CARA-CARA MEMPELAJARI SEL 1. sel hidup dan 2. sel mati. 1. Cara-cara mempelajari sel hidup 1a. Pemeriksaan vital langsung di dalam organismenya 1b. Pemeriksaan supravital apabila sel yang bersangkutan dipelajari di luar organismenya/dikultur dibantu dengan teknik pewarnaan vital - merah netral, - hijau Janus => mewarnai mitokhondria - biru tripan, - biru metilen.

Biakan sel atau biakan jaringan

1. Memperlihatkan Kultur slide. A, slide khusus, tebal dan mempunyai ruangan; B, Gelas penutup (cover glass) tempat sel melekat dan tumbuh C, medium beberapa tetes menggantung ; atas dasar itu teknik kultur ini dinamakan "hanging drops culture".

Botol Leighton Cawan Petri

Menurut jenisnyabiakan sel, biakan jaringan, biakan organ radioautografi biakan sel => - berbagai macam biosintesis - penelitian imunologi.

.Teknik pembedahan mikro- jarum mikro, - pipet mikro, - elektroda mikro - dan manipulator mikro => contoh, transplantasi nukleus

Transplantasi nukleus. Telur kodok nukleusnya dibuang, menggunakan ultraviolet (A) atau jarum mikro (B). Ke dalam telur yan telah dienukleasi tadi (C), dimasukkan nukleus donor (entoderm) menggunakan jarum mikro (F, G, H), sekarang telur yang telah mendapat nukleus donor (D), ternyata sebagian dapat berkembang menjadi kodok normal (E).

B1 A B2 Mikroskop Fase kontras "inverted" (A), yangdilengkapi oleh Mikromanipulator (B1, B2)

Metoda SitofotometeriBeberapa komponen sel mengabsorpsi sinar ultra violet secara spesifik. Misalnya asam nukleat mengabsorpsi sinar ultra violet sekitar 2600A, sedangkan protein sekitar 2800 A. Absorpsi diukur langsung dengan fotomultifilter atau dengan densitometer pada lempeng foto yang dikaliberasi.Mikroinsinerasimempelajari komposisi mineral di dalam sel. Cara ini sebenarnya hanyalah memanaskan irisan-irisan jaringan sampai 5250C abunya diperiksa dengan mikroskop lapangan gelap Besi oksida memberikan warna ke-merah-merahan

FluorosensiFluorosensi berarti bahwa benda atau medium yang disinari oleh cahaya tertentu memancarkan cahaya lain yang mempunyai gelombang yang lebih panjang.

fluorosensi alam yang dihasilkan oleh komponen-komponen sel itu sendiri tanpa diwarnai dg fluorokhromvitamin A, thiami dan riboflavin, menghasilkan fluorosensi yang spesifik sehingga mudah dikenal

fluorosensi sekunder komponen sel tersebut baru berfluorosensi setelah diwarnai dg fluorokhrom

Memperlihatkan diagram terjadinya fluorosensi pada zat yang distimulasi oleh sinar ultraviolet

Imunositokimiauntuk menentukan lokasi antigen pada tingkat mikroskop elektron, maupun pada tingkat mikroskop biasa Teknik pewarnaan langsung: antibodi langsung diwarnai dengan zat warna fluorokhrom mewarnai spermatozoa dengan komplek antibodi-fluorokhrom terhadap hyaluronidase; zat fluorokhrom terdapat pada akrosom => hyaluronidase pd akrosom Antigen Antibodi+z.w.flurokrom Antigen-Antibodi

Teknik penandaan tidak langsungyang diwarnai adalah anti terhadap antibodifluorosein untuk dipelajari di bawah mikroskop fase kontras atau dengan ferritin untuk dipelajari di bawah mikroskop elektron. komplek antigen antibodi yang belum diwarnai direaksikan dg anti terhadap antibodi. Ag-Ab Anti-Ai-Fluorosein-Ferritin Ag-Ab-Fluorosein-Ferritin

Diantara penemuan-penemuan yang menarik ialah bahwa hormon ACTH terletak pada sel-sel basofil dari kelenjar hipofise.

ABMikroskop (Epi)-Fluorosensi yang dapat digunakan baik untuk mengamati preparat yang berfluorosensi, tapi juga dapat digunakan untuk mikroskop cahaya biasa. A. sumber lampu Flourosensi, B. Sumber lampu cahaya biasa.

Radioautografi Didasarkan kepada kemampuan radioisotop merubah kristal perak bromida yang terdapat pada emulsi Preparat yang berisi irisan-irisan jaringan yang mengandung zat radioaktif dilapisi oleh emulsi fotografi preparat radioautograf tadi di-"developed" dengan menggunakan "develover" seperti fotografi biasa radioiosotop partikel , dan, atau sinar yang paling sering dipakai adalah partikel-.C14 telah banyak dipakai dalam radioautografi utk mempelajari biosintesis proteinThimidin-H3 utk mempelajari DNA, sedangkan untuk mempelajari metabolisme RNA didalam sel dipakai uridin-H3.

Atas memperlihatkan selapis kristal AgBr dalam emulsi gelatin. Selama "di- Expos" tritium yang terdapat pada jaringan, mengeluarkan sinar beta terus menerus dan akan mengenai sebuah kristal yang persis berada di atasnya. Setelah diperoses dalam developer kristal tersebut berubah menjadi sebuah benang perak; sedangkan kristal yang tidak dikenai sinar akan larut dalam developer.

Metoda Fraksionasi SelPenghancuran atau homogenisasi membran sel dengan berbagai cara mekanik, maupun kimia, kemudian diikuti oleh pemisahan berbagai fraksi sel, berdasarkan massa, bentuk dan beratnya. Menentukan susunan kimia berbagai komponen sel, seperti nukleus, nukleolus, kromosom, mitokhondria, komplek Golgi, mikrosom, alat-alat mitosis, aster, ribosom, ujung syaraf, vesikula sinapsis, granula sekresi dan lisosomPenghancuran mekanik biasanya menggunakan alat "homogenizer" dalam medium cair, larutan sukrosa dalam konsentrasi 0,25.

Diagram: Fraksionasi sel dan sentrifugasi

Sentrifugasi Diferensiasi Contoh di atas subsel dipisah-pisahkan dinamakan sentrifugasi diferensiasi. Partikel-partikel mengendap sesuai dengan perbandingan daya endapnya. Waktu yang diperlukan bagi tiap partikel untuk mengendap, tergantung kepada ukurannya dan beratnya Dapat digunakan untuk memisahkan zat-zat yang lebih kecil, misalnya virus atau molekul yang besar misalnya protein dan asam nukleat, dengan ultrasentrifugasi analitik Koefisen sedimentasinya dapat ditentukan. Koefisen tersebut dinyatakan dalam unit S (Svedberg unit) dan berhubungan dengan berat molekul partikel (misalnya t-RNA, 4S mempunyai BM 25.000 dalton).

A B C D E Sentrifugasi diferensial => koefisen sedimentasi (S)KekuatanSentrifuse

PUSTAKAMolecular Biology of the Cell, 2002, Bruce Albert, Alexander Johnson, Julian Lewis et al., Garland Science, New YorkMolecular and Cellular Biology, 1993, Wolf, S.L., Wadsworth Publishing Company, California.Genes VI , 1997, Levin, B. , Oxford University Press, New York.