5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

1/18

Orlando

102012430

Kelompok D

Fakultas Kedokteran Universitas Kristen KridaWacana

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

2/18

DeteksiGen

Normal /

Abnormal

DNA

Rekombinan

Rekayasa

Genetika

PCR

Sequencing

Southern

blotting

Enzim

retriksi

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

3/18

Gen bagi protein P diisolasi dan sekuens DNA

nya telah ditentukan. Gen tersebut ditemukan

mengandung 1000 bp sekuens pengkode dan dua

situs enzim retriksi EcoRI, -GAATC-. Satu

diantara kedua situs tersebut terletak 150 bpkearah dalam gen dari kodon start dan satunya

lagi 150 bp ke arah dalam dari kodon stop . Telah

ditemukan suatu protein P detektif, dan gennya

pun telah diklona serta di sequencing. Dalam genyang abnormal, salah satu sekuens tersebut telah

berubah menjadi GCATTC- .Kita ingin tahu

apakah sel-sel janin mengandung gen normal

atau abnormal.

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

4/18

Enzim retriksi : enzim bakteri yang

mengenali memotong sekuens nukleotidadi

dalam molekul DNA berantai ganda

Kodon awal merupakan kodon pertama yangditerjemahkan pada saat translasi atau

disebut juga kodon inisiasi (AUG yang

menyandikan metionin)

Kodon akhir merupakan salah satu dari tigakodon, yaitu UAG, UAA atau UGA.Kodon akhir

disebut juga kodon terminal yang tidak

menyandikan asam amino

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

5/18

Rumusan asalah

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

6/18

Rekayasa Genetika digunakan untuk

mengetahui mutasi protein pada

tingkat gen

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

7/18

Mengetahui bagaimana terjadinya DNA

rekombinan

Mengetahui teknik rekayasa genetika /

rekombinanMengetahui hasil rekayasa genetika dan DNA

rekombinan

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

8/18

Rekayasa genetika adalah tindakan sengaja

untuk memodifikasi DNA (substansi kimiawi

dalam kromosom yang bertanggung jawab

atas pewarisan sifat).Dalam arti luas, Tettamanzi melukiskannya

sebagai bentuk-bentuk manipulasi dan

pergantian tatanan gen dari organisme

hidup. Bahan genetik DNA mengandunginformasi keturunan yang dimiliki oleh

makhluk hidup

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

9/18

DNA recombinanadalah DNA yangrangkaian zat kimiapenyusunannya

dipotong kemudiandisisipkan ataudisambungkandengan DNA baru

yang membawasifat unggul,seperti yangdiinginkan.

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

10/18

Untuk mengetahui informasi genetik tersebut

digunakan teknik DNA Sequencing, yaitu

metode yang digunakan untuk menentukan

urutan basa nukleotida (adenine, guanine,cytosine dan thymine) pada molekul DNA.

DNA sequencing menggunakan metode PCR

(Polymerase Chain Reaction) sebagai

pijakannya

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

11/18

Reaksi rantai polimerase (PCR polymerase

chain reaction) merupakan suatu metode

untuk membuat salinan seg,men spesifik dari

suatu DNAMateri awal untuk PCR adalah suatu larutan

DNA untai ganda yang mengandung urutan

nukleotida yang ditargetkan untuk disalin

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

12/18

DNA dipanaskan secara singkat untuk

memisahkan untainya dan kemudian

didinginkan untuk membiarkan primer

berikatan dengan ujung-ujung urutan targetmelalui ikatan hydrogen , satu primer pada

setiap untai.

DNA polymerase menambahkan nukleotida

pada ujung 3 primerwaktu kira-kira 5 menit urutan DNA target

(yang panjangnya bisa mencapai ratusan

basa) telah digandakan.

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

13/18

larutan ini kemudian dipanaskan lagi,

memulai siklus pemisahan yang lain,pegikatan primer, dan sintesis DNA

hampir semua molekul DNA yang dihasilkan

akan terdiri atas urutan target yang tepat

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

14/18

Enzim restriksi endonuklease adalah enzim

bakteri yang mengenali memotong sekuens

nukleotidadi dalam molekul DNA berantai

ganda. Enzim ini memotong DNA menjadi

fragmen panjang yang bervariasi, bergantung

pada berapa banyak situs yang dikenali

enzim tersebut berada di dalam molekul

DNA.

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

15/18

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

16/18

Southern blott merupakan prosesperpindahan fragmen DNAyang terpisahsecara elektroforesisdari gel ke membran

Prinsipnya adalah kapilaritas, dimana bufer

yang merupakan fase gerak diasumsikan akanmembawa fragmen DNA dari gelke membran

Metode inimengkombinasikan elektroforesisgel agarosa

untuk memisahkan DNA berdasarkanukurannya dan kemudian ditransferke membranfilter untuk selanjutnyadilakukan hibridisasidengan probe

http://id.wikipedia.org/wiki/DNAhttp://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Kapilaritas&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Gelhttp://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttp://id.wikipedia.org/wiki/Membranhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hibridisasihttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Probe&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Probe&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Hibridisasihttp://id.wikipedia.org/wiki/Membranhttp://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttp://id.wikipedia.org/wiki/Gelhttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Kapilaritas&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesishttp://id.wikipedia.org/wiki/DNA

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

17/18

Pemeriksaan kromosom dan DNA dengan teknikrekombinasi DNA dapat membantu untukmendiagnosis penyakit dan juga mengetahuistatus gen. Pemeriksaan ini dilakukan dalam

tahap tertentu yang dimulai dari pemotonganDNA menggunakn enzim restriksi. Enzim restriksiyang digunakan adalah ECO-R1 yang berasal daribakteri e-coli dengan ciri pemotongan sticky enddengan urutan basa nitrogen yang sama yaitu

GAATC. Melalui teknik rekombinasi gen dapatmengetahui terjadinya mutasi protein padatingkat gen sehingga dapat kita kenali gentersebut normal atau abnormal.

5/26/2018 Deteksi Gen Dan Kromosom Manusia Dengan Teknik Dna

18/18