase, yaitu fase pembawa dan fase terlarut (ekstrak).

Perbedaan konsentrasi zat terlarut di dalam suatu fase dengan konsentrasi pada

keadaan setimbang merupakan pendorong terjadinya pelepasan zat terlarut dari

larutan yang ada. Gaya dorong (driving force) yang menyebabkan terjadinya

proses ekstraksi dapat ditentukan dengan mengukur jarak sistem dari kondisi

setimbang. Fase residu berisi cairan pembawa dan sisa zat terlarut. Fase ekstrak

berisi zat terlarut dan pelarut.

Pada ekstraksi cair-cair, satu komponen bahan atau lebih dari suatu

campuran dipisahkan dengan bantuan pelarut. Proses ini digunakan secara teknis

dalam skala besar misalnya untuk memperoleh vitamin, antibiotika, bahan-bahan

penyedap, produk-produk minyak bumi dan garam-garam. logam. Proses ini pun

digunakan untuk membersihkan air limbah dan larutan ekstrak hasil ekstraksi

padat cair. Ekstraksi cair-cair terutama digunakan, bila pemisahan campuran

dengan cara destilasi tidak mungkin dilakukan (misalnya karena pembentukan

azeotrop atau karena kepekaannya terhadap panas atau tidak ekonomis. Seperti

halnya pada proses ekstraksi padat-cair, ekstraksi cair-cair selalu terdiri atas

sedikitnya dua tahap, yaitu pencampuran secara intensif bahan ekstraksi dengan

pelarut, dan pemisahan kedua fase cair itu sesempurna mungkin.

Pada saat pencampuran terjadi perpindahan massa, yaitu ekstrak

meninggalkan pelarut yang pertarna (media pembawa) dan masuk ke dalam

pelarut kedua (media ekstraksi). Sebagai syarat ekstraksi ini, bahan ekstraksi dan

pelarut tidak saling melarut (atau hanya dalam daerah yang sempit). Agar terjadi

11

perpindahan masa yang baik yang berarti performansi ekstraksi yang besar

haruslah diusahakan agar terjadi bidang kontak yang seluas mungkin di antara

kedua cairan tersebut. Untuk itu salah satu cairan distribusikan menjadi tetes-

tetes kecil (misalnya dengan bantuan perkakas pengaduk). Tentu saja

pendistribusian ini tidak boleh terlalu jauh, karena akan menyebabkan

terbentuknya emulsi yang tidak dapat lagiatau sukar sekali dipisah. Turbulensi

pada saat mencampur tidak perlu terlalu besar. Yang penting perbedaan

konsentrasi sebagai gaya penggerak pada bidang batas tetap ada. Hal ini berarti

bahwa bahan yang telah terlarutkan sedapat mungkin segera disingkirkan dari

bidang batas. Pada saat pemisahan, cairan yang telah terdistribusi menjadi tetes-

tetes dan menyatu kembali menjadi sebuah fase yang homogen dan berdasarkan

perbedaan kerapatan yang cukup besar dapat dipisahkan dari cairan yang lain.

Kecepatan pembentukan fase homogen yang diikuti dengan menentukan output

sebuah ekstraktor cair-cair. Kuantitas pemisahan persatuan waktu dalam hal ini

semakin besar jika permukaan lapisan antar fase di dalam alat semakin luas.

Pertimbangan pemakaian proses ekstraksi sebagai proses pemisahan antara lain:

1. Komponen larutan sensitif terhadap pemanasan jika digunakan distilasi

meskipun pada kondisi vakum

2. Titik didih komponen-komponen dalam campuran berdekatan

3. Kemudahan menguap (volatility) komponen-komponen hampir sama.

Untuk mencapai proses ekstraksi cair-cair yang baik, pelarut yang

digunakan harus memenuhi kriteria sebagai berikut :

1. Kemampuan tinggi melarutkan komponen zat terlarut di dalam campuran.

2. Kemampuan tinggi untuk diambil kembali.

3. Perbedaan berat jenis antara ekstrk dan rafinat lebih besar.

4. Pelarut dan larutan yang akan diekstraksi harus tidak mudah campur.

5. Tidak mudah bereaksi dengan zat yang akan diekstraksi.

6. Tidak merusak alat secara korosi.

7. Tidak mudah terbakar, tidak beracun dan harganya relatif murah.

12

Penggunaan ekstraksi cair-cair, ekstraksi jika dibandingkan dengan

distilasi, mempunyai banyak keuntungan, mengingat:

1. Distilasi membutuhkan panas yang besar, misalnya pada larutan dengan

relative volatility sangat dekat.

2. Pemisahan pada proses distilasi akan mengalami kesulitan untuk komponen-

komponen azeotrop.

3. Komponen-komponen di dalam larutan dapat rusak dalam proses pemanasan.

4. Jika komponen yamg akan dipisahkan mempunyai perbedaan sifat fisika yang

kecil

Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa ektraksi dpakai jika proses

distilasi dianggap kurang praktis atau terlalu mahal biaya operasionalnya, atau

jika destilasi tidak mampu untuk memisahkannya. Ekstraksi akan lebih praktis

dibanding destilasi jika kemampuan mudah berubahnya cairan ke bentuk gas

(relative volatility) kedua komponen sangat dekat yaitu antara 1,0 dan 1,2. Selain

itu, ekstraksi cair-cair lebih ekonomis daripada destilasi atau steam stripping pada

pengolahan limbah cair, jika relative volatility dari larutan terhadap air kurang

dari 4.

13

BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

III.1. Alat dan bahan

III.1. Alat yang digunakan

Alat yang digunakan adalah 2 buah bejana maserasi, batang

pengaduk, cawan porselin, chamber, corong kaca, corong pisah,

erlenmeyer, eksikator, gelas kimia, gelas ukur, lampu uv 254 nm dan 366

nm, lempeng klt GF 254, lemari pengering, oven, pengayak no.14, pipa

kapiler, pipet tetes, rak tabung, tabung reaksi, timbangan digital

III.2. Bahan yang digunakan

Bahan yang akan digunakan adalah daun tembelekan (Lantana

Camara Linn.), air suling, aluminium foil, asam klorida (HCl), eter, etil

asetat, FeCl3, H2SO4 10%, n- heksan, kloroform, metanol, NaCl, pereaksi

dragendorf, pereaksi mayer, pereaksi wagner, dan serbuk mg.

III.2. Metode kerja

III.2.1. Sumber sampel

Daun tembelekan diambil dari sekitar kampus Sekolah Tinggi

Ilmu Farmasi Makassar pada bulan Oktober 2013.

III.2.2. Pengolahan Sampel

Mengumpulkan bahan baku daun tembelekan, kemudian

dilakukan sortasi basah yakni memisahkan daun tembelekan dari

sampah yang mungkin terikut saat penggumpulan. Dilakukan

pencucian dengan air mengalir, dirajangan dan dikeringkan dengan cara

diangin-anginkan. Selanjutnya dilakukan sortasi kering untuk

memisahkan sampel yang baik untuk dilanjutkan proses ekstraksi.

III.2.3. Ekstraksi dengan Pelarut Metanol

Sampel daun tembelekan (Lantana Camara Linn.) diekstraksi

dengan menggunakan metode maserasi. Cara kerjanya yaitu:

14

1. Ditimbang sampel daun tembelekan sebanyak 200 g yang telah

diayak terlebih dahulu menggunakan pengayak no 14 dan 18 mesh.

2. Dimasukkan sampel kedalam bejana maserasi yang telah

dibersihkan terlebih dahulu.

3. Ditambahkan pelarut metanol 1400 mL ke dalam bejana maserasi

yang berisi sampel hingga sampel terbasahi.

4. Ditutup rapat bejana maserasi dan didiamkan selama 3 hari

ditempat yang gelap atau terlindung dari cahaya dan sesekali di

aduk.

5. Setelah 3 hari , dilakukan penyaringan dengan menggunakan kain

flannel.

6. Filtrat ditampung dan diuapkan untuk mendapatkan ekstrak kental

metanol dari daun tembelekan.

7. Hasil ekstrak diuji kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam

sampel, meliputi Tanin, steroid, saponin dan alkaloid.

8. Dilakukan pemisahan dan pemurnian dengan teknik ECC (Ekstrak

Cair-Cair) dan uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis)

III.2.4. Pemeriksaan Pendahuluan Komponen Kimia Ekstrak Tembelekan

1. Tes Alkaloid Sampel

a. Sampel ditambahkan 2mL HCl 2N.

b. Ditambahkan larutan NaCl sebanyak 1 mL.

c. Disaring filtratnya .

d. Ditambahkan HCl 2 mL, dibagi menjadi 3 campuran dalam tabung

reaksi.

Tabung 1 ditambahkan pereaksi dragendrof.

Tabung 2 ditambahkan 1 mL pereaksi mayer.

Tabung 3 ditambahkan 1 mL pereaksi wagner.

e. Diamati warna endapan

15

2. Tes Flavonoid

a. Sampel ditambahkan 5 mL air.

b. Ditambahkan 5 mL N-Heksan, dikocok dan dipisahkan (1 & 2)

1. Heksan ditambahkan 0,5 mL HCl pekat kemudian dipanaskan

diatas hot plate.

2. Fase methanol ditambahkan 0,5 mL HCl pekat, ditambahkan

serbuk mg.

c. Di amati perubahan warna.

3. Tes Saponin

a. Ekstrak ditambahkan air panas.

b. Dikocok dengan kecepatan konstan selama 1 menit.

c. Diukur tinggi buih

d. Ditambahkan 5 tetes HCl

e. Diukur tinggi buih

4. Tes Tannin

a. Ekstrak ditambahkan air panas.

b. Ditambahkan 5 tetes NaCl, kocok.

c. Ditambahkan larutan FeCl3

d. Diamati perubahan warna.

III.2.5. Ekstraksi cair-cair dengan pelarut eter dan etanol

1. Ditimbang 10 gram sampel

2. Ditambahkan 20 mL aquadest dan masukkan ke corong pisah

3. Ditambahkan 20 mL eter, lalu kocok corong pisah dan diamkan hingga

terbentuk 2 lapisan

4. Diambil lapisan eter (I) untuk di uapkan dan lapisan air di masukkan

kembali kedalam corong pisah

5. Ditambahkan 20 mL kloroform ke dalam corong pisah, dikocok dan

didiamkan hingga terbentuk 2 lapisan ;

16

6. Diambil lapisan kloroform (II) untuk di uapkan dan lapisan air di

masukkan kembali ke corong pisah ;

7. Ditambahkan 20 mL etil asetat ke dalam corong pisah, dikocok dan

didiamkan hingga terbentuk 2 lapisan ;

8. Diambil lapisan etil asetat (III) untuk di uapkan dan lapisan air di ambil

setengahnya (IV) di masukkan dalam tabung reaksi dan disimpan dalam

lemari es untuk uji selanjutnya ;

9. Di kumpulkan beberapa fraksi pelarut yakni 4 fraksi dari proses di atas

dan 1 fraksi yaitu ekstrak kental untuk di lanjutkan ke Kromatografi Lapis

Tipis.

III.2.6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

III.2.6.1. Preparasi KLT

1. Di buat 2 lempeng dengan membuat ukuran lebar 5 cm dan

panjang 7 cm

2. Diberi ukuran pada lempeng dengan batas bawah 1 cm, t dan

batas atas 0,5 cm

3. Di aktifkan di oven, suhu 110C-115C selama 15 menit

4. Lempeng siap digunakan

III.2.6.2. Pembuatan Eluen

1. Eluen polar

Dibuat eluen polar sebanyak 5 ml mengguinakan chloroform :

methanol : air dengan perbandingan 3 : 5 : 9 ( 0,9 ml : 1,5 ml :

2,6 ml ) dan dimasukkan ke dalam chamber.

2. Eluen non polar

Dibuat eluen polar mengguinakan chloroform : methanol : air

dengan perbandingan 9 : 5 : 3 ( 2,6 ml : 1,5 ml : 0,9 ml ) dan

dimasukkan ke dalam chamber.

17

III.2.6.3. Penjenuhan chamber

1. Disiapkan chamber yang bersih lengkap dengan penutupnya

2. Chamber diisi dengan eluen yang diinginkan

3. Kemudian dimasukkan potongan kertas saring yang

panjangnya lebih dari tinggi chamber dan kemudian ditutup.

4. Dibiarkan hingga eluen naik pada kertas saring hingga

melewati penutup kaca (chamber telah jenuh).

III.2.6.4. Penotolan Sampel pada lempeng

1. Ekstrak yang telah diperoleh yaitu ekstrak eter, kloroform, etil

asetat, air dan ekstrak kasar ditotolkan pada plat KLT sesuai

tanda yang telah dibuat untuk masing-masing ekstrak.

2. Dimasukkan plat KLT ke dalam chamber yang telah

dijenuhkan.

3. Plat KLT dibiarkan sampai terelusi hingga batas atas.

4. Plat dikeluarkan dan dikeringkan.

5. Dilakukan pengamatan di bawah lampu UV 254 nm dan 366

nm

6. Disemprot dengan reagen penyemprot H2SO4 10% dan

dikeringkan dalam oven kemudian dilihat bercak nodanya dan

dihitung nilai Rf.

18

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Percobaan

a. Hasil ekstraksi daun tembelekan (Lantana camara L) secara maserasi

b. Hasil dari uji identifikasi ekstrak metanol daun tembelekan (Lantana camara

L)

No. Identifikasi Pereaksi Pengujian

Ket. Sebelum Sesudah

1. Alkaloid Dragendrof Hijau merah +

Mayer Hijau putih +

Wagner Hijau coklat +

2. Flavonoid HCl pekat Hijau Merah

HCl pekat +

magnesium

Kuning

jernih kuning +

3. Tanin FeCl3 Hijau Hijau

kehitaman +

4. Saponin HCl Tidak ada

buih

Ada buih

(0,5 cm) +

c. Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis ekstrak daun tembelekan (Lantana

camara L) menggunakan eluen polar kloroform metanol air (3:5:9)

No. Ekstrak

Pengamatan di

UV 254 nm

Pengamatan di

UV 366 nm

Penyemprotan

H2SO4 10%

Nilai

Rf Warna

Nilai

Rf Warna

Nilai

Rf Warna

1. Eter 0,80 Merah 0,80 Merah 0,12 Abu-abu

2. Kloroform 0,94 Merah

jambu

0,94 Merah

jambu

- -

3.

Etil Asetat 0,88

Merah

jambu

0,88

Merah

jambu

0,39 Abu-abu

Berat sampel

kering

Jumlah cairan

penyari

Berat ekstrak

kering % Rendamen

200 g 1400 mL 23,03 g 11,51%

19

0,45 Merah

jambu

0,45 Merah

jambu

4. Metanol 0,96 Merah

jambu

0,96 Merah

jambu

5. Air - - - - - -

d. Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis ekstrak daun tembelekan (Lantana

camara L) menggunakan eluen non polar kloroform metanol air (9:5:3)

No. Ekstrak

Pengamatan di

UV 254 nm

Pengamatan di

UV 366 nm

Penyemprotan

H2SO4 10%

Nilai

Rf Warna

Nilai

Rf Warna Nilai Rf Warna

1. Eter 0,84

0,76

0,70

0,46

0,36

Merah

Merah

jambu

Kuning

Merah

jambu

Merah

jambu

0,86

0,78

0,70

0,56

0,36

0,22

Merah

Merah

jambu

Kuning

Merah

jambu

Merah

jambu

Merah

jambu

0,12 Abu-

abu

2. Kloroform 0,82

0,64

0,42

0,30

Merah

jambu

Merah

jambu

Merah

jambu

Merah

jambu

0,84

0,74

0,38

Merah

jambu

Merah

jambu

Merah

jambu

3. Etil Asetat 0,84

0,48

0,40

Kuning

Kuning

Kuning

0,82

0,36

Kuning

Kuning

0,14 Abu-

abu

4. Metanol 0,84

0,76

0,46

0,36

Merah

Kuning

Kuning

Kuning

0,84

0,72

0,26

Merah

Kuning

Kuning

0,11 Abu-

abu

5. Air - - - - - -

20

IV.2 Pembahasan

Pada percobaan ini simplisia yang digunakan sebagai sampel dalam

ekstraksi dan identifikasi adalah daun tembelekan (Lantana camara L). Sampel

diambil pada sore hari sekitar pukul 16.00 18.00. Sebelum ekstraksi sampel

Simplisia yang telah kering diayak untuk menyeragamkan ukuran simplisia

kemudian diekstraksi.

Daun tembelekan (Lantana camara L) diekstraksi dengan metode dingin

yaitu metode maserasi karena zat aktif dari simplisia yang mengandung

senyawa yang mudah menguap dan tekstur dari simplisia yang lunak, juga

berdasarkan peneltian Barreto,dkk (2010) bahwa dengan metode maserasi

mampu menarik zat aktif dengan baik. Simplisia diekstraksi menggunakan

pelarut metanol dengan perbandingan 1:7 dimana 1 gram simplisia dalam 7 ml

pelarut, digunakan pelarut metanol karena metanol merupakan pelarut

semipolar yang mampu menarik senyawa polar maupun nonpolar dari simplisia.

Hasil ekstraksi diperoleh 23,03 gram dengan persen rendamen 11,51%

Pada ekstrak yang telah diperoleh dilakukan identifikasi senyawa

metabolit sekunder untuk mengetahui adanya kandungan senyawa kimia seperti

alkaloid, saponin, tanin dan flavonoid.

Pada uji alkaloid digunakan tiga jenis pereaksi untuk mengetahui apakah

ekstrak daun tembelekan (Lantana camara L) positif mengandung alkaloid

yaitu dengan pereaksi Mayer yang ditandai dengan terbentuknya endapan putih,

pereaksi wagner yang ditandai dengan terbentuknya endapan coklat dan

pereaksi dragendorf yang ditandai dengan terbentuknya endapan merah. Dari

hasil percobaan diperoleh hasil yang positif yang menandakan bahwa ekstrak

daun tembelekan (Lantana camara L) mengandung alkaloid. Hal ini sesuai

dengan hasil penelitian Jain shonu, dkk (2010) menyatakan bahwa daun

tembelekan (Lantana camara L) mengandung alkaloid.

Pada uji tanin dilakukan dengan menggunakan pereaksi FeCl3 2-3 tetes

yang ditandai dengan terbentuknya endapan hijau kehitaman. Dengan demikian

21

ekstrak daun tembelekan (Lantana camara L) positif mengandung senyawa

tanin khusus tanin pirogalat. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Jain shonu,

dkk (2010) menyatakan bahwa daun tembelekan (Lantana camara L)

mengandung tanin.

Pada uji flavonoid dilakukan dengan dua cara yaitu penambahan HCl

pekat dan penambahan HCl pekat dengan serbuk Mg. Pada penambahan HCl

pekat menunjukkan terbentuknya warna merah dan pada penambahan HCl

pekat dengan serbuk Mg terbentuk endapan kuning. Dengan demikian ekstrak

daun tembelekan (Lantana camara L) positif mengandung senyawa flavonoid.

Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Jain shonu dkk, (2010) menyatakan

bahwa daun tembelekan (Lantana camara L) mengandung flavonoid.

Pada uji saponin dilakukan dengan melarutkan ekstrak dalam air panas

kemudian di kocok kuat-kuat dan stabil selama 1 menit. Pada percobaan ini

menunjukkan adanya buih, kemudian ditambahkan HCl beberapa tetes

mununjukkan buih tidak hilang sehingga dengan demikian ekstrak daun

tembelekan (Lantana camara L) positif mengandung senyawa saponin. Hal ini

sesuai dengan hasil penelitian Jain shonu dkk, (2010) menyatakan bahwa daun

tembelekan (Lantana camara L) mengandung saponin.

Proses selanjutnya dilakukan ekstraksi cair-cair dengan melarutkan

ekstrak daun tembelekan (Lantana camara L) terhadap beberapa pelarut yang

telah di uji kelarutannya dan pada hasil uji ini diperoleh 4 fraksi yaitu fraksi

eter, kloroform, etil asetat dan air.

Fraksi-fraksi yang diperoleh dari hasil ekstraksi cair-cair, dilanjutkan

dengan identifikasi senyawa secara kromotografi lapis tipis yang merupakan

metode pemisahan komponen kimia berdasarkan prinsip adsorbsi dan partisi,

yang ditentukan oleh fase diam (adsorben) dan fase gerak (eluen), komponen

kimia bergerak naik mengikuti fase gerak karena daya serap adsorben terhadap

komponen-komponen kimia tidak sama sehingga komponen kimia dapat

bergerak dengan kecepatan yang berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya, hal

22

inilah yang menyebabkan terjadinya pemisahan.

Pada pengujian kromatografi lapis tipis dengan menggunakan dua eluen

yaitu eluen polar kloroform-metanol-air (3:5:9) dan eluen nonpolar kloroform-

metanol-air (9:5:9) dengan tujuan untuk membandingkan pemisahan dari

komponen senyawa dari ekstrak.

Pada uji KLT, penotolan dilakukan pada lempeng KLT yang telah

diaktifkan sebelumnya pada oven dengan suhu 105oC selama 15 menit, hal ini

dilakukan agar uap air yang diserap oleh permukaan lempeng lepas sehingga

tidak menghambat proses adsorbsi. Lempeng dielusi pada eluen yang telah di

jenuhkan dengan tujuan penjenuhan yaitu untuk menyamakan tekanan didalam

dan diluar chamber karena jika tekanan didalam dan di luar chamber tidak sama

maka akan menganggu proses elusi.

Adapun prinsip penampakan noda pada pegujian Kromatografi yaitu pada

UV 254 nm lempeng akan berflouresensi sedangkan sampel akan tampak

berwarna gelap. Penampakan noda pada lampu UV 254 nm adalah karena

adanya daya interaksi antara sinar UV dengan indikator fluoresensi yang

terdapat pada lempeng. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi

cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang

tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian

kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi.

Pada UV 366 nm noda akan berflouresensi dan lempeng akan berwarna

gelap. Penampakan noda pada lampu UV 366 nm adalah karena adanya daya

interaksi antara sinar UV dengan gugus kromofor yang terikat oleh auksokrom

yang ada pada noda tersebut. Fluoresensi cahaya yang tampak merupakan emisi

cahaya yang dipancarkan oleh komponen tersebut ketika elektron yang

tereksitasi dari tingkat energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi kemudian

kembali ke keadaan semula sambil melepaskan energi. Sehingga noda yang

tampak pada lampu UV 366 nm terlihat terang karena silika gel yang digunakan

tidak berfluororesensi pada sinar UV 366 nm.

23

Prinsip penampakan noda pereaksi semprot H2SO4 10% adalah

berdasarkan kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak

gugus kromofor dari zat aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan

bergeser ke arah yang lebih panjang (UV menjadi VIS) sehingga noda menjadi

tampak oleh mata.

Identifikasi kromatografi lapis tipis ekstrak eter pada eluen polar

kloroform-metanol-air (3:5:9), penampakan noda pada UV 254 nm dan UV 366

menghasilkan 1 noda yang sama dengan nilai Rf 0,80 dan pada penyemprotan

H2SO4 10% menghasilkan 1 noda lain dengan nilai Rf 0,12. Sedangkan pada

eluen nonpolar kloroform-metanol-air (9:5:3), penampakan noda pada UV 254

nm menghasilkan 5 noda dengan nilai Rf 0,84 ; 0,76 ; 0,70 ; 0,46 dan 0,36, pada

UV 366 nm menghasilkan 6 noda dengan nilai Rf 0,86 ; 0,78 ; 0,70 ; 0,56 ;0,36

dan 0,22 dan pada penyemprotan H2SO4 10% menghasilkan 1 noda dengan

nilai Rf 0,12. Berdasarkan nilai Rf diatas kemungkinan ada beberapa noda yang

memiliki senyawa yang sama.

Identifikasi kromatografi lapis tipis ekstrak kloroform pada eluen polar

kloroform-metanol-air (3:5:9), penampakan noda pada UV 254 nm dan UV 366

nm menghasilkan 1 noda yang sama dengan nilai Rf 0,90 dan pada

penyemprotan H2SO4 10% tidak menghasilkan noda. Sedangkan pada eluen

nonpolar kloroform-metanol-air (9:5:3), penampakan noda pada UV 254 nm

menghasilkan 4 noda dengan nilai Rf 0,82 ; 0,64 ; 0,42 dan 0,30, pada UV 366

nm menghasilkan 3 noda dengan nilai Rf 0,84 ; 0,74 dan 0,38 dan pada

penyemprotan H2SO4 10% tidak menghasilkan noda. Berdasarkan nilai Rf

diatas kemungkinan ada beberapa noda yang merupakan senyawa yang sama.

Identifikasi kromatografi lapis tipis ekstrak etil asetat pada eluen polar

kloroform-metanol-air (3:5:9), penampakan noda pada UV 254 nm dan UV 366

menghasilkan 2 noda yang sama dengan nilai Rf 0,88 dan 0,45, pada

penyemprotan H2SO4 10% menghasilkan 1 noda dengan nilai Rf 0,39.

Sedangkan pada eluen nonpolar kloroform-metanol-air (9:5:3), penampakan

24

noda pada UV 254 nm menghasilkan 3 noda dengan nilai Rf 0,84 ; 0,48 dan

0,40, pada UV 366 nm menghasilkan 2 noda dengan nilai Rf 0,82 dan 0,36 dan

pada penyemprotan H2SO4 10% menghasilkan 1 noda dengan nilai Rf 0,14.

Berdasarkan nilai Rf di atas kemungkinan ada beberapa noda yang memiliki

senyawa yang sama.

Identifikasi kromatografi lapis tipis ekstrak eter pada eluen polar

kloroform-metanol-air (3:5:9), penampakan noda pada UV 254 nm dan UV 366

menghasilkan 1 noda yang sama dengan nilai Rf 0,96 dan pada penyemprotan

H2SO4 10% tidak menghasilkan noda. Sedangkan pada eluen non polar

kloroform-metanol-air (9:5:3), penampakan noda pada UV 254 nm

menghasilkan 4 noda dengan nilai Rf 0,84 ; 0,76 ; 0,46 dan 0,36 , pada UV 366

nm menghasilkan 3 noda dengan nilai Rf 0,84 ; 0,72 dan 0,26 dan pada

penyemprotan H2SO4 10% menghasilkan 1 noda dengan nilai Rf 0,11.

Berdasarkan nilai Rf diatas kemungkinan ada beberapa noda yang merupakan

senyawa yang sama.

Identifikasi kromatografi lapis tipis ekstrak air pada eluen polar

kloroform-metanol-air (3:5:9) maupun pada eluen nonpolar kloroform-metanol-

air (9:5:3) tidak menghasilkan noda.

25

BAB V

PENUTUP

V.1 Kesimpulan

Dari hasil praktikum dapat disimpulkan sebagai berikut:

a. Daun tembelekan (Lantana camara L) dapat diekstraksi menggunakan

metode maserasi.

b. Dari uji identifikasi senyawa metabolit dapat disimpulkan bahwa daun

tembelekan (Lantana camara L) mengandung alkaloid, flavonoid, tanin dan

saponin.

c. Dari uji identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) diperoleh nilai Rf yang

cukup baik pada eluen non polar karena sebagian besar spot yang muncul

memiliki nilai Rf antara 0,2-0,8 sehingga dapat disimpulkan senyawa daun

tembelekan (Lantana camara L) bersifat nonpolar.

V.2 Saran

Untuk melakukan pemisahan lebih lanjut menggunakan kromatografi kolom

sehingga dapat dihasilkan senyawa tunggal.

26

DAFTAR PUSTAKA

Alimin, dkk. Kimia Analitik. Makassar: Alauddin Press, 2007.

Barreto, F.S, dkk. 2010. Antibacterial Activity of Lantana camara Linn and Lantana

montevidensis Brig Extracts from Cariri-Cear, Brazil

Khopkar, SM. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: UI-Press, 2008.

Harborne,J.B. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan. Padmawinata K, Soedira I, penerjemah. Bandung: Penerbit

Institut Teknologi Bandung. Terjemahan dari: Phytochemical methods.

Hamburger, Hostettmann. 1991. Bioactivity in plant: the link between phytochemistry

and medicine. Phytochemistry 12: 3864-3874.

Hariana, Arief, H. 2008. Tanaman Obat dan Khasiatnya seri 3. Penebar Swadaya.

Jakarta

Permadi, Adi. 2008. Membuat Kebun Tanaman Obat. Pustaka Bunda. Jakarta.

Sudarmadji,S. 1996. Analisis Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta : Liberty.

Shonu Jain, dkk. 2010. Pharmacognostic And Phytochemical Evaluation And Antipyretic Activity Of Leaves Of Lantana Camara Linn. Department of Pharmacognosy, TIT College of Pharmacy, Bhopal (M.P) India.