i

LAPORAN AKHIR

PENELITIAN KOMPETITIF FAKULTAS

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN, ANTIMIKROBA DAN SITOTOKSISITAS

TERHADAP CELL LINE HepG2 DAN MCF7 EKSTRAK DAUN SIMPOR

(Dillenia Sufruticosa)

TIM PENELITI

Ketua Peneliti : Sri Rahayu, M. Biomed NIDN 0025097903

Anggota Peneliti 1 : Annisa Wulan Agus Utami, M. Si NIDN 0401089101

Anggota peneliti 2 : Isfi Zahara NIM 3425164093

Anggota peneliti 3 : Farid Pujiono NIM 3425164063

Berdasarkan kontrak penelitian

No 38/SPK PENELITIAN/ 5. FMIPA / 2019 tanggal 17 Mei 2019

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS NEGERI JAKARTA

NOVEMBER 2019

Bidang Ilmu: Sains, Teknologi dan Olah Raga Penelitian Kelompok

ii

HALAMAN PENGESAHAN

PENELITIAN KOMPETITIF FAKULTAS

Judul penelitian : Aktivitas Antioksidan, Antimikroba dan

Sitotoksisitas Terhadap Cell Line HepG2 dan MCF

Esktrak Daun Simpor (Dillenia sufruticosa)

Kode/Bidang ilmu : 08/Sains, Teknologi dan Olah raga

Identitas Ketua Peneliti

a. Nama Lengkap : Sri Rahayu, M.Biomed

b. NIDN : 0025097903

c. Jabatan Fungsional : Lektor

d. Program studi : Biologi

e. Nomor hp : 08161690885

f. Alamar surel/ email : srirahayu@unj.ac.id

Biaya Penelitian Tahun 1 : 41.500.000

Jakarta, 22 November 2019

Mengetahui, Peneliti

Dekan Fakultas MIPA

Dr. Adisyahputra, M. S Sri Rahayu, M. Biomed

NIP. 196011111998703003 NIP. 197909252005012002

Menyetujui,

Ketua Lembaga Penelitian dan Pengabdian Kepada Masyarakat

Universitas Negeri Jakarta

Dr. Ucu Cahyana, M. Si

NIP. 196608201994031002

iii

TIM PELAKSANA

Ketua Pelaksana : Ns. Sri Rahayu, M.Biomed

NIDN : 0025097903

Bidang keahlian : Biokimia

Anggota Penelitian :

Anggota 1

Nama : Annisa Wulan Agus Utami, M.Si

NIDN : 0401089101

Bidang Keahlian : Mikrobiologi

Anggota 2

Nama : Isfi Zahara

NIM : 3425164093

Anggota 3

Nama : Farid Pujiono

NIM : NIM 3425164063

iv

KATA PENGANTAR

Segala Puji Allah SWT yang telah melimpahkan rahtmatnya sehingga

penelitian ini dapat dilaksanakan. Meskipun hasil kegiatan penelitian ini mungkin

belum sesuai dengan yang diharapkan, namun penelitian telah memberikan pelajaran

dan informasi yang berarti bagi civitas akademik jurusan Biologi UNJ. Sehingga

kegiatan ini telah membangun atmosfir akademik yang sehat bagi kalangan sivitas

akademik dilingkungan kami, terutama atmosfer dalam penelitian.

Adapun hasil penelitian yang ada mudah- mudahan tidak mengurangi arti

pentingnya sebagai informasi ilmiah. Pelajaran kegagalan dan kesulitan pada saat

penelitian akan menjadi pengalaman yang sangat berguna untuk penelitian di

kemudian hari.

Pada kesempatan ini, saya ingin mengucapkan terima kasih kepada DIPA BLU

FMIPA UNJ atas kesempatan serta dana yang diberikan untuk penelitian ini, ketua

lembaga penelitian UNJ serta semua pihak yang membantu dalam penelitian ini.

Peneliti menyadari penelitian ini masih sangat jauh dari sempurna dan memerlukan

masukan dari berbagai pihak.

Jakarta, November 2019

PENELITI

v

DAFTAR ISI

HALAMAN PENGESAHAN.............................................................................

i

TIM PELAKSANA............................................................................................. ii

KATA PENGANTAR……………………………………................................ iii

DAFTAR ISI.......…………………………………………................................ iii

RINGKASAN..................................................................................................... iv

BAB I. PENDAHULUAN......…………………………….............................. 1

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA…………………………….......................

BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN…………....................

5

8

BAB IV. METODE PENELITIAN…………………......................................... 10

BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI………………………… 13

BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN…………………………………….. 18

DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 19

LAMPIRAN ………………………………………………………….............. 22

LAMPIRAN 1. ARTIKEL PENELITIAN……………………………………. 22

LAMPIRAN 2. ACCEPTANCE LETTER PADA AIP PROCEEDING……… 31

LAMPIRAN 3. SERTIFIKAT SEMINAR INTERNASIONAL ……………… 32

LAMPIRAN 4. DRAFT HAKI……………………………………………….. 33

vi

RINGKASAN

Upaya invesitigasi sumber bahan alam sebagai antioksidan, antikanker dan

antimikroba saat ini memegang peranan yang sangat penting karena potensi yang

cukup baik dan efek yang minim. Tanaman simpor yang sudah dikenal oleh

masyarakat Belitung sebagai pembungkus makanan ternyata memiliki potensi yang

cukup baik sebagai antioksidan, antibakteri dan antimikroba. Penelitian ini merupakan

bagian dari eksplorasi potensi bahan alam sebagai agen herbal medicine yang telah

diPenelitian ini bertujuan menganalisis potensi antioksidan, antimikroba dan

antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) cell line

esktrak daun simpor. Penelitian dilakukan selama 3 tahun. Tahun pertama akan

dianalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor berdasarkan konten senyawa

flavonoid dan fenolik, kemampuan netralisir radikal DPPH, ABTS dan Reducing

power. Tahun kedua penelitian akan dilakukan uji uji sitotoksisitas dengan BSLT, sel

line (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) cell. Tahun ketiga penelitian akan

dilakukan uji antimikroba terhadap bakteri gram positif, negatif serta jamur. Penelitian

dilakukan di laboratorium biokimia dan mikrobiologi FMIPA UNJ. Sampel daun

simpor berasal dari varietas Dillenia Suffruticosa yang diambil di Belitung. Metode

penelitian menggunakan desain Rancang Acak Lengkap (RAL) pola faktorial dengan

konsentrasi ekstrak dan jenis pelarut sebagai faktornya. Uji analisis dilakukan dengan

Anova dan dilanjutkan dengan DMRT. Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan

bahwa ekstrak etanol dari daun simpor Dillenia sp. positif memiliki flavonoid dengan

kadar flavonoid tertinggi 0.00069 mg/QE pada maserasi 24 jam dan konsentrasi 15%.

Hasil ini membuktikan pula bahwa simpor memiliki kemampuan antioksidan dalam

menetralisir radikal bebas DPPH. Kemampuan antioksidan tertinggi adalah 97.097%

paad maserasi 24 jam dan konsentrasi 20%. Hal ini berarti bahwa simpor memiliki

kemampuan untuk menetralisir radikal DPPH hingga 97.097% dan menyisakan

radikal hanya 2.913%. Dapat disimpulkan pula bahwa konsentrasi dan lama maserasi

berpengaruh pada kadar flavonoid (α 0.003) namun tidak berpengaruh pada

kemampuan netralisir radikal DPPH (α 0.079).

1

BAB I. PENDAHULUAN

a. Latar Belakang

Berbagai kondisi dapat meningkatkan produksi radikal bebas dan pembentukan

ROS (Reactive oxygen species) seperti polutan, stress dan aktivitas fisik (1). Ros

sendiri secara fisiologis terbentuk sebagai produk samping mekanisme metabolism

tubuh (2). Senyawa biomolekul tubuh seperti protein, karbohidrat, lipid dan asam

nukelat dapat dirusak oleh aktivitas dari radikal bebas tersebut (3). Radikal bebas

bersifat sangat aktif sehingga dapat merusak struktur serta fungsi sel dan memicu

perkembangan berbagai penyakit (4). Paparan radikal bebas yang berlebihan

menyebabkan tubuh membutuhkan asupan antioksidan eksogen untuk mengatasinya

(6).

Sumber antioksidan dapat berasal dari hasil ekstraksi bahan-bahan alami maupun

dari hasil sintesa reaksi kimia. Penggunaan bahan alami sebagai sumber antioksidan

menjadi preferensi karena memiliki toksisitas yang rendah dan kaya akan senyawa

kimia penting bagi tubuh (7). Beberapa penelitian menunjukkan senyawa antioksidan

yang terkandung pada tanaman umumnya merupakan senyawa-senyawa fitokimia

seperti polifenol, tokoferol, karetenoid, asam askorbat (8). Berbagai tanaman telah

teridentifikasi memilliki senyawa aktif sebagai antioksidan diantaranya mahkota

dewa, meniran, daun papaya, daun bambu (9,10,11,12,13,14,15). Aktivitas

antioksidan tanaman umunya dipelajari berdasarkan jumlah total senyawa fenolik

yang dimiliki dan kemampuan dalam menangkal radikal bebas serta kemamuan

bioktivitas lainya (16,17,18).

Bioaktivitas lan yang dimiliki oleh tumbuhan selain sebagai antioksidan juga

sebagai antimikroba (19,20,21). Resistensi antimikroba sintetik terhadap beberapa

bakteri dan jamur menyebabkan peningkatan upaya untuk agen antimikroba yang

efektif. Tanaman obat dan metabolitnya merupakan sumber yang dapat digunakan

sebagai antimikroba. Beberapa penelitian memperlihatkan penggunaan senyawa aktif

dari tanaman pada berbagai pathogen termasuk pathogen yang berasal dari makanan,

air dan udara (22).

Peran bioaktif tanaman yang memiliki peran sebagai antioksidan juga

dimanfaatkan secara luas pada terapi kanker dengan efek samping yang sangat minim

2

(23,24). Beberapa tanaman yang telah terbukti memiliki aktivitas antikanker antara

lain Garcinia paucinervis, Elephantopus scaber, Evodia lepta, Achras zapota,

Stephania longa, Crocosmia crocosmiflora, Pandanus tectorius, Euphorbia hirta,

Bidens biternata, Cyperus rotundus, Microsorium fortuni, Bidens pilosa, Wedelia

calendulacea, Uncaria macrophylla, Sarcandra glabra and Melaleuca leucadendra (25).

60 % dari tamanan yang teruji memiliki aktivitas antikanker mengandung taxol,

curcumin dan kanabinoid (26,27).

Tanaman yang juga diketahui memiliki bioaktivitas sebagai antibakteri, antikanker

dan antioksidan adalah tanaman simpor. Tanaman ini telah lama digunakan di

masyarakat Malaysia pada penanganan penyakit kanker (28). Meskipun investigasi

aktivitas antoksidan dan antikanker serta antimikroba dari tanaman ini sudah banyak

dilakukan (29,30), namun hingga saat ini belum ada studi mengenai aktivitas

antioksidan, antimikroba dan antikanker dari simpor asal Belitung. Tanaman simpor

diketahui telah lama digunakan masyarakat Belitung sebagai pembungkus makanan

agar dapat bertahan lama. Penelitian ini mungkin merupakan penelitian pertama yang

mengkaji korelasi teori aktivitas antioksidan, sitotoksisitas dan antimokroba dari

tanaman simpor asal Belitung. Selain Hipotesis penelitian ini diperkuat dengan ekologi

tanaman simpor asal Belitung yang memiliki kondisi lingkungan yang sangat efektif

dalam mendukung komposisi fitokimia tanaman ini sebagai antioksidan, antimikroba

maupun antikanker.

b. Rumusan Masalah Penelitian

Berdasarkan latar belakang diatas dapat ditentukan rumusan masalah pada

penilitian ini antara lain:

1. Apakah ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) memiliki potensi sebagai

antioksidan, antimikroba dan antikanker?

2. Berapakah konsentrasi optimal dari ekstrak daun simpor sebagai antioksidan,

antimikroba dan antikanker?

3. Pelarut apakah yang paling tepat digunakan pada ekstraksi daun simpor sebagai

antioksidan, antimikroba dan antikanker?

3

4. Apakah aktivitas antioksidan, antimikroba dan antikanker ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa) sama baiknya atau lebih memiliki potensi dominan sebagai

antioksidan saja, antimikroba saja atau antikanker saja?

5. Apakah potensi antioksidan, antimikroba dan antikanker tanaman simpor asal

Belitung (Dillenia sufruticosa) lebih baik dari simpor varietas lain yang berasal dari

wilayah yang berbeda?

Pembatasan masalah pada penelitian ini adalah apakah ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa) memiliki aktivitas antioksidan, antimikroba dan anti kanker?

c. Tujuan Penelitian

Tujuan umum penelitian ini adalah untuk Menganalisis potensi antioksidan,

antimikroba dan antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae

(MCF7) cell line esktrak daun simpor.

Tujuan khusus penelitian ini adalah:

1. Menentukan konsentrasi dan pelarut paling optimal dari ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa).

2. Mengidentifikasi kandungan senyawa flavonoid dari ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa).

3. Menganalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

berdasarkan kemampuan menetralisir radikal DPPH (1.1-difenil 2-

picrilhidrazil), ABTS (2,2′-azino-bis-(3-ethylbenzothiozoline-6-sulfonic acid

diammonium salt) dan reducing power assay.

4. Menganalisis toksisitas ektrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) bedasarkan

metode BSLT (Brine Shrimp Lethal Test).

5. Menganalisis potensi antikanker ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

terhadap cell line karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7)

dengan metode MTT (3,4,5-dimetiltiazol, 2,5 difenil tetrazolium),

antiproliferasi dan apoptosis assay.

6. Menganalisis potensi antimikroba eksrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus), gram negatif

(Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), and jamur (Candida albicans).

4

d. Kegunaan Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan memberikan kontribusi mendasar bagi

pengembangan natural product dalam bentuk obat, seduhan maupun suplemen

berbahan dasar simpor sebagai sumber antioksidan, antimikroba dan antikanker.

Penelitian ini diharapkan juga memberikan informasi akan efek medikasi dari

tanaman endemik asal Belitung yang bisa dimanfaatkan masyarakat.

Temuan/inovasi yang ditargetkan dari penelitian ini adalah formulasi ekstrak daun

simpor yang paling optimal sebagai antioksidan. Selain itu juga sebagai antikanker

terhadap cell line kanker karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) dan

juga antimikroba terhadap bakteri dan jamur pathogen.

e. Urgensi Penelitian

Pengembangan bahan alam menjadi salah satu isu startegis dalam tema sains,

teknologi dan olahraga yang dikembangkan. Peningkatan kualitas hidup, gizi dan

kesehatan melalui pemanfaatan bahan alam menjadi konsep pemikiran dalam program

penelitian kompetitif di FMIPA Universitas Negeri Jakarta. Berbagai model,

formulasi, prototype dan pengemasan produk bahan alam menjadi inovasi yang

ditargetkan dalam mengoptimalkan gaya hidup dan kesehatan masyarakat.

Berdasarkan hal tersebut, penelitian ini dilakukan dalam rangka mendukung

pencapaian Resntra penelitian di FMIPA Universitas Negeri Jakarta. Diharapkan hasil

dari penelitian ini dapat dimanfaatkan untuk meningkatkan kualitas kesehatan

masyarakat secara luas.

5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

a. Peta Jalan Penelitian

Penelitian ini merupakan rangkaian upaya investigasi bahan alam yang memiliki

potensi sebagai antioksidan, antimikroba dan antikanker. Peta jalan penelitian ini

digambarkan sebagai berikut:

Gambar 1. Peta jalan penelitian

b. Kajian Hasil Penelitian

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih

elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam (32).

Antioksidan juga dapat menginaktifkan radikal bebas, molekul tidak stabil yang

dihasilkan oleh berbagai jenis proses kimia normal tubuh atau oleh radiasi matahari,

asap rokok, dan pengaruh-pengaruh lingkungan lainnya (33). Senyawa antioksidan

berperan penting untuk mengurangi kerusakan oksidatif sel maupun jaringan yang

2015-2021

Investigasi potensiantioksidan, antikanker danantibakteri berbagaitanamaman (invitro daninvivo)

2022- 2025

isolasi, identifikasi dan uji stabilitas senyawa aktif berbagai ekstrak tanaman dengan potensi antioksidan, antimokroba dan antikanker

2026-2028

Pengembangan sediaan produk melalui uji sediaan, uji kinetika dan invivo sediaan

Luaran: 1.Asian Journal of Microbiology, Biotechnology and Environmental, 17(2), 2015 2. Metamorfosa, 4(1), 2017 3. Hak Cipta EC00201814618, 4 Juni 2018

6

disebabkan antara lain oleh ROS seperti radikal superoksida, radikal nitrat hidroksida,

radikal lipid peroksil, dan radikal hidroksil (1,34).

Secara alamiah semua organisme memiliki mekanisme untuk mengatasi

radikal bebas, misalnya dengan mengaktifkan antioksidan endogen. Beberapa

antioksidan endogen tubuh antara lain adalah enzim superoksida dismutase dan

katalase, senyawa asam askorbat, tokoferol, dan glutation (35). Apabila jumlah ROS

melebihi kapasitas antioksidan untuk mengatasinya, maka akan timbul

ketidakseimbangan antara ROS dengan antioksidan yang akan menyebabkan

ketidakseimbangan yang disebut dengan stress oksidatif (36). Stress oksidatif inilah

yang bertanggung jawab terhadap onset terjadinya berbagai penyakit (37). Kondisi

stress oksidatif tubuh yang tidak dapat ditangani dengan mekanisme antioksidan alami

dapat diatasi dengan pemberian antioksidan eksogen.

Berbagai senyawaa antioksidan yang dihasilkan tumbuhan untuk menangkal

radikal bebas, diantaranya biflavanoid, β-karoten, vitamin C, dan E. Kemampuan

beberapa tanaman sebagai antioksidan dipengaruhi oleh senyawa metabolit sekunder

yang terkandung di dalamnya. Diantara beberapa jenis antioksidan yang dihasilkan

oleh tumbuhan tersebut, yang menunjukkan aktivitas antioksidan terbaik adalah

biflavonoid (38). Biflavonoid efektif dalam penghilangan radikal hidroksil, radikal

peroksil, dan anion superoksida (39,40). Potensi antioksidan senyawa biflavonoid

diperkirakan disebabkan oleh pelepasan atom hidrogen yang terdapat pada gugus

hidroksil (–OH).

Berbagai tanaman dilaporkan memiliki kemampuan antioksidan yang sangat baik

diantaranya mahkota dewa, meniran, daun papaya, daun bambu (9,10,11,12,13,14,15).

Daun simpor yang telah berabad lamanya dikenal masyarakat sebagai pembungkus

makanan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat baik karena adanya kandungan

senyawa fenolik pada tanaman ini (28,29,31). Selain sebagai antioksidan, tanaman ini

juga diketahui memiliki potensi sebagai antikanker (41).

Kanker merupakan penyakit yang mematikan dan menyebabkan banyaknya kasus

kematian di sleuruh dunia. Kemoterapi telah diketahui masyarakat selama beabad

lamanya untuk penyembuhan kanker. Namun, beberapa agen kemoterapi memiliki

toksisitas yang sangat tinggi terhadap jaringan normal dan menyebabkan timbulnya

7

resistensi. Karena keterbatasa ini perlu dikembangkan agen terapi yang lebih aman

(25).

Pengembangan bahan alami sebagai sumber agen terapi kanker terus

dikembangkan karena lebih efektif dan minim efek samping (30). Berbagai penelitian

telah melakukan analisis mengenai senyawa bioaktif tanaman yang berpotensi dalam

terapi kanker. Senyawa bioaktif ini dapat membunuh sel kanker melalui beberapa

mekanisme seperti meningkatkan sistem imun, menginduksi apoptosis, mengurangi

resistensi dan menghambat angiogenesis (25). Dillenia sufruticosa yang berasal dari

Malaysia telah terbukti memiliki potensi pada terapi kanker dengan memodulasi

mitogen activated protein kinase (MAPKS) pada level gen dan protein (28).

Selain potensi sebagai antioksidan dan antikanker, tanaman simpor juga memiliki

potensi sebagai antibakteri (25). Varietas dari Dillenia indica pada pelarut methanol

dan n-heksan pada fraksi kloroform diketahui dapat menghambat pertumbuhan 13

bakteri (Bacillus cereus, B. megaterium, B. subtilis, Staphylococcus aureus, Sarcina

lutea, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella paratyphi, S. typhi,

Shigella boydii, S. dysenteriae, Vibrio mimicus, V. parahemolyticus) dan 3 jamur

(Candida albicans, Aspergillus niger, Sacharomyces cerevacae) (29).

8

BAB III. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN

a. Tujuan Penelitian

Tujuan umum penelitian ini adalah untuk Menganalisis potensi antioksidan,

antimikroba dan antikanker terhadap karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae

(MCF7) cell line esktrak daun simpor.

Tujuan khusus penelitian ini adalah:

7. Menentukan konsentrasi dan pelarut paling optimal dari ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa).

8. Mengidentifikasi kandungan senyawa flavonoid dari ekstrak daun simpor

(Dillenia sufruticosa).

9. Menganalisis aktivitas antioksidan ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

berdasarkan kemampuan menetralisir radikal DPPH (1.1-difenil 2-

picrilhidrazil), ABTS (2,2′-azino-bis-(3-ethylbenzothiozoline-6-sulfonic acid

diammonium salt) dan reducing power assay.

10. Menganalisis toksisitas ektrak daun simpor (Dillenia sufruticosa) bedasarkan

metode BSLT (Brine Shrimp Lethal Test).

11. Menganalisis potensi antikanker ekstrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

terhadap cell line karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7)

dengan metode MTT (3,4,5-dimetiltiazol, 2,5 difenil tetrazolium),

antiproliferasi dan apoptosis assay.

12. Menganalisis potensi antimikroba eksrak daun simpor (Dillenia sufruticosa)

terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus), gram negatif

(Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), and jamur (Candida albicans).

b. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan memberikan kontribusi mendasar bagi

pengembangan natural product dalam bentuk obat, seduhan maupun suplemen

berbahan dasar simpor sebagai sumber antioksidan, antimikroba dan antikanker.

Penelitian ini diharapkan juga memberikan informasi akan efek medikasi dari

tanaman endemik asal Belitung yang bisa dimanfaatkan masyarakat.

9

Temuan/inovasi yang ditargetkan dari penelitian ini adalah formulasi ekstrak daun

simpor yang paling optimal sebagai antioksidan. Selain itu juga sebagai antikanker

terhadap cell line kanker karsinoma hati (HepG2) dan karsinoma mamae (MCF7) dan

juga antimikroba terhadap bakteri dan jamur pathogen.

10

BAB IV. METODE PENELITIAN

a. Diagram Alur Penelitian

Alur penelitian digambarkan dalam diagram dibawah ini:

.

Gambar 2. Diagram Alur Penelitian

Skrining awal komposisi

fitokimia ekstrak daun simpor

Premilinary

Tahun 1

Analisis

senyawa

antioksidan

daun simpor

Tahun 2

Analisis

sitotoksisitas

ekstrak daun

simpor

Tahun 3

Analisis

aktivitas

antimikroba

Hasil

Komposisi seny. Fitokimia

simpor

Determinasi total senyawa

flavonoid dan fenolik.

Indikator: Informasi jumlah

kandungan seny. Fenolik dan

flavonoid

Analisis aktivitas antioksidan

berdasarkan metode ABTS, DPPH dan

Reducing power assay.

Indikator: IC50 DPPH, ABTS dan

absorbansi reducing power

Target Luaran

1. 2 prosiding terindeks

scopus

2. HKI dalam bentuk

hak cipta

toksisitas dengan metode BSLT.

Indikator: info toksisitas simpor

Analisis sitotoksistas simpor

terhadap cell line kanker

karsinoma hati (HepG2) dan

karsinoma mamae (MCF7)

melalui MTT,

antiploriferation dan

apoptosis assay.

Indikator: IC50 sitotoksisitas

thdp HepG2 dan MCF7

Target Luaran

1. 1 jurnal terindeks

scopus

3. HKI dalam bentuk

hak cipta

2. HKI dalam bentuk

paten sederhana

Analisis terhadap bakteri gram positif

(Staphylococcus aureus), gram negatif

(Escherichia coli, Pseudomonas

aeruginosa), and jamur (Candida

albicans). Indikator: aktivitas

antimikroba terhadap jamur dan

bakteri.

Target Luaran

1. 1 jurnal terindeks

scopus

2. HKI dalam bentuk

hak cipta

11

b. Metodologi penelitian

Penelitian dilakukan di laboratorium biokimia dan mikrobiologi FMIPA, UNJ

pada bulan April sampai November 2019. Sampel yang digunakan adalah daun simpor

(Dillenia sufruticosa) yang diambil dari Belitung. Metode penelitian menggunakan

desain eksperimen rancang acak lengkap (RAL) dengan 2 faktor. Faktor yang diujikan

adalah konsentrasi ekstrak (25,50,75 ppm) dan jenis pelarut (metanol, etilasetat dan

air). Setiap perlakuan diuji secara duplo.

Determinasi total senyawa fenolik ditentukan secara spektrofotometri dengan

Folinciocalteu assay. 30 µl ekstrak pada konsentrasi berbeda dicampur dengan 150 µl

reagen Folin (1:10 v/v dalam air), didiamkan suhu 25◦C selama 5 min, kemudian 120

µl sodium bicarbonate (75 gm/L) larutan ditambahkan. Diadiamkan 90 min dan

absorbansi diukur pada 725 nm. Asam galat (0–500 mg/L) digunakan dalam

pembuatan kurva stanndar. Determinasi total flavonoid ditentukan dengan metode

kolorimetri. Kuersetin digunakan pada pembuatan kurva standar dan absorbansi

diukur pada 420 nm.

Kapasitas scavenging radikal dilakukan dengan metode ABTS dan DPPH. Asam

askorbat digunakan sebagai kontrol positif dan pelarut tanpa ekstrak sebagai kontrol

negatif. Larutan ekstrak dicampur dengan 2 ml larutan 0.16nM DPPH dalam pelarut.

Didiamkan selama 30 menit dalam kondisi gelap. Absorbasi diukur pada 517 nm.

ABTS dilarutkan dalam air dengan hingga konsentrasi 7Mm/ Kalium persulfate

(K2S2O8) ditambahkan hingga konsentrasi 2.45mM. Didiamkan dalam temperature

ruang selama 1 malam. Absorbasi diukur pada 734 nm.

Reducing power dievaluasi dengan menggunakan asam askorbat. Asam askorbat

dan pelarut dicampur dengan buffer fosfat (500 µl, 0.2 M, pH 6.6) dan potassium

ferrisianida [K3Fe (CN)6] (500 µl, 10 mg/mL). Campuran kemudian diinkubasi suhu

50◦C selama 20 min. Setelah itu 500 µl TCA ditambahkan dan disentrifugasi pada

8000 rpm selama 10 min. Supernatan yang jernih (100 µl) dicampur dengan air dan

ditambahkan 20 µl ferri klorida (0.1% w/v) . Absorbansi diukur pada 700 nm. Buffer

posfat digunakan sebagai kontrol.

Uji toksisitas ditentukan dengan metode BSLT, MTT, antiproliferasi dan apoptosis

assay terhadap sel line HepG2 dan MCF. Sebagai standar digunakan sel line normal

HPL1A (human peripheral lung epithelial cells). Uji sitotoksisitass dengan BSLT

12

menggunakan Artemia salinas usia 1 hari. 4 mg ekstrak di larutkan pada reagen DMSO

pada berbagai konsentrasi. Lc50 sampel setelah 24 jam didapatkan dalam persentase

udang yang mati pada konsentrasi sample tertentu. MTT assay dilakukan dengan

menggunakan sel line yang di tumbuhkan pada 96-well microtiter plates dengan

kerapatan sel 10 × 10−4 cells per 100 µl setiap sumur. Plate kemudian diinkubasi pada

suhu 37◦C selama 24 h dalam 5% CO2. Setelah inkubasi, sel diberikan ekstrak simpor.

Diinkubasi kembali selama 72 jam dan digunakan pelarut saja yang ditentukan sebagai

blanko serta sel line normal sebagai kontrol. Setelah itu medium kultur di bersihkan

dengan aspirasi dan ditambahkan 20 µl MTT pada setiap well. Setelah itu diinkubasi

4 jam dan ditambahkan DMSO. Absorbansi siukur pada panjang gelombang 570 nm.

Uji Antiproliferasi dilakukan dengan menempatkan 4,000 sel per well dalam 96-

well microplate dan diinkubasi selama 1 malam. 100 µg/mL Ekstrak di berikan pada

setiap well dan diinkubasi selama 38 jam pada suhu 37°C. Setelah itu sel diwarnai

dengan resazurin reduction reagent Alarma Blue (Invitrogen, Frederick, MD, USA)

untuk menentukan sitotoksisitas eksrak. Intensitas flurosen kemudian di ukur dengan

microplate reader. Inhibisi (%) dikalkulasi dengan persamaan regresi linear.

Pewarnaan fluorosen dilakukan dengan Arrayscan VTI high-content screening reader

(Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Intensitas fluorescent dianalisis dengan

vHCS Scan software (Thermo Scientific).

Uji antimikroba dilakukan terhadap bakteri gram positif (Staphylococcus aureus)

gram negatif (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa), dan jamur (Candida

albicans) dengan metode difusi agar. Organisme pathogen diperoleh dari UNJCC

(Universitas Negeri Jakarta Culture Collection). Inokulum bakteri dibuat dengan

konsentrasi 1.0 × 104 CFU/mL dan di tambahkan saline steril. Suspensi disiapkan

segar dan tempatkan pada 4◦C hingga digunakan untuk pengujian. Suspensi kemudian

sebar pada medium solid untuk memferivikasi kontaminasi dan viabilitas inoculum.

Tiga antiobiotik (ampisilin, streptomoisin dan tetrasiklin) digunakan sebagai kontrol

positif. Pelarut tanpa ekstrak digunakan sebagai kontrol negatif. Plat agar kemudian

diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24h dan inhibisi zona bening dalam nm digunakan

sebagai acuan sensitivitas antimokroba ekstrak simpor.

13

BAB V. HASIL DAN LUARAN YANG DICAPAI

a. Hasil Penelitian dan Pembahasan

Water content

Moisture content of sample used was the leaves of Dillenia sp. which had been

dried in the sun for two days. The results of the analysis of Dillenia sp. leaves obtained

water content of 73.65%. Decrease in water content occurs due to the evaporation

process. Water and compounds found in leaves easily evaporate so that the levels

decrease and affect the weight of the leaves. The reduction in water content in the

leaves aims to be easily stored and inhibit the enzymatic process. Large water levels

allow the simplicia to become a growth medium for microorganisms (42,43).

Qualitative Flavonoid Assay

Table 1. Prelimary qualitative flavonoid analysis of ethanolic leaf extract of Dillenia

Treatment Inferences

24 hours

10% +

15% ++

20% +++

48 hours

10% +++

15% ++

20% +

Note : (+) present

Qualitative test results of flavonoids on leaf extract of Dillenia sp. positively

contains flavonoids. Indications that the extract is positive for flavonoids will change

colour after adding magnesium and HCl reagents to yellow. The addition of

magnesium and HCl reagent in the extract aims to reduce the nucleus of benzopirone

in flavonoid compounds. Addition of HCl causes a reduction between magnesium and

flavonoid compounds (44).

Quantitative Flavonoid Assay

Determination of flavonoid content aims to determine the flavonoid compounds

contained in the leaf of Dillenia sp. Levels of flavonoid compounds were expressed in

14

mg QE / mg. Determination of flavonoid levels uses the AlCl3 colony method with the

principle of complex formation. This principle forms a shift in the wavelength of the

visible direction so that the color of the solution turns yellow. AlCl3 will form complex

and stable compounds (45) after reacting with C4 ketone groups and hydroxyl groups

on C3 or C5 from flavone and flavonol compounds. The formation reaction of the

Flavonoid-AlCl3 complex can be show in Figure 3 and 4.

Figure 3. The formation reaction of the

Flavonoid-AlCl3 complex.

Figure 4. Complex formation reaction

between AlCl3 and flavone [13]

Quesertin was used in designing flavonoid standard curves since it belongs to the

flavonoid group (46) which have ketone groups on C4 atoms and hydroxyl groups on

C3 or C5 atoms. In addition, quesertin easily reacts with AlCl3 (47). The flavonoids

have chelating properties so they can bind to metals and prevent increased oxidation

and gives positive effect (48).

The absorbance of the questionnaire was plotted against the concentration so that it

gets the calibration curve equation. From the graph obtained the regression equation y

= 0,0007x - 0,0007; with a correlation coefficient (R²) = 0.9396. The correlation

coefficient (R2) value close to 1 indicates regression analysis can be trusted ( Figure

5)

15

Figure 5. Quercetin standard curve

The results of the research in Table 2 shows that the highest concentration of

flavonoid compounds were at 24 hours maceration time with a concentration of 10%

(2.904 mg QE / mg. The lowest was at the maceration time of 48 hours with a

concentration of 20% (2.875 mg QE / mg). Statistical analysis showed that data was

homogenous and normally distributed (ᾳ> 0.005). ANOVA results obtained

maceration time and concentration significantly affect flavonoid content (ᾳ= 0.003)

[15]. Duncan Pos Hoc test showed that almost all group were not different unless the 24

hours x 15% one.

Table 2. Flavonoid content of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.

Time

maceration

(hours)

Concentation

(%)

Flavonoid content

(mg QE/mg)

24

10 2.904

15 2.953

20 2.877

48

10 2.893

15 2.887

20 2.875

DPPH Radical Scavenging Assay

Free radicals are relatively unstable because they have unpaired electrons in the outer

orbit. These electrons are very reactive if they are compounded with other molecules.

Substances able to prevent and protect from the side effects of free radicals are

antioxidants. Antioxidants can to subvert one molecule and stabilize it.

DPPH is a free radical compound that is often used to measure antioxidant activity

from various compounds or extracts of natural ingredients. This method is easy to use

y = 0.0007x - 0.002R² = 0.9689

0

0.005

0.01

0.015

0.02

0.025

0.03

0.035

0.04

0.045

0 10 20 30 40 50 60 70

Ab

sorb

ance

(n

m)

Concentration (ppm)

16

to measure antioxidant activity in extracts. DPPH which was reacted with ethanolic

leaf extract of Dillenia sp., caused the intensity of purple to decrease and turn yellow

(Figure 6,7.). This color change occurs because of the transfer of electrons from

certain compounds in the ethanolic extract of Dillenia sp. on DPPH so that it becomes

stable.

Figure 6. Results of a qualitative

flavonoid analysis of ethanolic leaf

extract of Dillenia sp. in maceration

time 24 and 24 hours and series

consentration of 10%, 15%, and 20%

(left to right).

Figure 7. DPPH scavenging of

ethanolic leaf extract of Dillenia sp.

the 24 hour in series concentration (10,

50, 100, 150, and 200) ppm shows the

change in color of DPPH after being

given Dillenia sp. ethanolic leaf

extract from purple to yellow.

The method used to measure activity is expressed by the value of DPPH

reduction. DPPH reduction in ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maseration 24

was highest at extract concentrations of 20% (97.097%) while the extracts in

maseration 48 hours were highest at extract concentrations of 10% (95.095%) (Table

3)

Table 3. DPPH scavenging of ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maceration time

24 and 48 hours (values represent means±SE).

Concentration

(ppm)

Concentration extract

24 hours 48 hours

10% 15% 20% 10% 15% 20%

10 88,69 ±

0,01

65,47 ±

0,01

91,89 ±

0,00

94,39 ±

0,00

85,09 ±

0,01

91,39 ±

0,00

50 91,79 ±

0,01

89,29 ±

0,01

91,89 ±

0,00

91,49 ±

0,01

78,58 ±

0,01

89,89 ±

0,00

100 89,79 ±

0,01

95,20 ±

0,01

96,70 ±

0,00

97,10 ±

0,01

88,69 ±

0,01

91,99 ±

0,01

150 95,70 ±

0,01

92,59 ±

0,01

96,30 ±

0,00

91,69 ±

0,01

88,59 ±

0,01

89,79 ±

0,01

200 90,59 ±

0,01

84,58 ±

0,01

97,10 ±

0,00

95,10 ±

0,01

94,19 ±

0,00

92,49 ±

0,01

17

Antioxidant properties can be found in extracts with different concentrations.

Ethanolic extracts are polar solvents and are very effective for extracting antioxidant

compounds in the leaves of Dillenia sp. This study provides evidence that the leaf of

Dillenia sp. from Belitung contains flavonoid compounds and has the potential as a

source of antioxidants. Antioxidant activity is influenced by time and concentration

during extraction. Statistical analysis showed that concentration and maceration didn’t

affect DPPH scavenging ability Dillenia (ᾳ 0.079).

b. Luaran yang dicapai

Luaran yang telah dicapai pada penelitian ini antara lain :

1. Publikasi dalam prosiding terindeks scopus (Accepted) AIP Conference

Proceeding.

2. Seminar Internasional pada Annual Applied Sciences Education Conference, 24

April 2019

3. HAKI berupa kumpulan foto dokumentasi penelitian (Draft)

18

BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN

a. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian disimpulkan bahwa ekstrak etanol dari daun simpor

Dillenia sp. positif memiliki flavonoid dengan kadar flavonoid tertinggi 0.00069

mg/QE pada maserasi 24 jam dan konsentrasi 15%. Hasil ini membuktikan pula bahwa

simpor memiliki kemampuan antioksidan dalam menetralisir radikal bebas DPPH.

Kemampuan antioksidan tertinggi adalah 97.097% paad maserasi 24 jam dan

konsentrasi 20%. Hal ini berarti bahwa simpor memiliki kemampuan untuk

menetralisir radikal DPPH hingga 97.097% dan menyisakan radikal hanya 2.913%.

Dapat disimpulkan pula bahwa konsentrasi dan lama maserasi berpengaruh pada kadar

flavonoid (α 0.003) namun tidak berpengaruh pada kemampuan netralisir radikal

DPPH (α 0.079).

b.Saran

Sebaiknya diujikan pula kemampuan antioksidan berdasarkan jenis

antioksidan dari simpor apakah sebagai pemutus rantai, atau pengkelat besi atau jenis

antioksidan lain. Bisa juga dicek apakah simpor tergolong kedalam antioksidan primer

maupun sekunder. Sehingga mekanisme kerja terhadap sel dapat dirprediksi.

19

Daftar Pustaka

1. Blokhina et al. 2003. Antioxidant, oxidative stress and oxygen deprivation

stress. Annals of Botany. 91, 179- 194

2. Al-Ghubory, K.H., Fowler, P.A., Garrel, C. 2010. The Role of cellular oxygen

species, oxidative stress and antioxidant in pregnancy woman. The

International Journal of Biochemsitry and Cell Biologi.42, 1634-1650.

3. Suirta, I.W., Puspawati, N.M., & Gumiati, N.K..2007, Isolasi dan Identifikasi

Senyawa Aktif Larvasida dari Biji Mimba (Azadirachta indika A. Juss)

Terhadap Larva Nyamuk Demam Berdarah (Aedes Aegypti). Jurnal Kimia. 1

(1), 47-54.

4. Halliwell, B. andGutteridge, J.M.C.2006. Free Radicals in Biology and

Medicine. 4th Ed. Oxford: Clarendon Press.

5. Tuminah. 2009. Efek Asam Lemak Jenuh dan Asam Lemak Tak Jenuh

Terhadap Kesehatan. J Media Peneliti dan Pengembangan Kesehatan. 19(1),

13-20

6. Mau JL, Lin HC, Song SF. 2002. Antioxidant properties of several specialty

mushrooms. Food Res Int. 35, 519–526.

7. Carocho, M., and Ferreira, I. C. 2013. A review on antioxidants, prooxidants

and related controversy: natural and synthetic compounds, screening and

analysis methodologies and future perspectives. Food Chem. Toxicol. 51, 15–

25. doi: 10.1016/j.fct.2012.09.021

8. Wojcik, M., Burzynska-Pedziwiatr, I., and Wozniak, L. A. 2010. A review of

natural and synthetic antioxidants important for health and longevity. Curr.

Med. Chem. 17, 3262–3288. doi: 10.2174/092986710792231950.

9. Hasnirwan, Ibrahim S, Yanti, M. 2013. Isolasi Dan Karakterisasi Flavonoid

Pada Fraksi Aktif Antioksidan Dari Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria

macrocarpa (Scheff Boerl). Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung,

2013

10. Maisarah, et al. 2013. Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya.

International Food Research Journal. 20(3), 1043-1048.

11. Kweon, M, Hwang H,Sung H. 2001. Identification and Antioxidant Activity

of Novel Chlorogenic Acid Derivatives from Bamboo (Phyllostatchys edulis).

J. Aric Food Chem. 49(10), 4645-55.

12. Vardar-Unlü, G.; Candan, F.; Sökmen, A.; Daferera, D.; Polissiou, M.;

Sökmen, M.; Dönmez, E. 2003. Type, B. Antimicrobial and antioxidant

activity of the essential oil and methanol extracts ofThymus pectinatus Fisch.

et Mey.Var. Pectinatus (Lamiaceae). J. Agric. Food Chem.51, 63-67.

13. Govindan, B et al. 2018. Secondary metabolites from the unique bamboo,

Melocanna baccifera. Natural Product Research. 1478, 6419-27.

14. Supriyatin, Rahayu, S, Sukmawati, D. 2015. Phytochemical Composition,

Antimicrobial and Antioxidant Activity of Manggong Bamboo (Gigantochloa

20

Manggong) Leaf Extract. Asian Journal of Microbiology, Biotechnology and

Environmental Sciences. 17(2), 443-450.

15. Supriyatin, Rahayu, S, Apriana, R. 2017. The Effect of Maximum Physical

Activity and Manggong Bamboo (Gigantochoa Manggong) Leaves Extract in

Liver Organ of Rats (Rattus norvegicus). Metamorfosa. 4(1), 8-12

16. Farhat, M. B., Landoulsi, A., Chaouch-Hamada, R., Sotomayor, J. A., and

María, J. J. 2013. Characterization and quantification of phenolic compounds

and antioxidant properties of Salvia species growing in different habitats.

Indus. Crops Prod. 49, 904–914. doi: 10.1016/j.indcrop.2013.06.047

17. Navas-Lopez,J.F.,Ostos-Garrido,F.J.,Castillo,A.,Martín,A.,Gimenez,M.J.,and

Pistón, F. 2014. Phenolic content variability and its chromosome location in

tritordeum. Front. Plant Sci. 5:10. doi: 10.3389/fpls.2014.00010

18. Iqbal, E., Salim, K. A., and Lim, L. B. L. 015. Phytochemical screening, total

phenolics and antioxidant activities of bark and leaf extracts of Goniothalamus

velutinus (Airy Shaw) from Brunei Darussalam. J. King Saud Univ. Sci. 27,

224–232. doi: 10.1016/j.jksus.2015.02.003.

19. Malla, S., Shrotri, C. K., and Jain, R. 2014. Antimicrobial, phytochemical and

antioxidant screening of leaves and stem bark from Albizia lebbeck (l.). Int. J.

Pharm. Bio. Sci. 5, 259–270.

20. Mahomoodally, M. F., Gurib-Fakim, A., and Subratty, A. H. (2010). Screening

for alternative antibiotics: an investigation into the antimicrobial activities of

medicinal food plants of Mauritius. J. Food Sci. 75, M173–M177. doi:

10.1111/j.1750-3841.2010.01555.x

21. Mandal, N., Das, A., Chaudhuri, D., Ghate, N. B., and Chatterjee, A. (2013).

Comparative assessment of phytochemicals and antioxidant potential of

methanolic and aqueous extracts of Clerodendrum colebrookianum walp. leaf

from North-East India. Int. J. Pharm. Pharm. Sci. 5, 420–427.

22. Kuki´c, J., Popovi´c, V., Petrovi´c, S., Mucaji, P., ´Ciric, A., and Stojkovi´c,

D. (2008). Antioxidant and antimicrobial activity of Cynara cardunculus

extracts. Food Chem. 107, 861–868. doi: 10.1016/j.foodchem.2007.09.005

23. DeSantis, C. E., Lin, C. C., Mariotto, A. B., Siegel, R. L., Stein, K. D., and

Kramer, J. L. 2014. Cancer treatment and survivor ship statistics. CA Cancer

J. Clin. 64, 252–271. doi: 10.3322/caac.21235.

24. Fridlender, M., Kapulnik, Y., and Koltai, H. 2015. Plant derived substances

with anti-cancer activity: from folklore to practice. Front. Plant Sci. 6:799. doi:

10.3389/fpls.2015.00799

25. Almosnid, N, et al. 2017. Evaluation of extracts prepared from 16 plants used

in Yao ethnomedicine as potential anticancer agents. Journal of

Ethnopharmacology. https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.09.032

26. Gordaliza, M. 2007. Natural products as leads to anticancer drugs. Clin. Transl.

Oncol. 9, 767–776. doi: 10.1007/s12094-007-0138-9

21

27. Carocho, M., and Ferreira, I. C. 2013. A review on antioxidants, prooxidants

and related controversy: natural and synthetic compounds, screening and

analysis methodologies and future perspectives. Food Chem. Toxicol. 51, 15–

25. doi: 10.1016/j.fct.2012.09.021

28. Foo et al., 2016. Dillenia sufruticosa dichloromethane induced apoptosis

toward MDA-MB-231 Triple Negative Breast Cancer Cells. Journal of

Ethnopharmacology. 187, 195-204.

29. Parvin, M.S, Rahmab, M,S. Islam, S, Rashid, M, A. 2009. Chemical and

biological investigations of Dillenia indica Linn. Bangladesh J Pharmacol. 4,

122-25. doi: 10.3329/bjp.v4i2.2758

30. Armania, N, et Al., 2013. Dillenia sufruticosa exhibit Antioxidant and

Cytotoxic Activity Trough Induction of Apoptosis and G2/M Cell Cycle

Arrest. Journal of Ethnopharmacology. 146, 525-535.

31. Abdile, H, Singh, R.P, Jayaprakasha, G.K, Jena, B.S. 2005. Antioxidant

Activity of Dillenia Indica Fruit. Food Chemsitry. 90, 891-896.

32. Sunarni, T. 2005. Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa

kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae. Jurnal Farmasi

Indonesia 2 (2), 2001, 53-61.

33. Rohman, Abdul. 2006. Aktivitas antioksidan, kandungan fenolik total dan

flavonoid total serta esktrak etil asetat buah mengkudu serta fraksinya.

Majalah Farmasi Indonesia. 13(3).136.

34. Ayoola, P.B. & Adeyeye, A. 2010. Effect of Heating on the Chemical

Composition and Physico - Chemical Properties of Arachis hypogea

(Groundnut) Seed Flour and Oil. Pakistan Journal of Nutrition 9 (8). 751-754

35. Mau JL, Lin HC, Song SF. 2002. Antio Oxidant properties of several specialty

mushrooms. Food Res Int 35:519–526.

36. Ichiisi, E, Li, X, Iorio E. 2016. Oxidative Stress and Diseases: Clinical Trials

and Approaches. Oxid. Med. Cell.Longev. 2016.1-3.

37. Andrade et al. 2018. Imvitro Antioxidant Property of Biflavonoid

Agathisflavone. Chemistry Central Journal. 12: 75

38. Cadenas, E. and Packer, L. 2002. Handbook of Antioxidants. 2nd Edition,

Marcel Dekker, Inc. New York.

39. Wardani, R. 2014. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Aktif Antioksidan dari

Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Herba Meniran (Phyllantus niruri L.). Skripsi.

Fakultas Farmasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta.

40. Farah SH, Wende L, Trust B 2008. Measurement of anthocyanins and other

phytochemicals in purple wheat. Food Chem.109. 916-924.

41. G. Eswaraiah, K.A. Peele, S. Krupanidhi, R.B. Kumar, T.C. Venkateswarulu.

2018. Identification of Bioactive Compounds in Leaf Extract of Avicennia alba

by GC-MS Analysis and Evaluation of Its In-vitro Anticancer Potential

Against MCF7 and HeLa cell lines. Journal of King Saud University - Science

(2018), doi: https://doi.org/10.1016/j.jksus.2018.12.010

22

42. Voight, R. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Diterjemahkan oleh Soendani

N.S. Yogyakart; UGM Press. 1995.

43. Supriningrum R. Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Pacar Kuku

(Lawsonia inermis L.) Berdasarkan Perbedaan Cara Pengeringan. Jurnal

Ilmiah Manutung. 2018; 4(2): 156-161.

44. Gandhi, Dipal, and Priti. Mehta. Dillenia Indica Linn. and Dillenia Pentagyna

Roxb.: Pharmacognostic, Phytochemical and Therapeutic Aspects. Journal of

Applied Pharmaceutical Science. 2013; 3(11): 134-142

45. Kanta RS, Kar M, Roiutray R. DPPH Free Radical Scavenging Activity of

Some Leafy Vegetable used by Tribals of Odisha, India. Journal of Medicinal

Plants Studies. 2013; 1(4):21-27.

46. Ifeanyi OE. A Review on Free Radicals and Antioxidants. Int. J. Curr. Res.

Med. Sci. 2018; 4(2): 123-133.

47. Blessy BM, Archana T, Suresh K J. Free Radicals and Antioxidants : A

Review. Journal of Pharmacy Research 2011; 4(12): 4340-4343.

48. Abdille Md H, R P Singh, G K Jayaprakasha, and B S Jena. Antioxidant

Activity of the Extracts from Dillenia Indica Fruits. Food Chemistry. 2005; 90:

891-896.

23

Lampiran 1. Artikel penelitian

Antioxidant Capacity of Dillenia sp. Leaf Extract Against DPPH (1,1-Diphenyl-

2picryl Hidrazil) Radical

S Rahayu1*, I Zahara1, Afifah1, K Arya P1, Supriyatin2

1 Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences,

Universitas Negeri Jakarta, Indonesia 2 Department of Biology Education, Faculty of Mathematics and Natural

Sciences, Universitas Negeri Jakarta, Indonesia

Corresponding author: srirahayu@unj.ac.id

Abstract. Some plants have capacity as exogenous antioxidant. Simpor (Dillenia sp.)

is plant of the Dilleniaceae family which may have the property of antioxidant. The

purpose of this study was to measure the antioxidant capacity of the 96% ethanolic

simpor leaf extract. Factorial design was applied with 2x3 factors of maseration time

(24 and 48 hours) and concentration series of (10, 15, 20%). Normality was done by

Kolmogorov-Smirnov and homogeneity by Levine. Data was analysed by ANOVA

(ᾳ= 0.05). Post Hoc was analysed by Duncan. Antioxidant property was analysed

qualitatively and quantitatively on flavonoid and also leaves water content. The

antioxidant capacity assay was measured using DPPH (1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil)

scavenging ability at 517 nm with ascorbic acid as control. The result showed that

water content of the plant was 73.65%. Simpor contain flavonoids with highest

flavonoid content (2.953 mg QE / mg) in 24-hour maceration time at 10%

concentration. Furthermore, it also has ability to scavenge DPPH (1,1-Diphenyl-

2picryl Hidrazil) radical with the highest value (97,10 ± 0,01%) in 24 hours maceration

at 20% extract concentration. Statistical analysis on flavonoid content showed that

time and concentration gave significant effect on flavonoid content (ᾳ =0.003).

Duncan result revealed that almost all groups didn’t significantly different only the 24

hours x 15% concentration was. DPPH inhibition based on statistic proved that both

factors didn’t affect scavenging ability of Dillenia (ᾳ =0.079). It can be concluded that

simpor leaves has antioxidant capacity against DPPH radical due to its flavonoid

content. Furthermore, concentration and maceration time significantly affect

flavonoid content and didn’t affect DPPH radical scavenging ability of Dillenia plant.

Keywords: antioxidant capacity, DPPH, leaves simpor, (Dillenia sp.)

1. Introduction

Antioxidants are compounds that can fight free radicals. Free radicals are obtained from the

rest of the results of body metabolism, cigarette smoke, chemicals in food, air pollution,

sunlight, and so forth [1]. Antioxidants collect in balancing free radical molecules in the

metabolic process [8]. The mechanism of antioxidants is to make redox and absorb free radicals

quickly inside the membrane [3]. The need for sources of antioxidants from plants needs to be

optimized because they have no side effects and prices are relatively affordable. Naturally the

body is able to produce antioxidants, but the amount of free radicals is excessive so the

antioxidants are no longer able to overcome them. Another alternative to fight free radicals is

consuming antioxidants from outside the body to help endogenous antioxidant to cope with it

One source of antioxidants can come from plants. These sources of antioxidants can be

obtained from stems, leaves, fruits and seeds. Many plants have been widely known contain

antioxidant. One of the plants which has an antioxidant source is the simpor.

Simpor (Dillenia sp.) is a plant species from the Dilleniacea tribe. These plants are spread

in various Asian regions including Bhutan, India, Laos, Nepal, Philipines, Sri Lanka, Thailand,

Vietnam, Myanmar Malaysia and Indonesia [6]. In India there are only two types of

symposiums that pose as medicinal plants, namely Dillenia indica Linn. and Dillenia

24

penagyana Roxb [5]. In the Belitung area the community uses simpor leaves as a fish wrap,

rice cake wrappers and vegetable wrappers in traditional markets.

The content of secondary metabolites in D.indica leaves is flavonoids, triterpenoids,

steroids, tannins [14] while those in fruits contain 34% phenolics [1]. In D. indica seeds, there

are fixed oil, color matter, sterols, glycosides, saponins, proteins, free amino acids, sugars, free

acids and tannins [19]. Different types of plants contain different secondary metabolites. D.

penagyana contains 6% tanins. The stem contains naringenin-41-O-b-D-xylopyranoside,

flavonoid glycosides, 7-galactosyl glucoside naringenin and dihydroquercetin 5-galactoside

along with rhamnetin-3-glucoside [19], saponins [18]. Both plants have betalin, betulinic acid,

and β-sitosterol [6].

Research on secondary metabolites in D. indica and D. penagyana has been studied

extensively, ranging from isolation, separation and quantification. Nevertheless, no report

dealing with the Dillenia sp. leaves from Belitung has been informed. This study has been

carried out to analyze the ability of Dillenia sp. leaf extract as antioxidant in reducing DPPH

(1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil) free radicals. DPPH was applied in the study as free radicals

model to be scavenged by antioxidant from simpor.

2. Material and Method

2.1. Place and time The research was conducted at the Biochemical Laboratory Biology Faculty of Mathematics

and Natural Sciences, Universitas Negeri Jakarta on February-April 2019.

2.2. Plant Material Leafy Dillenia sp. were collected from Belitung. Dillenia sp. leaves are cut into small pieces,

weighed as much as 100 grams and dried in direct sunlight for 2 days to reduce water

content. Calculation of water content [16].

𝑾𝒂𝒕𝒆𝒓 𝒄𝒐𝒏𝒕𝒆𝒏𝒕 % = (𝒘𝟏 − 𝒘𝟐)/𝒘𝟏 × 𝟏𝟎𝟎

W1: initial weight; W2: final weight.

2.3. Extraction The leaves powdered was weighed and extracted with ethanol 96% with variations in

maceration time 24 and 48 hours and concentration series of (10%, 15%, and 20%). The

solvent was removed by using rotary evaporator at temperature 45℃ [12,21].

2.4. Qualitative Flavonoid Assay 30 mg of extraction was put into a test tube. Magnesium powder and a few drops of

concentrated HCl was added. Positive flavonoids were seen as yellow orange [7] color

formation.

2.5. Flavonoid

2.5.1. Configuring Standard Quercetin Solution

A total of 2.5 mg of quercetin was weighed and dissolved in 25 ml of ethanol as standard, 100

ppm. A series of standard concentrations of 20, 30, 40, 50 and 60 ppm is made. 0.5 mL of

standard liquid solution added 0.1 mL aluminum (III) chloride 10%, 0.1 mL sodium acetate 1

25

M and 2.8 mL distilled water. Taken one of the concentrations of a standard solution, the

absorbance is measured at a wavelength of 400-800 nm.

2.5.2. Setting a Standard Quercetin Curve

The standard curve is made by connecting the concentration of the standard quercetin solution

with the absorbed results obtained by measurement using a UV-Vis spectrophotometer at a

wavelength of 437.55 nm [7].

2.6. Determination of Total Flavonoid Levels in Extracts A total of 20 mg samples were weighed and dissolved in 10 mL pa ethanol and then

centrifuged to obtain a concentration of 2000 ppm. 0.5 mL of the test sample was added with

0.1 mL aluminum (III) chloride 10%, 0.1 mL sodium acetate 1 M and 2.8 mL distilled water.

After incubation for 30 minutes, the absorbance was measured using a UV-Vis

spectrophotometer at the maximum wavelength of quercetin 437.55 nm. The total

flavonoids from the ethanol extract of the leaves of Dillenia sp. were calculated using a linear

regression equation from the quercetin calibration curve that had been previously measured.

Total flavonoid content is expressed as the number of mg quasertin equivalent to each mg

of extract [7].

2.7. DPPH Radical Scavenging Assay Referring to the study of [10], the modified antioxidant capacity of the extract was measured

DPPH (1,1-Diphenyl-2picryl Hidrazil), free radical 1ml 0.1mM of DPPH solution in ethanol was

mixed with 1ml of leaf solution extract of variying concentration (10, 50, 100, 150 and 200)

ppm. Corresponding blank samples were prepared and ascorbic acid was used as a standard

reference. As control as used 1ml ethanol and 1ml DPPH solution. The DPPH measured

absorption at 517 nm after 30 minutes in dark using UV-Vis spectrophotometer. The%

inhibition was measured using the following formula.

𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒕𝒊𝒐𝒏 % = (𝑨𝒄 − 𝑨𝒔)/𝑨𝒄 × 𝟏𝟎𝟎

Where Ac is the absorbance of the control and As is the absorbance of the sample.

3. Results and Discussion

3.1. Water content Moisture content of sample used was the leaves of Dillenia sp. which had been dried in the

sun for two days. The results of the analysis of Dillenia sp. leaves obtained water content of

73.65%. Decrease in water content occurs due to the evaporation process. Water and

compounds found in leaves easily evaporate so that the levels decrease and affect the weight

of the leaves. The reduction in water content in the leaves aims to be easily stored and inhibit

the enzymatic process. Large water levels allow the simplicia to become a growth medium

for microorganisms [20,17].

3.2. Qualitative Flavonoid Assay

26

Table 1. Prelimary qualitative flavonoid analysis

of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.

Treatment Inferences

24 hours

10% +

15% ++

20% +++

48 hours

10% +++

15% ++

20% +

(+) present

Qualitative test results of flavonoids on leaf extract of Dillenia sp. positively contains

flavonoids. Indications that the extract is positive for flavonoids will change colour after

adding magnesium and HCl reagents to yellow. The addition of magnesium and HCl reagent

in the extract aims to reduce the nucleus of benzopirone in flavonoid compounds. Addition

of HCl causes a reduction between magnesium and flavonoid compounds [7].

3.3. Quantitative Flavonoid Assay Determination of flavonoid content aims to determine the flavonoid compounds contained

in the leaf of Dillenia sp. Levels of flavonoid compounds were expressed in mg QE / mg.

Determination of flavonoid levels uses the AlCl3 colony method with the principle of complex

formation. This principle forms a shift in the wavelength of the visible direction so that the

color of the solution turns yellow. AlCl3 will form complex and stable compounds [11] after

reacting with C4 ketone groups and hydroxyl groups on C3 or C5 from flavone and flavonol

compounds. The formation reaction of the Flavonoid-AlCl3 complex can be show in Figure 1

and 2.

Figure 1. The formation reaction of the

Flavonoid-AlCl3 complex.

Figure 2. Complex formation reaction

between AlCl3 and flavone [13]

27

Quesertin was used in designing flavonoid standard curves since it belongs to the

flavonoid group [9] which have ketone groups on C4 atoms and hydroxyl groups on C3 or C5

atoms. In addition, quesertin easily reacts with AlCl3 [4]. The flavonoids have chelating

properties so they can bind to metals and prevent increased oxidation and gives positive

effect [2].

The absorbance of the questionnaire was plotted against the concentration so that it gets

the calibration curve equation. From the graph obtained the regression equation y = 0,0007x

- 0,0007; with a correlation coefficient (R²) = 0.9396. The correlation coefficient (R2) value

close to 1 indicates regression analysis can be trusted ( Figure 3).

Figure 3. Standard quecertin curve

The results of the research in Table 2 shows that the highest concentration of flavonoid

compounds were at 24 hours maceration time with a concentration of 10% (2.904 mg QE /

mg. The lowest was at the maceration time of 48 hours with a concentration of 20% (2.875

mg QE / mg). Statistical analysis showed that data was homogenous and normally distributed

(ᾳ> 0.005). ANOVA results obtained maceration time and concentration significantly affect

flavonoid content (ᾳ= 0.003) [15].. Duncan Pos Hoc test showed that almost all group were not

different unless the 24 hours x 15% one.

Tabel 2. Flavonoid content of ethanolic leaf extract of Dillenia sp.

Time maceration

(hours)

Concentation

(%)

Flavonoid content

(mg QE/mg)

24

10 2.904

15 2.953

20 2.877

y = 0.0007x - 0.002R² = 0.9689

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0 20 40 60 80

Ab

sorb

ance

(n

m)

Concentration (ppm)

Chart Title

28

48

10 2.893

15 2.887

20 2.875

3.4. DPPH Radical Scavenging Assay Free radicals are relatively unstable because they have unpaired electrons in the outer orbit.

These electrons are very reactive if they are compounded with other molecules. Substances

that are able to prevent and protect from the side effects of free radicals are antioxidants.

Antioxidants can to subvert one molecule and stabilize it.

DPPH is a free radical compound that is often used to measure antioxidant activity from

various compounds or extracts of natural ingredients. This method is easy to use to measure

antioxidant activity in extracts. DPPH which was reacted with ethanolic leaf extract of Dillenia

sp., caused the intensity of purple to decrease and turn yellow (Figure 4,5.). This color change

occurs because of the transfer of electrons from certain compounds in the ethanolic extract of

Dillenia sp. on DPPH so that it becomes stable.

Figure 4. Results of a qualitative flavonoid

analysis of ethanolic leaf extract of Dillenia

sp. in maceration time 24 and 24 hours and

series consentration of 10%, 15%, and 20%

(left to right).

Figure 5. DPPH scavenging of ethanolic

leaf extract of Dillenia sp. the 24 hour in

series concentration (10, 50, 100, 150, and

200) ppm shows the change in color of

DPPH after being given Dillenia sp.

ethanolic leaf extract from purple to

yellow.

The method used to measure activity is expressed by the value of DPPH reduction.

DPPH reduction in ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maseration 24 was highest at extract

concentrations of 20% (97.097%) while the extracts in maseration 48 hours were highest at

extract concentrations of 10% (95.095%) (Table 3)

Table 3. DPPH scavenging of ethanolic leaf extract of Dillenia sp. in maceration time 24 and

48 hours (values represent means±SE).

Concentration

(ppm)

Concentration extract

24 hours 48 hours

10% 15% 20% 10% 15% 20%

10 88,69 ± 0,01 65,47 ± 0,01 91,89 ± 0,00 94,39 ± 0,00 85,09 ± 0,01 91,39 ± 0,00

50 91,79 ± 0,01 89,29 ± 0,01 91,89 ± 0,00 91,49 ± 0,01 78,58 ± 0,01 89,89 ± 0,00

29

100 89,79 ± 0,01 95,20 ± 0,01 96,70 ± 0,00 97,10 ± 0,01 88,69 ± 0,01 91,99 ± 0,01

150 95,70 ± 0,01 92,59 ± 0,01 96,30 ± 0,00 91,69 ± 0,01 88,59 ± 0,01 89,79 ± 0,01

200 90,59 ± 0,01 84,58 ± 0,01 97,10 ± 0,00 95,10 ± 0,01 94,19 ± 0,00 92,49 ± 0,01

Antioxidant properties can be found in extracts with different concentrations. Ethanolic

extracts are polar solvents and are very effective for extracting antioxidant compounds in the

leaves of Dillenia sp. This study provides evidence that the leaf of Dillenia sp. from Belitung

contains flavonoid compounds and has the potential as a source of antioxidants. Antioxidant

activity is influenced by time and concentration during extraction. Statistical analysis showed

that concentration and maceration didn’t affect DPPH scavenging ability Dillenia (ᾳ 0.079).

4. Conclusion

Based on the results of research and data analysis that has been carried out that ethanolic leaf

extract of Dillenia sp. have flavonoid levels of 0.0069 mg QE / mg with a 24 hour maceration

time at a concentration of 15%. Ethanol leaf extract Dillenia sp. also has antioxidant activity

with the DPPH method. The highest ability to scavenge radicals on DPPH was 97.097% at

maceration 24 hours at 20% extract concentration.

5. Acknowledgment

Gratitude is firstly address to Allah SWT. Thanks to head of Biology Department, head

of laboratory and laboratory asisstant of Biology Department Universitas Negeri

Jakarta for help and support. Special thanks also mentioned for NOBI team for

psychological support. And also thank you to Belitung tourism guide who dedicatively

helping on samples preparation.

References

[1] Blokhina et al. Antioxidant, oxidative stress and oxygen deprivation stress.

Annals of Botany. 2003; 91, 179- 194 [2] Abdille Md H, R P Singh, G K Jayaprakasha, and B S Jena. Antioxidant Activity of the

Extracts from Dillenia Indica Fruits. Food Chemistry. 2005; 90: 891-896.

[3] Banjarnahor Sofna DS, Artanti N. Antioxidant properties of flavonoids. Med J Indones.

2014;23:239-44.

[4] Blessy BM, Archana T, Suresh K J. Free Radicals and Antioxidants : A Review. Journal

of Pharmacy Research 2011; 4(12): 4340-4343.

[5] Chang CM, When HJ. Estimation of Total Flavonoid content in propolis by two

complentary spektometer UV-Vis Methods. J. Food Drugs. Annal England. 2002.

[6] Dickison WC. A note on the wood anatomy of Dillenia (Dilleniaceae), IAWA bulletin

1979; 2-3.

[7] Gandhi, Dipal, and Priti. Mehta. Dillenia Indica Linn. and Dillenia Pentagyna Roxb.:

Pharmacognostic, Phytochemical and Therapeutic Aspects. Journal of Applied

Pharmaceutical Science. 2013; 3(11): 134-142.

[8] Haeria, Hermawati, Pine Tenri A Ugi Dg.. Penentuan Kadar Flavonoi Total dan

Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sbidara (Ziziphus spina-christi L.).

Journal of Pharmaceutical and Medicinal Science.2016;1(2):57-61.

[9] Ifeanyi OE. A Review on Free Radicals and Antioxidants. Int. J. Curr. Res. Med. Sci.

2018; 4(2): 123-133.

[10] Justesen U, and Knuthsen P. Composition of flavonoids in fresh herbs and calculation

of flavonoid intake by use of herbs in traditional Danish dishes. Food Chemistry.

2001;73(2), 245–250.

30

[11] Kanta RS, Kar M, Roiutray R. DPPH Free Radical Scavenging Activity of Some Leafy

Vegetable used by Tribals of Odisha, India. Journal of Medicinal Plants Studies.

2013; 1(4):21-27.

[12] Mabry TJ, Markham KR, dan Thomas MB. The Systemic Identification of Flavonoid.

Berlin: Springer-Verlag.1970. 50-52.

[13] Manarim, GR dan De Agular. Removal of Pigments from Sugarcane Cells by Adsorbent

Chromatographic Column. Ann Chromatogr Sep Tech. 2016; 2(1): 1015.

[14] Mukherjee KS, Badruddoza S. Chemical constituents of Dillenia indica Linn. and Vitex

negundo Linn. J Indian Chem Soc 1981; 58:97–98.

[15] Predescu NC, Papuc C Nicorescu V, Gajaila I, Goran GV, Petcu CD, Stefan G. The

Influence of Solid-to-Solvent Ratio and Extraction Method on Total Phenolic

Content, Flavonoid Content and Antioxidant Properties of Some Ethanolic Plant

Extracts. REV.CHIM.(Bucharest). 2016 67(10). 1922-1927.

[16] Setyaji H, Suwita V, and Rahimsyah A. Sifat Kimia dan Fisika Kerupuk Opak

Penambahan Daging Ikan Gabus (Ophiochephalus striatus). Jurnal Penelitian

Universitas Jambi Seri Sains.2012; 14(1): 17-22.

[17] Supriningrum R. Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Pacar Kuku

(Lawsonia inermis L.) Berdasarkan Perbedaan Cara Pengeringan. Jurnal Ilmiah

Manutung. 2018; 4(2): 156-161.

[18] Tiwari KP, Srivastava SD, Srivastava SK. Alpha- Lrhamnopyranosyl- 3 beta- hydroxyl-

lup20(29)-en-28-oic acid from stem of Dillenia pentagyna. Phytochemistry. 1980;

19(5): 980-1.

[19] Uppalapati L, Rao JT. Antimicrobial efficiency of fixed oil and unsaponifiable matter

of Dillenia indica Linn. Indian Drugs Pharm Ind. 1980; 15(3): 35-38.

[20] Voight, R. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Diterjemahkan oleh Soendani N.S.

Yogyakart; UGM Press. 1995.

[21] Zahid K, Ahmed M and Khan F. Evaluation of Phytochemical Compounds in Stem and

Leaf Extract of Artocarpus integrifolia L. F. Pakistan Journal of Science. 2017;

69(3): 304-309.

[22] Malik, S. K., Z.U. Khan and M. Ajaib. Investigation of in-vitro antioxidant potential of

ethnobotanically important tree, Pterospermum acerifolium L. Pak J Bot. 2012; 44:

105 -109.

[23] Supriyatin, Rahayu S, Sukmawati, D 2015 Phytochemical composition, antimicrobial

and antioxidant activity of Manggong Bamboo (Gigantochloa Manggong) leaves

extract. Asian Jr. of Microbiol. Biotech. Env. Sc. 17 (2) : 2015 : 443-450

[24] Supriyatin Rahayu S Apriana R 2017 The Effet of Maximum Physical Activity and

Manggong Bamboo (Gigantochloa manggong) Leaf Extract on Catalase Activity in

Liver Organ of Rats (Rattus norvegicus) Metamorfosa iv(1) 8-12

31

Lampiran 2. Acceptance pada AIP Conference Proceeding

32

Lampiran 3. Sertifikat seminar AASEC

33

Lampiran 4. Draft HAKI

PERMOHONAN PENDAFTARAN CIPTAAN

I. Pencipta : 1. Nama : Sri Rahayu, M.Biomed, Isfi Zahara, M. Farid 2. Kewarganegaraan : Indonesia

3. Alamat : Cluster Hidayah no A.4 Jalan Hidayah 2 rt02/02 Pondok Gede Jati Bening, Bekasi

4. Telepon : - 5. No. HP & E-mail : 08161690885

II. Pemegang Hak Cipta : 1.Nama : LPPM Universitas Negeri Jakarta

2. Kewarganegaraan : Indonesia 3. Alamat : Gd. Ki Hajar Dewantara Lt 6-7 Kampus A,

Universitas Negeri Jakarta , Jalan Rawamangun Muka, Jakarta Timur. Kode

Pos 13220 4. Telepon : (021) 489-0856 5. No. HP & E-mail : lppm@unj.ac.id

III. Kuasa : 1. Nama : - 2. Kewarganegaraan : - 3. Alamat - 4. Telepon : - 5. No. HP & E-mail : -

IV. Jenis dari judul ciptaan yang dimohonkan : Kumpulan dokumentasi “Mencari

fakta dibalik Dillenia” V. Tanggal dan tempat di-

umumkan untuk pertama kali di wilayah Indonesia atau di luar wilayah Indo- nesia : November 2019

VI Uraian ciptaan : Kumpulan dokumentasi foto beserta insert caption penelitian simpor berisi informasi tahapan pelaksanaan penelitian dan hasil yang didapat dalam ukuran kertas a4 lux.

Jakarta, 19 November 2019

Tnda Tangan : Nama Lengkap : Dr. Ucu Cahyana, M.Si NIP :196608201994031002

34