Gambar . Bagian-bagian Colony Counter Tipe DC-3Bagian bagian dari colony counter : 1. Pen jack (tempat memasukkan count pen) 2. Tombol reset ( untuk mengatur tayangan dari indikator hitung dalam keadaan 000 ) 3. Power Switch (untuk menghidupkan lampu fluoresen sebelah kiri) 4. Power Switch (untuk menghidupkan lampu fluoresen sebelah kanan) 5. Source Switch (untuk menghidupkan lampu pada count indicator) 6. Tombol hitung (tombol untuk memulai hitungan pada count indicator) 7. Lampu signal Count indicator 8. Pembesar (Loupe) 9. Indikator hitung / Count indicator (maksimal 3 digit/3 angka) 10. Petridish/cawan petri yang akan dihitung jumlah koloninya 11. Penjepit petridish/Cawan petri 12. Pen hitung / Count pen

AO Quebec Darfield Colony Counters Model 3325, 3326, 3327,

Cara Menggunakan Colony Counter Dan menghitung jumlah Koloni dalam petridish

Sambungkan pen count dgn pen jack

Turn on lamp.flours.kiri,kanan Dan lamp.indikator

Reset indikator hitung Pd posisi nol (000)

Kmd.cawan petri diletakkan pada colony count,dijepit dan ditutup kembali

Tutup petridis dibuka

turn on tombol hitung untuk mulai menghitung dengan menekan Ujung pen count ke glass penuntup Plate shg memberikan signal dan Mengubah angka di count indikator

256

c c

Koloni bakteri yang dihitung (terpisah)

Kotak yang dihitung (dihitung 10 kotak dgn koloni terpisah / 1 kotak Luasnya 1 cm2

Dicatat jumlah koloni yg ditunjukkan oleh count indikator,hitung Jumlah koloni dalam satuan CFU/ ml.

MENGHITUNG JUMLAH BAKTERI DENGAN MENGGUNAKAN METODE TOTAL PLATE COUNT

Cara Kerja :Siapkan alat-alat dan bahan-bahan yang diperlukan Encerkan 3 tabung agar steril dalam air mendidih. Biasanya diperlukan waktu 10 menit untuk mengencerkan 10 - 20 ml agar dalam tabung. Diperhatikan supaya agar diencerkan dengan baik, karena pengenceran yang tidak sempurna menyebabkan gumpalan agar sehingga menyulitkan perhitungan jumlah.

Dinginkan agar dalam penangas air (suhu 45oC - 50 oC).selama 5 - 10 menit. Agar harus didinginkan suhu 45oC - 50 oC karena mikroorganisme dapat mati bila dimasukkan media bersuhu > 55oC Dibuat pengenceran suspensi kuman 10-1, 10-2, 10-3, 104 pada tabung reaksi. Besar pengenceran tergantung jumlah kuman dalam sample. Semakin tinggi jumlah kuman dalam sampel, semakin tinggi pengenceran yang harus dilakukan. Tandailah 4 tabung reaksi steril dengan hurup A, B, C, dan D. Diisi masing-masing tabung dengan 9 ml larutan PZ steril. Tambahkan 1 ml suspensi kuman (sampel) ke tabung A, campur dengan baik dan pindahkan 1 ml ke tabung B, campur dan begitu seterusnya sampai tabung terakhir (D). Didapatkan sederetan tabung dengan pengenceran berturut-turut sampel : 10-1, 10-2

Dipipet 1 ml cairan suspensi kuman dari masingmasing pengenceran : 10-1, 10-2, 10-3, 10-4. Masukkan ke dalam cawan petri yang sesuai. Sewaktu memasukkan cairan ke dalam cawan petri, angkat penutup cawan sedikit saja untuk Disiapkan cawan petri dan tandai dengan nama dan tingkat pengenceran masing-masing suspensi kuman membolehkan cairan mengalir ke dalam cawan petri. Tuangkan agar ke dalam cawan dan goyang cawan kekiri dan kekanan, kemudian digoyang memutar dengan gerakan searah jarum jam 5 kali dan gerakan berlawanan dengan arah jarum jam 5 kali. Usahakan supaya agar cairnya tidak tumpah keluar sewaktu memutar-mutar cawan petri Berhati-hatilah sewaktu memutar cawan sehingga tidak menimbulkan buih atau gelembung udara. Tujuannya supaya mikroorganisme menyebar ke seluruh media.

Biarkan lempengan agar membeku (10 menit). Setelah membeku, balik lempengan agar dan masukkan ke lemari pengeram pada suhu 37oC selama 24 - 48 jam. Sebaiknya lempengan agar dibalik sehingga air kondensasi tidak jatuh pada permukaan agar sehingga menyebabkan penyebaran koloni. Dihitung jumlah koloni pada lempengan agar sebanyak 10 kotak (I kotak = 1 cm2) secara random dengan menggunakan alat Colony Counter " Lakukan tiap pengenceran pada 3 cawan petri yang berbeda Jumlah koloni pada ke-3 media dengan pengenceran yang sama dirata-ratakan. Dihitung jumlah kuman dalam satuan CFU/ml

Rumus : Jmlh koloni pada 10 ktk Jmlh Kuman/ml = r2 x --------------------------x Pengencern 10 (jmlh ktk yang dhitung)

Catatan : untuk menentukan jumlah koloni dalam 1cm2 jumlah koloni pada 10 kotak dibagi dengan 10 (jumlah kotak yang dihitung)

Perhitungan Misalkan : koloni yang dihitung adalah koloni yang tumbuh terpisah pada pengenceran 10-3 Suspensi kuman yang diambil = 1 ml Jumlah koloni pada 10 kotak = 150 koloni petridish = 9 cm, r = 4,5 cm = 22/7 Rumus : Jumlah koloni pada 10 kotak Jumlah Kuman/ml = r2 x --------------------------------------x Pengenceran 10 (jumlah kotak yang dihitung) Jumlah kuman : 22 150 koloni = ------------- x ( 4,5 )2 x ---------------------- x 103 7 10 kotak = 3,143 x 20,25 x 15 x 1.000 = 954.686 CFU / ml

1 ml suspensi bakteri + 9 ml NaCl 0,9 % ,dimasukkan dalam tabung I 1 ml 1 ml 1 ml

Dibuang 1 ml