EFEK ANTIINFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA TOPIKAL …menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Efek...

i

EFEK ANTIINFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA TOPIKAL

TERHADAP EDEMA KAKI YANG DIINDUKSI FORMALIN 0,5% PADA

MENCIT JANTAN GALUR SWISS

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Devi Nathania

NIM : 078114127

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2011

iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Karya ini kupersembahkan kepada:

Tuhan Yesus Kristus

Orang tuaku, Wadijono Joedi & Tjan Tek Fung

Adik-adikku

Teman-teman yang kusayangi

Almamaterku tercinta

Janganlah takut sebab DIA selalu beserta kita.

Sebesar apapun rintangan yang kita hadapi, kita punya Tuhan yang lebih besar

daripada rintangan itu.

vii

PRAKATA

Penulis mengucapkan puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa

karena atas berkat, rahmat dan cinta-Nya yang diberikan, penulis dapat

menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol

secara Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit

Jantan Galur Swiss”.

Dalam proses pelaksanaan dan penyusunan skripsi yang merupakan tugas

akhir untuk memenuhi salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Strata

satu Farmasi (S. Farm.), program Studi Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, penulis ingin mengucapkan terima kasih

kepada pihak-pihak yang telah banyak mendukung. Dukungan baik langsung

maupun tidak langsung, bimbingan moril maupun pengetahuan juga telah

dirasakan oleh penulis. Maka ucapan terima kasih yang tulus khususnya penulis

tujukan kepada :

1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

2. Ipang Djunarko, M. Sc., Apt. selaku dosen pembimbing yang telah bersedia

mengarahkan, mendampingi, dan meluangkan waktu untuk berdiskusi

bersama penulis selama proses penelitian hingga selesainya skripsi ini.

3. Phebe Hendra, M. Sc., Ph. D., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah

memberikan waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

4. Jeffry Julianus, M. Si. selaku dosen penguji skripsi yang telah memberikan

waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

viii

5. Staf laboratorium, Bapak Kayatno dan Yohanes Ratijo yang telah banyak

membantu selama penulis melakukan penelitian di Laboratorium Imono.

6. Kedua orang tua, Wadijono Joedi dan Tjan Tek Fung, atas doa, kesabaran,

nasehat dan dukungannya yang tidak pernah terlewatkan sehingga penulis

dapat semangat dalam menyelesaikan skripsi ini.

7. Adikku Devi Christina, Ayu Florencia, dan Stefanny Rahayu Joedi yang

memberikan semangat dan doa.

8. Temanku Maya, Yosephine, Dika, dan Yudi untuk kerjasama dan

dukungannya selama melakukan dan menyelesaikan skripsi ini.

9. Sahabatku Dita, Olive, dan Frissa yang telah memberikan semangat, doa, dan

dukungan bagi penulis.

10. Teman-teman kost Talenta: Mba Ocha, Cik Winny, Ussy, Iema, Amma, Tika,

Soso, Mengty, Fanny, dan Inggrid.

11. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah membantu

penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

Penulis menyadari masih banyak kekurangan dan ketidaksempurnaan

yang ada dalam penyusunan skripsi ini. Maka penulis mengaharapkan kritik dan

saran yang dapat membuat karya ini menjadi lebih baik. Akhir kata, semoga

penelitian skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca terutama bagi perkembangan

ilmu kefarmasian.

Penulis

ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL…………………………………………………………... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.................................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ......................................................................... iv

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH……….… v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................. vi

PRAKATA .......................................................................................................... vii

DAFTAR ISI ....................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii

DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xiv

INTISARI ........................................................................................................... xvi

ABSTRACT .......................................................................................................... xvii

BAB I. PENGANTAR ........................................................................................ 1

A. Latar Belakang ........................................................................................ 1

1. Permasalahan ............................................................................. 2

2. Keaslian penelitian ..................................................................... 3

3. Manfaat penelitian ......................................................................... 4

B. Tujuan Penelitian .................................................................................... 4

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................ 6

A. Inflamasi .................................................................................................. 6

B. Antiinflamasi ........................................................................................... 9

x

C. Formalin .................................................................................................. 10

D. Virgin Coconut Oil (VCO) HealthyCo®

.................................................. 10

E. Eugenol ................................................................................................... 11

F. Asetil Eugenol ......................................................................................... 12

G. Metode Pengujian Antiinflamasi ............................................................ 12

H. Landasan Teori ........................................................................................ 13

I. Hipotesis .................................................................................................. 14

BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 15

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 15

B. Variabel Penelitian .................................................................................. 15

C. Definisi Operasional ……....................................................................... 16

D. Bahan dan Alat Penelitian ....................................................................... 17

1. Bahan ............................................................................................... 17

2. Alat ................................................................................................... 18

E. Tata Cara Penelitian .............................................................................. 18

1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki………. 18

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif ..................... 19

3. Orientasi pelarut asetil eugenol ........................................................ 19

4. Penentuan peringkat konsentrasi asetil eugenol .............................. 19

5. Pengelompokan hewan uji ............................................................... 20

6. Pengamatan ...................................................................................... 21

F. Tata Cara Analisis Hasil ......................................................................... 21

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 22

xi

A. Orientasi Rentang Waktu Pengolesan Senyawa pada Edema Kaki

Mencit, Orientasi Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif, serta

Orientasi Pelarut dan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol.................. 22

1. Orientasi rentang waktu pengolesan senyawa pada edema kaki

mencit……………………………………….................................... 23

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif…………… 26

3. Orientasi pelarut dan peringkat konsentrasi asetil eugenol……… 28

B. Hasil Uji Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal terhadap

Edema Kaki Mencit yang Diinduksi oleh Formalin 0,5%....................... 29

C. Hasil Uji Hubungan Linieritas Konsentrasi Asetil Eugenol terhadap

Daya Antiinflamasi yang Ditimbulkan…………................................... 40

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 42

A. Kesimpulan ............................................................................................. 42

B. Saran ........................................................................................................ 42

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 44

LAMPIRAN ........................................................................................................ 48

BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 83

xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan

setiap jam selama 5 jam pengamatan ............................................... 24

Tabel II. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan

setiap 10 menit selama 1 jam pengamatan ....................................... 25

Tabel III. Hasil analisis AUC total ketiga konsentrasi eugenol menggunakan

One-Way ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe……. 27

Tabel IV. Hasil analisis rata-rata nilai AUC total tebal edema kaki mencit

yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan

menggunakan one way ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji

Scheffe.............................................................................................. 32

Tabel V. Nilai hasil uji Scheffe % penghambatan inflamasi yang diinduksi

formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan......................................... 35

Tabel VI. Nilai hasil uji Scheffe % daya antiinflamasi yang diinduksi

formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan......................................... 36

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Skema mediator-mediator inflamasi yang berasal dari fosfolipid

beserta aksinya................................................................................ 7

Gambar 2. Struktur eugenol ............................................................................ 11

Gambar 3. Struktur asetil eugenol ................................................................... 12

Gambar 4. Skema jalannya penelitian ............................................................. 20

Gambar 5. Grafik rata-rata tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin

0,5% selama 6 jam pengamatan..................................................... 30

Gambar 6. Diagram batang nilai AUC total masing-masing perlakuan........... 33

Gambar 7. Turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan –tioeter...................... 37

Gambar 8. Struktur Asetil Eugenol….............................................................. 37

Gambar 9. Interaksi antara asetil eugenol dengan valin................................... 38

Gambar 10. Bentuk radikal dari asetil eugenol…….......................................... 38

Gambar 11. Grafik hubungan linieritas log konsentrasi asetil eugenol 100%

v/v, 50% v/v, dan 25% v/v dengan % penghambatan inflamasi

dari masing-masing perlakuan tersebut.......................................... 41

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Elusidasi Struktur Asetil Eugenol................................................... 48

Lampiran 2.

a. Sertifikat Kalibrasi Jangka Sorong merk Mitutoyo........................ 53

b. Tabel hasil pengukuran presisi jangka sorong merk Mitutoyo....... 55

Lampiran 3. Skema orientasi peringkat konsentrasi kontrol positif eugenol…. 55

Lampiran 4. Surat Keterangan Pembelian Mencit di LPPT-Universitas Gajah

Mada (UGM)…………………………………………………… 56

Lampiran 5.

a. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap jam selama 5 jam

pengamatan .................................................................................... 57

b. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap 10 menit selama 1 jam

pengamatan .................................................................................... 60

Lampiran 6.

a. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol

Positif ............................................................................................. 63

b. Hasil Analisa Rata-rata AUC total Eugenol 25% v/v, 50% v/v,

dan 100% v/v untuk Kontrol Positif menggunakan Metode

Analisis One-Way ANOVA Tingkat Kepercayaan 95%

kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ..................................... 64

xv

Lampiran 7. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol Menggunakan

Pelarut VCO……………………………………………………... 67

Lampiran 8. Hasil Analisa Tebal Edema Kaki Mencit yang diinduksi

Formalin 0,5% menggunakan General Linear Model tingkat

kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe……. 67

Lampiran 9. Hasil Analisa Nilai AUC total masing-masing perlakuan

menggunakan One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95%

kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ............................. 72

Lampiran 10. Perhitungan nilai % penghambatan inflamasi pada kelompok

kontrol eugenol 50% v/v; asetil eugenol 100% v/v; 50% v/v; dan

25% v/v .......................................................................................... 76

Lampiran11. Hasil analisa % penghambatan inflamasi menggunakan One-

Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

dengan uji Scheffe ......................................................................... 77

Lampiran 12. Hasil analisa % daya antiinflamasi menggunakan One-Way

ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan

uji Scheffe ...................................................................................... 79

Lampiran 13. Perhitungan nilai EC50 .................................................................. 82

xvi

INTISARI

Inflamasi sering terjadi di masyarakat. Salah satu cara pengatasannya

dengan pemberian agen antiinflamasi topikal, karena OAINS dapat menimbulkan

gastritis bila digunakan secara oral. Eugenol merupakan komponen utama dalam

minyak cengkeh yang terbukti memiliki efek antiinflamasi. Asetil eugenol

merupakan turunan eugenol yang juga berkhasiat sebagai antiinflamasi. Penelitian

ini bertujuan untuk menguji secara in vivo efek antiinflamasi asetil eugenol secara

topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan

galur Swiss sehingga didapatkan nilai EC50-nya.

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan

rancangan acak lengkap pola satu arah. Model pengukurannya dengan

menggunakan jangka sorong. Mencit dibagi dalam 6 kelompok, yaitu kelompok

kontrol negatif formalin 0,5%; kelompok kontrol negatif VCO; kontrol positif

eugenol 50% v/v; kelompok perlakuan asetil eugenol 25% v/v; 50% v/v; dan

100% v/v. Pengolesan senyawa uji dilakukan pada menit ke-60 setelah injeksi

formalin dan pengukuran tebal edema dilakukan tiap jam selama 6 jam

pengamatan. Data tebal edema diolah menjadi nilai AUC total kemudian

dianalisis dengan uji Kolmorogorof-Smirnov, dilanjutkan dengan analisis

ANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95% dan uji Scheffe serta Post Hoc.

Hasil persentase penghambatan inflamasi asetil eugenol 25% v/v, 50%

v/v, dan 100% v/v berturut-turut adalah 41,52%; 16,96%; dan 9,04%; sedangkan

persen daya antiinflamasinya berturut-turut sebesar 8,23%; -30,32%; dan -

42,74%. Berdasarkan uji regresi linier, semakin meningkatnya konsentrasi asetil

eugenol, persen penghambatan dan persen daya antiinflamasinya semakin

menurun. Dari persamaan regresi linier tersebut didapatkan nilai EC50 sebesar

15,45%.

Kata kunci: asetil eugenol, antiinflamasi, topikal, formalin.

xvii

ABSTRACT

Inflammation often happens in our life. The most easiest way to overcome

this inflammation is given topical anti-inflammatory agent because oral anti-

inflammatory agent, especially NSAIDs can make side effect on gastrointestinal

tract. Eugenol is the main compound of clove oil that proven its anti-inflammatory

effect. Acetyl eugenol is eugenol’s derivate that also have anti-inflammatory

effect. It had proven in in vitro study. This study aims to prove that acetyl eugenol

really has in vivo anti-inflammatory effect.

This research includes pure experimental studies of completely

randomized one-way pattern design. Measurement of paw-edema induced

formalin of mice using the vernier caliper Mitutoyo. Mice were divided into 6

groups, ie. negative control group of formalin 0.5% and VCO; positive control

group of eugenol 50%; and acetyl eugenol 25%, 50%, and 100% v/v. Application

of test compound is given in the 60th

minute after formaldehyde injection

and edema is measure every hour for 6 hours. Edema thickness data is processed

into the value of total AUC and was analyzed with Kolmorogorof-Smirnov test,

followed by a one-way ANOVA analysis with a 95% level of confidence and then

Scheffe test and Post Hoc. Then proceed again with Linear Regression to know

EC50.

The percentage of inflammatory inhibition of acetyl eugenol 25% v/v,

50% v/v, and 100% v/v are 41.52%; 16.96%; and 9.04%; and the potency of

acetyl eugenol are 8.23%; -30.32%; and -42.74%. According to the linier

regression’s result, the increasement of concentration acetyl eugenol will cause

the decreasement of inflammatory inhibition and potency of acetyl eugenol. The

effective concentration of acetyl eugenol is 15.45%.

Key words: acetyl eugenol, anti-inflammatory, topical, formaldehyde.

1

BAB I

PENGANTAR

Latar Belakang

Inflamasi atau yang biasa kita kenal dengan istilah peradangan

merupakan mekanisme pertahanan tubuh terhadap infeksi maupun iritasi. Gejala-

gejala inflamasi antara lain kalor, dolor, rubor, tumor, dan functiolaesa. Inflamasi

ini sering kita alami dalam kehidupan sehari-hari dan tidak jarang menimbulkan

rasa yang tidak nyaman bagi penderitanya. Rasa tidak nyaman yang timbul

mendorong penderita untuk bergegas mengatasi peradangan yang terjadi.

Salah satu upaya pertama yang dapat dilakukan untuk mengurangi rasa

tidak nyaman yang timbul akibat inflamasi adalah dengan pemberian obat

antiinflamasi lokal yang dapat dioleskan pada daerah yang terkena inflamasi. Hal

ini dirasa lebih mudah, cepat dan praktis sebagai pertolongan pertama daripada

pemberian secara oral terutama untuk obat-obat golongan Antiinflamasi Non

Steroid (AINS) yang dapat menimbulkan efek samping berupa iritasi pada

lambung. Efek samping ini timbul karena sebagian besar obat-obat golongan

AINS tidak selektif terhadap enzim siklooksigenase-2 (COX-2) (Schror dan

Meyer-Kirchrath, 2000).

Agen antiinflamasi lokal yang berasal dari bahan alam dan sering dipakai

di pasaran adalah eugenol. Dalam penelitian yang dilakukan oleh Ozturk dan

Ozbek (2005), menyebutkan bahwa minyak esensial yang terkandung dalam

tanaman cengkeh memiliki efek antiinflamasi dengan menghambat COX-2.

2

Adapun isi dari minyak esensial tersebut antara lain β-caryophyllen dan eugenol

sebagai komponen utama, α-humulen, eugenyl acetat, dan α-copaen. Tiap-tiap

komponen dalam minyak esensial tersebut saling mempengaruhi satu sama lain

dalam menimbulkan efek antiinflamasi. Oleh karena itu perlu dilakukan uji

aktivitas antiinflamasi dari masing-masing komponen tersebut.

Hidalgo, Rosa, Carrasco, Cardona, Gallardo, dan Espinoza (2009) juga

menyebutkan bahwa eugenol dan turunannya memiliki kemampuan sebagai

antioksidan yang dapat menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh reaktif

oksigen spesies, dimana reaktif oksigen spesies ini juga berpengaruh pada proses

terjadinya inflamasi. Srivastava dan Maholtra (1991) juga melakukan penelitian

tentang derivat eugenol, yaitu asetil eugenol. Dalam penelitian ini disebutkan

bahwa asetil eugenol dapat menghambat agregasi dan metabolisme asam

arakhidonat pada platelet manusia secara in vitro.

Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik dan ingin mengetahui

apakah asetil eugenol memiliki efek antiinflamasi apabila digunakan secara

topikal dan berapakah % penghambatan inflamasi dan % daya antiinflamasinya

serta konsentrasi efektif (EC50) dari asetil eugenol bila digunakan secara topikal.

1. Permasalahan

Berdasarkan uraian yang dikemukakan di atas, maka permasalahan yang

diteliti adalah:

3

a. Apakah asetil eugenol memiliki efek antiinflamasi secara topikal terhadap

edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 % pada mencit jantan galur

Swiss?

b. Berapakah % penghambatan inflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian

asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh

formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

c. Berapakah % daya antiinflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil

eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin

0,5 % pada mencit jantan galur Swiss?

d. Berapakah konsentrasi efektif (EC50) asetil eugenol sebagai agen

antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 %

pada mencit jantan galur Swiss?

2. Keaslian penelitian

Sepanjang penelusuran pustaka yang dilakukan penulis, ada penelitian

tentang asetil eugenol yang pernah dilakukan, yaitu Acetyl eugenol, a component

of oil of cloves (Syzygium aromaticum L.) inhibits aggregation and alters

arachidonic acid metabolism in human blood platelets (Srivastava dan Maholtra,

1991). Dalam penelitian itu disebutkan bahwa asetil eugenol berpotensi sebagai

agen penghambat platelet dan dapat menghambat agregasi asam arakhidonat pada

konsentrasi 12 µM.

Penelitian lain yang berkorelasi dengan penelitian yang akan dilakukan

penulis adalah Uji Efek Antiinflamasi Krim Tipe A/M Ekstrak Etanolik Jahe 10%

4

(Zingiber officinale Roscoe) yang Diberikan Topikal terhadap Udem Kaki Tikus

yang Diinduksi Karagenin (Gunani, 2009). Hasil penelitian tersebut menunjukkan

krim tipe A/M ekstrak etanolik jahe 10% memiliki daya antiinflamasi dengan

persentase penghambatan (45,10 + 11,18)% lebih kecil dari Na diklofenak

emulgel yang memiliki persentase penghambatan (76.47+13,16)% (p=0,002).

Namun penelitian tentang Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara

Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi oleh Formalin 0,5 % pada Mencit

Jantan Galur Swiss belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis. Penelitian ini dapat menambah informasi dan

pengetahuan tentang efek antiinflamasi asetil eugenol secara topikal

terhadap edema yang diinduksi oleh formalin 0,5%.

b. Manfaat praktis. Penelitian ini dapat dijadikan sebagai acuan, yaitu berupa

nilai EC50, untuk penggunaan asetil eugenol sebagai antiinflamasi topikal.

Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

Penelitian ini bertujuan untuk memberikan informasi tambahan tentang

khasiat asetil eugenol sebagai antiinflamasi topikal.

5

2. Tujuan khusus

a. Mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi secara topikal dari asetil

eugenol terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada

mencit jantan galur swiss.

b. Mengetahui % penghambatan inflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian

asetil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh

formalin 0,5 % pada mencit jantan galur Swiss.

c. Mengetahui % daya antiinflamasi yang ditimbulkan oleh pemberian asetil

eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin

0,5 % pada mencit jantan galur Swiss.

d. Mengetahui konsentrasi efektif (EC50) asetil eugenol sebagai agen

antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5 %

pada mencit jantan galur Swiss.

6

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Inflamasi

Rhen dan Cidlowski (2005) mendefinisikan inflamasi sebagai respon

reflektif tubuh terhadap infeksi, ikatan antibodi terhadap antigen di dalam tubuh,

iritasi mekanik atau luka, dan kerusakan jaringan. Pengamatan yang lebih dekat

pada daerah inflamasi menunjukkan terjadinya dilatasi pada pembuluh darah

sehingga darah pada daerah tersebut lebih banyak, serta terjadi bendungan cairan

lainnya yang menyebabkan daerah tersebut membengkak (Maffetone, 2002).

Gejala-gejala yang dapat dikenali dalam proses inflamasi adalah adanya

rubor (kemerahan), edema (pembengkakan), kalor (panas), dolor (nyeri), dan

functiolaesa (hilangnya fungsi) (Kee dan Hayes, 1996).

Rubor atau kemerahan biasanya merupakan hal pertama yang terlihat di

daerah yang megalami peradangan (Kee dan Hayes, 1996). Warna kemerahan ini

akibat adanya dilatasi pembuluh darah kecil dalam daerah yang mengalami

kerusakan (cit Setyarini, 2009). Dengan vasodilatasi maka aliran darah yang

menuju ke daerah tersebut akan semakin banyak sehingga terlihat warna

kemerahan dan panas yang dirasakan (Karch, 2003).

Gejala paling nyata dari peradangan akut yang mungkin terjadi adalah

edema lokal. Gejala ini timbul karena adanya migrasi cairan dan sel-sel dari

sirkulasi darah ke jaringan-jaringan interstial. Campuran dari cairan dan sel yang

tertimbun di daerah peradangan disebut eksudat. Pada awal peradangan, sebagian

7

besar isi dari eksudat adalah cairan plasma, tetapi kemudian sel-sel darah putih

akan meninggalkan aliran darah kemudian tertimbun sebagai bagian dari eksudat

(Price dan Wilson, 1995).

Dolor atau rasa sakit dari reaksi peradangan dapat disebabkan oleh

adanya perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat

merangsang ujung-ujung nosiseptor. Pengeluaran zat kimia tertentu seperti

histamin (Price dan Wilson, 1995), prostaglandin, dan serotonin atau zat kimia

bioaktif lainnya dapat merangsang nosiseptor. Selain itu, edema yang terjadi

mengakibatkan peningkatan tekanan lokal yang menimbulkan rasa sakit (cit

Setyarini, 2009).

Gangguan fungsi (functiolaesa), merupakan konsekuensi dari suatu

proses radang. Gerakan yang terjadi pada daerah radang, baik dilakukan secara

langsung atau reflek akan mengalami hambatan rasa sakit. Pembengkakan yang

hebat secara fisik mengakibatkan kurangnya gerak jaringan (cit Setyarini, 2009).

Gambar 1. Skema mediator-mediator inflamasi yang berasal dari fosfolipid

beserta aksinya (Rang, Dale, Ritter, dan Moore, 2003)

8

Peristiwa utama yang terjadi pada proses inflamasi adalah adanya

perubahan aliran vasa darah dan peningkatan permeabilitas sekuler. Pada

perubahan aliran vasa darah terjadi vasokonstriksi sementara yang kemudian

menjadi vasodilatasi yang berlebihan sehingga banyak aliran darah yang mengalir

ke daerah tersebut. Proses ini membuat daerah yang mengalami inflamasi menjadi

merah dan hangat. Vasodilatasi ini membuat sirkulasi darah menjadi melambat

dan terjadi peningkatan permeabilitas vaskular sehingga terjadi stasis. Kemudian

terjadi marginasi leukosit dan keluarnya cairan yang menyebabkan terjadinya

edema. Peristiwa penting yang kedua adalah terjadinya peningkatan permeabilitas

vaskular sehingga menyebabkan kebocoran endotel. Peristiwa ini akan

meningkatkan tekanan hidrostatik dan penurunan tekanan koloid osmotik protein

(Harijadi, 2009).

Fosfolipid yang terdapat di dalam membran dipecah oleh fosfolipase A2

ketika dipicu oleh adanya neurotransmiter, neuromodulator, dan neurohormon.

Salah satu hasil pemecahan tersebut adalah asam arakidonat. Asam arakidonat ini

masuk ke dalam siklooksigenase melewati knob hidrofobik yang merupakan

penghubung antara protein ke membran. Asam arakidonat masuk ke dalam sisi

aktif siklooksigenase, dimana terjadi penambahan dua molekul oksigen sehingga

terbentuk prostaglandin endoperoksida (PGG2). Prostaglandin endoperoksida

masuk ke dalam sisi aktif peroksidase dimana gugus heme membantu

menghilangkan satu atom oksigen dari bentuk peroksida sehingga menjadi

prostaglandin H2 (PGH2) yang meninggalkan enzim siklooksigenase dan berperan

9

dalam penggumpalan darah, sensitivitas nyeri, dan reaksi alergi (Amasino, Deng,

Huang, Lee, Lesi, Pu, et al., 1996).

B. Antiinflamasi

Obat Anti-Inflamasi Non Steroid (OAINS) populer dengan menghambat

baik sistem enzim siklooksigenase maupun lipooksigenase intraseluler, yang

nantinya akan berpengaruh pada respon inflamasi yang terjadi dan menurunkan

produksi berbagai komponen prostaglandin (Babb, 1992). Dannhardt dan Laufer

(2000) menyatakan bahwa senyawa yang termasuk dalam penghambat enzim

COX-2 adalah senyawa yang bersifat lipofil dan asam. Berdasarkan strukturnya

ada beberapa golongan inhibitor selektif COX-2, yaitu: (1) turunan karbosiklik

dan heterosiklik yang terikat visinal dengan moieties aril, (2) turunan diaril- atau

aril/heteroaril-eter dan –tioeter, (3) turunan cis-stilben, serta (4) keton diaril dan

aril/heteroaril, (5) senyawa dengan gugus antioksidan.

Untuk mampu bekerja dengan efektif, OAINS topikal harus mampu

melakukan penetrasi ke dalam kulit serta memasuki sirkulasi atau diabsorbsi ke

dalam jaringan yang lebih dalam untuk menghambat siklooksigenase. Hal tersebut

dipengaruhi oleh keseimbangan solubilitas lipid dan aqueous agar permeasi

optimal. Sekalipun kadar plasma dari pemberian OAINS topikal relatif lebih

rendah daripada pemberian OAINS secara oral, akan tetapi studi komparatif yang

dilakukan dengan zat aktif diklofenak menunjukkan tidak terjadi perbedaan yang

signifikan dengan rute pemberian oral maupun topikal dalam terapi osteoartritis

(Moore, 2004).

10

C. Formalin

Formalin adalah larutan formaldehid sekitar 37% yang larut dalam air.

Formaldehid seketika menghasilkan gugus hidroksimetil yang reaktif pada asam

amino seperti lysine (K), arginine (R), tyrosine (Y), asparagine (N), histidine (H),

glutamine (Q), and serine (S) (Sompuram, Vani, Messana, dan Bogen, 2004).

Asam-asam amino tersebut berikatan dengan protein dan molekul besar.

Formaldehid memiliki nilai koefisien difusi sebesar 0,79. Kecepatan penetrasi

jaringan oleh formaldehid relatif cepat, kurang lebih 1 mm/jam (Goldstein,

Ferkowicz, Odish, Mani, dan Hastah, 2003). Kandungan unsur aldehida yang

terdapat di dalam formalin akan mudah bereaksi dengan protein sehingga

menyebabkan kematian sel (Hasyim, Hamam, dan Akil, 2006). Formalin ini

menghasilkan inflamasi lokal dan nyeri (Banerjee, Sur, Mandal, Das, dan Sikdar,

2000). Menurut Tanko, Kamba, Saleh, Musa, dan Mohammed (2008), formalin

menimbulkan fase nosiseptif sebagai fase awal dan fase inflamasi sebagai fase

kedua. Selama fase kedua, formalin memicu terjadinya pelepasan serotonin,

histamin, bradikinin, dan prostaglandin.

D. Virgin Coconut Oil (VCO) HealthyCo®

Virgin Coconut Oil (VCO) adalah minyak yang diekstraksi dari daging

kelapa segar (bukan kopra) dengan cara mekanis atau alami, dengan atau tanpa

pemanasan. Untuk melindungi kandungan dari minyak tersebut, produksi minyak

kelapa murni tidak mengalami penyulingan kimia, pemutihan, atau penghilangan

bau. Karakteristik dari minyak kelapa murni ini adalah: minyak berwarna bening

hingga kuning pucat dengan aroma dan rasa yang khas. Kandungan dalam VCO

11

ini antara lain: asam kaproat, asam kaprilat, asam kaprat, asam laurat, asam

miristat, asam palmitat, asam palmitoleat, asam stearat, asam oleat, asam linoleat,

dan asam linolenat (The virgin coconut oil, 2010).

E. Eugenol

Eugenol memiliki titik didih 2530C dan titik lebur sebesar -9

0C. Senyawa

yang berbau cengkeh ini mudah terbakar, memiliki kestabilan yang cukup tinggi

tetapi akan mudah teroksidasi dengan adanya agen pengoksidasi yang kuat.

Senyawa ini berbahaya bila ditelan dan memiliki LD50 sebesar 2680 mg/kg BB

tikus. (MSDS, 2007). Gambar struktur eugenol:

Gambar 2. Struktur Eugenol (Bulan, 2004)

Eugenol (C10H12O2) merupakan isomer dari posisi betelfenol yang

ditemukan di tanaman Myrtaceae dan Lauraceae. Eugenol berwarna kekuningan

dan berbentuk cair. Senyawa ini sering digunakan sebagai wangi-wangian di

bidang farmasi dan digunakan dalam pembuatan vanilin. Di dalam tumbuhan,

eugenol terkadang ditemukan dalam bentuk glukosida yang dihasilkan dari proses

hidrolisis, yaitu hasil fermentasi (Gildemeister, 2009).

Menurut Sadeghian, Seyedi, Saberi, Arghiani, dan Riazi (2008), eugenol

(4-allyl-2-methoxyphenol) merupakan senyawa alam yang menunjukkan aktivitas

sebagai antispasmodik, antipiretik, antibakteri (Ayoola, Lawore, Adelowotan,

12

Aibinu, Adenipekun, Coker, et al., 2008), dan antiinflamasi dengan menghambat

pembentukan prostaglandin pada jalur COX-2 (Ozturk dan Ozbek, 2005).

F. Asetil Eugenol

Asetil eugenol (C12H14O3) merupakan senyawa turunan eugenol yang

berwarna bening hingga kuning pucat dan memiliki konsistensi seperti minyak.

Senyawa ini bersifat mudah terbakar dan dapat mengiritasi kulit serta toksik bila

tertelan. Sinonim dari asetil eugenol adalah eugenol asetat, 1-asetoksi-2-metoksi-

4-alilbenzena, 4-alil-2-metoksifenil asetat. Senyawa ini memiliki titik didih 281°C

dan kerapatan 1,08 (Rdchemicals, 2006). Secara in vitro, asetil eugenol dapat

menghambat agregasi dan metabolisme asam arakhidonat pada platelet manusia

(Srivastava dan Maholtra, 1991). Menurut Hidalgo, et al. (2009), senyawa

eugenol dan turunannya (termasuk di dalamnya adalah asetil eugenol) dapat

menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh reaktif oksigen spesies serta

dapat menghambat jalur COX-2 sehingga prostaglandin tidak terbentuk (Ozturk

dan Ozbek, 2005).

Gambar 3. Struktur Asetil Eugenol (Rdchemicals, 2006)

G. Metode Pengujian Antiinflamasi

Metode yang dapat digunakan untuk menguji aktivitas antiinflamasi

suatu senyawa antara lain mengukur eritema dan udem pada telinga hewan

13

pengerat, uji edema pada kaki hewan pengerat, dan uji induksi artritis pada hewan

pengerat (Evans dan Williamson, 1996).

Metode lain pengujian efek antiinflamasi dengan mengukur diameter

edema pada kaki tikus yang diinduksi formalin 50µL 2,5% v/v setiap satu jam

selama lima jam. Pengukuran diameter edema tersebut dilakukan menggunakan

vernier caliper. Pengukuran dilakukan hingga jam ke-5 karena pada jam ke-5

tersebut terjadi penghambatan inflamasi yang signifikan setelah 5 jam dari

pemberian ekstrak Newbouldia laevis (Tanko et al., 2008).

H. Landasan Teori

Inflamasi merupakan respon perlindungan tubuh terhadap kerusakan

jaringan yang terjadi. Walaupun begitu, inflamasi sering menimbulkan rasa tidak

nyaman bagi penderitanya. Formalin 0,5% sebanyak 0,025ml dilaporkan memiliki

aktivitas inflamasi pada kaki mencit (Vogel, 2002), yang terbagi dalam dua fase,

yaitu fase awal (0-5 menit) merupakan fase nosiseptif sedangkan fase kedua (20-

30 menit) merupakan fase inflamasi (Lu et al., 2009). Penggunaan formalin lebih

dipilih sebagai agen penginflamasi karena gejala-gejala inflamasi yang timbul

lebih nyata bila dibandingkan dengan karagenin (Joseph, George, dan Nair, 2005).

Hal ini dilihat dari edema yang timbul lebih besar dan lebih merah, sehingga akan

lebih mempermudah dalam pengamatan.

Dalam penelitian Ozturk dan Ozbek (2005), disebutkan bahwa minyak

esensial yang terkandung dalam tanaman cengkeh memiliki efek antiinflamasi

dengan menghambat COX-2. Adapun isi dari minyak esensial tersebut antara lain

14

β-caryophyllen dan eugenol sebagai komponen utama, α-humulen, eugenyl acetat,

dan α-copaen. Tiap-tiap komponen dalam minyak esensial tersebut saling

mempengaruhi satu sama lain dalam menimbulkan efek antiinflamasi. Hidalgo et

al. (2009) juga menyebutkan bahwa eugenol dan turunannya memiliki

kemampuan sebagai antioksidan yang dapat menghambat peroksidasi lipid yang

diinduksi oleh reaktif oksigen spesies, sedangkan penelitian secara in vitro dari

asetil eugenol terbukti dapat menghambat agregasi dan metabolisme asam

arakhidonat dan mengganggu biosintesis prostaglandin yang merupakan senyawa

penting dalam proses terjadinya inflamasi (Srivastava dan Maholtra, 1991).

Selain itu, bila dilihat dari strukturnya, asetil eugenol termasuk dalam

kategori senyawa turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan –tioeter yang

bersifat lipofil dan asam serta memiliki struktur yang lebih besar dari induknya,

sehingga berpotensi selektif COX-2 (Dannhardt dan Laufer, 2000). Dapat

dikatakan bahwa asetil eugenol yang merupakan senyawa turunan dari eugenol ini

berpotensi sebagai agen antiinflamasi topikal terhadap edema kaki mencit yang

diinduksi oleh formalin 0,5 %.

I. Hipotesis

Pemberian asetil eugenol secara topikal memiliki efek antiinflamasi

terhadap edema kaki mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5 % dengan

penghambatan inflamasi dan daya antiinflamasi yang meningkat seiring dengan

meningkatnya konsentrasi asetil eugenol.

15

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian berjudul Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal

terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan

Galur Swiss ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan

acak lengkap pola satu arah.

B. Variabel Penelitian

1. Variabel utama

Variabel utama dalam penelitian ini yaitu:

a. Variabel bebas : peringkat konsentrasi asetil eugenol

b. Variabel tergantung : tebal edema pada kaki mencit

2. Variabel pengacau

a. Variabel pengacau terkendali:

1) Subyek uji : mencit jantan

2) Galur : Swiss

3) Umur subyek uji : 2-3 bulan

4) Berat badan subyek : 30-40 gram

5) Keadaan subyek : sehat

b. Variabel pengacau tak terkendali : variabilitas individu tiap mencit, seperti

kekebalan dan status patologi tiap mencit.

16

C. Definisi Operasional

1. Inflamasi adalah respon reflektif tubuh terhadap infeksi, ikatan antibodi

terhadap antigen di dalam tubuh, iritasi mekanik, dan kerusakan jaringan.

Gejala inflamasi ditandai dengan rubor, kalor, dolor, tumor, dan functiolaesa.

Dalam hal ini yang diukur adalah edema (bengkak).

2. Asetil eugenol adalah senyawa hasil sintesis dari anhidrida asam asetat dengan

eugenol (Riswanto, 2011).

3. Waktu pemberian senyawa antiinflamasi dilakukan secara topikal 1 jam

setelah pemberian agen inflamasi (lampiran 5b).

4. Pengolesan secara topikal yaitu pengolesan senyawa secara merata ke seluruh

permukaan udema kaki mencit selama ± 10 detik.

5. Tebal edema merupakan tebal telapak kaki mencit yang diukur menggunakan

jangka sorong merk Mitutoyo.

6. Daya antiinflamasi adalah kemampuan dalam menurunkan tebal edema yang

terbentuk selama proses inflamasi. Rumus perhitungan % penghambatan

inflamasi dan % daya antiinflamasi:

17

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007)

Keterangan:

(AUC0-6)positif : AUC0-6 rata-rata kelompok kontrol positif (cm.jam)

(AUC0-6)negatif : AUC0-6 rata-rata kelompok kontrol negatif (cm.jam)

(AUC0-6)perlakuan : AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang

diberi senyawa uji (cm.jam)

D. Bahan atau Materi Penelitian

1. Bahan penelitian

a. Hewan uji

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit

jantan galur Swiss berumur 2-3 bulan dengan berat 30-40 gram yang

diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT),

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta dengan pembelian atas nama

Paulina Maya Octasari (terlampir).

b. Formalin 0,5%

Formalin 0,5% produksi Bratachem® yang didapatkan dari

Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Sanata Dharma,

Yogyakarta dan digunakan sebagai agen penginflamasi.

18

c. Eugenol

Eugenol murni merk Sigma Aldrich® didapatkan dari Laboratorium

Kimia Organik Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta dan digunakan

sebagai kontrol positif.

d. Asetil eugenol

Asetil eugenol yang digunakan sebagai senyawa uji didapatkan dari

hasil sintesis Riswanto (2011) di Laboratorium Kimia Organik Universitas

Sanata Dharma, Yogyakarta.

e. VCO

VCO merk HealtyCo® dibeli di Apotek Sanata Dharma Yogyakarta

dan digunakan sebagai pelarut eugenol dan asetil eugenol.

2. Alat penelitian

Alat penelitian yang digunakan dalam penelitian ini antara lain kotak

kaca tempat pengamatan mencit, stopwatch merk Baby-G, timbangan merk

Ohaus, alat-alat gelas, jangka sorong merk Mitutoyo.

E. Tata Cara Penelitian

1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki mencit.

Hewan uji dibagi dua kelompok (masing-masing kelompok terdiri dari 3

ekor mencit) dimana kelompok I tidak diinjeksi formalin dan kelompok II

diinjeksi formalin 0,5% sebanyak 0,025 mL/20 g BB mencit secara subplantar.

Setiap jam diukur tebal kaki mencit dan dihitung selisihnya kemudian dianalisis

19

menggunakan paired T-test. Waktu yang menunjukkan nilai p<0,05 merupakan

waktu optimum pengolesan.

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif

Hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok (masing-masing kelompok terdiri

dari 3 ekor). Kelompok I sebagai kontrol edema (hanya diinjeksi formalin),

kelompok II, III, dan IV masing-masing diinjeksi formalin 0,5% kemudian diolesi

dengan eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v. Hasil selisih edema diolah

menjadi nilai AUC (Area Under Curve) total yang dihitung dari jam ke-0 sampai

jam ke-6 dan kemudian dianalisis menggunakan One-Way ANOVA. Kelompok

yang memiliki nilai p<0,05 akan digunakan sebagai kontrol positif.

3. Orientasi pelarut asetil eugenol

Mengambil 2 tetes asetil eugenol dan meneteskan tetes demi tetes pelarut

menggunakan pipet tetes hingga asetil eugenol dapat bercampur homogen dengan

pelarut.

4. Penentuan peringkat konsentrasi asetil eugenol

Berdasarkan hasil orientasi pelarut asetil eugenol maka akan didapatkan

pelarut yang sesuai untuk asetil eugenol. Setelah itu, kita tentukan peringkat

konsentrasi asetil eugenol yang akan digunakan (25% v/v, 50% v/v, dan 100%

v/v). Konsentrasi 100% v/v merupakan asetil eugenol murni tanpa pengenceran

dengan VCO. Konsentrasi 50% v/v dibuat dari pencampuran asetil eugenol

20

dengan VCO 1:1. Konsentrasi 25% v/v dibuat dari pencampuran asetil eugenol

dengan VCO 1:3.

5. Pengelompokan hewan uji

Tiga puluh ekor mencit diukur ketebalan kaki kirinya menggunakan

jangka sorong. Kemudian diinjeksikan formalin 0,5% secara subplantar pada kaki

kiri yang sebelumnya telah diukur tebalnya.

Gambar 4. Skema Jalannya Penelitian

Keterangan:

Kel. I : Kelompok Formalin 0,5%

Kel. II : Kelompok Kontrol Negatif (VCO)

Kel. III : Kontrol Positif (Eugenol 50% v/v)

Kel. IV : Kelompok Asetil Eugenol 25% v/v

Kel. V : Kelompok Asetil Eugenol 50% v/v

Kel. VI : Kelompok Asetil Eugenol 100% v/v

21

Dari perlakuan tersebut hewan uji dibagi secara acak menjadi 6

kelompok besar, yaitu kelompok formalin 0,5%; kelompok kontrol negatif VCO;

kelompok kontrol positif eugenol 50% v/v; kelompok asetil eugenol I, kelompok

asetil eugenol II, dan kelompok asetil eugenol III. Setelah 1 jam dilakukan

pengukuran ketebalan kaki mencit setiap kelompok. Kemudian segera setelah

diukur, kelompok kontrol negatif kaki kiri mencit diolesi VCO, kelompok kontrol

positif diolesi eugenol 50% v/v. Pada kelompok asetil eugenol I diberikan asetil

eugenol 25% v/v, pada kelompok asetil eugenol II diberikan asetil eugenol

konsentrasi 50% v/v, sedangkan pada kelompok asetil eugenol III diberikan asetil

eugenol konsentrasi 100% v/v.

6. Pengamatan

Pengamatan dilakukan dengan cara mengukur ketebalan edema kaki kiri

mencit setiap jam selama 6 jam menggunakan jangka sorong.

F. Tata Cara Analisis Hasil

1. Analisis hasil dilakukan dengan mengukur ketebalan edema kaki kiri mencit

menggunakan jangka sorong.

2. Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC total masing-

masing perlakuan.

3. Hasilnya dianalisis menggunakan uji Kolmorogorof-Smirnov, dilanjutkan

analisis ANOVA satu arah taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe.

4. Jika terdapat nilai p<0,05 yang menandakan adanya perbedaan yang bermakna

dilakukan analisis lanjutan menggunakan metode Post Hoc.

22

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian yang berjudul Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara

Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi oleh Formalin 0,5% pada Mencit

Jantan Galur Swiss merupakan bagian dari suatu rangkaian penelitian besar yang

bertujuan untuk mengetahui apakah dengan penambahan gugus asetil pada

senyawa eugenol dapat memberikan efek antiinflamasi secara topikal. Asetil

eugenol yang digunakan dalam penelitian ini merupakan hasil sintesis dari

anhidrida asam asetat dengan eugenol dan senyawa hasil sintesis tersebut telah

dibuktikan kebenarannya melalui elusidasi struktur oleh salah satu peneliti dari

bagian sintesis, sehingga dapat dijamin bahwa senyawa yang peneliti gunakan

benar merupakan asetil eugenol (Riswanto, 2011).

A. Orientasi Rentang Waktu Pengolesan Senyawa pada Edema Kaki Mencit,

Orientasi Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif, serta Orientasi

Pelarut dan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol

Orientasi bertujuan untuk memvalidkan metode penelitian yang

digunakan agar hasil yang didapatkan akurat dan representatif. Orientasi yang

dilakukan antara lain: orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki

mencit, orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif, dan orientasi

konsentrasi asetil eugenol.

23

1. Orientasi rentang waktu pengolesan senyawa pada edema kaki mencit

Orientasi ini bertujuan untuk mengetahui kapankah waktu pengukuran

kaki mencit yang tepat setelah injeksi formalin 0,5%. Dalam penelitian ini dipilih

waktu pengolesan senyawa saat edema maksimal. Hal ini bertujuan untuk

mengetahui dengan jelas efek penurunan edema kaki mencit setelah dioleskan

senyawa uji. Bila senyawa uji dioleskan langsung setelah injeksi formalin 0,5%,

masih dimungkinkan adanya peningkatan edema walaupun telah dioleskan

senyawa antiinflamasi karena pada rentang waktu tersebut memang terjadi

peningkatan edema.

Alasan penggunaan formalin dalam penelitian ini adalah karena formalin

merupakan agen inflamasi yang bersifat bifasik (terdapat fase nosiseptif pada fase

awal dan fase inflamasi pada fase berikutnya) dan cocok digunakan dalam

pengujian antiinflamasi suatu senyawa (Tanko et al., 2008). Menurut Joseph,

George, dan Nair (2005), formalin menimbulkan gejala-gejala inflamasi yang

lebih nyata, terutama dalam hal edema yang lebih besar dan lebih merah bila

dibandingkan dengan karagenin. Hal ini tentu saja menguntungkan dan akan

mempermudah dalam pengamatan.

Dalam penelitian ini digunakan metode pengukuran menggunakan jangka

sorong. Sebelum digunakan, jangka sorong dikalibrasi dan diukur presisinya

terlebih dahulu. Pengkalibrasian ini bertujuan untuk menjamin keakuratan dari

alat ukur yang digunakan, sedangkan uji presisi bertujuan untuk menjamin

keterulangan pengukuran dari jangka sorong yang digunakan. Menurut Mulja dan

Hanwar (2003), suatu alat ukur dikatakan memiliki presisi yang baik jika nilai

24

Coefficient of Varians (CV) ≤ 2%. Sebelum digunakan, jangka sorong diuji

presisinya terlebih dahulu dengan cara mengukur tebal kaki mencit secara

berulang sehingga didapatkan nilai CV berturut-turut 0,71%, 0,34% dan 0%.

Dengan demikian jangka sorong yang digunakan dalam penelitian ini memenuhi

syarat validitas alat ukur dan dapat dipertanggungjawabkan penggunaannya.

Tabel I. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap jam

selama 5 jam pengamatan

Kelompok Tebal edema (cm)

X+SE I II III IV V

I 0,097 + 0,013 - tb - - -

II 0,110 + 0,017 tb - tb - -

III 0,123 + 0,020 - tb - tb -

IV 0,127 + 0,012 - - tb - tb

V 0,107 + 0,012 - - - tb -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diukur 1 jam setelah diinjeksi formalin

0,5%

Kelompok II : Kelompok mencit yang diukur pada jam kedua setelah diinjeksi

formalin 0,5%

Kelompok III : Kelompok mencit yang diukur pada jam ketiga setelah

diinjeksi formalin 0,5%

Kelompok IV : Kelompok mencit yang diukur pada jam keempat setelah


Kelompok V : Kelompok mencit yang diukur pada jam kelima setelah


tb : Berbeda tidak bermakna

b : Berbeda bermakna

X : Rata-rata tebal edema

SE : Standar Error

Hasil orientasi pada tabel II menunjukkan bahwa ada perbedaan yang

tidak bermakna dari tebal edema kaki mencit tiap jamnya. Maka dari itu,

dilakukan orientasi lagi dengan mengukur tebal edema kaki tiap 10 menit selama

1 jam pengamatan.

25

Tabel II. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap 10

menit selama 1 jam pengamatan

Kelompok

Tebal edema

(cm)

X+SE

I II III IV V VI

I 0,128 + 0,014 - tb - - - -

II 0,128 + 0,014 tb - tb - - -

III 0,143 + 0,013 - tb - b - -

IV 0,160 + 0,015 - - b - tb- -

V 0,165 + 0,014 - - - tb - b

VI 0,180 + 0,013 - - - - b -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-10 setelah


Kelompok II : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-20 setelah


Kelompok III : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-30 setelah


Kelompok IV : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-40 setelah


Kelompok V : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-50 setelah


Kelompok VI : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-60 setelah




X : Rata-rata tebal edema

SE : Standar Error

Hasil orientasi pada tabel III menunjukkan bahwa terjadi perbedaan yang

bermakna pada menit ke-30 dan 40 serta menit ke-50 dan 60. Oleh karena itu

dilakukan uji paired T-test lagi untuk menit ke-40 dan 60 sehingga didapatkan

hasil bahwa terjadi perbedaan yang bermakna antara menit tersebut. Dari hasil

tersebut, maka didapatkan waktu pengolesan senyawa pada edema mencit adalah

60 menit setelah injeksi formalin 0,5%.

Hasil orientasi ini sesuai dengan Canon, Leurs, dan Hough (2007) yang

mengatakan bahwa aktivitas peningkatan edema secara signifikan terjadi pada

26

menit ke-30 sampai menit ke-60 setelah injeksi formalin secara subplantar.

Namun, peningkatan akan terus terjadi sampai menit ke-240 secara tidak

signifikan.

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif

Orientasi ini bertujuan untuk menentukan konsentrasi berapakah dari

eugenol yang paling efektif digunakan sebagai agen antiinflamasi topikal bagi

edema kaki mencit pada penelitian ini. Penggunaan eugenol sebagai kontrol

positif karena asetil eugenol merupakan turunan dari eugenol. Eugenol dilaporkan

memiliki efek antiinflamasi yang berkaitan dengan penghambatan kerja enzim

siklooksigenase-2 (Sadeghian et al., 2008). Namun belum ada data yang

menyebutkan konsentrasi eugenol sebagai antiinflamasi topikal. Oleh karena itu,

dilakukan orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif. Peringkat

konsentrasi eugenol yang diuji adalah eugenol 25% v/v, eugenol 50% v/v, dan

eugenol 100% v/v.

Eugenol 100% v/v merupakan eugenol murni, sedangkan untuk membuat

eugenol 50% v/v dan eugenol 25% v/v harus dilakukan pengenceran dengan

pelarut yang cocok. Dalam penelitian ini digunakan pelarut VCO (Virgin Coconut

Oil) merk HealthyCoR karena eugenol dan VCO memiliki sifat yang sama, yaitu

sama-sama merupakan senyawa lipofil (minyak) sehingga memenuhi prinsip “like

dissolve like”. Dari hasil orientasi pelarut ini, eugenol dapat bercampur dan larut

homogen dalam VCO.

27

Tabel III. Hasil analisis AUC total ketiga peringkat konsentrasi eugenol

menggunakan One-Way ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe

Kelompok Tebal edema (cm)

X+SE I II III IV

I 0,983 + 0,0169 - tb b tb

II 0,733 + 0,0721 tb - tb tb

III 0,610 + 0,0328 b tb - tb

IV 0,835 + 0,0929 tb tb tb -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% secara

subplantar

Kelompok II : Kelompok mencit yang diolesi eugenol 25% v/v 1 jam setelah


Kelompok III : Kelompok mencit yang diolesi eugenol 50% v/v 1 jam setelah


Kelompok IV : Kelompok mencit yang diolesi eugenol 100% v/v 1 jam setelah




X : Rata-rata AUC total

SE : Standar Error

Dari tabel IV di atas, dapat dilihat bahwa pengolesan eugenol 100% v/v

dan 25% v/v menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna terhadap kelompok

mencit yang diinjeksi formalin 0,5% (kelompok kontrol negatif). Hanya eugenol

50% v/v saja yang menunjukkan perbedaan yang bermakna. Hal ini mungkin

disebabkan pada kelompok eugenol 100% v/v, efek iritasi eugenol lebih besar

daripada efek antiinflamasinya, sehingga peningkatan edema lebih besar daripada

penurunan edema yang seharusnya terjadi. Begitu pula pada kelompok eugenol

25% v/v, penurunan edema menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna

terhadap kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5%. Hal ini mungkin

disebabkan karena pada konsentrasi 25% v/v, eugenol yang ada tidak cukup untuk

mengatasi inflamasi yang timbul, sehingga malah terjadi peningkatan edema.

Pada kelompok mencit yang diolesi eugenol 50% v/v menunjukkan perbedaan

28

yang bermakna terhadap kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5%. Hal ini

berarti eugenol 50% v/v memiliki efek antiinflamasi karena terbukti secara

statistik dapat menurunkan edema kaki mencit. Jadi, pada penelitian ini eugenol

yang dapat digunakan sebagai kontrol positif adalah eugenol dengan konsentrasi

50% v/v.

3. Orientasi pelarut dan peringkat konsentrasi asetil eugenol

Orientasi ini bertujuan untuk mengetahui pelarut yang sesuai untuk asetil

eugenol sehingga dapat diaplikasikan secara topikal. Asetil eugenol yang

digunakan dalam penelitian ini merupakan hasil sintesis antara anhidrida asam

asetat dengan eugenol. Asetil eugenol yang dihasilkan memiliki kemurnian

95,88%; berbentuk cair dan berwarna merah (Riswanto, 2011). Asetil eugenol

merupakan senyawa turunan eugenol yang tidak larut dalam air tetapi larut dalam

pelarut non polar. Beberapa pelarut nonpolar yang dicoba untuk melarutkan asetil

eugenol antara lain etanol 96% dan VCO.

Pelarut non polar pertama yang diuji adalah etanol 96%. Pelarut ini dapat

mengiritasi kulit dengan cara menarik air yang ada di kulit sehingga membuat

kulit kering. Pemberian etanol 96% secara berulang dapat menyebabkan kulit

menjadi kemerahan, gatal, inflamasi, kering dan kemungkinan terjadi alergi.

Etanol 96% memiliki titik didih 78,20C dan memiliki titik leleh -112

0C sehingga

mudah menguap (MSDS, 2002). Selain itu di dalam etanol 96% terdapat

kandungan air sebesar 4% sehingga menyebabkan terbentuknya 2 lapisan ketika

asetil eugenol dicampur dengan etanol 96%. Hal ini disebabkan karena asetil

eugenol tidak dapat bercampur dengan air akibat dari perbedaan kepolaran antara

29

kedua senyawa tersebut. Karena sifat dari etanol 96% yang mudah menguap dan

terdapat kandungan air di dalam etanol 96% tersebut, maka etanol 96% tidak

dipilih sebagai pelarut dari asetil eugenol.

Pelarut kedua yang diuji adalah VCO. Dari hasil percobaan, asetil

eugenol dapat larut dengan baik dan homogen pada VCO. Hal ini disebabkan

karena kedua senyawa tersebut memiliki kepolaran yang sama. Oleh karena itu,

konsentrasi asetil eugenol tertinggi yang dapat dibuat adalah 100%. Dari

konsentrasi tertinggi tersebut, dapat dibuat peringkat konsentrasi asetil eugenol

yaitu 25% v/v, 50%v/v, dan 100% v/v. Faktor kelipatan yang digunakan antar

konsentrasi eugenol adalah 2 kali.

B. Hasil Uji Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal terhadap

Edema Kaki Mencit yang Diinduksi oleh Formalin 0,5%

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui ada atau tidaknya efek

antiinflamasi dari asetil eugenol dan untuk mengetahui berapakah besarnya

penghambatan inflamasi dan daya antiinflamasi asetil eugenol yang dihasilkan.

Besarnya daya antiinflamasi dari asetil eugenol dilihat dari besarnya kemampuan

asetil eugenol untuk menurunkan edema kaki mencit yang dapat dilihat dari %

daya antiinflamasi.

Dalam penelitian ini digunakan metode pengukuran menggunakan jangka

sorong. Jangka sorong yang digunakan adalah jangka sorong digital merk

Mitutoyo. Keuntungan dari metode pengukuran menggunakan jangka sorong

dibandingkan dengan metode potong kaki adalah tidak perlu mengorbankan

hewan uji yang digunakan, penggunaannya sederhana, dan dapat mengurangi

30

kesalahan pengukuran. Jangka sorong merk Mitutoyo ini memiliki rentang

pengukuran 0-150 mm. Penyimpangan alat ini maksimal sebesar + 2µm

sedangkan alat ini memiliki penyimpangan pengukuran + 1µm. Maka dapat

dikatakan alat yang digunakan dapat dipertanggungjawabkan.

Dalam penelitian ini, tebal edema diukur tiap jam selama 6 jam. Setelah

itu dihitung nilai AUC tiap jamnya kemudian dirata-rata, maka didapatkan profil

seperti gambar 5.

Gambar 5. Grafik rata-rata tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin 0,5%

selama 6 jam pengamatan

Dari grafik tersebut dapat dilihat bahwa grafik dari kontrol positif

eugenol 50% v/v berhimpit dengan grafik dari asetil eugenol 25% v/v sedangkan

grafik asetil eugenol 50% v/v berada di tengah-tengah antara kontrol negatif dan

kontrol positif, dan asetil eugenol 100% v/v berdekatan dengan grafik kontrol

31

negatif formalin dan VCO. Hal ini menunjukkan bahwa asetil eugenol 25% v/v

memiliki aktivitas antiinflamasi yang hampir sama dengan kontrol positif eugenol

50% v/v dalam menurunkan tebal edema kaki mencit yang diinduksi oleh

formalin 0,5%; sedangkan asetil eugenol 50% v/v dan asetil eugenol 100% v/v

memiliki profil kemiripan dengan kontrol negatif yang berarti kedua konsentrasi

asetil eugenol tersebut tidak memiliki aktivitas antiinflamasi. Hal ini dapat dilihat

dari luas area dibawah kurvanya yang hampir sama dengan grafik formalin dan

kontrol negatif VCO. Hal ini semakin diperkuat lagi dengan melihat hasil

perhitungan statistiknya di tabel IV.

Dari tabel IV dapat dilihat bahwa pada kelompok kontrol positif eugenol

50% v/v dan kelompok asetil eugenol 25% v/v menunjukkan perbedaan bermakna

terhadap kelompok kontrol negatif formalin dan kontrol negatif VCO. Hal ini

berarti bahwa kelompok kontrol positif eugenol 50% v/v dan kelompok asetil

eugenol 25% v/v dapat menurunkan edema kaki mencit secara signifikan dan

kemampuan asetil eugenol 25% v/v tersebut berbeda tidak bermakna dengan

kelompok kontrol positif eugenol 50% v/v dalam menurunkan edema kaki mencit.

32

Tabel IV. Hasil analisis rata-rata nilai AUC total tebal edema kaki mencit yang

diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan menggunakan one way

ANOVA taraf kepercayaan 95% dengan uji Scheffe

Kel.

Rata-rata

AUC total

(cm.jam)

X ± SE

I II III IV V VI

I 0,957 ± 0,050 - tb b tb tb tb

II 0,973 ± 0,030 tb - b tb tb tb

III 0,620 ± 0,031 b b - tb tb tb

IV 0,569 ± 0,083 b b tb - tb b

V 0,808 ± 0,034 tb tb tb tb - tb

VI 0,885 ± 0,076 tb tb tb b tb -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5%

Kelompok II : Kelompok mencit yang diolesi VCO (Virgin Coconut Oil)

setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5%

Kelompok III : Kelompok mencit yang diolesi eugenol 50% v/v setelah 1

jam diinjeksi formalin 0,5%

Kelompok IV : Kelompok mencit yang diolesi asetil eugenol 25% v/v


Kelompok V : Kelompok mencit yang diolesi asetil eugenol 50% v/v


Kelompok VI : Kelompok mencit yang diolesi asetil eugenol 100% v/v




X : Rata-rata AUC total

SE : Standar Error

33

Gambar 6. Diagram batang nilai AUC total masing-masing perlakuan

Dalam penelitian ini digunakan 2 kelompok kontrol negatif, yaitu kontrol

negatif formalin 0,5% dan kontrol negatif VCO. Kontrol negatif formalin

digunakan untuk membuktikan bahwa formalin benar-benar dapat menimbulkan

edema pada kaki mencit, sedangkan kontrol negatif VCO digunakan sebagai

faktor koreksi bagi kontrol positif eugenol dan kelompok perlakuan asetil eugenol

karena VCO merupakan pelarut dari eugenol dan asetil eugenol. Dari tabel VI

dapat dilihat bahwa antara kelompok kontrol negatif formalin dan kontrol negatif

VCO berbeda tidak bermakna (p>0,05). Hal ini berarti bahwa VCO tidak

menimbulkan penurunan edema, sehingga penurunan edema yang terjadi pada

kelompok kontrol negatif dan kelompok perlakuan asetil eugenol benar-benar

karena senyawa ujinya, bukan karena VCO.

34

Selanjutnya, untuk mengetahui seberapa besar aktivitas antiinflamasi dari

masing-masing senyawa, maka dihitunglah % penghambatan inflamasi dan %

daya antiinflamasi dari nilai AUC total yang sebelumnya telah dihitung.

Prosentase penghambatan inflamasi yang didapatkan dari hasil perhitungan

berturut-turut dari kontrol positif eugenol 50% v/v, kelompok perlakuan asetil

eugenol 100% v/v, asetil eugenol 50% v/v, dan asetil eugenol 25% v/v adalah

36,28%; 9,04%; 16,96%; dan 41,52%. Dari tabel V di bawah ini menunjukkan

bahwa ada perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas antiinflamasi dari

kontrol positif eugenol 50% v/v, asetil eugenol 50% v/v dan asetil eugenol 25%

v/v. Pada kelompok perlakuan asetil eugenol 100% v/v menunjukkan %

penghambatan inflamasi yang paling rendah diantara ketiga senyawa yang

lainnya.

35

Tabel V. Nilai hasil uji Scheffe % penghambatan inflamasi yang diinduksi

formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan

Kelompok

Rata-rata %

penghambatan

inflamasi

X ± SE

I II III IV

I 36,28 ± 3,20 - tb tb tb

II 41,52 ± 8,50 tb - tb b

III 16,96 ± 3,48 tb tb - tb

IV 9,04 ± 7,86 tb b tb -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%

kemudian setelah 1 jam diolesi eugenol 50% v/v

Kelompok II : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%

kemudian setelah 1 jam diolesi asetil eugenol 25% v/v

Kelompok III : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%


Kelompok IV : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%




X : Rata-rata persentase penghambatan edema kaki

SE : Standar Error

Bila dilihat dari % penghambatan inflamasi masing-masing senyawa

yang paling tinggi adalah asetil eugenol 25% v/v, yaitu sebesar 41,52%. Nilai %

penghambatan inflamasi ini lebih tinggi daripada nilai % penghambatan inflamasi

kontrol positif eugenol 50% v/v. Hal ini berarti asetil eugenol 25% v/v memiliki

aktivitas antiinflamasi yang lebih bagus daripada kontrol positif eugenol 50% v/v.

Prosentase daya antiinflamasi yang didapatkan dari hasil perhitungan

sesuai dengan peringkat konsentrasi eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v

berturut-turut adalah 8,23%; -30,32%; dan -42,74%. Dari % daya antiinflamasi

yang didapat, maka dapat kita ketahui bahwa asetil eugenol 50% v/v dan asetil

36

eugenol 100% v/v tidak memiliki daya antiinflamasi, sedangkan asetil eugenol

25% v/v memiliki daya antiinflamasi walaupun kecil.

Tabel VI. Nilai hasil uji Scheffe % daya antiinflamasi yang diinduksi formalin

0,5% selama 6 jam pengamatan

Kelompok Rata-rata % daya

antiinflamasi

X ± SE

I II III

I 8,23 ± 13,34 - tb b

II -30,32 ± 5,46 tb - tb

III -42,74 ± 12,33 b tb -

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%


Kelompok II : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%


Kelompok III : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5%




X : Rata-rata persentase penghambatan edema kaki

SE : Standar Error

Beberapa mekanisme penghambatan inflamasi yang dimiliki eugenol

antara lain: menekan ekspresi COX-2 (Magalhaes et al., 2010) pada makrofag

RAW 264,7 (Otzurk dan Obezk, 2005) dan menghambat kemotaksis leukosit yang

dimiliki oleh setiap senyawa fenolik (Azuma, Ozasa, Ueda dan Takagi, 1986).

Berdasarkan pendekatan yang dilakukan oleh Dannhardt dan Laufer

(2000), asetil eugenol termasuk dalam kategori senyawa turunan diaril- atau

aril/heteroaril-eter dan –tioeter serta merupakan senyawa yang bersifat lipofil dan

asam sehingga berpotensi selektif COX-2. Senyawa yang termasuk dalam

penghambat selektif enzim COX-2 akan masuk melalui knob hidrofobik pada

37

protein siklooksigenase kemudian menduduki sisi aktif enzim sehingga mencegah

pelepasan mediator kimia inflamasi seperti prostaglandin (Amasino et al., 1996).

Gambar 7. Turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan –tioeter (Dannhardt dan

Laufer, 2000)

Gambar 8. Struktur Asetil Eugenol (Rdchemicals, 2006)

Menurut Giersel, McDonald, Hauser, Rangwala, Koboldt, dan Seibert

(1996), ada perbedaan sisi aktif enzim pada COX-1 dan COX-2, yaitu Isoleusin

pada COX-1 dan Valin pada COX-2. Asetil eugenol berpotensi selektif COX-2,

maka asetil eugenol dapat menduduki sisi aktif enzim COX-2 yaitu valin.

Interaksi yang mungkin terjadi antara asetil eugenol dengan valin yaitu:

38

H2N

O

OH

O

O

O

asetil eugenol

valin

interaksi hidrofobik

Gambar 9. Interaksi antara asetil eugenol dengan valin

Menurut Evan (2008), dalam proses inflamasi juga terjadi pembentukkan

oksigen reaktif akibat proses oksidasi asam arakhidonat. Senyawa fenol yang

tersubstitusi akan membentuk radikal fenol dan berpotensi sebagai penangkap

radikal bebas (Dannhardt dan Laufer, 2000). Asetil eugenol merupakan senyawa

turunan eugenol dan merupakan senyawa fenol tersubstitusi. Asetil eugenol dapat

berperan sebagai penangkap radikal bebas sehingga dapat menetralkan oksigen

reaktif yang terbentuk selama proses inflamasi.

Gambar 10. Bentuk radikal dari asetil eugenol (Hidalgo et al., 2009)

39

Menurut Hidalgo, et al. (2009) ada 2 macam bentuk radikal bebas yang

dihasilkan oleh eugenol dan turunannya, yaitu radikal fenol dan radikal alil.

Gugus fenol pada eugenol akan diubah menjadi radikal fenol. Radikal fenol lebih

stabil karena adanya resonansi elektron yang terjadi pada ikatan rangkap yang

terdapat pada cincin aromatis, sehingga menyebabkan terbentuknya radikal pada 2

posisi, yaitu: posisi ortho (o) atau posisi para (p) dari gugus fenol yang menempel

pada cincin aromatis.

Radikal alil terbentuk akibat adanya gugus metoksi, gugus asetat,

ataupun gugus nitro yang menempel pada cincin aromatis. Asetil eugenol

memiliki gugus asetil dan gugus metoksi. Gugus metoksi merupakan donor

elektron dan akan terstabilisasi akibat adanya resonansi pada cincin aromatis.

Pada asetil eugenol, radikalnya terbentuk pada bagian alil. Hal ini disebabkan

karena atom H pada alil tidak terikat kuat sehingga mudah lepas dan membentuk

radikal. Radikal alil yang terbentuk kurang stabil bila dibandingkan dengan

radikal fenol. Namun demikian, radikal alil ini masih dapat meredam radikal

bebas yang terbentuk selama proses inflamasi.

Dalam penelitian ini, senyawa uji yang digunakan dioleskan merata pada

bagian edema kaki mencit. Efek yang ditimbulkan dari pemberian obat secara

topikal sangat bergantung pada kemampuan suatu obat untuk menembus masuk

ke dalam kulit. Kulit merupakan barier pertahanan tubuh yang terdiri dari

berlapis-lapis sel dan tiap lapisan sel tersebut memiliki lipofilisitas yang berbeda-

beda. Oleh karena itu, senyawa yang dapat menembus barier kulit adalah senyawa

yang memiliki lipofilisitas sedang. Dari data di atas menunjukkan bahwa asetil

40

eugenol mampu menjadi agen antiinflamasi topikal pada edema yang diinduksi

formalin 0,5%.

C. Hasil Uji Hubungan Linearitas Konsentrasi Asetil Eugenol terhadap Daya

Antiinflamasi yang Ditimbulkan

Uji ini bertujuan untuk mengetahui hubungan liniearitas antara

konsentrasi asetil eugenol terhadap % penghambatan inflamasi yang ditimbulkan.

Caranya adalah dengan membuat regresi linier antara log konsentrasi asetil

eugenol vs % penghambatan inflamasi sehingga didapatkan grafik hubungan

linearitas antara log konsentrasi eugenol dengan % penghambatan inflamasi. Dari

grafik hubungan linearitas tersebut dapat ditentukan nilai EC50 dari asetil eugenol.

Dari hasil perhitungan regresi linier didapatkan persamaan y = -53,948x

+ 114,166 dengan nilai r= 0,9589. Namun nilai r ini lebih kecil daripada nilai r

tabel untuk jumlah sampel 3 (n=3), yaitu, 0,997. Berikut adalah grafik hubungan

linearitas antara log konsentrasi asetil eugenol dengan % penghambatan inflamasi.

41

Gambar 11. Grafik hubungan linieritas log konsentrasi asetil eugenol 100% v/v,

50% v/v, dan 25% v/v dengan % penghambatan inflamasi dari masing-masing

perlakuan tersebut

Dari ketiga peringkat konsentrasi asetil eugenol, tidak ada yang mencapai

efek antiinflamasi hingga 50%. Oleh karena itu perlu dilakukan ekstrapolasi untuk

mendapatkan nilai EC50 dari asetil eugenol. Namun, selain dari grafik, nilai EC50

dapat dihitung melalui persamaan regresi linier yang telah didapat. Dari hasil

perhitungan tersebut didapatkan nilai EC50 asetil eugenol sebesar 15,45%. Hal ini

berarti asetil eugenol dengan konsentrasi 15,45% dapat menimbulkan efek pada

50% populasi.

42

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Asetil eugenol konsentrasi 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v memiliki efek

antiinflamasi secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin

0,5% pada mencit jantan galur Swiss.

2. Asetil eugenol konsentrasi 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v memiliki % efek

antiinflamasi berturut-turut sebesar 41,52%; 16,96%; dan 9,04% terhadap

edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan galur

Swiss.

3. Asetil eugenol konsentrasi 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v memiliki % daya

antiinflamasi berturut-turut sebesar 8,23%; -30,32%; dan -42,74% terhadap

edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan galur

Swiss.

4. Konsentrasi efektif (EC50) asetil eugenol sebagai agen antiinflamasi topikal

terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan

galur Swiss adalah sebesar 15,45%

B. Saran

1. Dapat dilakukan penelitian serupa dengan memperkecil rentang peringkat

konsentrasi asetil eugenol supaya nilai EC50 dapat masuk dalam rentang

penelitian.

43

2. Penelitian ini dapat dilanjutkan dengan membuat suatu formulasi yang

mengandung zat aktif asetil eugenol agar lebih praktis dalam proses aplikasi

penggunaan.

44

DAFTAR PUSTAKA

Amasino, A., Yuting Deng, Samuel Huang, Iris Lee, Adeyinka Lesi, Yaoli Pu, et

al., 1996, COX-1 And COX-2 Enzymes Synthesize Prostaglandins and

Are Inhibited by NSAIDS (Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs),

Laporan Penelitian, University of Wisconsin-Madison.

Ayoola, G. A., F. M. Lawore, T. Adelowotan, I. E. Aibinu, E. Adenipekun, H. A.

B. Coker, et. al., 2008, Chemical analysis and antimicrobial activity of

the essential oil of Syzigium aromaticum (clove), African Journal of

Microbiology Research, Vol.(2) pp, 162-166.

Azuma, Y., Ozasa, N., Ueda, Y., dan Takagi, N., 1986, Pharmacological Studies

on the Anti-inflammatory Action of Phenolic Compounds, J. Dent. Res.,

65: 53.

Babb, R. R., 1992, Gastrointestinal Complications of Nonsteroidal Anti-

Inlammatory Drugs, West J. Med., 157, 444-447.

Banerjee, S., Sur, T. K., Mandal, S., Das, P. C., dan Sikdar, S., 2000, Assessment

of The Anti-Inflammatory Effects of Swertia Chirata in Acute and

Chronic Experimental Models in Male Albino Rats, Indian Journal of

Pharmacology, 32: 21-24.

Bulan, R., 2004, Reaksi Asetilasi Eugenol dan Oksidasi Metil Iso Eugenol,

http://library.usu.ac.id/download/fmipa/kimia-rumondang.pdf, diakses

tanggal 21 November 2010.

Canon, K. E., Leurs, R., dan Hough, L. B., 2007, Activation of Peripheral and

Spinal Histamine H3 Receptors Inhibits Formalin-Induced Inflammation

and Nociception, Respectively, Pharmacol. Biochem. Behav., 88(1):

122–129.

Dannhardt, G., dan Laufer, S., 2000, Structural Approaches to Explain the

Selectivity of COX-2 Inhibitors: Is There a Common Pharmacophore?,

Current Medicinal Chemistry, 7, 1101-1112.

Evan, S. P., 2008, Antioksidan Alami di Sekitar Kita, http://www.chem-is-

try.org/artikel_kimia/kimia_pangan/antioksidan-alami-di-sekitar-kita/,

diakses tanggal 20 November 2010.

Evans, F. J., and Williamson, E. M., 1996, Selection, Preparation, and

Pharmacologicaly Evaluation of Plant Material, John Willey, New

York, pp. 131-137.

http://library.usu.ac.id/download/fmipa/kimia-rumondang.pdf

45

Giersel, J. K., McDonald, J. J., Hauser, S. D., Rangwala, S. H., Koboldt, C. M.,

Seibert, K., 1996, A Single Amino Acid Difference between

Cyclooxygenase-1 (COX-1) and -2 (COX-2) Reverses the Selectivity of

COX-2 Specific Inhibitors, The Journal of Biological Chemistry,

271(26), 15810-15814.

Gildemeister, F., 2009, The Volatile Oil,

http://chestofbooks.com/health/aromatherapy/The-Volatile-Oils-

Vol1/Eugenol.html, diakses tanggal 8 November 2010.

Goldstein, N. S., Ferkowicz, M., Odish, E., Mani, A., dan Hastah, F., 2003,

Minimum Formalin Fixation Time for Consistent Estrogen Receptor

Immunohistochemical Staining of Invasive Breast Carcinoma, Am. J.

Clin. Pathol., 120:86-92.

Gunani, S. B., 2009, Uji Daya Antiinflamasi Krim Tipe A/M Ekstrak Etanolik

Jahe 10% (Zingiber officinale Roscoe) yang Diberikan Topikal Terhadap

Udem Kaki Tikus yang Diinduksi Karagenin, Laporan Penelitian,

Surakarta.

Harijadi, 2009, Radang/Inflamasi, http://medicine.uii.ac.id/, diakses tanggal 12

Juli 2010.

Hasyim, M., Hamam, dan Akil, S., 2006, Formalin Bukan Formalitas, CP-Buletin,

Nomor 73/Tahun VII.

Hidalgo, M. E., Rosa, C. D. L., Carrasco, H., Cardona, W., Gallardo, C.,

Espinoza, L., 2009, Antioxidant Capacity of Eugenol Derivatives, Quím.

Nova, Vol. 32 No. 6.

Ikawati, Z., Supardjan, A. M., Asmara, L. S., 2007, Pengaruh Senyawa

Heksagamavunon-1 (HGV-1) terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi

Anafilaksis Kutaneus Aktif pada Tikus Wistar Jantan Terinduksi

Ovalbumin, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah

Mada.

Joseph S. M, George M. C, dan Nair J. R, 2005, Effect of feeding cuttlefish liver

oil on immune function, inflammatory response and platelet aggregation

in rats. Current Sci., 88(3) :507-510.

Karch, A.M., 2003, Focus on Nursing Pharmacology, 2nd edition, Lippincot

Williams dan Wilkins E Wolter Kluwer Company, New York, pp.

198,203, 209-211.

http://chestofbooks.com/health/aromatherapy/The-Volatile-Oils-Vol1/Eugenol.html

http://chestofbooks.com/health/aromatherapy/The-Volatile-Oils-Vol1/Eugenol.html

http://medicine.uii.ac.id/

46

Kee. J. L., dan Hayes. E. R, 1996 Farmakologi Pendekatan Proses Keperawatan,

edisi 5, diterjemahkan Peter. A., Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp.

310-317.

Lu, T. C. Jung, C. L., Tai, H. H., Ying, C. L., Chia, Y. L., Yung, J. C., et al.,

Analgesic and Anti-Inflammatory Activities of the Methanol Extract from

Pogostemon cablin, eCAM,

http://ecam.oxfordjournals.org/cgi/reprint/nep183v1, diakses tanggal 21

Agustus 2010.

Maffetone, P., 2002, The ABCs of Chronic Inflammation, In Fitness and In

Healthy, pp. 1-10.

Magalhaes, C. B., Riva, D. R., DePaula, L. J., Brando-Lima, A., Koatz, V. L.,

Leal-Cardoso, J. H., Zin, W. A., dan Faffe, D. S., 2010, In vivo anti-

inflammatory action of eugenol on lipopolysaccharide-induced lung

injury, J. Appl. Physiol., 108: 845-851.

Moore, R. A., 2004, Topical Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs Are Effective

in Osteoarthritis of the Knee, The Journal of Rheumatology, 1893-1895.

MSDS, 2007, Kemanan Data untuk Eugenol, http://msds.chem.ox.ac.uk/keamana

data untuk eugenol.html, diakses tanggal 26 November 2010.

MSDS, 2002, Material Safety Data Sheet Ethanol 96%,

http://www.ncpalcohols.com/MSDS/MSDS%20Light%20Spirit.pdf,


Mulja, M. dan Hanwar, D., 2003, Prinsip – Prinsip Cara Berlaboratorium yang

Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Airlangga, vol. III

No. 2, Agustus 2003, halaman 71-76.

Ozturk, A., and Ozbek, H., 2005, Caryophyllata Essential Oil: An Animal Model

of Anti-inflammatory Activity, Department of Pharmacology, Van

Turkey.

Price, S.A. dan Wilson, L.M., 1995, Clinical Concept of Disease Processes, 4th

edition, diterjemahkan oleh Anugerah, P., Penerbit Buku Kedokteran

EGC, Jakarta, pp. 37.

Rang, H. P., Dale, M. M., Ritter, J. M., and Moore, P. K., 2003, Pharmacology,

5th edition, Bath Press, USA, pp. 231-237, 244-250.

Rdchemicals, 2006, Acetyl Eugenol,

http://www.rdchemicals.com/chemicals.php?mode=details&mol_id=748

5, diakses tanggal 20 November 2010.

http://ecam.oxfordjournals.org/cgi/reprint/nep183v1

http://msds.chem.ox.ac.uk/keamana%20data%20untuk%20eugenol.html



http://www.ncpalcohols.com/MSDS/MSDS%20Light%20Spirit.pdf



47

Rhen, T. dan Cidlowski, J. A., 2005, Antiinflammatory Action of Glucocorticoids,

New Mechanisms for Old Drugs, The New England Journal of

Medicine, 353, 1711-23.

Riswanto, F. D. O., 2011, Sintesis Asetil Eugenol dari Eugenol dan Anhidrida

Asam Asetat dengan Katalis Natrium Hidroksida, Skripsi, Universitas

Sanata Dharma, Yogyakarta.

Sadeghian, H., Seyedi, S. M., Saberi, M. R., Arghiani, Z., dan Riazi, M., 2008,

Design and Synthesis of Eugenol Derivatives as A Potent 15-

Lipoxygenase Inhibitors, Bioorganic and Medicines Chemistry, 16: 890-

901.

Schror, K. and Meyer-Kirchrath, J., 2000, Cyclooxygenase-2 Inhibition and Side-

effects of Non-steroidal Anti-inflammatory Drugs in the Gastrointestinal

Tract, Curr. Med. Chem., 7, 1121-1129.

Setyarini, H., 2009, Uji Daya Antiinflamasi Gel Ekstrak Etanol Jahe 10%

(Zingiber officinale Roscoe) yang diberikan Topikal terhadap Udem Kaki

Tikus yang diinduksi Karagenin, 13-15, Skripsi, UMS, Surakarta.

Sompuram, S. R, Vani, K., Messana, E., and Bogen, S. A., 2004, A Molecular

Mechanism of Formalin Fixation and Antigen Retrieval, Am. J. Clin.

Pathol., 121:190-199.

Srivastava, K. C., Malhotra, N., 1991, Acetyl Eugenol, a Component of Oil of

Cloves (Syzygium aromaticum L.) Inhibits Aggregation and Alters

Arachidonic Acid Metabolism in Human Blood Platelets, NCBI, 42(1),

73-81.

Tanko, Y., Kamba, B., Saleh, M. I. A., Musa, K. Y., Mohammed, A., 2008, Anti-

nociceptive and anti-inflammatory activities of ethanolic flower extract

of Newbouldia laevis in mice and rats, Healthy Synergies Publications,

Vol. 1(3), pp. 13-19.

The virgin coconut oil, 2010, What is Virgin Coconut Oil?,

http://www.thevirgincoconutoil.com/articleitem.php?articleid=155,


Vogel, 2002, Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, 2nd

ed.,Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany, pp. 702-703.

http://www.thevirgincoconutoil.com/articleitem.php?articleid=155

48

Lampiran 1. Elusidasi Struktur Asetil Eugenol

53

Lampiran 2.

a. Sertifikat Kalibrasi Jangka Sorong merk Mitutoyo

55

b. Tabel hasil pengukuran presisi jangka sorong merk Mitutoyo

Kelompok

Tebal Kaki Rata-

rata SD CV(%) Rep I Rep II Rep III

I 0,282 0,284 0,28 0,282 0,002 0,71

II 0,292 0,29 0,29 0,291 0,001 0,34

III 0,286 0,286 0,286 0,286 0 0

Lampiran 3. Skema orientasi peringkat konsentrasi kontrol positif eugenol

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok Kontrol Negatif Formalin 0,5%

Kelompok II : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam

sesudahnya diolesi eugenol 100%

Kelompok III : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam


Kelompok IV : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam


56

Lampiran 4. Surat Keterangan Pembelian Mencit di LPPT-Universitas

Gajah Mada (UGM)

57

Lampiran 5.

a. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi oleh

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap jam selama 5 jam

pengamatan

Descriptive Statistics

N Mean Std.

Deviation Minimum

Maximu

m

jam1 3 .0967 .02309 .07 .11

jam2 3 .1100 .03000 .08 .14

jam3 3 .1233 .03512 .09 .16

jam4 3 .1267 .02082 .11 .15

jam5 3 .1067 .02082 .09 .13

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

jam1 jam2 jam3 jam4 jam5

N 3 3 3 3 3

Normal Parametersa Mean .0967 .1100 .1233 .1267 .1067

Std.

Deviation

.0230

9 .03000 .03512 .02082 .02082

Most Extreme

Differences

Absolute .385 .175 .204 .292 .292

Positive .282 .175 .204 .292 .292

Negatif -.385 -.175 -.185 -.212 -.212

Kolmogorov-Smirnov Z .667 .303 .354 .506 .506

Asymp. Sig. (2-tailed) .766 1.000 1.000 .960 .960

a. Test distribution is Normal.

Paired Samples Statistics

Mean N Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 jam1 .0967 3 .02309 .01333

jam2 .1100 3 .03000 .01732

58

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 jam1 & jam2 3 .866 .333

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig.

(2-

tailed

)

Mean

Std.

Deviatio

n

Std.

Error

Mean

95%

Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair 1 jam1 -

jam2 -.01333 .01528 .00882 -.05128 .02461 -1.512 2 .270


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 jam2 .1100 3 .03000 .01732

jam3 .1233 3 .03512 .02028


N Correlation Sig.

Pair 1 jam2 & jam3 3 .997 .052

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean

95% Confidence

Interval of the Difference

Lower Upper

Pair 1 jam2 - jam3

-.01333 .00577 .00333 -.02768 .00101 -4.000 2 .057

59


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 jam3 .1233 3 .03512 .02028

jam4 .1267 3 .02082 .01202


N Correlation Sig.

Pair 1 jam3 & jam4 3 .775 .435

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean

95% Confidence

Interval of the Difference

Lower Uppe

r

Pair 1 jam3 - jam4

-.00333

.02309 .0133

3 -

.06070 .0540

4 -.250 2 .826


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 jam4 .1267 3 .02082 .01202

jam5 .1067 3 .02082 .01202


N Correlation Sig.

Pair 1 jam4 & jam5 3 .885 .309

60

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig.

(2-

tailed)

Mean

Std.

Deviati

on

Std.

Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair 1 jam4 -

jam5 .02000 .01000 .00577 -.00484 .04484 3.464 2 .074

b. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap 10 menit selama 1 jam

pengamatan


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 menit10 .1275a 4 .02754 .01377

menit20 .1275a 4 .02754 .01377

a. The correlation and t cannot be computed because the

standard error of the difference is 0.


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 menit20 .1275 4 .02754 .01377

menit30 .1425 4 .02500 .01250


N

Correlatio

n Sig.

Pair 1 menit20 & menit30 4 .932 .068

61

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean

95% Confidence Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair 1

menit20 - menit30

-.01500 .01000 .00500 -.03091 .00091 -3.000 3 .058


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 menit30 .1425 4 .02500 .01250

menit40 .1600 4 .02944 .01472


N

Correlatio

n Sig.

Pair 1 menit30 &

menit40 4 .951 .049

Paired Samples Test

Paired Differences

t df Sig. (2-tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean


Difference

Lower Upper

Pair 1

menit30 - menit40

-.01750 .00957 .00479 -.03273 -.00227 -3.656 3 .035


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 menit40 .1600 4 .02944 .01472

menit50 .1650 4 .02887 .01443

62


N Correlation Sig.

Pair 1 menit40 &

menit50 4 .981 .019

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean


Difference

Lower Upper

Pair 1

menit40 - menit50

-.00500 .00577 .00289 -.01419 .00419 -1.732 3 .182


Mean N Std.

Deviation Std. Error

Mean

Pair 1 menit50 .1650 4 .02887 .01443

menit60 .1800 4 .02582 .01291


N Correlatio

n Sig.

Pair 1 menit50 & menit60

4 .984 .016

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean


Difference

Lower Upper

Pair 1

menit50 - menit60

-.01500 .00577 .00289 -.02419 -.00581 -5.196 3 .014

63


Mean N

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

Pair 1 menit40 .1600 4 .02944 .01472

menit60 .1800 4 .02582 .01291


N

Correlatio

n Sig.

Pair 1 menit40 &

menit60 4 .965 .035

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std. Deviati

on

Std. Error Mean


Difference

Lower Upper

Pair 1

menit40 - menit60

-.02000 .00816 .00408 -.03299 -.00701 -4.899 3 .016

Lampiran 6.

a. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif

Faktor pengali = = 2

Konsentrasi kedua= 2 x 25% = 50% v/v

sehingga didapatkan ketiga konsentrasi eugenol sebagai orientasi kontrol

positif berturut-turut adalah 25% v/v, 50% v/v, 100% v/v.

64

b. Hasil Analisa Rata-rata AUC total Eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan 100%

v/v untuk Kontrol Positif menggunakan Metode Analisis One-Way

ANOVA Tingkat Kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji

Scheffe.


N Mean

Std.

Deviation Minimum

Maximu

m

AUCtota

l 12 .79042 .169551 .545 1.005


AUCtota

l

N 12

Normal Parametersa Mean .79042

Std. Deviation .169551

Most Extreme

Differences

Absolute .193

Positive .193

Negatif -.160

Kolmogorov-Smirnov Z .668

Asymp. Sig. (2-tailed) .764


65

Descriptives

AUCtotal

N Mean

Std.

Deviatio

n Std. Error

95% Confidence

Interval for

Mean

Minim

um

Maxim

um

Lower

Bound

Upper

Bound

eugenol100 3 .83500 .160935 .092916 .43522 1.23478 .665 .985

eugenol50 3 .61000 .056789 .032787 .46893 .75107 .545 .650

eugenol25 3 .73333 .124933 .072130 .42298 1.04368 .625 .870

kontrol 3 .98333 .029297 .016915 .91055 1.05611 .950 1.005

Total 12 .79042 .169551 .048945 .68269 .89814 .545 1.005

ANOVA

AUCtotal

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .225 3 .075 6.581 .015

Within Groups .091 8 .011

Total .316 11

66

Multiple Comparisons

AUCtotal Scheffe

(I) perlakuan (J)

perlakuan

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound

Upper Bound

eugenol100 eugenol50 .225000 .087170 .163 -.07945 .52945

eugenol25 .101667 .087170 .722 -.20279 .40612

kontrol -.148333 .087170 .455 -.45279 .15612

eugenol50 eugenol100 -.225000 .087170 .163 -.52945 .07945

eugenol25 -.123333 .087170 .595 -.42779 .18112

kontrol -.373333* .087170 .018 -.67779 -.06888

eugenol25 eugenol100 -.101667 .087170 .722 -.40612 .20279

eugenol50 .123333 .087170 .595 -.18112 .42779

kontrol -.250000 .087170 .113 -.55445 .05445

kontrol eugenol100 .148333 .087170 .455 -.15612 .45279

eugenol50 .373333* .087170 .018 .06888 .67779

eugenol25 .250000 .087170 .113 -.05445 .55445

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

AUCtotal

Scheffe

perlakuan N

Subset for alpha =

0.05

1 2

eugenol50 3 .61000

eugenol25 3 .73333 .73333

eugenol10

0 3 .83500 .83500

kontrol 3 .98333

Sig. .163 .113

Means for groups in homogeneous

subsets are displayed.

67

Lampiran 7. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Asetil Eugenol

Menggunakan Pelarut VCO

Faktor pengali = = 2

Konsentrasi kedua= 2 x 25% = 50% v/v

sehingga didapatkan ketiga peringkat konsentrasi asetil eugenol berturut-turut

adalah 25% v/v, 50% v/v, dan 100% v/v.

Lampiran 8. Hasil Analisa Tebal Edema Kaki Mencit yang diinduksi

Formalin 0,5% menggunakan General Linear Model tingkat kepercayaan

95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe

Within-Subjects Factors

Measure:MEASURE_1

tebal Dependent

Variable

1 t1

2 t2

3 t3

4 t4

5 t5

6 t6

Between-Subjects Factors

Value Label N

VAR00001

1 FORMALIN 5

2 VCO 5

3 EUGENOL50% 5

4 ASETIL25% 5

5 ASETIL50% 5

6 ASETIL100% 5

68

Multivariate Testsc

Effect Value F

Hypothe

sis df Error df Sig.

tebal Pillai's Trace .477 3.650a 5.000 20.000 .017

Wilks' Lambda .523 3.650a 5.000 20.000 .017

Hotelling's Trace .913 3.650a 5.000 20.000 .017

Roy's Largest Root .913 3.650a 5.000 20.000 .017

tebal *

VAR00001

Pillai's Trace .699 .779 25.000 120.000 .760

Wilks' Lambda .446 .736 25.000 75.799 .804

Hotelling's Trace .944 .695 25.000 92.000 .849

Roy's Largest Root .483 2.316b 5.000 24.000 .075

a. Exact statistic

b. The statistic is an upper bound on F that yields a lower bound on the

significance level.

c. Design: Intercept + VAR00001 Within Subjects Design: tebal

Mauchly's Test of Sphericityb

Measure:MEASURE_1

Withi

n

Subje

cts

Effect

Mauchly's

W

Approx.

Chi-

Square df Sig.

Epsilona

Greenhou

se-

Geisser

Huynh

-Feldt

Lower

-

bound

tebal .213 34.212 14 .002 .704 1.000 .200

Tests the null hypothesis that the error covariance matrix of the

orthonormalized transformed dependent variables is proportional to

an identity matrix.

a. May be used to adjust the degrees of freedom for the averaged

tests of significance. Corrected tests are displayed in the Tests of

Within-Subjects Effects table.

b. Design: Intercept +

VAR00001

Within Subjects Design: tebal

69

Tests of Within-Subjects Effects

Measure:MEASURE_1

Source

Type III

Sum of

Squares df

Mean

Squar

e F Sig.

tebal Sphericity Assumed .008 5 .002 2.822 .019

Greenhouse-Geisser .008 3.519 .002 2.822 .036

Huynh-Feldt .008 5.000 .002 2.822 .019

Lower-bound .008 1.000 .008 2.822 .106

tebal *

VAR00001

Sphericity Assumed .008 25 .000 .619 .917

Greenhouse-Geisser .008 17.597 .000 .619 .872

Huynh-Feldt .008 25.000 .000 .619 .917

Lower-bound .008 5.000 .002 .619 .687

Error(tebal) Sphericity Assumed .065 120 .001

Greenhouse-Geisser .065 84.467 .001

Huynh-Feldt .065 120.000 .001

Lower-bound .065 24.000 .003

Tests of Between-Subjects Effects

Measure:MEASURE_1

Transformed Variable:Average

Source

Type III Sum

of Squares df

Mean

Square F Sig.

Intercept 3.799 1 3.799 1.222E3 .000

VAR0000

1 .137 5 .027 8.839 .000

Error .075 24 .003

70

Tests of Within-Subjects Contrasts

Measure:MEASURE_1

Source tebal

Type III

Sum of

Squares df

Mean

Square F Sig.

tebal Linear 3.471E-5 1 3.471E-5 .041 .841

Quadratic .008 1 .008 10.374 .004

Cubic 9.796E-6 1 9.796E-6 .018 .895

Order 4 4.298E-5 1 4.298E-5 .106 .748

Order 5 3.716E-5 1 3.716E-5 .196 .662

tebal *

VAR00001

Linear .004 5 .001 .888 .505

Quadratic .002 5 .000 .507 .768

Cubic .001 5 .000 .519 .759

Order 4 .001 5 .000 .505 .770

Order 5 .000 5 7.319E-5 .387 .853

Error(tebal) Linear .020 24 .001

Quadratic .018 24 .001

Cubic .013 24 .001

Order 4 .010 24 .000

Order 5 .005 24 .000


MEASURE_1

Scheffe

(I) VAR00001 (J) VAR00001

Mean

Differen

ce (I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

FORMALIN VCO -.00133 .014397 1.000 -.05345 .05078

EUGENOL50% .05967* .014397 .018 .00755 .11178

ASETIL25% .06867* .014397 .005 .01655 .12078

ASETIL50% .02600 .014397 .663 -.02612 .07812

71

ASETIL100% .01133 .014397 .986 -.04078 .06345

VCO FORMALIN .00133 .014397 1.000 -.05078 .05345

EUGENOL50% .06100* .014397 .014 .00888 .11312

ASETIL25% .07000* .014397 .004 .01788 .12212

ASETIL50% .02733 .014397 .614 -.02478 .07945

ASETIL100% .01267 .014397 .977 -.03945 .06478

EUGENOL50% FORMALIN -.05967* .014397 .018 -.11178 -.00755

VCO -.06100* .014397 .014 -.11312 -.00888

ASETIL25% .00900 .014397 .995 -.04312 .06112

ASETIL50% -.03367 .014397 .389 -.08578 .01845

ASETIL100% -.04833 .014397 .082 -.10045 .00378

ASETIL25% FORMALIN -.06867* .014397 .005 -.12078 -.01655

VCO -.07000* .014397 .004 -.12212 -.01788

EUGENOL50% -.00900 .014397 .995 -.06112 .04312

ASETIL50% -.04267 .014397 .160 -.09478 .00945

ASETIL100% -.05733* .014397 .024 -.10945 -.00522

ASETIL50% FORMALIN -.02600 .014397 .663 -.07812 .02612

VCO -.02733 .014397 .614 -.07945 .02478

EUGENOL50% .03367 .014397 .389 -.01845 .08578

ASETIL25% .04267 .014397 .160 -.00945 .09478

ASETIL100% -.01467 .014397 .956 -.06678 .03745

ASETIL100% FORMALIN -.01133 .014397 .986 -.06345 .04078

VCO -.01267 .014397 .977 -.06478 .03945

EUGENOL50% .04833 .014397 .082 -.00378 .10045

ASETIL25% .05733* .014397 .024 .00522 .10945

ASETIL50% .01467 .014397 .956 -.03745 .06678

Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .001.

*. The mean difference is significant at the .05 level.

72

MEASURE_1

Scheffe

VAR00001 N

Subset

1 2 3

ASETIL25% 5 .10400

EUGENOL50% 5 .11300 .11300

ASETIL50% 5 .14667 .14667 .14667

ASETIL100% 5 .16133 .16133

FORMALIN 5 .17267

VCO 5 .17400

Sig. .160 .082 .614

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Based on observed means.

The error term is Mean Square(Error) = .001.

Lampiran 9. Hasil Analisa nilai AUC total masing-masing perlakuan

menggunakan one way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian

dilanjutkan dengan uji Scheffe


N Mean

Std.

Deviation Minimum

Maximu

m

perlakuan 30 3.50000 1.737021 1.000 6.000

AUCtotal 30 .80200 .194899 .335 1.100

73


perlakua

n

AUCtota

l

N 30 30

Normal Parametersa Mean 3.50000 .80200

Std. Deviation 1.737021 .194899

Most Extreme

Differences

Absolute .139 .119

Positive .139 .077

Negatif -.139 -.119

Kolmogorov-Smirnov Z .764 .652

Asymp. Sig. (2-tailed) .604 .789


Descriptives

AUCtotal

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimu

m

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

FORMALIN 5 .95700 .111277 .049764 .81883 1.09517 .785 1.070

VCO 5 .97300 .066858 .029900 .88998 1.05602 .925 1.085

EUGENOL50% 5 .62000 .069642 .031145 .53353 .70647 .520 .710

ASETIL100% 5 .88500 .170953 .076453 .67273 1.09727 .700 1.100

ASETIL50% 5 .80800 .075713 .033860 .71399 .90201 .675 .860

ASETIL25% 5 .56900 .185014 .082741 .33928 .79872 .335 .730

Total 30 .80200 .194899 .035583 .72922 .87478 .335 1.100

74

ANOVA

AUCtotal

Sum of

Squares df

Mean

Square F Sig.

Between Groups .738 5 .148 9.744 .000

Within Groups .364 24 .015

Total 1.102 29


AUCtotal

Scheffe

(I) perlakuan (J) perlakuan

Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

FORMALIN VCO -.016000 .077842 1.000 -.29777 .26577

EUGENOL50% .337000* .077842 .012 .05523 .61877

ASETIL100% .072000 .077842 .971 -.20977 .35377

ASETIL50% .149000 .077842 .606 -.13277 .43077

ASETIL25% .388000* .077842 .003 .10623 .66977

VCO FORMALIN .016000 .077842 1.000 -.26577 .29777

EUGENOL50% .353000* .077842 .008 .07123 .63477

ASETIL100% .088000 .077842 .933 -.19377 .36977

ASETIL50% .165000 .077842 .498 -.11677 .44677

ASETIL25% .404000* .077842 .002 .12223 .68577

EUGENOL50

%

FORMALIN -.337000* .077842 .012 -.61877 -.05523

VCO -.353000* .077842 .008 -.63477 -.07123

ASETIL100% -.265000 .077842 .075 -.54677 .01677

ASETIL50% -.188000 .077842 .354 -.46977 .09377

ASETIL25% .051000 .077842 .994 -.23077 .33277

ASETIL100% FORMALIN -.072000 .077842 .971 -.35377 .20977

VCO -.088000 .077842 .933 -.36977 .19377

75

EUGENOL50% .265000 .077842 .075 -.01677 .54677

ASETIL50% .077000 .077842 .961 -.20477 .35877

ASETIL25% .316000* .077842 .021 .03423 .59777

ASETIL50% FORMALIN -.149000 .077842 .606 -.43077 .13277

VCO -.165000 .077842 .498 -.44677 .11677

EUGENOL50% .188000 .077842 .354 -.09377 .46977

ASETIL100% -.077000 .077842 .961 -.35877 .20477

ASETIL25% .239000 .077842 .134 -.04277 .52077

ASETIL25% FORMALIN -.388000* .077842 .003 -.66977 -.10623

VCO -.404000* .077842 .002 -.68577 -.12223

EUGENOL50% -.051000 .077842 .994 -.33277 .23077

ASETIL100% -.316000* .077842 .021 -.59777 -.03423

ASETIL50% -.239000 .077842 .134 -.52077 .04277


AUCtotal

Scheffe

perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

ASETIL25% 5 .56900

EUGENOL50% 5 .62000 .62000

ASETIL50% 5 .80800 .80800 .80800

ASETIL100% 5 .88500 .88500

FORMALIN 5 .95700

VCO 5 .97300

Sig. .134 .075 .498


76

X 100%

X 100%

Lampiran 10. Perhitungan nilai % penghambatan inflamasi pada kelompok

kontrol eugenol 50% v/v; asetil eugenol 100% v/v, 50% v/v, dan 25% v/v

Salah satu contoh perhitungan nilai % daya antiinflamasi pada kelompok kontrol

eugenol 50%

penghambatan inflamasi eugenol 50% I (%) = 0,973 – 0,520

0,973

= 46,56 %

penghambatan inflamasi asetil eugenol 100% I (%) = 0,907 – 0,720

0,907

= 26 %

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok kontrol positif eugenol 50% v/v

Kelompok II : Kelompok kontrol positif asetil eugenol 100% b/v

Kelompok III : Kelompok kontrol positif asetil eugenol 50% b/v

Kelompok IV : Kelompok kontrol positif asetil eugenol 25% b/v

Kelompok

Perlakuan

Persentase penghambatan inflamasi (%) Rata-

Rata Replikasi

I

Replikasi

II

Replikasi

III

Replikasi

IV

Replikasi

V

I 46,56 33,20 36,28 38,34 27,03 36,282

II 26,00 1,34 2,88 -13,05 28,06 9,044

III 12,64 11,61 14,70 30,63 15,21 16,958

IV 34,22 57,86 24,97 24,97 65,57 41,521

77

Lampiran11. Hasil analisa % penghambatan inflamasi menggunakan One-

Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji

Scheffe

NPar Tests


N Mean Std.

Deviation Minimum Maximum

perlakuan 20 2.5000 1.14708 1.00 4.00

penghambatan

20 25.9510 18.78824 -13.05 65.57


perlakuan penghambat

an

N 20 20

Normal Parametersa Mean 2.5000 25.9510

Std. Deviation 1.14708 18.78824

Most Extreme Differences

Absolute .169 .129

Positive .169 .105

Negative -.169 -.129




Oneway

Descriptives

penghambatan

N Mean Std.


95% Confidence Interval for Mean

Minimum

Maximum

Lower Bound

Upper Bound

EUGENOL50% 5 36.2820 7.15840 3.20133 27.3937 45.1703 27.03 46.56

ASETIL100% 5 9.0460 17.56848 7.85686 -12.7681 30.8601 -13.05 28.06

ASETIL50% 5 16.9580 7.78338 3.48083 7.2937 26.6223 11.61 30.63

ASETIL25% 5 41.5180 19.01639 8.50439 17.9060 65.1300 24.97 65.57

Total 20 25.9510 18.78824 4.20118 17.1578 34.7442 -13.05 65.57

78

ANOVA

penghambatan

Sum of

Squares df

Mean

Square F Sig.

Between

Groups 3578.571 3 1192.857 6.101 .006

Within Groups 3128.393 16 195.525

Total 6706.964 19

Post Hoc Tests


penghambatan Scheffe

(I) perlakuan (J) perlakuan

Mean

Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

EUGENOL50

%

ASETIL100% 27.23600 8.84363 .053 -.3309 54.8029

ASETIL50% 19.32400 8.84363 .231 -8.2429 46.8909

ASETIL25% -5.23600 8.84363 .949 -32.8029 22.3309

ASETIL100% EUGENOL50% -27.23600 8.84363 .053 -54.8029 .3309

ASETIL50% -7.91200 8.84363 .848 -35.4789 19.6549

ASETIL25% -32.47200* 8.84363 .018 -60.0389 -4.9051

ASETIL50% EUGENOL50% -19.32400 8.84363 .231 -46.8909 8.2429

ASETIL100% 7.91200 8.84363 .848 -19.6549 35.4789

ASETIL25% -24.56000 8.84363 .090 -52.1269 3.0069

ASETIL25% EUGENOL50% 5.23600 8.84363 .949 -22.3309 32.8029

ASETIL100% 32.47200* 8.84363 .018 4.9051 60.0389

ASETIL50% 24.56000 8.84363 .090 -3.0069 52.1269


79

Homogeneous Subsets

penghambatan

Scheffe

perlakuan N


1 2

ASETIL100% 5 9.0460

ASETIL50% 5 16.9580 16.9580

EUGENOL50% 5 36.2820 36.2820

ASETIL25% 5 41.5180

Sig. .053 .090


Lampiran 12. Hasil analisa % daya antiinflamasi menggunakan One-Way

ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

dengan uji Scheffe

NPar Tests


N Mean

Std.

Deviation Minimum Maximum

VAR0000

1 15 2.0000 .84515 1.00 3.00

daya 15 -21.6127 31.91850 -77.42 45.97

80


VAR00001 daya

N 15 15

Normal Parametersa Mean 2.0000 -21.6127

Std. Deviation .84515 3.19185E1

Most Extreme

Differences

Absolute .215 .149

Positive .215 .149

Negative -.215 -.096




Oneway

Descriptives

daya

N Mean

Std.


95% Confidence

Interval for Mean

Minim

um

Maximu

m

Lower

Bound

Upper

Bound

asetil100 5 -42.7420 27.57414 12.33153 -76.9798 -8.5042 -77.42 -12.90

asetil50 5 -30.3220 12.21242 5.46156 -45.4857 -15.1583 -38.71 -8.87

asetil25 5 8.2260 29.84096 13.34528 -28.8264 45.2784 -17.74 45.97

Total 15 -21.6127 31.91850 8.24132 -39.2885 -3.9368 -77.42 45.97

ANOVA

daya

Sum of

Squares df

Mean

Square F Sig.

Between

Groups 7063.236 2 3531.618 5.886 .017

Within Groups 7199.836 12 599.986

Total 14263.072 14

81

Post Hoc Tests


daya

Scheffe

(I)

VAR00001

(J)

VAR00001

Mean

Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

asetil100 asetil50 -12.42000 15.49176 .731 -55.6045 30.7645

asetil25 -50.96800* 15.49176 .021 -94.1525 -7.7835

asetil50 asetil100 12.42000 15.49176 .731 -30.7645 55.6045

asetil25 -38.54800 15.49176 .082 -81.7325 4.6365

asetil25 asetil100 50.96800* 15.49176 .021 7.7835 94.1525

asetil50 38.54800 15.49176 .082 -4.6365 81.7325

*. The mean difference is significant at the 0.05

level.

Homogeneous Subsets

daya

Scheffe

VAR00001 N


1 2

asetil100 5 -42.7420

asetil50 5 -30.3220 -30.3220

asetil25 5 8.2260

Sig. .731 .082

Means for groups in homogeneous subsets are

displayed.

82

Lampiran 13. Perhitungan nilai EC50

Dari hasil regresi linier antara log konsentrasi asetil eugenol dengan % daya

antiinflamasi, didapatkan persamaan regresi liniernya: y= -53,948x + 114,166

Perhitungan EC50:

y= -53,948x + 114,166

50= -53,948x + 114,166

x= 1,189

EC50= antilog 1,189

EC50= 15,45

Jadi nilai EC50 asetil eugenol pada konsentrasi 15,45%

83

BIOGRAFI PENULIS

Devi Nathania merupakan anak sulung dari

pasangan Wadijono Yoedi dan Tjan Tek Fung yang

memiliki tiga adik bernama Devi Christina, Ayu Florencia,

dan Stefanny Rahayu Yoedi. Lahir di Semarang, 15 Mei

1989. Pendidikan awal di TK Theresiana 01 Semarang

(1993-1995), SD Theresiana 02 Semarang (1995-2001),

SMP Domenico Savio Semarang (2001-2004), SMF

Yayasan Pharmasi Semarang (2004-2007), kemudian

menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta (2007-2010).

Selama kuliah, penulis pernah berpartisipasi dalam kepanitiaan Pelepasan

Wisudawan dan Wisudawati di bidang kesekretariatan(2008), panitia Sumpahan

Apoteker (2009), dan Ketua Panitia Pharmacy Competition (2010). Pengabdian

masyarakat yang pernah dilakukan adalah sebagai relawan bencana gunung

Merapi (2010) dan mengikuti pelayanan di Pos Kesehatan Kota Baru. Program

Kreativitas Mahasiswa 2009 pernah diikuti dan lolos menjadi peserta Pekan

Ilmiah Mahasiswa Nasional 2010 Bidang Penelitian. Pengalaman kerja sebagai

asisten dosen juga pernah dialami, seperti menjadi asisten dosen praktikum kimia

dasar, kimia organik, spektroskopi, farmasi fisika, dan farmakologi.

EFEK ANTIINFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA TOPIKAL …menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Efek...

Documents

Transcript of EFEK ANTIINFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA TOPIKAL …menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Uji Efek...