BAB I

PENDAHULUAN

I. DASAR TEORI

Toksikologi adalah studi mengenai efek toksik atau efek berbahaya bahan

kimia. Toksisitas kronik adalah pengaruh merugikan yang timbul akibat pemberian

takaran berulang dari pestisida, bahan kimia, atau bahan lain, atau pemakaran dengan

bahan tersebut yang berlangsung cukup lama. Pada hewan percobaan, periode

pemaparan dilakukan seumur hidup hewan, misal : 18 bulan untuk mencit, 24 bulan

untuk tikus dan 7-10 tahun untuk anjing atau monyet. Sementara toksisitan subkronik

mirip dengan toksisitas kronik, untuk rentang waktu yang lebih pendek. Pemaparan

pada hewan uji selama 3 bulan untuk tikus dan 1 atau 2 tahun untuk anjing.

( Harmita dan Maksum Radji,2008,Buku Ajar Analisis Hayati,Jakarta: EGC )

Manfaat terbesar buah manggis bagi kesehatan bukan terletak pada daging

buah nya melainkan kulit buahnya. Di dalam kulit buah manggis (pericarp) terdapat

komponen yang bersifat antioksidan. Zat tersebut adalah xanthone. Xanthone

merupakan molekul besar yang terdiri dari banyak molekul kecil yang bersifat

antioksidan, dimana antioksidan berfungsi untuk melawan atau menetralkan radikal

bebas yang masuk atau diproduksi dalam tubuh.

Khasiat xanthone dalam pengobatan :

Antikanker

Antibakteri

Antiinflamasi

Memelihara sistem imun

Keseimbangan mikrobiologi

Zat-zat lain yang berkhasiat yang terkandung dalam buah manggis

adalah :

Stilbenes berperan sebagai pertahanan bagi tanaman dari serangan

jamur.

Quinone yang berfungsi sebagai antibakteri yang mempunyai struktur

seperti tetrasiklin.

Polisakarida sebagai antikanker yang menghambat kemampuan sel

bermutasi sehingga membantu menghentikan penyebaran

kanker.

( GRASINDO, khasiat kulit buah manggis )

II. ALAT DAN BAHAN

1. Bahan :

Ekstrak kulit buah manggis

Etanol 95%

Aquadest

Tikus varietas wistar

2. Alat :

Evaporator

Centrifuge

Rotavapor

Oven vacum

III. SKEMA KERJA

Ekstrak kulit buah manggis diendapkan ,lalu diserbukkan

Serbuk dimaserasi dua kali dengan etanol 95% selama 1-2 hari lalu diuapkan dibawah tekanan.

Ekstrak dipanaskan pada suhu 50 o C, lalu diuapkan dengan evaporator pada suhu 55o C selama 12jam, dan menghasilkan supernatan

Supernatan diuapkan pada 55oC menggunakan rotaporator,lalu dimasukkan dalam oven slama 12 jam

Ekstrak disimpan dalam wadah tertutup baik,terlindung dari cahaya pada suhu kurang dari 20o C

Tikus disimpan didalam laboratorium pada suhu ruang 25oC± 1oC secara konstan dengan kelembapan 60%.

Tikus diaklimatisasi dengan lingkungan selama 2 minggu

Pembuatan ekstrak kulit buah manggis

Perlakuan pada hewan uji sebelum penelitian

Uji Toksisitas kronik pada tikus

Dibagi 6 kelompok Setiap kelompok mendapat 15 ekor tikus

Kelompok 2 :

diberi dosis 10mg/kg BB/hari selama 6

bulan

Kelompok 3 :

diberi dosis

100mg/kgBB/hari selama 6

bulan

Kelompok 4 :

diberi dosis 500mg/kg BB/hari selama 6

bulan

Kelompok 5 :

diberi dosis

1000mg/kg BB /hari selama 6

bulan

Kelompok 6 :

sebagai kontrol

positif dosis 1000 mg/kg

BB/hari selama 6

bulan

Selama penelitian,BB dan asupan makanan dicatat dan diamati setiap minggunya dan diamati perilaku dan tanda-tanda kelainan.

setelah 6 bulan hewan uji dipuasakan menggunakan inhalasi dietileter

diambil cuplikan sampel darah dari venacava posterior untuk menentukan hematologi dan nilai kimia serum klinis

Kelompok 1 :

sebagai kontrol negatif diberi

aquadest 10ml/kgBB

Analisis Hematologi

Pada analisis ini yang dipriksa adalah sel darah merah hematokrid,

hemoglobin,limfosit,trombosit,basofil.

Pengukuran nilai kimia serum

Pada analisa ini yang diperiksa adalah alkalin fosfatase, alanin transminase,urea

protein, birilubin,total albumin,asam urat,darah nitrogen (BUN ).

Pemeriksaan hispatologi

Dilakukan pada trakea,kerongkongan, pankreas, usus, kelenjar tiroid,kelenjar

prostad,rahim,kelenjar susu dan ovarium.

BAB II

HASIL DAN PEMBAHASAN

I. Hasil

Pengaruh MPE pada berat badan, konsumsi makanan dan status kesehatan:

Tikus jantan menerima MPE pada dosis1000 dan 500 mg / kg / hari menunjukkan

hasil yang secara signifikan lebih rendah dari rata-rata berat badan kelompok kontrol

sejak minggu ke-7 dan ke-17 sampai akhir penelitian masing-masing. Perubahan berat

badan yang sama diamati pada tikus betina diperlakukan dengan dosis MPE tertinggi

di 12 minggu dan seterusnya (Gambar 1). Pengukuran asupan makanan mingguan

pada jantan dan betina selama periode eksperimental seluruhnya menunjukkan tidak

ada perbedaan yang signifikan antara semua pengobatan kelompok dan kelompok

kontrol yang sesuai dalam hampir setiap minggu. Hanya tikus jantan dan betina yang

menerima dosis tertinggi memiliki

asupan makanan yang secara signifikan lebih rendah sesuai kelompok kontrol pada

minggu ke 8, 9 dan 14 di kelompok pertama dan pada minggu ke 2 di kelompok

kedua(Gbr. 2). Semua kelompok yang diberikan MPE menunjukkan keadaan sehat

dan tidak ada tanda kelainan, dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Gambar kurva Pertumbuhan 1 dari tikus jantan dan betina menerima MPE selama 6 bulan.

Gambar 2 Konsumsi makanan tikus jantan dan betina menerima MPE selama 6 bulan.

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok satelit

* berbeda nyata dengan kelompok kontrol (p <0,05)

Pengaruh ME terhadap berat organ relatif: Pada jantan, berat relatif, paru-

paru,perut,otak, baik ginjal dan testis kanan dalam kelompok menerima 500 mg / kg /

hari MPE jauh lebih tinggi dari pada pada kelompok kontrol. Hampir semua organ

dalam kelompok dosis tertinggi memiliki berat relatif lebih tinggi secara signifikan

dibandingkan dengan kelompok kontrol, kecuali kandung kemih. Perubahan serupa

juga teramati pada kelompok acuan, kecuali kelenjar adrenal dan kandung kemih

(Tabel 1). Pada tikus betina, berat relative perut dalam kelompok yang diberikan MPE

dengan dosis 500 mg / kg / hari dan seterusnya secara signifikan lebih tinggi dari pada

kelompok kontrol. Berat relatif dari hati dan kedua ginjal pada dosis tertinggi dan

kelompok acuan signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Selain itu, kelompok dosis tertinggi memiliki bertarelatif otak yang signifikan lebih

tingga dari pada kelompok kontrol (Tabel 2).

Tabel 2 organ berat Relatif (g/1000g berat badan) dan berat badan (g) tikus

betina menerima MPE selama 6 bulan

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok acuan * berbeda nyata

dengan kelompok kontrol (p <0,05)

Pengaruh ME pada nilai-nilai hematologi: Seperti digambarkan dalam Tabel 3

dan 4, eosinofil dalam tikus jantan dan betina yang menerima MPE pada dosis 500

dan 1000 mg / kg / hari secara signifikan lebih rendah dari pada kelompok kontrol.

Neutrofil di tikus jantan dosis tertinggi dan kelompok acuan adalah signifikan lebih

tinggi dibandingkan dengan kelompok kontrol.Selain itu, WBC pada tikus betina dari

kelompok acuan secara signifikan lebih tinggi dari pada kelompok kontrol.

Pengaruh ME pada nilai-nilai kimia klinis: Dalam laki-laki tikus, kelompok

menerima MPE pada dosis 500 dan 1000 mg / kg / hari memiliki ALT yang signifikan

lebih tinggi dari pada kelompok kontrol. AST dan BUN di dosis tertinggi dan

kelompok acuan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok

kontrol. Kolesterol dari kelompok yang menerima MPE pada dosis 500 dan 1000

mg / kg / hari dan kelompok acuan menunjukkan signifikan lebih tinggi tingkat

dibandingkan dengan kelompok kontrol. Jumlah total protein, asam urat dan glukosa

dalam kelompok dosis tertinggi secara signifikan lebih rendah dari pada kelompok

kontrol (Tabel 5). Pada tikus jantan tersebut, kelompok dosis tertinggi memiliki AST

dan bilirubin total signifikan lebih tinggi dibandingkan kontrol, sedangkan tingkat

glukosa secara signifikan lebih rendah dibanding pada kelompok kontrol. BUN dan

kreatinin dalam kedua kelompok yang menerima MPE pada dosis 500 mg / kg / hari

dan seterusnya dan pada kelompok acuan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan

pada kelompok kontrol (Tabel 6). Pengaruh MPE pada perubahan histopatologi:

Pada topsi, tidak ada lesi makroskopik yang luar biasa dalam setiap organ dari

kelompok yang diperlakukan dengan MPE dan kelompok kontrol. Histopatologi

organ visceral mengungkapkan bahwa kelompok dosis tertinggi jantan dan betina

memiliki insiden bronchiole signifikan lebih rendah terkait proliferasi jaringan limfoid

di paru-paru sesuai dari kelompok kontrol. Kelompok acuan dari kedua jenis kelamin

memiliki insiden lebih tinggi secara signifikan centrilobular hidropik degenerasi pada

jaringan hati dari kelompok kontrol. Temuan histopatologi ginjal, jantung dan usus di

semua kleompok yang diberikan MPE tidak berbeda dari pada kelompok kontrol

(Tabel 7 dan 8). Selain itu, tidak ada lesi yang luar biasa dalam pemeriksaan lainnya

antara keolmpok yang diberikan MPE dan kelompok kontroTabel 3 nilai-nilai

hematologi tikus jantan menerima MPE selama 6 bulan

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok satelit * berbeda nyata dengan kontrol (p <0,05)

Tabel 4 nilai-nilai hematologi tikus betina menerima MPE selama 6 bulan

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok satelit* Berbeda nyata dengan kelompok kontrol (p <0,05)

Tabel 5 Biokimia nilai tikus jantan menerima MPE selama 6 bulan

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok satelit* Berbeda nyata dengan kelompok kontrol (p <0,05)

Tabel 6 nilai Biokimia tikus betina menerima MPE selama 6 bulan

Nilai dinyatakan sebagai mean ± SD, 1000-S: kelompok satelit* Berbeda nyata dengan kelompok kontrol (p <0,05)

Tabel 7 Hasil histopatologi tikus jantan dan betina menerima MPE selama 6 bulan

Hasilnya dinyatakan sebagai jumlah tikus dengan temuan patologis per jumlah tikus diobati, 1000-S: satelitkelompok* Berbeda nyata dengan kelompok kontrol (p <0,05)(NRL: Tidak ada lesi yang luar biasa, Balt: Bronchiole terkait jaringan limfoid, Galt: Gut terkait jaringan limfoid)

Diskusi

Dalam studi ini, suatu administrasi MPE di setiap dosis yang diuji tidak menyebabkan tanda-tanda nyata beracun dan kematian pada tikus. Pengukuran berat badan tubuh menunjukkan bahwa MPE dapat menekan pertumbuhan hewan dan tikus jantan lebih rentan terpengaruh dari pada tikus betina. Hasil penelitian kami berbeda dengan sebelumnya oleh Towatana dkk. (2010) yang mengatakan bahwa pemberian oral 50% Ekstrak etanol di galur Wistar yang dilakukan selama tiga bulan tidak mempengaruhi berat badan pada waktu-poin. Ini perbedaan dapat disebabkan oleh perbedaan konstituen kimia dan isinya antara 95% dan 50% etanol ekstrak.

Peaslee dan Einhellig (1973) menunjukkan bahwa tikus yang diberi dengan diet yang mengandung asam tanat memiliki pertumbuhan yang lamban.Selain itu, tikus weanling yang menerima tannin varietas sorgum yang tinggi memiliki pertumbuhan signifikan lebih rendah dibandingkan mereka yang diobati dengan varietas tanin rendah (Jambunathan dan Mertz, 1973). Oleh karena itu, hasilnya berat badan yang lebih buruk pada kelompok jantan yang diberikan KME dengan dosis 500 mg / kg dan bahwa pada dosis tertinggi dari kedua jenis kelamin sebagian mungkin disebabkan karena efek dari tanin. Makanan yang masuk kurang signifikan diamati, hanya pada tiga titik waktu dalam tikus jantan dari dosis tertinggi kelompok dan hanya satu titik waktu dalam penyebab penerimaan dosis perempuan ini. Namun, pengukuran asupan makanan mingguan pada waktu-poin yang lain pada kedua kelompok tidak menunjukkan perbedaan. Dengan demikian, tidak dapat dinyatakan MPE yang menekan asupan makanan dari hewan. Hampir semua organ tikus jantan dari dosis tertinggi dan kelompok acuan serta beberapa organ tikus jantan yang diberikan MPE dengan dosis 500 mg / kg / hari menunjukkan bobot relatif lebih tinggi. Temuan ini mungkin disebabkan oleh berat badan yang lebih rendah. Sebagai Hasil histopatologi organ tersebut tidak menunjukkan setiap kelainan yang terkait. Selain itu, mereka yang bobot sebenarnya tidak ditemukan adanya perubahan bila dibandingkan dengan kelompok kontrol. Alasan yang

sama dapat menjelaskan bobot relatif meningkat dari beberapa organ perempuan dari tikus dosis tertinggi dan kelompok acuan.

Analisis hematologi sampel darah dari tikus betina tidak menunjukkan perbedaan yang signifikandalam jumlah WBC total antara dosis tertinggi dan kelompok kontrol. Dengan demikian, peningkatan parameter terseut hanya dalam kelompok acuan betina, karena bisa untuk variasi biologis antara tikus dari pada hasil ekstrak. Penurunan eosinofil dalam tikus jantan dan betina pada kelompok yang menerima MPE di dosis 500 dan 1000 mg / kg / hari dan juga bahwa dalam kelompok satelit ini tampaknya berhubungan dengan ekstrak. Namun, perubahan ini masih dalam batas normal(Gad, 1992) dan mengungkapkan tidak adaperubahan signifikan klinis. Jumlah neutrofil dari tikus jantan yang menerima dosis tertinggi secara signifikan lebih tinggi dan tampaknya menjadi yang berhubungan dengan dosis. Sementara Jejun dkk. (2008) menemukan bahwa dosis yang sama dari ekstrak etanol 95% dari manggis tidak menyebabkan perbedaan yang signifikan dalam hematologi parameter termasuk neutrofil di jantan Sprague Dawley-tikus. Perbedaan ini mungkin karena perbedaan strain tikus dan durasi ekstrak pengobatan. Namun, dalam studi ini, perubahan neutrofil sedikit lebih tinggi dari pada range yang normal (Gad, 1992) dan penarikan pengobatan dapat menyebabkan reversibilitas efek ini.

Pemeriksaan kimia klinik menunjukkan peningkatan tingkat ALT dalam tikus jantan yang menerima MPE pada dosis 500 dan 1000 mg / kg / hari dan juga bahwa dari AST pada tikus jantan dan betina menerima dosis tertinggi, yang mungkin disebabkan oleh MPE. Pramyothin dkk. (2003) menunjukkan bahwa xanthon, senyawa senyawa utama yang diisolasi dari pericarp manggis, yang disebabkanpeningkatan kedua enzim transaminase terisolasi dalam tikus hepatosit, yang menunjukkan hepatoxic efek. Selain itu, mangostin telah menunjukkan manfaat untuk mendorong peningkatan yang signifikan dari AST dan ALT pada tikus yang diperlakukan bila diberi secara intraperitoneal ataulisan administrasi (Sornprasit et al., 1987). Penurunan total protein pada tikus jantan yang menerimadosis tertinggi hasilnya sedikit lebih rendah dari kisaran normal (Pimainog et al., 2003) dan perubahan ini bisa kembali ke normal setelah penarikan ekstrak. Kemungkinan penyebab dari temuan ini mungkin akan menurunkan sintesis protein disebabkan oleh insufisiensi hepatik dan / atau peningkatan katabolisme protein (Stockham dan Scott, 2002).

Marzo dkk. (2002) melaporkan bahwa ayam yang diberi pakan dengan asam tanat diet menambahkan ditunjukkan peningkatan yang ditandai dalam kegiatan hati cathepsin A dan D yang menunjukkan peningkatan katabolisme protein. Dengan demikian, tannin dalam MPE, setidaknya sebagian, menjelaskan temuan ini. Hal meningkatkan bilirubin total dalam tikus betina yang menerima dosis tertinggi adalah dalam kisaran normal (0,00-0,55 mg / dl) seperti dilansir Gad(1992).Penurunan kadar glukosa dalam tikus jantan dan betina yang menerima dosis tertinggi mungkin berkontribusi ke glukoneogenesis yang menurun di hati, sesuai dengan insufisiensi hati seperti yang ditunjukkan oleh kegiatan peningkatan enzim hati (Stockham dan Scott,

2002). Penurunan kadar asam urat pada tikus jantan cenderung berhubungan dengan dosis, namun yang dikelompok dosis tertinggi dalam kisaran normal (Gad, 1992).

Penurunan kadar kolesterol pada tikus jantan yang menerima ekstrak pada 500 mg / kg dan seterusnya serta kelompok acuan laki-laki mungkin disebabkan oleh penurunan produksi dalam gangguan hepatosit (Stockham dan Scott, 2002), bagaimanapun perubahan ini adalah dalam nilai-nilai referensi dari tikus jantan (Pimainog et al., 2003). Peningkatan BUN dan kreatinin pada tikus betina yang diperlakukan dengan dosis 500 dan 1000 mg / kg / hari serta peningkatan BUN di tikus jantan dari kelompok dosis tertinggi lebih tinggi dari interval referensi tikus Wistar jantan dan betinaseperti dilansir Pimainog dkk. (2003). Ini menyarankan bahwa perubahan MPE dapat mempengaruhifungsi ginjal dan efek ini juga diamati pada kedua jenis kelamin setelah penarikan ekstrak.