ANTIBODI MONOKLONALBIOTEKNOLOGI KEDOKTERANAdieba Warda Hayya4401412085Ardi Rijal Fauzi4401412094

Peran BioteknologiMasalah infertilisasiPembuatan antibiotikPembuatan antibodiPembuatan vaksinPembuatan zat kimia lain (Insulin, somatostatin, interferon, faktor pembeku darah, hormon pertumbuhan, alfa lactalbumin, dsb.

PEMBUATAN ANTIBODI MONOKLONAL (ABM)

AntibodiProtein yang dihasilkan sel limfosit B atau sel plasmaSpesifik (antigen binding site dengan epitop dari antigen)Fungsi: menonaktifkan dan menandai antigen untuk pengancuran lebih lanjut.

Antibodi MonoklonalAbM: antibodi homogen identik yang diproduksi oleh satu klon sel-sel dimana sifat khas antibodi dipertahankanTeknologi AbM: teknologi yang menggunakan sel-sel sistem imunitas (seperti sel limfosit B) untuk menghasilkan protein antibodiTeknologi AbM : Teknik Hibridoma Fusi Sel

Sejarah AbM(1975) Kohler dan Milstein : teknik hibridoma (produksi antibodi terus menerus)Dasar teknik : mekanisme fusi sel dari membran dua sel yang menempel (heterokarion)Fusi nukleus menghasilkan hibridoma dengan informasi genetik kedua sel asal

Sejarah AbMKohler dan Milstein melakukan fusi sel lien tikus dengan sel mieloma tikus (sel limfosit B malignan; terus membelah/ imortal)Hibridoma menghasilkan antibodi spesifik sel lien

Contoh AbM

AbMKelainanRituximabNon-Hodgkins lymphomaTrastuzumabKanker payudaraAlemtuzumabLeukemia limfositik kronisBevacizumabKanker usus besarCetuximabKanker usus besarGemtuzumab OzogamicinLeukemia myelogenik akutIbritumomab TiuxetanNon Hodgkins lymphoma

RituximabAbM yang dipakai dalam pengobatan Limfoma non-HodgkinMengenali penanda protein CD20CD20 ditemukan di permukaan Sel B abnormal (dan Sel B normal) yang ditemukan pada jenis-jenis Limfoma non Hodgkin yang paling umum

TrastuzumabAbM yang dipakai dalam pengobatan kanker payudaraMengenali penanda HER-2HER-2/neu receptor hadir di atas permukaan sel kanker pada 25% wanita dengan kanker payudaraTrastuzumab juga meningkatkan efek obat kemoterapi

Tahap-tahap pembentukan Ab MonoklonalImunisasi mencit dg antigen yg akan dibuat ab monoklonalnyaLimpa mencit diambil dan dibuat suspensi termasuk sel B yg mengandung Ab thd Ag yg disuntikanFusi sel limpa dg sel mielomaSeleksi sel dg membiakkan sel dlm media selektif, dimana hanya sel hibrid saja yg bisa tumbuhSel hibrid berproliferasi membentuk klon yg disebut HibridomaSeleksi sel hibridoma unggul yg menghasilkan Ab monoklonal.

1975, by Georges Khler and Cesar Milstein- Be awarded a Nobel Prize in1984

Pembiakan Antibodi Secara In Vivo/ Invitro

In Vivo :-disuntikkan ke ronnga peritorial => perut membesar karena antibodi berkembang => jika ingin dikeluarkan, perut dipencet-disuntikkan AbM di punggung => jika ingin dikeluarkan diambil darah => serum dipisahkan dari darah

Pembentukan & Seleksi Sel HibridHybridoma: Sel limfosit B X sel myelomaDihasilkan menggunakan polyethylene glycol (PEG) untuk terjadi fusi selSel myeloma : mempunyai kemampuan pertumbuhan yang tidak ada hentinyaSel B : membantu memberikan informasi genetik untuk sintesis antibodi spesifikSeleksi dilakukan dengan medium HAT (hypoxanthine, aminoprotein, and thymidine)Sel Myeloma tidak dapat tumbuhSel B cells dapat survive, namun tidak dalam waktu lama

kegunaanPara ilmuwan berharap dapat menggunakan antibodi monoklonal dalam pengobatan kanker.Untuk mendeteksi kandungan hormon korionik gonadotropin (HCG) dalam urine wanita hamil.Untuk mengikat racun dan menonaktifkannya, contohnya racun tetanus dan kelebihan obat digoxin dapat dinonaktifkan oleh antibodi ini.Mencegah penolakan jaringan terhadap sel hasil transplantasi jaringan lain.

Antibodi monoklonal sebagai agen diagnostik dan terapiAb monoklonal telah banyak dimanfaatkan dalam bidang kesehatan, baik untuk diagnostik maupun utk pengobatan peny.kanker tertentu.Ab monoklonal yg berasal dr sel mencit/tikus menimbulkan rx alergi pd pasienProtein mencit dikenal sbg antigen asing oleh tubuh pasien respon imun alergi, inflamasi, penghancuran ab monoklonal itu sendiri

Beberapa penelitian tlh mengembangkan pembuatan ab monoklonal generasi baru seluruhnya berasal dari protein manusia mengurangi efek penolakan.

ANTIBODI MONOKLONAL GENERASI BARU

1. Chimaric monoclonal antibodiesDibuat melalui rekayasa genetika utk menciptakan suatu mencit/tikus yg dpt memproduksi sel hibrid mencit-manusiaBagian variabel dr mol ab, termasuk antigen binding site (fab) berasal dr mencit,sdgkn variabel konstan (Fc) berasal dr manusia.Contoh : Rituximab 66% molekulnya berasal dr manusia kanker Limfoma.

2. Humanized monoclonal antibodiesBagian protein yg berasal dr mencit hanya terbatas pada antigen binding site (fab) saja, sdk bag. Fc nya berasal dr manusia.Contoh : Alemtuzumab 90% berasal dr manusia Chronic Lymphocytic Leukimia (CLL)

3. Fully human monoclonal antibodiesSepenuhnya berasal dr manusia teknik rekayasa genetika untuk menciptakan mencit transgenik yg membawa gen yg berasal dr manusia shg mampu memproduksi antibodi yg diinginkan.Pendekatan lainnya merekayasa suatu binatang transgenik yg dpt mensekresikan antibodi manusia dalam air susu yg dikeluarkan oleh binatang tersebut.

Penggunaan antibodi monoklonal untuk terapi kanker dibagi dalam 2 tipe yaitu :Antibodi monoklonal murni tanpa dikombinasikan dg senyawa lain.- Trastuzumab menyerang protein HER2 mrpk protein yg terdapat dlm jumlah besar pd sel kanker payudara

2. Antibodi monoklonal yg dikombinasikan dg beberapa senyawa lain (Conjugated monoclonal antibodies) antara lain kemoterapi, toksin dan senyawa radioaktif.obat ini berperan sbg wahana yg akan menghantarkan substansi2 obat, racun, dan materi radioaktif menuju langsung ke sasaran yakni sel kanker.

Ab monoklonal yg dikombinasikan dg obat kemoterapi chemolabeledAb monoklonal yg dikombinasikan dg senyawa radioaktif Radioimmunotherapy (RIT)Ab monoklonal yg dikombinasikan dg racun immunotoksin

PEMBUATANPembentukan antibodi monoklonal dilakukan dengan menggunakan kelinci atau tikus. Langkah pertama adalah menginjeksikan antigen ke tubuh kelinci atau tikus percobaan, kemudian limpanya dipisahkan. Selanjutnya dilakukan peleburan sel- sel limpa dengan sel- sel mieloma (sel- sel kanker). Sekitar 1% dari sel limpa adalah sel plasma yang menghasilkan antibodi. Sedangkan 10% sel hibridoma akhir terdiri dari sel yang menghasilkan antibodi. Setiap sel hibridoma hanya menghasilkan 1 antibodi.Disini teknik seleksi dikembangkan untuk mengidentifikasi sel hibridoma, kemudian dilakukan pengembangan atau pengklonan berikutnya. Klon yang diperoleh dari hibridoma berupa antibodi monoklonal. Antibodi monoklonal dapat disimpan beku, kemudian dapat diinjeksikan ke dalam tubuh hewan atau dibiakkan dalam suatu kultur untuk menghasilkan antibodi dalam jumlah besar.

Khuswatun:Kenapa pake mencit? Apa kelebihannya?Hewan coba mudah dikembangbiakanPerbedaan cara pembuatan antibodi? (rituximab, trastuzumab, dll)Antigen yang dimasukkan (antigen dilemahkan, epitopnya saja.

Limfoma non Hodgkin : keganasan primer limfosit yang dapat berasal dari limfosit B, limfosit T dan kadang (amat jarang) berasal dari sel NK (natural killer) yang berada dalam sistem limfe*Limfoma non Hodgkin : keganasan primer limfosit yang dapat berasal dari limfosit B, limfosit T dan kadang (amat jarang) berasal dari sel NK (natural killer) yang berada dalam sistem limfe*Limfoma non Hodgkin : keganasan primer limfosit yang dapat berasal dari limfosit B, limfosit T dan kadang (amat jarang) berasal dari sel NK (natural killer) yang berada dalam sistem limfe****