analisis sperma

ANALISIS SPERMA

Wahyu SiswandariBagian Patologi Klinik

Jurusan Kedokteran FKIK UNSOED

05/03/2023 WS_Analisis Sperma_LC14 1

Learning objectives :

Setelah mengikuti praktikum ini, diharapkan :

• Mahasiswa mampu melakukan pemeriksaan analisis sperma

• Mahasiswa mampu menginterpretasi hasil pemeriksaan sperma


Referensi :

WHO Laboratory Manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. 4th ed. Cambridge University Press. 1999

Penuntun laboratorium WHO untuk pemeriksaan semen manusia dan interaksi semen-getah servik. Edisi 1. Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. 1988

Gandasoebrata R. Penuntun laboratorium klinik. Edisi 10. Dian Rakyat. Jakarta. 2001

Strasinger, di lorenzo. Semen. In urynalysis and body fluid. Philadhelpia. FA Davis co. 2008

WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. 5th ed. 2010


Pengumpulan bahan

Abstinensia min 2 hari ~ mak 7 hari Cara masturbasi Dikeluarkan di laboratorium atau sediaan dikirim ke

laboratorium dalam waktu maksimal 1 jam sejak dikeluarkan

Tempat botol/gelas kaca bermulut lebar atau botol plastik dgn syarat non toksik thd spermatozoa

identitas penderita, tanggal pengumpulan dan lamanya abstinensia, jam ejakulasi

Dikirim ke laboratorium pada suhu 20-370C


Alat dan bahan

Alat :– mikroskop– pipet tetes– gelas / tabung / pipet ukur kaca – objeck glass dan cover glass– pipet leukosit– bilik hitung Neubauer Improved (NI)

Bahan :– semen– larutan Turk– aquadest– Larutan fikasasi metanol 96% – Cat Giemsa


Jenis Pemeriksaan

MakroskopisMikroskopisAntibodi yang melapisi spermaBiakan semenAnalisis biokimiaCASA ( computer aided sperm analysis)


Pemeriksaan makroskopis

WarnaNormal : putih kelabu homogen, butiran seperti jeli Abnormal :

Jernih jumlah sperma sangat sedikit Merah kecoklatan sel darah merah Kuning penderita ikterus, minum vitamin

BauNormal : bau khas seperti bunga akasiaAbnormal : bau busuk infeksi


Pemeriksaan makroskopis

Likuefaksi (mencairnya semen)Diamati pada suhu kamar dicatat waktu pencairanNormal : mencair dalam 60 menit, rata-rata ± 15 menit

(jk semen tdk mencair dlm 60 mnt, utk pemeriksaan ditambahkan lar fisiologis atau ensim proteolitik)

Volume tabung/gelas ukur dari kacaNormal : > 1.5 ml


Pemeriksaan makroskopisKonsistensiCara : Sampel diambil dgn pipet / ujung jarum biarkan

menetes amati benang yang terbentukNormal : benang < 2 cm atau sisa sampel di ujung pipet/

jarum hanya sedikit

pHCara : Teteskan sampel pd kertas pH meter (stlh likuefaksi/

30 mnt baca hasil setelah 30 dtk)Normal : pH 7,2 – 7,8Abnormal : pH > 7,8 infeksi, waktu pemeriksaan pH < 7 azoospermia

kemungkinan disgenesis vas deferens, vesika seminalis, atau epididimis


Pemeriksaan mikroskopis

Pemeriksaan estimasi jumlah spermaCara : – Teteskan 1 tetes sampel ke objek glass tutup dgn cover

glass periksa di bawah mikroskop pembesaran 400 x px pada beberapa lapang pandang, pada suhu kamar

– Jumlah rata-rata sperma yang didapat dikalikan dengan 106

– Jumlah rata-rata sperma yang didapat digunakan sebagai dasar pengenceran saat penghitungan dengan bilik hitung Neubauer Improved


Tabel 1. Pengenceran berdasarkan estimasi jumlah sperma

Jumlah sperma / lapang pandang

(400x)

Pengenceran

< 15 1 : 5

15 – 40 1 : 10

40 – 200 1 : 20

> 200 1 : 50


Pemeriksaan mikroskopisMotilitas sperma

Cara : – 1 tetes sampel ke objek glass tutup dgn cover

glass px dgn pembesaran 400x pd suhu kamar– Px dlm 4 -6 lapang pandang pd 200 sperma– Kecepatan gerak sperma normal 5 x panjang

kepala sperma atau 0,5 x panjang ekor sperma atau ± 25 μm/detik.


– klasifikasikan gerakan sperma :• Motilitas progresif (PR) sperma bergerak

aktif, lurus atau dlm lingkaran besar, dgn kecepatan adekuat• Motilitas nonprogresif (NP) sperma

bergerak, dalam lingkaran kecil , gerakan di tempat, atau gerakan lain di luar kriteria PR• Tidak motil (IM) tidak ada pergerakan

sperma

– Px ulang dengan tetesan sperma kedua– Normal PR dan NP ≥ 40%

(PR > 32%)


Pemeriksaan mikroskopisPemeriksaan vitalitas sperma– Jika sperma motil < 40 % px vitalitas/sperma yang

hidup dgn pengecatan supravital– 1 tetes sampel segar + 1 tetes eosin 0,5% pd objek glass

ditutup dgn cover glass 1-2 mnt diamati dgn mikroskop (pembesaran 400x)

– Hitung persentase jumlah sperma yang mati (terwarnai oleh cat) dengan yang hidup (tidak terwarnai oleh cat)

– Pemeriksaan ini untuk mengecek pemeriksaan motilitas– Persentese sel mati < 58%



D1, D2: sperma matiL : sperma hidup


Morfologi spermaCara : – 1 tetes sampel ke salah satu ujung objek glass dibuat

apusan sampel dikeringkan di udara difiksasi dgn metanol 96% keringkan

– Cat dgn Giemsa ( 30 mnt ) bilas dgn air bersih keringkan px dgn mikroskop pembesaran 400 x

– Hitung pd 200 sperma kepala, leher & ekor hasil yang didapat dibuat persentase



Pengecatan (WHO, 2010): Papanicolaou, Shorr or Diff-Quik stain is recommended

Sperma Normal AbnormalKepala / leher /

ekor1

2

3…..dst


NeckNeck


Pemeriksaan mikroskopisPemeriksaan elemen bukan spermaCara :

penghitungan sel selain sperma : leukosit, sel epitel gepeng dll hitung dlm 100 sperma

Penghitungan :C = N x S

100C : jumlah sel dalam juta / mlN : jumlah sel yang dihitung dalam 100 spermaS : jumlah sperma dalam juta / ml



Pemeriksaan hitung jumlah spermaCara :

- pipet leukosit & bilik hitung NI- Pasang bilik hitung NI di miroskop dgn

pembesaran 100x / 400x cari kotak hitung spt terlihat dlm gambar

- Penghitungan di kotak tengah yg td 25 kotak sedang masing-2 didalamnya terbagi menjadi 16 kotak kecil


– Hisap sampel dgn pipet leukosit sampai angka 0,5 hisap lart Turk sampai angka 11 (pengenceran 1 : 20)(Pengenceran lain berdasarkan estimasi jumlah sperma)

– Jumlah kotak sedang yang harus dihitung :jml sperma dlm 1 kotak sedang < 10 hitung 25

kotakjml sperma dlm 1 kotak sedang 10-40 hitung 10

kotakjml sperma dlm 1 kotak sedang > 40 hitung 5 kotak

– Buat rata-rata jumlah sperma hitung jumlah sperma & faktor koreksinya dgn aturan seperti tertera dalam tabel

– Normal : ≥ 15 jt/ ml05/03/2023 WS_Analisis Sperma_LC14 30

Pengenceran

Jumlah kotak sedang yg dihitung

25 10 5

Faktor koreksi

1 : 10 10 4 2

1 : 20 5 2 1

1 : 50 2 0,8 0,4


Pengencer (WHO, 1999) : 50 gr NaHCO3, 10 ml 35% formalin, 0,25 gr tryptan blue dalam 1 l aquades

Contoh : • Rata-rata ditemukan 50 sperma yang dihitung dalam

5 kotak sedang dengan pengenceran 1 : 20, maka jumlah sperma adalah :

= 50/1 x 106 = 50 juta / ml• Rata-rata ditemukan 20 sperma yang dihitung dalam

10 kotak sedang dengan pengenceran 1 : 20, maka jumlah sperma adalah :

= 20/2 x 106 = 10 juta / ml


Cara (menurut Gandasoebrata):

– Hisap semen dengan pipet lekosit sampai angka 0,5

– Kemudian, hisap aquadest sampai angka 11 kocok

– Teteskan ke dalam bilik hitung NI– Hitung sperma dalam bilik hitung seluas 1 mm2

– Jumlah yang didapat dikalikan 200.000 jumlah sperma / ml


Interpretasi Hasil

• Interpretasi hasil analisis sperma saat ini didasarkan atas 3 parameter pokok, yaitu :– Jumlah spermatozoa / ml– % motilitas spermatozoa yang bergerak baik

(kriteria PR dan NP)– % morfologi spermatozoa normal


Interpretasi Hasil Jml sperma(juta/ml)

% motil % morfo*

Normozoospermia ≥ 15 ≥ 40 ≥ 4

Oligozoospermia < 15 ≥ 40 ≥ 4

Ekstrim Oligozoospermia < 5 ≥ 40 ≥ 4

Astenozoospermia ≥ 15 < 40 ≥ 4

Teratozoospermia ≥ 15 ≥ 40 < 4

Oligoastenozoospermia < 15 < 40 ≥ 4

Oligoastenoteratozoospermia

< 15 < 40 < 4

Oligoteratozoospermia < 15 ≥ 40 < 4


Interpretasi Hasil Jml sperma % motil % morfo

Astenoteratozoospermia

≥ 15 < 40 < 4

Polizoospermia ≥ 250 ≥ 40 ≥ 4

Azoospermia Bila tidak dijumpai spermatozoa dari pemeriksaan sediment sentrifugasi sperma yang lebih dari 1 kali

Nekroozoospermia Bila semua spermatozoa tidak ada yang hidup, dinyatakan dalam pengecatan vital

Kriptozoospermia Bila ditemukan spermatozoa yang tersembunyi yaitu bila ditemukan dalam sediment sentrifugasi sperma

Aspermia Bila tidak ada semen /sperma yang keluar, meskipun pasien telah merasa mengeluarkan ejakulat


WHO, 2010

Pemeriksaan Antibodi

• Ditujukanj thd Ab yg melapisi sperma infertilitas krn faktor imunologi

• Cara : immunobead test, mixed antiglobulin reaction test (MAR)


Pemeriksaan biakan semen

• jk didapatkan : tanda dan gejala infeksi kelenjar asesori, atau leukosit > 1 juta / ml

• prinsip : steril !


Pemeriksaan analisis biokimia• Plasma semen asam sitrat, asam

fosfatase, gama glutamil transpeptidase• Kemampuan sekresi prostat Zn, asam

sitrat• Kemampuan sekresi vesika seminal

fruktosa• Kapasitas sekresi epididimis L karnitin


CASA ( computer aided sperm analysis)

• lebih teliti• Dpt utk pemeriksaan rutin motilitas, jumlah,

morfologi


analisis sperma

Documents

Transcript of analisis sperma