i

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL RUMPUT LAUT

(Eucheuma cottonii), LAMUN (Enhalus acoroides), DAN TAURIN

TERHADAP HISTOPATOLOGI SERTA KADAR GLUTATION

JANTUNG MENCIT (Mus musculus L.) JANTAN

YANG DI INDUKSI GLIFOSAT

SKRIPSI

Oleh

SRI RAHMANING TIYAS

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG

2019

ii

ABSTRACT

ANTIOXIDANT ACTIVITIES OF SEAWEED (Eucheuma cottonii),

SEAGRASS (Enhalus acoroides), EXTRACTS AND TAURIN ON

HISTOPATHOLOGY AND GLUTHATION HEART MICE

(Mus musculus L.) DUE TO GLYPHOSATE

By

Sri Rahmaning Tiyas

The use of herbicides such as glyphosate, better known as Roundup, can continuously

increase the risk of various diseases, including cardiovascular disease, due to tissue

damage caused by oxidative stress. The purpose of this study was to determine the

antioxidant activity of seaweed extract (Eucheuma cottonii), seagrass (Enhalus

acoroides.) And taurine on histopathology and the gluthation of cardiac levels of

male mice (Mus musculus) induced by glyphosate. The test animals became 2

surgical groups namely on days 7 and 14. Each group consisted of 5 treatments

(positive control, negative control, seagrass, seaweed, taurine) with each of 5

repetitions. Giving glyphosate is carried out every 2 days intra peritoneal (0.5 cc) and

administration of extracts is carried out daily orally (0.2 cc). Doses of glyphosate,

seagrass, seaweed, and taurine were 13.225 mg / BB, 8,4 mg / BB, 15.96 mg / BB

and 15.6 mg / BB. The parameters used were the degree of histological damage, and

the level of gluthation in the heart organ. Data analysis was performed using One

Way ANOVA at 5% significance level (p <0.05%) and further testing with the

Smallest Significant Difference (LSD) at the 5% level. The results showed that

methanol extract of seaweed (Eucheuma cottonii), seagrass (Enhalus acoroides) and

taurine had the ability to repair damage to the histology of the heart of mice induced

by glyphosate.

Key words: Enhalus acoroides, Eucheuma cottonii, glutathione, glyphosate,

cardiac histopathology, Mus musculus

iii

ABSTRAK

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL RUMPUT LAUT

(Eucheuma cottonii), LAMUN (Enhalus acoroides), DAN TAURIN

TERHADAP HISTOPATOLOGI SERTA KADAR GLUTATION

JANTUNG MENCIT (Mus musculus L.) JANTAN

YANG DI INDUKSI GLIFOSAT

Oleh

Sri Rahmaning Tiyas

Penggunaan herbisida seperti glifosat atau lebih dikenal dengan Roundup yang terus

menerus dapat meningkatkan resiko timbulnya berbagai macam penyakit salah

satunya penyakit kardiovaskualar, akibat kerusakan jaringan yang disebabkan oleh

stress oksidatif. Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui aktivitas antioksidan dari

ekstrak rumput laut (Eucheuma cottonii), lamun (Enhalus acoroides.) dan taurin

terhadap histopatologi dan kadar gluthation jantung mencit (Mus musculus) jantan

yang diinduksi glifosat. Hewan uji dibagi menjadi 2 kelompok pembedahan yakni

pada hari ke 7 dan 14. Tiap kelompok terdiri dari 5 perlakuan (kontrol positif, kontrol

negatif, lamun, rumput laut, taurin) dengan masing masing 5 pengulangan. Pemberian

glifosat dilakukan 2 hari sekali secara Intra peritoneal (0,5 cc) dan pemberian ekstrak

dilakukan tiap hari secara oral (0,2 cc). Dosis glifosat, lamun, rumput laut, dan taurin

adalah 13,225 mg/BB, 8,4 mg/BB, 15,96 mg/BB dan 15,6 mg/BB. Parameter yang

digunakan adalah tingkat kerusakan histologi, dan kadar gluthation pada organ

jantung. Analisis data dilakukan menggunakan One Way ANOVA pada taraf nyata

5% (p<0,05%) dan uji lanjut dengan Beda Nyata Terkecil (BNT) pada taraf nyata

5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak methanol rumput laut (Eucheuma

cottonii), lamun (Enhalus acoroides) dan taurin memiliki kemapuan memperbaiki

kerusakan histologi jantung mencit yang diinduksi glifosat.

Kata kunci : Enhalus acoroides, Eucheuma cottonii, glutation, glifosat,

histopatologi jantung, Mus musculus L.

iv

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL RUMPUT LAUT

(Eucheuma cottonii), LAMUN (Enhalus acoroides), DAN TAURIN

TERHADAP HISTOPATOLOGI SERTA KADAR GLUTATION

JANTUNG MENCIT (Mus musculus L.) JANTAN

YANG DI INDUKSI GLIFOSAT

Oleh

SRI RAHMANING TIYAS

Skripsi

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Memperoleh Gelar

SARJANA SAINS

Pada

Jurusan Biologi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG

2019

vii

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Kebumen, pada tanggal 31 Mei 1998. Penulis merupakan anak

bungsu dari tiga bersaudara oleh pasangan Bapak Sucipto dan Ibu Rosidah.

Penulis menyelesaikan pendidikan Taman Kanak-Kanak di TK Muslimat NU

Kebumen pada tahun 2003. Pendidikan formal penulis dilanjutkan ke jenjang Sekolah

Dasar di SDN 1 Kebumen dan diselesaikan pada tahun 2009. Setelah itu, penulis

melanjutkan pendidikannya di SMPN2 Talangpadang yang berakhir pada tahun 2012.

Pada tahun 2015, penulis menyelesaikan pendidikan wajib belajar 12 tahun di SMAN

1 Talangpadang. Selama masa pendidikan SMA, penulis pernah menjadi anggota

Pasukan Pengibar Duplikat Bendera Pusaka (PASKIBRAKA) Kab. Tanggamus tahun

2013.

Pada tahun 2015, penulis memutuskan untuk melanjutkan pendidikan di Perguruan

Tinggi Negeri (PTN) dan berhasil lolos Seleksi Bersama Masuk Perguruan Tinggi

Negeri (SBMPTN) di Jurusan Biologi Universitas Lampung. Selama menjadi

mahasiswa di Jurusan Biologi FMIPA Unila, penulis pernah menjadi asisten

praktikum mata kuliah Struktur dan Perkembangan Hewan.serta Pencemaran

lingkungan

viii

Penulis juga aktif di Organisasi Himpunan Mahasiswa Biologi (HIMBIO) sebagai

bendahara Bidang Ekspedisi pada tahun 2016-2017 serta pernah menjadi sekertaris

Aksi Lingkungan Pekan Konservasi Sumber Daya Alam (PKSDA) ke XX HIMBIO

FMIPA Unila. Penulis melaksanakan Kuliah Kerja Nyata (KKN) di Desa Putihdoh,

Kecamatan Cukuh Balak, Kabupaten Tanggamus pada Januari hingga Maret 2018

dan melaksanakan Kerja Praktik di Laboratorium Agronomi Untuk Evaluasi

Bioteknologi, Biotechnology Research Center LIPI Cibinong pada September 2018.

ix

PERSEMBAHAN

Alhamdulillah hirabbil alamin..

Dengan penuh rasa syukur kepada Allah SWT atas segala nikmat, karunia,

serta ridho-Nya yang selalu Dia berikan, kupersembahkan karya kecilku untuk:

Ibu dan Bapak tercinta yang tiada hentinya menyebutkan namaku dalam tiap

do’nya, yang selalu memberikan pelukan hangat penuh kasih serta beribu cinta

yang tiada hentinya;

Kedua kakak ku, yang selalu memberikan semangat, canda dan tawa serta

bahu untuk bersandar ketika semua terasa berat;

Untuk orang-orang super yang selalu mendukung, memberi banyak pengajaran

dan motivasi dalam tiap perjalananku;

Serta,

Almamaterku tercinta, Universitas Lampung.

x

MOTTO

“Sesungguhnya dibalik kesulitan pasti ada kemudahan”

(QS. Al Insyirah :5-6)

“Just because it took longer than others, doesn’t mean you failed. Speed is relative.

Remember that”.

“Of course it’s hard. It’s supposed to be hard. If it was easy, everyone would do it.

Hard is what makes it great”

xi

SANWACANA

Puji syukur kepada Allah Yang Maha Esa, karena atas berkat dan karunia-Nya

penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

Skripsi Dengan Judul “Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Rumput Laut

(Eucheuma cottonii), Lamun (Enhalus acoroides), Dan Taurin Terhadap

Histopatologi Serta Kadar Glutation Jantung Mencit (Mus Musculus) Jantan

Yang Di Induksi Glifosat” merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains di Universitas Lampung. Penelitian ini merupakan sebagian dari

penelitian Puslitbang Pesisir dan Kelautan LPPM Universitas Lampung yang didanai

oleh Hibah Institusi tahun 2018.

Penulis telah menerima banyak bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak dalam

penyusunan skripsi ini. Oleh sebab itu, sebagai wujud rasa hormat penulis

menyampaikan ucapan terimaksih kepada:

1. Kedua orang tua, Bapak Sucipto dan Ibu Rosidah yang selalu memberikan

kasih sayang serta memberikan dukungan

xii

2. Ibu Endang Linirin Widiastuti, Ph.D. selaku dosen pembimbing utama yang

telah memberikan ilmu, bantuan, saran, serta motivasi selama perkuliahan,

pelaksanaan penelitian hingga penyusunan skripsi;

3. Bapak Dr. G. Nugroho Susanto, M. Sc. selaku dosen pembimbing II atas

saran, bimbingan dan motivasi yang telah diberikan kepada penulis selama

pelaksanaan penelitian hingga penyusunan skripsi;

4. Ibu Prof. Ida Farida Rifai selaku dosen pembahas atas ilmu serta saran yang

telah diberikan kepada penulis dalam penyusunan skripsi;

5. Bapak Dr. Sumardi, M. Si. selaku pembimbing akademik yang selalu

memberikan pengarahan, bimbingan dan saran selama perkuliahan;

6. Prof. Hasriadi Mat Akin, M.P. selaku Rektor Universitas Lampung;

7. Bapak Drs. Suratman, M.Sc. selaku Dekan FMIPA Universitas Lampung;

8. Bapak Drs. Kanedi, M.Si., selaku Ketua Jurusan Biologi FMIPA Universitas

Lampung;

9. Ibu Dr. Emantis Rosa, M.Biomed. selaku Kepala Laboratorium Biomolekuler

dan Mba Nunung Cahyawati, A.Md. selaku laboran yang telah banyak

membantu penulis selama penulisan skripsi ini;

10. Seluruh dosen dan staf Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung yang

telah memberikan ilmu dan bantuan kepada penulis;

11. Kedua kakakku Mas Agung dan Mba Lia yang selalu membagikan canda

tawa bahkan motivasi agar penulis menjadi pribadi yang lebih baik;

12. Mba Iffa Afiqa Khairani, S.Si. yang telah membimbing penulis selama

penelitian dan telah berbagi ilmu, dorongan serta motivasi kepada penulis;

xiii

13. Teman-teman seperjuangan penelitian serta anggota laboratorium

biomolekuler Kak Yogi, Mba Rizka, Mba Wulan, Yonathan, Lily, Mba Win,

Arra, dan Pak Yoharnes yang telah berbagi ilmu hingga canda tawa dengan

penulis selama masa penelitian dan penyusunan skripsi;

14. Sahabat-sahabatku Winda, Anna, Tia, Inas, Arra, Sundari, Yunita, Nada, Dewi

yang selalu memberikan dukungan, semangat, canda tawa, rasa kekeluargaan

yang terjalin selama ini serta pengalaman dan pengajaran yang diperoleh

bersama;

15. Teman-teman masa kecilku, teman-teman COST SMANTAP atas

kebersamaan selama ini;

16. Teman-teman KKN Desa Putihdoh, Kecamatan Cukuh Balak, Kabupaten

Tanggamus;

17. Teman-teman Biologi angkatan 2015, seluruh kakak dan adik tingkat Jurusan

Biologi FMIPA Unila atas kebersamaannya yang telah diberikan;

18. Semua pihak dan instansi yang telah membantu penulis dalam pelaksanaan

penelitian dan penyusunan skripsi;

19. Serta almamater Universitas Lampung tercinta.

Akhir kata, penulis menyadari masih banyak kesalahan dan kekurangan dalam

penyusunan dan penulisan. Skripsi ini dapat diselesaikan tepat waktu atas kontribusi

serta motivasi dari pihak-pihak terkait.

xiv

Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan dapat menambah

pengetahuan kita semua. Amin.

Bandar Lampung, 22 Maret 2019

Sri Rahmaning Tiyas

xv

DAFTAR ISI

Halaman

SAMPUL DEPAN i

ABSTRACT ii

ABSTRAK iii

HALAMAN JUDUL DALAM iv

HALAMAN PERSETUJUAN v

HALAMAN PENGESAHAN vi

RIWAYAT HIDUP vii

HALAMAN PERSEMBAHAN ix

MOTTO x

SANWACANA xi

DAFTAR ISI xv

DAFTAR GAMBAR xvii

DAFTAR TABEL xix

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang 1

B. Tujuan Penelitian 3

C. Rumusan Masalah 3

xvi

D. Manfaat Penelitian 4

E. Kerangka Pemikiran 4

F. Hipotesis 5

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Rumput Laut (Eucheuma cottoni) 6

B. Lamun Laut (Enhalus acoroides) 8

C. Taurin 9

D. Glifosat 11

E. Mencit (Mus musculus L.) 12

F. Jantung 14

G. Stres Oksidatif dan Reactive

Oxygen Species (ROS) 14

H. Stres Oksidatif Pada Jantung dan

Kardiovaskular 17

I. Glutation 21

III. METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat 25

B. Alat dan Bahan 25

C. Pelaksanaan Penelitian 26

D. Parameter 35

E. Analisis Data 35

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Uji Fitokimia Rumput Laut (Eucheuma cottonii)

dan Lamun (Enhalus acoroides) 36

B. Berat Badan dan Indeks Berat Organ 40

C. Histologi Jantung 44

D. Kadar Glutation Jantung Mencit 58

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan 64

B. Saran 64

DAFTAR PUSTAKA 65

LAMPIRAN 75

xvi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Eucheuma cottonii 6

Gambar 2. Enhalus acoroides 8

Gambar 3. Mekanisme Kerja Taurin Terhadap Ang-II 10

Gambar 4. Mekanisme Reduksi Taurin Terhadap Stress 10

Gambar 5. Sruktur Kimia Glifosat 11

Gambar 6. Mencit (Mus musculus L.) 13

Gambar 7. Jalur Pembentukan ROS pada Jalur Metabolisme 15

Gambar 8, Efek ROS pada Fungsi Seluler 16

Gambar 9. Progresi Arterosclerosis pada Kardiovascular 18

Gambar 10. Histologi Jantung Kontrol Negative 21

Gambar 11. Histologi Jantung Dengan Paparan Cd. 21

Gambar 12. Sintesis Glutation dan Pemanfaatannya Pada Hewan 23

Gambar 13. Rerata Kerusakan Histologi Jantung Mencit Perlakuan 7

Hari (Mean ± SEM) 45

xvii

xvi

Gambar 14. Rerata Kerusakan Histologi Jantung Mencit Perlakuan 14

Hari (Mean ± SEM) 45

Gambar 15. Gambaran Histologi Jantung Kelompok Normal (K1)

(1) Perlakuan Hari ke-7 dan (2) Perlakuan hari ke-14

Dengan Perbesaran 400X. Ket: (A) infraksi myocardial (B) inti

sel (C) inti sel nekrosis (D) inti sel inflamasi 48

Gambar 16. Gambaran Histologi Jantung Kelompok Glifosat (K2)

(1) Perlakuan Hari ke-7 dan (2) Perlakuan hari ke-14 Dengan

Perbesaran 400X. Ket: (A) infraksi myocardial (B) hipertrofi

otot jantung (C) infltrasi (D) intisel nekrosis 49

Gambar 17. Gambaran Histologi Jantung Kelompok Perlakuaan

Induksi Glifosat + Ekstrak Methanol Lamun (E. acoroides)

(K3). (1) Perlakuan Hari ke- 7 dan (2) Perlakuan Hari ke-14

Dengan Penampang Melintang Pada Perbesaran 400X. Ket: (A)

inti sel piknosit (B) inti sel nekrosis 51

Gambar 18. Gambaran Histologi Jantung Kelompok Dengan Induksi Glifosat

+Ekstrak Methanol Rumput Laut (E. cottonii) (K4), (1)

Perlakuan 7 Hari dan (2) Perlakuan 14 Hari Dengan Penampang

Melintang Pada Perbesaran 400X. Ket: (A) inti sel nekrosis

(B) infraksi myocardial. 52

Gambar 19. Gambaran Histologi Kelompok Perlakuan Induksi

Glifosat + Taurin (K5). (1) Perlakuan Hari ke-7 dan

(2)Perlakuan Hari ke- 14 Dengan Penampang melintang

pada perbesaran 400X. Ket: (A) inti sel nekrosis (B)

infraksi myocardial (C) inti sel inflamasi (D)

hipertrofi otot jantung 53

Gambar 20. Kadar total glutation jantung mencit perlakuan

14 hari (µM) 58

xviii

xvi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Kardiokines Sebagai Biomarker CVD 19

Tabel 2. Kandungan MDA, SOD, CAT

dan GSH-Px Jantung Dengan Paparan Cd 20

Tabel 3. Prosedur uji Fitokimia 28

Tabel 4. Hasil Uji Fitokimia Eucheuma cottonii

dan Enhalus acoroides 36

Tabel 5. Rata-Rata Berat Badan Mencit (gr) 41

Tabel 6. Rata-Rata Indeks Berat Organ Jantung Mencit (%) 41

xix

1

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Indonesia merupakan negara agraris dengan mata pencaharian sebagian

besar penduduknya adalah bertani dan berkebun. Luas lahan pertanian dan

perkebunan di Indonesia sebesar 8,19 juta Ha dan 7,21 juta Ha dengan

jumlah petani 46.466.593 (BPS, 2013; 2014; 2016). Hal tersebut

menyebabkan tingginya konsumsi pupuk, herbisida, pestisida dan

fungisida, baik organik maupun kimia. Kurangnya pengetahuan mengenai

bahaya penggunaan herbisida kimia meyebabkan tingginya kemungkinan

paparan zat kimia. Salah satu herbisida yang banyak digunakan oleh

masyarakat Indonesia ialah glifosat atau lebih dikenal dengan Roundup.

Pada tahun 2010-2014 terdapat 119 kasus tentang penyalahgunaan produk

herbisida yang mengandung glifosat (Ik POM, 2014).

Glifosat atau N-(phosphonomethyl)-glycine merupakan herbisida yang

dapat menghambat pertumbuhan gulma secara tidak selektif. Sebagian

besar produk glifosat mengandung surfaktan, yang mana kombinasi

keduanya dapat meningkatkan efek toksisitas (Cox dan Caroline, 1995).

2

Tidak seperti herbisida lainnya, glifosat tidak memiliki efek anti kolinesterase dan

pada sistem syaraf pusat (Millio dan Beswick, 2011). Glifosat dapat masuk

kedalam tubuh melalui mulut, kulit, mata atau terhirup saat menggunakannya.

Paparan zat kimia seperti glifosat secara terus menerus dapat menyebabkan

timbulnya suatu stress oksidatif.

Stress oksidatif dapat timbul karena adanya respon terhadap radikal bebas yakni

suatu atom atau molekul yang memiliki elektron tidak berpasangan (Clarkson dan

Thomson, 2002). Radikal bebas yang ada dalam sel akan memulai suatu reaksi

berantai dengan mengambil electron pada molekul lain untuk menjaga

kestabilannya. Kerusakan oksidatif yang terjadi, menimbulkan kerusakan pada

sel, jaringan dan organ, sehingga mempercepat proses penuaan dan menimbulkan

berbagai penyakit degeneratif, termasuk kanker (Droge, 2002).

Stress oksidatif juga berpotensi menyebabkan berbagai penyakit kardio vascular.

Menurut data World Health Organization (WHO), penyakit akibat disfungsi

kardiovaskular (CVD) menjadi salah satu penyebab kematian tertinggi didunia

(Mendis, dkk., 2011). Beberapa penyakit CDV termasuk penyakit arteri koroner

(CAD), stroke, hipertensi, gagal jantung, rheumatic aetiologies, kelainan jantung

bawaaan dan penyakit vascular peripheral (Karla, dkk., 2017). Persentasi

kematian global 2013 pada penyakit ini sebesar 31% atau kurang lebih 17,5 juta

kematian pertahun, dan hal tersebut berdampak pada perekonomian dunia.

3

Untuk itu, ekspolorasi mengenai potensi sumber antioksidan diperlukan.

Indonesia yang memiliki wilayah lautan yang sukup luas, tentu meyimpan sumber

keanekaragaman tumbuhan laut dan makro alga yang tinggi. Beberapa jenis

tumbuhan beberapa jenis makro alga memiliki potensi mengandung senyawa

antioksidan. Tumbuhan laut dan makro alga seperti rumput laut (Eucheuma

cottonii) dan lamun ( Enhalus acoroides. ) diketahui memiliki kandungan

senyawa antioksidan seperti fenol dan carotenoid. Sedangkan taurin memiliki efek

perlindungan dan pencegahan terhadap keruskan jaringan yang disebabkan oleh

oksidasi.

B. Tujuan Penelitian

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak

rumput laut (Eucheuma cottonii), lamun (Enhalus acoroides) dan taurin terhadap

histopatologi dan kadar gluthation jantung mencit (Mus musculus) jantan yang

diinduksi glifosat.

C. Rumusan Masalah

Rumusan masalah pada penelitian ini yaitu apakah pemberian ekstrak methanol

rumput laut (Eucheuma cottonii), lamun (Enhalus acoroides) dan taurin memiliki

efek antioksidan terhadap histopatologi jantung dan kadar gluthation mencit (Mus

musculus) jantan yang diinduksi glifosat.

4

D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memeberikan informasi mengenai potensi ekstrak

methanol rumput laut (Eucheuma cottonii), lamun (Enhalus acoroides), dan taurin

sebagai antioksidan alami dalam mencegah kerusakan histologi dan menaikkan

kadar gluthation pada jantung mencit (Mus musculus) akibat induksi senyawa

radikal bebas seperti glifosat.

E. Kerangka Pemikiran

Herbisida seperti glifosat banyak digunakan di Indonesia. Namun, penggunaannya

yang salah dan berlebihan dapat berdampak buruk bagi kesehatan serta

mencemari lingkungan. Glifosat yang terkandung dalam Roundup dapat masuk ke

dalam tubuh dengan cara tertelan, terhirup kontak dengan mata dan kulit. Paparan

secara terus menerus dapat memicu timbulnya stress oksidatif dan meningkatnya

kadar ROS (Reactive Oxygen Species). Hal tersebut dapat mengakibatkan

kerusakan pada lipid, protein, dan asam nukleat dalam sel. Untuk mencegah

dampak negatif tersebut, tubuh perlu suatu senyawa antioksidan. Rumput laut

(Eucheuma cottonii) dan lamun (Enhalus acoroides.), memiliki potensi sebagai

sumber antioksidan alami karena mengandung senyawa seperti fenol dan

carotenoid. Sedangkan taurin diketahui sebagai salah satu senyawa antioksidan

karena dapat mengikat radikal bebas sehingga menurunkan tingkat kerusakan

dalam sel.

5

F. Hipotesis

Hipotesis pada penelitian ini yaitu pemberian ekstrak methanol rumput laut

(Eucheuma cottonii), lamun (Enhalus acoroides) dan taurin memiliki efek

antioksidan seperti mencegah kerusakan histologi serta menaikkan kadar

gluthation jantung mencit (Mus musculus) jantan akibat induksi senyawa radikal

bebas seperti glifosat.

6

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Rumput Laut (Eucheuma cottonii)

Eucheuma cottonii atau yang dikenal dengan rumput laut merah merupakan

salah satu jenis Rhodophyceae. Menurut Dotty (1985) klasifikasi rumput laut

sebagai berikut:

Divisi ; Rhodophyta

Kelas : Rhodophyceae

Ordo : Gigartinales

Famili : Solieraceae

Genus : Eucheuma

Spesies : Eucheuma cottonii

Gambar 1. Eucheuma cottonii

7

Eucheuma cottoni memiliki cirri-ciri morfologi thallus silindris, percabangan

berujung runcing, berwarna cokelat kemerahan, percabangan yang terbentuk

berseling (alternates) dan tidak teratur serta tempat hidup pada daerah fotik

laut, yakni pada kedalaman yang memungkinkan sinar matahari dapat masuk.

Pada habitat aslinya Eucheuma cottoni mampu hidup secara berkoloni

(Anggadiredjo, 2006).

Ekstrak polifenol E.cottonii memiliki potensi sebagai suplemen makan untuk

mencegah perkembangan kanker payudara melalui modulasi hormonal dan

oksidatif serta apoptosis. Ekstrak ethanol E.cottonii juga memiliki anti

proliferasi (Farideh, dkk., 2011). Penelitian lain menunjukkan adanya efek

yang signifikan pada asma yang diinduksi oleh loratadin, seperti

berkurangnya rasa gatal pada nasal hidung, histolog paru serta gen.

Ekstrak E.cottonii dapat digunakan sebagai anti inflamasi pada asma dan

mengubah sirkulasi sel darah putih menjadi lebih baik. Kegunaan lainnya

yakni ekstrak E.cottonii dapat meningkatkan sintesa mucin, menurunkan

regulasi faktor alfa yang berperan dalam nekrosi tumor, interleukin, namun

meningkatkan ekspresi interfenon gamma (Nurul’ain, dkk., 2015).

8

B. Lamun Laut (Enhalus acoroides)

Lamun laut (seagrass) merupakan salah satu jenis Angiospermae dan hidup

pada laut dangkal. Akar, batang dan daunnya telah beradaptasi untuk hidup

dalam laut. Pada perairan laut dangkal, vegetasi lamun dapat ditemukan

karena cahaya matahari tersedia dengan baik untuk pertumbuhan dan

perkembangannya.

Klasifikasi lamun laut menurut Phillips dan Menez (1988) adalah:

Divisi : Anthophyta

Kelas : Angiospermae

Oerdo : Holobidae

Famili : Hydrocharitacea

Genus : Enhalus

Species : Enhalus acoroides.

Gambar 2. Enhalus acoroides (IK Untan, 2017)

9

Faktor lingkungan seperti suhu, intensitas matahari, salinitas, substrat,

kedalaman, arus, serta nutrient mempengaruhi pertumbuhan dan

perkembangan lamun (Hemminga dan Duarte, 2000). Lamun dapat tumbuh

pada perairan laut tropis dengan suhu 26-300C. Lamun memiliki bunga, dan

menghasilkan buah.

Ekstraksi Enhalus acoroides. menggunakan ethanol menunjukkan adanya

kandungan fenol serta proanthocyanidhin pada daun serta akar . Penelitian

lain menunjukkan bahwa Enhalus acoroides mengandung komponen senyawa

antioksidan yang tinggi, seperi flavonoid dan sterol (Rengasamy, dkk., 2010;

Hasina, dkk., 2003; Sureda, dkk., 2008; Gokce, dkk., 2008). Pada spesies

lamun lain, terdapat kandungan tanin, saponin, dan triterpenoid serta steroid

(Aulia, dkk., 2013).

C. Taurin

Taurin, atau 2-aminoethanesulfonic acid adalah asam organic yang banyak

ditemukan dalam makhluk hidup. Taurin secara alami disintesi dalam tubuh,

seperti pada empedu, pancreas dan jumah kecil dalam usus (Murray, 2009).

Pemberian taurin dapat memeperbaiki kerusakan hepatosit hati mencit dengan

induksi glifosat (Elfa, dkk., 2016). Taurin diketahui dapa memperbaiki

histopatologi jantung, menghambat apoptosis akibat stress oksidatif pada

hati, menurunkan stress oksidatif akibat akumulasi besi, menurunkan lipid

peroksidase pada hati (Zeyu, dkk., 2014).

10

Beberapa studi menyatakan bahwa taurin dapat membantu sistem

kardiovaskular akibat stress oksidatif. Termasuk memperbaiki profil lipid,

memodulasi Ca+ karena tinggi Ca

+ dalam ruang intraseluler. Selain itu, taurin

juga dapat bekerja secara antagonis terhadap angiotense (Ang-II) sebagai efek

antioksidan. Taurin dapat menurunkan induksi Ang-II pada kardiak hipertrofi

dengan menghabat aktivasi protein kinase C dan asosiasi mitogen kinase C

(Azuma, dkk., 2000). Berikut adalah mekanisme antagonis taurin terhadap

Ang-II dan modulasi Ca+ menurut Yan-Jun, dkk (2008) (Gambar 3 Gambar

4).

Gambar 3. Mekanisme Kerja Taurin Terhadap Ang-II (Yan-Jun, dkk., 2008)

Gambar 4. Mekanisme Reduksi Taurin Terhadap Stress Oksidatif (Yan-Jun,

dkk., 2008)

11

D. Glifosat

Glifosat atau N-(phosphonomethyl)-glycine merupakan kandungan zat kimia

yang terdapat dalam herbisida. Merek dagang yang telah diketahui

mengandung glifosat adalah Roundup. Mekanisme kerja glifosat yaitu cairan

akan terserap oleh daun dan diedarkan keseluruh bagian tanaman. Kemudian

glifosat yang terakumulasi dalam tanaman dan akan mengganggu

pembentukan enzim serta protein pada jalur metabolisme asam sikimat

(Shicimic Acid Pathway). Glifosat termasuk kedalam golongan asam fosfonik

atau organofosfonat (Ik POM, 2016) (Gambar 6).

Gambar 5. Stuktur Kimia Glifosat (Ik POM, 2016)

Tingkat toksikologi glifosat LD50 intraperitonial mencit dan tikus sebesar

134-170 mg/kg bb, LC50 inhalasi tikus sebesar 3180 mg/m3 LD50 oral tikus

sebesar >5000 mg/kg, LD 50 intraperitonial tikus sebesar 235 mg/kg LD50

oral tikus sebesar 5957 mg/kg dan LD50 kulit kelinci sebesar>5000 mg/kg.

Pada kasus keracunan glifosat pada manusia, masalah kesehatan timbul pada

sistem pencernaan, pernafasan dan syaraf. Efek korosif pada gastrointestinal,

mulut, tenggorokan, serta nyeri epigastrium akan menimbulkan gejala nyeri

pada pada dinding perut bagian atas serta disfagia atau kesulitan menelan.

12

Penyakit lain yang ditimbulkan yakni seperti diare, mual dan muntah

(Handerson dkk., 2010). Selain itu pada keracunan berat, glifosat dapat

mengakibatkan gangguan ginjal dan hati, gangguan pernapasan, gangguan

kesadaran, edema paru, shock, aritmia, gagal ginjal, asidosis metabolic dan

hiperklamia (Bradbery, 2015). Roundup diketahui dapat menekan fungsi

sitokrom 450 dan 2 macam enzim yakni gluthation-S-transferase serta G-6-P

dehydrogenase yang berperan dalam produksi toksik dalam tubuh (Acquavella

dkk.,2004)

E. Mencit (Mus musculus L.)

Mencit banyak digunakan sebagai hewan uji pada penelitian biologis dan

kedokteran. Hewan ini banyak digunakan sebagai model hidup pada

penelitian yang nantinya akan diterapkan pada manusia. Mencit mudah

didapat, mudah dikembangbiakkan dan harganya reatif murah, ukuran badan

yang realtif kecil (Yuwono dkk., 1994; Somala, 2006). Mencit digunakan

pada penelitian dan diagnosis dalam bidang farmasi dan tingkah laku.

Klasifikasi mencit menurut Suckow dkk (2006) :

Kingdom : Animalia

Phylum : Chordata

Class : Mamalia

Ordo : Rodentia

13

Family : Muridae

Genus : Mus

Species : Mus musculus

Gambar 6. Mencit (Mus musculus)

Mencit dapat hidup dalam 1-3 tahun. Berat badan mencit jantan antara 20-30

gdan betina antara 18-35 g dengan berat kelahiran 1-2 g. Laju denyut jantung

310-840 denyut/ per menit. Laju respirasi mencit 80-230 per menit. Mencit

memiliki suhu tubuh 36,5 -380 C dan volume darah 7-8%, 1.5- 2,5 ml.

Mencit merupakan hewan communal. Mencit adalah hewan nocturnal namun

dapat bearadap tasi dengan lingkungannya.

Seekor mencit jantan memiliki volume sirkulasi darah 6-8% dari berat

tubuhnya, dan ketika mencit menua dan bertamabah berat badan (Obese) akan

mengalami penurunan. Pengumpulan darah mencit melalui saluran vena pada

14

ekornya, vena saphenous, sinus retro-orbital, pembuluh branchial, vena cava,

aorta abdominal atau teknik cardiac puncture (JHU, 2016).

F. Jantung

Jantung merupakan salah satu organ vital dalam tubuh. Jantung dapat dirusak

oleh beberapa zat kimia dan zat tersebut bekerja secara langsung pada otot

jantung atau secara tidak langsung melalui susunan syaraf dan pembuluh

darah yang berada pada jantung (Lu, 2010). Morfologi jantung terdiri atas

atrium kiri dan kanan serta ventrikel kiri dan kanan. Atrium kiri berfungsi

menerima darah yang berasal dari paru paru melalui vena pulmonalis.

Kemudian ventrikel berfungsi memompakan dara yang diterima dari atrium

ke sirkulasi sistemik dan pulmonary. Ventrikel kanan memiliki kontraksi yang

lebih rendah dibandingkan dengan ventrikel kiri karena digunakan untuk

mengalirkan darah ke arteri pulmonalis. Sedangkan ventrikel kiri digunakan

untuk memompa darah sitemik dan mempertahankan aliran darah ke jaringan

jaringan perifer (Eroschenko, 2003).

G. Stres Oksidatif dan Reactive Oxygen Species (ROS)

Stres oksidatif dapat terjadi ketika terganggunya keseimbangan antara oksidan

dan antioksidan dalam tubuh (Wikana, 2011; Kamiliah, 2018).

Ketidakseimbangan tersebut terjadi karena produksi oksigen reaktif dalam

tubuh meningkat sehingga timbul radikal bebas. Radikal bebas tersebut dapat

berupa paparan zat kimia, polusi bahan bakar fosil, induksi senyawa kimia

15

bakteri atau virus dan lain sebagainya. Terdapat dua bentuk radikal bebas

yang ada dalam tubuh yaitu ROS (Reactive Oxygen Species ) dan RNS

(Reactive Nitrogen Species). ROS (Reactive Oxygen Species ) secara alami

akan diproduksi oleh tubuh apabila terjadi reaksi oksidasi secara belebih

dalam sel (Gambar 7).

Gambar 7. Jalur Pembentukan ROS pada Jalur Melabolisme (Dikalov, 2011)

Mitokondria merupakan tempat utama yang dapat menghasilkan ROS, karena

dalam mitokondria berlangsung reaksi fosforilasi oksidatif tempat sintesi

ATP. CVD – ROS (Cardio Vascular Disease) disebabkan oleh NADPH

Oksidasi pada mitokondria (NOX), xantin oksidase (XO), lyposidase (LO)

dan myeloperoxidase (MPO). Selanjutnya, ROS akan melakukan crosstalk

dengan adanya aktivasi NOX oleh H2O2, yang merupakan penginduksi xantin

dehigrogenase dan merubahnya menjadi XO, OONO- menginduksi produksi

16

–O2 dan pada akhirnya terbentuk suatu siklus oksidatif dalam mitokondria

(Gambar 7) (Dikalov, dkk., 2011).

Dalam dinding vascular, ROS diproduksi oleh semua lapisan, termasuk

endothelium, otot dan adventisia (Lassegue dan Clempus, 2003). 1-2% dari

molekul oksigen digunakan selama proses respirasi diubah menjadi radikal

superoksida. Satu reduksi elektron dari molekul oksigen membentuk O2- atau

anion superoksida, yang merupakan prekursor ROS yang kemudian

berdampak negative pada tingkat seluler (Gambar 8). Dismutase dari anion

superoksida akan menghasilkan H2O2. Kemudian ketika molekul H2O2

berinteraksi dengan ion transisi logam, seperti besi dan tembaga, terbentuklah

molekul ROS yang paling reaktif, yaitu OH-, melalui reaksi yang dikenal

dengan sebutan reaksi Fentons. Fe2+ + H2O2 Fe3+

+ OH- + OH. (Bayu, 2017;

Dalaen dan Aiman, 2014; Noori, 2012).

Gambar 8. Efek ROS pada Fungsi Seluler (Martin, dkk., 2017)

17

Akibat terganggunya respirasi seluler dimitokondria, sel akan mengalami

kekurangan suplai ATP. Hal tersebut akan menggangu viabilitas sel. Selain itu

ROS akan menginduksi DNA lalu akan mengoksidasi protein, dan apabila hal

tersebut terjadi akan mengakibatkan kematian sel (Martin, dkk., 2007).

H. Stres Oksidatif Pada Jantung dan Kardiovaskular

Stres okdiatif dapat terjadi karena tingginya ROS (Reactive Oxygen Species)

dalam tubuh. Peningkatan ROS tersebut dapat memicu timbulnya penyakit

kardiovaskular. ROS dapat terbentuk karena adanya proses bikomia dan

fisologi yang umum terjadi dalam tubuh. Hal tersebut dapat terjadi karena

adaya aktifitas xantine oksidase, NADPH oksidase, lipogenasis, mitokondria

atau terlepasnya nitrit oksida pada sel vaskular (Lakshmi, dkk., 2009).

Dalam keadaan fisiologis, ROS diproduksi dengan konsentrasi rendah dan

berperan sebagai sinyal dalam regulasi Vascular Smooth Muscle Cell (VSMC)

untuk kontraksi, relaksasi dan pertumbuhan (Touyz dan Schiffrin, 1999).

Stres oksidatif dapat menyebabkan disfungsi endothelium (ED) ,

arterosklerosis, hipertensi, dan gagal jantung (Lakshmi, dkk., 2009).

Arterosklerosis menjadi penyebab utama timbulnya penyakit kardiovaskular

(CVD). Adanya penyempitan arteri menyebabkan konsekuensi reduksi aliran

darah sebagai alat pengangkut oksigen dalam tubuh. Hal tersebut merupakan

bentuk peringatan dalam dinding arteri koroner, karena terbentuk bagian besar

18

dari LDL cksolesterol dan materi hasil pembuangan aktivitas seluler (Mehta,

dkk., 1998). Arterosklerosis dapat pula disebabkan oleh perubahan molekul

yang diinduksi oleh sitokin, hormone, growth factor, dan senyawa oksidatif.

Endositosis akibat oksidasi LDLs terjadi dalam makrofage dan berlangsung

dalam waktu yang lambat dan kemudian terakumulasi padan intima dan

membentuk arterosklerosis.

Gambar 9. Progresi Arterosclerosis pada Kardiovascular

(Karla, dkk., 2016)

Pada fase arterogenesis yang dipicu oleh reaksi oksidatf, LDL akan

teroksidasi (oxLDL) dan kemudian akan terakumulasi dalam peningkatan

resiko penyakit ini. Aktifitas oxLDL dalam endothelium oleh produksi

molekul adhesi yang dikumpulkan oleh monosit dan T-Cell sebagai kunci

untuk stimulator respon sistem imun (Zwaka, dkk., 2001). Peningkatan

arterosklesrosis dan CVD (Cardiovascular Disease) genesis dimulai dengan

akumulasi dan perubahan molekul menjadi bagian yang berpotensi mengalami

19

kerusakan (Gambar 9.) LDLs pada konsentrasi tinggi akan menghambat

kapasitas endositosis sel endothelial (EC), migrasi dan akumulassi pada

intima. LDLs akan mengalami oksidasi dan menginduksi VCAM (green

square) yang terekspresi pada EC. Monosit akan masuk kedalam intima akibat

interaksi VCAM (Angela, dkk., 2013; Assie, dkk., 2014; Nisha, dkk., 2016)

Pada Tabel 1, menunjukkan beberapa kondisi yang dapat dijadikanp

biomarker untuk membantu dalam menidentifikasi dan menginvestigasi

mekanisme patologi CVD serta tingkat kerusakan CVD, menurut Dewey, dkk

(2016)

Tabel 1. Kardiokines sebagai biomarker CVD

Heart Failur atau gagal jantung disebkan tingginya kadar Melanodialdehid

(MDA) yang merupakan produk lipid peroksidase dalam plasma darah.

20

Pada Tabel 2 menunjukkan kandungan MDA, SOD, CAT, dan GSH-Px pada

jantung dengan paparan Cd (Cadmium) dengan pemberian ekstrak bawang

merah (Allium cepa) dengan kandungan polifenol 20-40 %. (Saref, dkk.

2014).

Tabel 2. Kandungan MDA, SOD, CAT dan GSH-Px jantung dengan paparan

Cd

Control Cd

MDA (nm/mg tissue) 4.89±0.23 7.57±0.49a

SOD (U/mg protein) 4.09±0.33 2.88±0.23a

CAT (k/mg protein) 3.34±0.17 1.98±0.1a

GSH-Px (nm/mg protein) 348.91±26.01 187.15±12.67a

Menurut Saref dkk, (2014) stress oksidativ dapat mempengaruhi sel sel

jantung tikus sehingga mengalami kerusakan histologi, serta apoptosis pada

jaringan kardiak. Pada gambar 10 dan 11 nampak pada histologi jantung

tersebut terjadi adanya miofibril yang hilang dan vakuolisasi sitoplasma.

Selain itu perubahan bentuk myofibril pada jantung hewan uji juga mengalami

perubahan.

21

Gambar 10 Histologi Jantung Kontrol Negatif (1) Inti Sel Normal (Saref,

dkk., 2014)

Gambar 11. Histologi Jantung Dengan Paparan Cd. (2) Vakuolisasi

Sitoplasma, (3) Kerusakan Myofibril (Saref, dkk., 2014)

I. Glutation

Glutation l-γ-glutamyl-cysteinyl-glisin (glutathion) merupakan suatu tripeptida

yang terdiri dari asam glutamat, sistein, glisin dan dapat ditemukan dalam

sitosol, mitokondria dan inti sel. Di dalam inti, glutation berperan dalam

1

2 3

22

menjaga tingkat redoksi dari protein sulfhidryl yang sangat diperlukan untuk

perbaikan DNA dan ekspresi gen. Glutation yang teroksidasi (GSSG) akan

terakumulasi di dalam sel dan merupakan penanda adanya kondisi

stresoksidatif pada suatu organisme (Valko dkk., 2007).

GSSG akan mendetoksifikasi hydrogen peroksida dan lipid peroksidase

dengan mengaktivasi GSH-Px. GSH akan mendonorkan elektronnya ke pada

H2O2 sehinggga tereduksi menjadi menjadi H2O dan O2. GSSG juga akan

mereduksi GSH dengan GSH reudktase dengan menggunakan NAD(P)H

sebagai donor elektronnya.reduksi glutation dengan adanya donor proton pada

membrane lipid akan melindungi sel dari ganguan zat oksidatif (Curello dkk.,

1985).

GSH merupakan kofaktor untuk beberapa enzim detoksifikasi seperti GSH-Px

dan transferase. Langkah yang dilakukan yaitu dengan mengubah vitamin C

dan E kedalam bentuk sisi aktif. GSH akan melindungi sel dari agen penyebab

apoptosis dengan melakukan interaksi proapotosik dan antiapoptosik pada

jalur penghubung. GSH juga akan mengaktivasi dan meregulasi beberapa

faktor transkripsi seperti AP-1, NF-kB, dan Sp-1 ( Esra dkk.,2012).

Gambar 12 menunjukkan proses katalisasi enzim dan indikasi reaksi enzim

yang terjadi dalam proses sintesis glutation dalam tubuh hewan. 1) -glutamyl

transpeptidase, 2) -glutamyl cyclotransferase, 3) 5-oxoprolinase, -

23

4) glutamylcysteine synthetase, 5) glutathione synthetase, 6) dipeptidase, 7)

glutathione peroxidase, 8) glutathione reductase, 9) superoxide dismutase,

10) BCAA transaminase (cytosolic and mitochondrial), 11) glutaminase, 12)

glutamate dehydrogenase, 13) glutamine:fructose-6- phosphate transaminase

(cytosolic), 14) nitric oxide synthase, 15) glutathione S-transferase, 16)

NAD(P)H oxidase dan mitochondrial respiratory complexes, 17) glycolysis,

18) glutathione-dependent thioldisulfide atau thioltransferase atau

nonenzymatic reaction, 19) transsulfuration pathway, 20) deacylase, dan 21)

serine hydroxymethyltransferase. Sedangkan : AA, amino acids; BCKA,

branched-chain _-ketoacids; GlcN- 6-P, glucosamine-6-phosphate; GS-NO,

glutathione–nitric oxide adduct; KG, -ketoglutarate; LOO, lipid peroxy

radical; LOOH, lipid hydroperoxide; NAC, N-acetylcysteine; OTC, L-2-

oxothiazolidine-4- carboxylate; R_, radicals; R, nonradicals; R-5-P, ribulose-

5-phosphate; X, electrophilic xenobiotics (Guoyao, dkk., 2004).

Gambar 12. Sintesis Glutation dan Pemanfaatannya Pada Hewan (Guyaou, dkk.,

2004)

24

Menurut Guyaou Wu, dkk (2004) glutation memiliki beberapa peran dalam

tubuh hewan, terutama mamalia diantaranya sebagai antioksidan, serta dalam

regulasi dan metabolisme. Pada fungsinya sebagai antioksidan, glutation dapat

menangkap radikal bebas dan molekul reactive lainnya, menghilangkan

hydrogen dan lipid peroksidase dan mencegah oksidasi biomolekuler.

Sedangkan pada regulasi dan metabolisme, glutation dapat membantu proses

sintesis leukosit dan prostalgladin, mengubah formaldehida menjadi formate,

memproduksi α-laktat dari methylglyoxal, membentuk mercapturates dari

elektofili, menyimpan dan menyebarkan sistein. Selain itu glutation dapat

membantu proses reaksi redoks pada inntraseluler, sebagai sinyal transduksi

dan ekspresi gen, meregulasi DNA dan sintesi protein serta proteolisis,

proliferasi sel dan apoptosis, produksi sitokin dan respon imun, meregulasi

fungsi dan integritas mitokondria.

25

III. METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Agustus hingga Desember 2018 di

Laboratorium Biomolekuler, Laboratorium Bakteriologi Balai Veteriner

Lampung dan Laboratorium Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas

Lampung.

B. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain kandang mencit, botol

minum mencit, jarum suntik, sonde lambung, alat bedah, botol sampel, neraca

analitik, gelas objek, mikroskop, beaker glass, gelas ukur, tabung reaksi,

erlenmeyer, corong, mikro pipet, mikro tip, cawan petri, spatula, kaca

penutup, sentrifugator, tube 1,5 ml, kertas saring, blender, vortex, embedding

cassette, pan, slide preparat, inkubator, mikrotom, alat tulis dan kamera.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain hewan uji berupa

mencit jantan (Mus musculus L.) berumur 3 bulan dengan berat badan

26

± 30-40g, pelet pakan mencit, air minum, lamun (Enhalus acoroides.), rumput

laut (Eucheuma cottonii), taurin, herbisisda glifosat dengan merek dagang

Roundup, kit Glutation Essay, akuadest, methanol for analysis, CMC,

paraffin, Hematoxylin, eosin, paraffin, xylol, alkohol (70%, 80%, 90%, dan

100%), kanada balsam dan larutan buffer formalin 10%.

C. Pelaksanaan Penelitian

1. Persiapan Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini yaitu mencit jantan (Mus

musculus L.) ekor berumur 3 bulan sebanyak 30 ekor dengan berat badan

± 30-40 g, diperoleh dari Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner

(BPPV) Regional III Bandar Lampung. Mencit dipelihara secara individu

dalam bak plastik berukuran 20x30 cm dengan penutup jaring kawat

dilengkapi wadah pakan, botol minum dan sekam padi.

Aklimatisasi mencit dilakukan selama 7 hari sebelum perlakuan, hal ini

dilakukan agar mencit beradaptasi dengan keadaan kandang. Selama

aklimatisasi berlangsung, mencit diberi dipakan berupa pellet dan air

secara ad libitum (secukupnya). Setiap hari berat badan ditimbang dan

diamati prilakunya. Mencit yang sehat selama aklimatisasi, selanjutnya

dikelompokkan dan diberi perlakuan sesuai dengan rancangan percobaan.

27

2. Persiapan Bahan Uji

2.1 Persiapan Rumput Laut (Eucheuma cottonii) dan Lamun (Enhalus

acoroides.).

Rumput laut (Eucheuma cottonii) yang diperoleh dari BBPBL (Balai

Besar Perikanan dan Budidaya Laut) Lampung dan lamun (Enhalus

acoroides) yang berasal dari Pantai Sari Ringgung Kabupaten

Pesawaran segar dipilih, dan dicuci dengan air mengalir hingga bersih.

Pelarut yang digunakan yaitu methanol for analysis. Rumput laut

(Eucheuma cottonii) dan lamun (Enhalus acoroides) dikering

anginkan pada suhu ruang hingga kadar airnya berkurang. Kemudian,

dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 30-35 0C.

Lamun (Enhalus acoroides) dan Eucheuma cottoni yang telah kering

dihaluskan menggunakan blender dan dimaserasi dengan pelarut

methanol (1:10) selama 24 jam. Hasil maserat kemudian dievaporasi

menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental.

Ekstrak yang diperoleh kemudian dimasukkan ke dalam oven agar

terbentuk pasta dan dilarutkan dalam CMC 1% (1,0 gr CMC dalam

100 ml aquadest).

28

3. Uji Fitokimia Ekstrak Rumput laut (Eucheuma cottonii) dan Lamun

(Enhalus acoroides)

Pada penelitian ini dilakukan beberapa prosedur uji fitokimia yang akan

menurut Nur, dkk (2014) (Tabel 3).

Tabel 3. Uji Fitokimia Ekstrak Rumput laut (Eucheuma cottonii) dan

Lamun (Enhalus acoroides)

Uji fitokimia Prosedur Indikator

Saponin 0,5 mL sampel + 5 mL

akuades, kemudian dikocok

selama 30 detik

Busa

Flavonoid 0,5 mL sampel + 0,5 g serbuk

Mg + 5 mL HCl pekat

(ditambahkan tetes demi tetes

Perubahan warna

sampel menjadi

merah atau kuning

dan terbentuk busa

Terpenoid 0,5 mL sampel + 0,5 asam

asetat glacial + 0,5 mL H2SO4

Perubahan warna

sampel menjadi

merah atau kuning

Alkaloid 0,5 mL sampel + 5 tetes

kloroform + 5 tetes pereaksi

Mayer (1 g KI dilarutkan

dalam 20 mL akuades dan

ditambahkan 0,271 g HgCl2

hingga larut)

Perubahan warna

sampel menjadi

putih kecokelatan

Tanin 1 mL sampel + 3 tetes larutan

FeCl3

Perubahan warna

sampel menjadi

hitam kebiruan

29

4. Pemberian Perlakuan

Pada penelitian ini digunakan Rancangan Acak Kelompok Lengkap

(RAKL), dengan membagi hewan uji menjadi 2 kelompok pembedahan.

Tiap kelompok terdiri dari 5 perlakuan dengan masing masing 5

pengulangan. Pembagian kelompok pembedahan sebagai berikut:

- Kelompok A: Kelompok dengan perlakuan 7 hari pemberian ekstrak

dan 4 kali (tiap 2 hari) penyuntikan glifosat secara intra

peritoneal (IP)

- Kelompok B: Kelompok dengan perlakuan 14 hari pemberian ekstrak

dan 8 kali (tiap 2 hari) penyuntikan glifosat secara intra

peritoneal (IP)

Sedangkan pembagian kelompok perlakuan sebagai berikut:

- Kelompok 1: Kelompok yang hanya diberi perlakuan pemberian

pakan pellet hingga akhir perlakuan (kontrol negatif)

- Kelompok 2: Kelompok yang hanya diberi perlakuan pemberian

glifosat secara Intra Peritonial (IP) sebanyak 0,5 cc

(kontrol positif)

- Kelompok 3: Kelompok dengan pemberian ekstrak lamun

(Enhalus acoroides).secara oral sebanyak 0,2 cc

- Kelompok 4: Kelompok dengan pemberian ekstrak kelompok dengan

pemberian ekstrak rumput laut (Eucheuma cottonii)

secara oral sebanyak 0,2 cc

30

- Kelompok 5: Kelompok dengan pemberian taurin dosis

secara oral sebanyak 0,2 cc

Penentuan dosis glifosat diperoleh melalui perhitungan 52,59 mg/bb x 0,14 x

1,75 (berat badan mencit 35 g) sehingga diperoleh dosis 13,225 mg/BB

(Nahla, 2009). Dosis Eucheuma cottoni yang digunakan sebesar 15,96 mg/BB

(Nurul’ain, dkk., 2015). Dosis Enhalus acoroides. yang diberikan sebanyak

8,4 mg/BB (berat badang mencit 35 g). Sedangkan untuk dosis taurin

sebanyak 15, 6 mg/BB (Annisa, dkk., 2016).

5. Nekropsi dan Penimbangan Organ Jantung

Setelah 7 dan 14 hari pemeberian ekstrak dan taurin, dilakukan nekropsi.

Mencit didiseksi leher kemudian pembedahan dilakukan untuk diambil

organ jantungnya secara hati-hati. Organ ditimbang berat basahnya

menggunakan neraca analitik. Setelah itu organ dimasukkan kedalam

larutan buffer formalin 10%.

6. Pembuatan Preparat Histopatologi Jantung Mencit

Proses pembuatan preparat histopatologi jantung mencit menggunakan

pewarnaan hematoxlyne eosin. Pembuatan preparat terdiri dari beberapa

tahapan yakni

31

a. Fixation

Memfiksasi spesimen berupa organ jantung dengan menggunakan

larutan buffer formalin 10%. Kemudian dicuci dengan air mengalir.

b. Trimming

Memotong organ jatung dengan ukuran ± 3 mm, kemudian dimasukan

ke dalam embedding cassette.

c. Dehidration

Menghilangkan air dengan cara meletakkan embedding cassette pada

kertas tisu. Kemudian organ jantung direndam berturut-turut dalam

alkohol bertingkat 70%, 96%, 96%, dan 96% masing-masing selama

30 menit. Selanjutnya dilakukan perendaman pada alkohol absolut I,

II, III selama 1 jam.

d. Clearing

Untuk membersihkan sisa alkohol, dilakukan clearing dengan xilol I

dan II masing-masing selama 1 jam.

e. Impregnation

Impregnasi dengan menggunakan parafin selama 1 jam di dalam

inkubator dengan suhu 65OC.

f. Embedding

Parafin dimasukkan ke dalam wadah logam dan dimasukkan ke dalam

oven dengan suhu di atas 58OC, lalu dituangkan ke dalam pan dan

dipindahkan satu persatu dari embedding cassette. Pan berisi parafin

dimasukkan ke dalam air. Kemudian paraffin yang berisi potongan

32

jantung dilepaskan dari pan dengan memasukkan ke dalam suhu 4-60C

beberapa saat. Paraffin dipotong sesuai dengan letak jaringan yang ada

dengan menggunakan scalpel hangat dan diletakkan pada balok kayu,

lalu diratakan pinggir dan ujungnya dibuat sedikit meruncing.

g. Cutting

Sebelum memotong, blok parafin didinginkan terlebih dahulu.

Terlebih dahulu pemotongan kasar dilakukan kemudian dilanjutkan

dengan pemotongan halus dengan ketebalan 4-5 mikron. Lembaran

potongan yang paling baik akan mengaapungkan pada air. Apabila

terbentuk kerutan, untuk mengilangkannnya dengan cara menekan

salah satu sisi lembaran jaringan tersebut dengan ujung jarum dan sisi

yang lain ditarik menggunakan kuas runcing. Kemudian lembaran

jaringan dipindahkan ke dalam water bath dengan suhu 60 OC selama

beberapa detik hingga pita paraffin mengembang sempurna

Setelah itu mengambil lembaran jaringan tersebut dengan gerakan

menyendok menggunakan slide bersih dan menempatkannya di tengah

atau pada sepertiga atas atau bawah, mencegah jangan sampai ada

gelembung udara di bawah jaringan. Mengeringkan slide dan jika

sudah kering, memanaskan slide pada inkubator dengan suhu 37oC

selama 24 jam untuk merekatkan jaringan dan mencairkan sisa parafin

sebelum pewarnaan.

33

h. Staining (Pewarnaan)

Setelah jaringan melekat sempurna pada slide, selanjutnya secara

berurutan slide dimasukkan ke dalam beberapa zat kimia untuk

dilakukan proses pewarnaan sebagai berikut

1) Deparafinisasi, dengan menggunakan larutan xilol I dan II

masing-masing selama 5 menit serta dihidrasi ke dalam alkohol

absolut selama 1 menit serta alkohol 70%, 80%, dan 96%

masingmasing selama 2 menit lalu dengan air atau aquadest

selama 10 menit.

2) Melakukan pulasan inti dengan zat warna Harris Hematoxylin

selama 15 menit, lalu air mengalir, dan eosin selama maksimal

1 menit.

3) Melakukan dehidrasi dengan menggunakan alkohol 70%, 90%,

96%, dan absolut masing-masing selama 2 menit.

4) Melakukan penjernihan dengan menggunakan larutan xilol I

dan II masing-masing selama 2 menit.

i. Mounting

Setelah pewarnaan selesai, menempatkan slide di atas kertas tisu pada

tempat datar, lalu ditetesi dengan bahan mounting berupa kanada

balsam dan ditutup dengan cover. Selanjutan dilakukan pengamatan

preparat menggunakan mikroskop dengan perbesaran 400x.

34

7. Indeks Organ Jantung Mencit

Penghitungan indeks organ jantung dilakukan dengan menimbang berat

organ jantung saat dibedah dibagi berat badan mencit sebelum dibedah.

Perhtungan Indeks organ jantung menurut Katrin dkk (2014) ialah:

Indeks Organ (%): berat organ (gr)

berat badan (gr)

8. Pemeriksaan Kerusakan Organ Jantung

Pemeriksaan dilakukan dengan mengamati 5 lapang pandang secara acak

menggunakan mikroskop dengan perbedasan 100x hingga 400x. Tingkat

kerusakan ditentukan dari tingkat cytoplasmic vacuoalization,

disorganisasi myocardial, inflamasi dan nekrosis pada inti sel serta

hilangnya myofibril serta kerusakan lainnya yang mungkin terjadi. Data

yang diperoleh kemudian dihitung reratanya sehingga didapatkan nilai 1

ulangan dalam setiap perlakuan. Berikut persentase menurut Yanuarti, dkk

(2017):

Jumlah sel yang rusak

Jumlah seluruh sel

9. Pemeriksaan kadar glutathione

Kadar glutathion diperiksa menggunakan metode Ellman. Sebanyak 50 μl

sampel homogenat jaringan jantung, dicampur dengan 200 μl TCA 5 dan

1,75 ml PBS 0,1 ml pH 7,0 dan divorteks hingga homogen. Larutan

kemudian disentrifugasi (3.500 rpm) selama 10 menit. Supernatan yang

X 100% Kerusakan sel % :

X 100 %

35

terbentuk diambil sebanyak 800 μl dan ditambahkan 25 μl DNTB.

Kemudian larutan diinkubasi pada tempat gelap selama 1 jam. Setelah 1

jam, larutan dibaca absorbansi nya pada panjang gelombang 412 nm

(Susantiningsih, 2014).

Pada penelitian ini total GSH dihitung menggunakan rumus menurut

Akerboom dan Sies (1981), Eyer dan Podharsky (1986):

dengan: y= Ax+B

y : 0,0004x + 0,0028

R2 : 0,9789

D. Parameter

Parameter yang diukur pada peneelitian ini yaitu tingkat kerusakan histologi

dan kadar gluthation organ jantung, kandungan fitokimia ekstrak, berat badan

mencit selama perlakuan, dan indeks berat organ jantung.

E. Analisis Data

Data hasil penelitian ini akan dianalisis menggunkan One Way ANOVA pada

taraf nyata 5% (p<0,05) untuk melihat perbedaan pengaruh antar kelompok

perlakuan. Apabila terdapat perbedaan yang bermakna, maka dilanjutkan

dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT) pada taraf nyata 5%.

64

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulan bahwa:

1. Induksi glifosat sebanyak 13,225 mg/BB selama 14 hari

bepengaruh secara nyata terhadap kerusakan histologi jantung mencit.

Pemberian ekstrak methanol rumput laut (E. cottonii) sebanyak 15,96

mg/BB dan lamun (E. acoroides) sebanyak 8,4 mg/BB serta

taurin sebanyak 15, 6 g/BB mampu memperbaiki kerusakan

histologi jantung mencit dengan induksi glifosat selama 14 hari

2. Pemberian ekstrak methanol rumput laut (E. cottonii) sebanyak 15,96

mg/BB dan lamun (E. acoroides) sebanyak 8,4 mg/BB serta

taurin sebanyak 15, 6 g/BB belum mampu meningkatkan kadar

glutation pada mencit yang diinduksi glifosat selama 14 hari.

B. Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kandungan fitokimia pada

rumput laut (E. cottonii) dan lamun (E. acoroides) serta kadar enzim

antioksidan lainnya pada jantung mencit yang diinduksi glifosat.

65

DAFTAR PUSTAKA

A.Agata., E.L. Widiastuti., G.N. Susanto., Sutiyarso., 2016. Respon Histopatologi

Hepar mencit (Mus musculus) yang Diinduksi Benzo(α)Piren terhadap

Pemberian Taurindan Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata). Jurnal

Natural Indonesia 16(2):54-63

A. Pirillo., G.D. Norata., A.L Catapano., 2013. LOX-1, OxLDL, and

Atherosclerosis. Mediat. Inflam. 152786.

Acquavella, J.F., Bruce, H., Alexander, B.H., Mandel, J.S., Gustin, C., Baker, B.,

2004. Glyphosate Biomonitoring For Farmers and Their Families: Results

From The Farm Family Exposure Study. Environ. Health Perspect. 112, 321–

326.

Akerboom, T.P, dan Sies, H. 1981. Assay of Glutathione, Glutathione Disulfide, and

Glutathione Mixed Disulfides in Diological Samples. Methods Enzymol 77,

373-382.

Amudha, P., Jayalakhsmi, M., Pushpabharathi, N., Vanitha, V., 2018. Identification

of Bioactive Components in Enhalus acoroides Seagrass Extract by Gas

Chromatography-Mass Spectrometry. Asian Journal of Pharmateutical and

Clinical Research Vol 11.

Andreas Baouer-Panskus. 2014. TestBiotech Comment on The German Renewal

Assesment Report (RAR) on The Active Ingredient Glyphosate. Institute for

Independent Impact Assessment in Biotechnology. Frohschammerstr.

Germany.

Anand, V. P., Bhat, J.k., Varghese, J.M., Das S.K., 2011. Supplementation of Vitain

E Improves Cognitive Status and Oxidative Stress in Type 2 Diabetes Melitus.

International Research Journal Of Pharmacy 2(11):169-172

Anggadiredjo, J. T. 2006. Rumput Laut. Penebar Swadaya. Jakarta.

.

66

Aulia, F., Henky, I., Arief, P. 2013. Ekstraksi Senyawa Metabolit Sekunder Lamun

Thalassodendron ciliatum Pada Pelarut Berbeda. Program Studi Budidaya,

FIKP UMRAH.

Ari Yuniatuti. 2016. Dasar Molekuler Glutation dan Perannya Sebagai Antioksidan.

FMIPA Unnes.

Assies, J., Mocking, R.J., Lok, A., Ruhe, H.G., Pouwer, F., Schene, A.H. 2014.

Effects of Oxidative Stress on Fatty Acidandone-Carbon-Metabolism in

Psychiatric and Cardiovascular Disease Comorbidity. Acta Psychiatr. Scand.,

130, 163–180.

Azuma, M., Takahashi, K., Fukuda, T. 2000. Taurine Attenuates Hypertrophy

Induced By Angiotensin II In Cultured Neonatal Rat Cardiac Myocytes. Eur J

Pharmacol 403; 181-8.

Barenji, K., Drazner, M.H., Rothermal, B.A Hill, JA., 2005. Does Load-Indced

Ventricular Hypertrophy Progress to Systolic Heart Failure?. Am J Physiol

Heart Circ. Physiol 289(1):8-16

Bayu Putra, D., J., 2017. Efek Antioksidan Taurine Dan Jamur Tiram (Pleurotus

Ostreatus (Jacq.) P. Kumm) Terhadap Stres Oksidatif Pada Beberapa Organ

Homeostasis Mencit Yang Diinduksi Paraquat. (Tesis) FMIPA Univesitas

Lampung.

Bekris, L.M., Viernes, Hannah-Malia A. B.S., Farin, Federico M., Maier, Lisa A.,

Kavanagh, Terrance J., Takaro, Tim K. MD., 2006. Chronic Beryllium

Disease and Glutathione Biosynthesis Genes. Journal of Occuoational end

Environtment Medicine. 48:599-606

Bradberry, S. M., Proudfoot, A. T., Vale, J.A. 2004. Glyphosate Poisoning. Toxicol Rev

23(3): 159-67.

Boya, R.D., 2011. Pengaruh Ekstrak psak Bumi (Eurycoma longifolia Jerk) Terhadap

Histologi Sel Hepar Mencit Yang Dipaparkan Parasetamol. (Skripsi).

Universitas Sebelas Maret.

C. G. Karla., L. C. Daniel., H. Holger. 2017. CVD in Oxidative Stress. J Clin. Med.

(6); 22.

C. S. U. Dewi., R. D. Kasitowati., J. A. Siagian., 2017. Phytochemical Compounds of

Enhalus acoroides from Wanci Island (Wakatobi) and Talango Island

(Madura) Indonesia. IOP Conf. Series: Earth and Endvironmental Science

137 (1) 012045.

67

Clarkson, P. M., and Thompson, H.S. 2000. Antioxidant: What Role do They Play in

Physical Activity and Health. Am J Clin Nutr 72; 637-46.

Currello, S., Ceconi, C., Bigoli, C., Ferrari R., Albertini A.,Guarnieri, C. 1985.

Changes in the Cardiac Gluthatione Status After Ischemia and Reperfusion.

Experientia. 41:42-43.

Cox and Caroline. 1995. Glyphosate, Part 1: Toxicology. Journal of Pesticide Reform,

Volume 15 (3).

Dalaen, S.M.A. and Aiman, I.Q. 2014. Oxidative Stress versus Antioxidants.

AmericanJournal of Bioscience and Bioengineering. 2(5):60-71.

Damanik dan Alrasyid, H., 2009. Potensi tempe Kedelai dalam terapi Nutrisi Medik

pada Obesitas Dewasa dengan Komorbid. (Skripsi). Instusional Respository

USU.

David H., Jian H.W., and Gerald B., 2007. Structure-Based Identification of Novel

Human Y-Glutamylcysteine Synthetase Inhibitors. Molecular Pharmacology

71:1140-1147.

Dewey, C.M.,Spitler, K.M., Ponce, J.M., Hall, D.D., Grueter, C.E. 2016. Cardiac-

Secreted Factors as Peripheral Metabolic Regulators and Potential Disease

Biomarkers. J. Am. Heart Assoc.

Dikalov, S. 2011. Crosstalk Between Mitochondria and NADPH Oxidase. Free Radic

Biol, Med. (51); 1289-1301.

Dotty,M. S. 1985. Eucheuma Farming for Carrageenan sea Grant Advisory Report.

Prentice-Hall. New Jersey.

Drog W. 2002. Free Radicals in The Physiologial Control Of Cell Function. Physiol

Rev 82(2); 47-95.

Dwi, M.N.H dan Nour, A., 2017. Profil Histopatologi pada Jaringan Jantung Tikus

Subkronik 90 Hari Menggunakan Ekstrak Metanolik Scurrula atropurpurea (Bl.)

Dans. BIOSAINTROPIS (3): 30-36

E. Katrin., Susanto., H. Winarno., 2014. Keamanan sambiloto (Andrographis paniculata

nees) Kering Yang Diiradiasi Gamma Berdasarkan Aspek Toksisitas Akutnya

Terhadap Mencit Galur Swiss Webster. Jurnal sains dan Teknologi Nuklir

Indonesia 15(2):103-11

68

Eliane,D., Febiana, D.M., Ricardo, S.C., Janaina, D. P., Paulo, R.D., Agusto. L.,

2003. The Teratogenic Potential of The herbicide Glyphosate-Roundup In

Wiatar Rats. Toxicology Letters. 142: 45-52

Elva, V.P., G. N. Susanto., Sumardi., E. L. Widiastuti. 2016. Pengaruh TAurin

Terhadap Aktivitas Enzim Superoksida Dismutase, Melanoaldehida dan

Histologi Pada Hati Mencit (Mus musculus) Jantan Yang Diberi Herbisida

Glifosat. NATURAL B, Vol 3 226-234.

Emilie, C., Robin, M., Carine, T., Gilles-Eric, S., 2012. A Glyphosate-Baseed

Herbiside Induces Necrosis and Apoptosis in Mature Rat Testicular Cells in

vitro and Testosteron Decrease at Lower Levels. Toxicology in Vitro (26):269-

279

Emilia, K.,. Suvi, M.K., Hanna, L., Anna-Liisa, L., 2013. The Keap1-Nrf2 pathway:

Mechanisms of Activation and Dysregulation in Cancer. Redox Biology 1:45-

49

Endang L. W., Bayu, P.D. J., E. Nurcahyani. 2017. Uji Antioksidan Taurin dan

Ekstrak Jamur Tiram Terhadap Efek Oksidan Paraquat Pada Jaringan Paru

Mencit Jantan (Mus musculus). Prosiding Seminar Nasional Biollogi XXIV

PBI 101-109.

Eroschenko, V. P., 2003. Atlas Histologi di Fiore dengan Korelasi Rungsional

Edisi 9. ECG. Jakarta.

Esra, B., Umit, M. S., Cansin, S., Serpil, E., dan Omer, K. 2012. Oxidative Stress and

Antioxsidant Defense. WAO Journal 9-19.

Esther, E.C., Arthur,A.W., Yigal, M.P., 2011 Heart Failure: Advances Through

Genomics. Nature Review Genomics (12):357-362

Eyer P, dan Podhradsky D. 1986. Evaluation of The Micromethod For Determination

of Glutathione Using Enzymatic Cycling and ELLman’s Reagent. Anal

Biochem 153, 57-66.

Farideh, N., Suhaila. M., Samaneh, G. F., Javad, B., Nooedin, M. M., Noorjahan, B.

M. A., Fauziah O. 2012. Pholyphenol-rich Seaweed (Eucheuma cottonii)

Extract Suppresses Breast Tumour Via Hormone Modulation and Apoptosis

Induction. J. Food Chemistry 130: 376- 382.

Garbary, D. J., 2007. The Margin of The Sea: Survival at The Top of The Tides. In

Seckbach , J (Ed.) Algae and Cyanobacteria of Extreme Environtments.

Springer. Berlin 173-191

69

Guoyao, W., Yun-Zhong, F., Sheng, Y., Joanne, R. L., Nancy, D. T. 2004.

Glutathione Metabolism and Its Implication for Health. American Society for

Nutritional Science 489-492.

Gokce, G., Haznedaroglu, M. Z. 2008. Evaluation of Antidiabetic, Antioxidant and

Vasoprotective Effect of Posidonia Oceanic Extract. J Ethanolpharmacol 115:

122-30.

Handerson, A.M., Gervais, J. A., Luukinen, B., Buhl,K., Stone, D. 2010. Glyphosate

general Fact Sheet. National Pesticide Information Center. Oregon State

Univesity Extinsion Service.

Hasina El., Kolenchenko, E. A., Sgrebneva, M. N., Kovalev, V. V., Khotimchenko

yu. S. 2003. Antioxidant Activities of a Low Etherifeid Pectin From the

Seagrass Zostera marina. Russian J Mar Biol 29(4): 259-61.

Hemminga, M. A., and C. M. Duarte. 2000. Seagrass Ecology. University Press.

Cambridge.

Howe, C.M., Berril, M., Pauli, B>D., Helbing, C.C., Werry, K., Veldhoen, N., 2004.

Toxicity of Glyphosate-Based Pesticides to Four North American Frog

Species. Environt Toxicol Chem (8): 1928-38

Kehat., Jennifer, D., Malte, T., Federica, A., Marc, K. Saba-El-Leil., Marjorie, M.,

Atlen, J. y., John, N. L., Wolfram,H. Z., Sylvain, M., Jeffery, D.M., 2011.

ERK1/2 Regulate The Balance Between Eccentric and Concentric Cardiac

Growth. Circ Res (2) 108

Ik POM. 2016. Kenali Herbisida yanag Anda Gunakan – Glifosat.

https://ik.pom.go.id/v2016/. Diakses pada tanggal 10 Oktober 2018.

Ilmu Kelautan Untan. 2017 . Lamun Tumbuhan Laut Ajaib Dengan Kandungan Gizi

Tinggi. https://marinescience.untan.ac.id/tag/enhalus-acoroides/. Diakses pada

4 Januari 2019

Joko, S., Siti, A., Ria, O. R., Aristri, P.P., Nabila, U., Yumiko, Y. S., 2012. Phenol

Content, Antioxidant Acivity and Fibers Profile of Four Tropical Seagrasses

From Indonesia. Journal of Coastal development Vol (15): 189-196.

Kamilia, T., 2018. Pengaruh Pemberian Ekstrak Ethanol Jahe Merah (Zingiber

officinale Roxb. var Rubrum) Terhadap Histologi Hari dan Paru Mencit Jantan

yang Diinduksi Paraquat. (Skripsi) Biologi FMIPA Universitas Lampung.

70

Karen, L., Roberto, N., Adrian, L., Maria, L.M., Carlos, L., Guilermo, L.V., 2014.

Effects of Sublethal Expossure to a Glyphosate-Based Herbicide

Formulatioan on Metabolic Activities Of Different Xenobotic-Metabilizing

Enzymes in Rats. International Journal of Toxicology 1-12

Lakshmi, S. V., Padmaja, G., Kuppusamy, P., Kutala, V. K. 2009. Oxidative Stress In

Cardiovascular Disease. Indian J Biochem Biophys 46(6); 421-40.

Lassague, B., and R. E. Clempus,. 2003. Vascular NAD(P)H Oxidases: Specific

Features, Expression, and Regulation. J Physiol Regul Integr Comp Physiol

285(2): R277-97.

Lu, dan Frank C., 2010. Toksikologi Dasar. UI Press. Jakarta.

Merk Percival. 1998. Antioxidants. Clinical Nutrions Insight 31:01-04

Martin, O., Vladimir, G., Sten, O., Boris, Z. 2007. Mitohondria , Oxidative Stress and

Cell Death. J Apoptosis 12;913-922.

Manas, F., Peralta, L., Ugnia, L., Weyers, A., Garcia Ovando, H., Gorla, N. (2013)

Oxidative Stress and Comet Assay in Tissues of Mice Administered

Glyphosate and Ampa in Drinking Water for 14 Days. BAG. Journal of basic

and applied genetics, 24(2): 67-75.

Mendis, S., P. Puska , B. Norrving. 2011. Global Atlas on Cardiovascular Disease

Prevention and Control. World Health Organization. Geneva Switzerland.

Metha, J. L., T. G. Saldeen, K. Rand. 1998. Interactive Role Of Infection,

Inflamation and Traditional Risk Factors in Artherosklerosis and Coronanry

Artery Disease. J. Am Coll. Cardiol (31); 1217-1225.

Michael, B., Yano., Barry., Sellers, R. S., Perry, R.,Morton, D., Roomie, N., Johnson,

K. k., Schafer, K., 2007. Evaluation of Organ Weights for Rodent and Non-

Rodent Toxicity Studies: A Review of Regulatory Guidelines and a Survey of

Current Practises. Toxicologic Pathology. Vol 35; 742-750

Millo, J and Beswick, W., 2011, Fatal Poisoning with Glyphosate Surfactant

Herbicide, JICS Vol 2 (1).

Monica, J. C., Diana, A. M., Abilio, I., Oliveira-Neto., Francisco, T. R., Ana, L. K.,

2008. Oxidative Stress Biomarkers and Heart Function in Bullfrog Tadpoles

Exposed to Roundup Original. Ecotoxicology (17): 153-163

Murray, R. K., Granner, D. K., and Rodwell, V. W. 2009. Biokimia Kedokteran

Harper, Edisi 27, Penerbit Buku Kedokteran EG. Jakarta.

71

Nahla,S El-Shenawy. 2009. Oxidative Stress Responses of Rats Exposed to Roundup

and Its Active Ingredients Glyphosate. J Environt Toxicol Pharmacol 28

(3);379-85.

Neil Kaplowitz, 1981. The Importance and Regulation of Hepatic Glutathione. THE

YALE JOURNAL OF BIOLOGY AND MEDICINE 54: 497-502

Nisha P., Keshav, R. P., dan Kalpana, P., 2016. Reactive Oxygen Species: A Key

Hallmark of Cardiovascular Disease. Hindawi Publishing Corporation

Advance in Medicine.

Nurul’Ain, A.B., U.A.Victor, M.S. Noordin, L. Swee-Ling, M . Suhaila. 2015.

Seewed (Eucheuma cottonii) Reduced Inflamation, MUcin Synthesis,

Eosinophil Infiltration and mMP-( Expression In Asthma Induced Rats

Compared to Loratadine. Journal Of Function Foods 19: 710-722.

Nur, S., Erwin., W. K. Irawan. 2014. Identifikasi dan Uji Toksisitas Senyawa

Flavonid Fraksi Klorofom dari Daun Terap ( A. Odorantissimus blanco).

Jurnal Isolasi. Universitas Mulawarman.

Nurjanah, Mala, N., Effionoria, A., Novi, l., Taufik, H., 2017. Identification of

Bioactive Compounds of Seaweed Sargassum sp. and Eucheuma cottonii

Doty as a Raw Sunscreen Cream. Pakistan Academy of Science: B. Life and

Environment 54 (4): 311-318

Noori, S. 2012. An overview of Oxidative Stress and Antioxidant Defensive System.

Open Access Scientific Reports. 1(8):1-9.

Nora, B., dan Gilles-Eric, S., 2009. Glyphosate Formulations Induce Apoptosis and

Necrosis in Human Umbilical, Embryonic, and Placental Cells. Chem Res

Toxicol (1): 97-105

Novita Rina dan Antarsih., 2017. Efek Ekstrak Aetil Asetat Daun Lamun Enhalus

acoroides (L.F) Royle Terhadap Kadar MDA dan GSH Mencit Jantan Tua.

SEL Jurnal Penelitian Kesehatan Vol 4 (2):56-65

P.S. Fransius., 2008. Penampilan Reproduksi Mencit (Mus musculus) yang Diberi

Daun Torbangun (Caleus ambiocunlour) dan Taraf sop Daun Torbangun

Kering. Program Studi Teknologi Produksi Ternak. IPB.

Patricia, M., Suhaila, M., Noordin, M. M., Kharidah, M.M., Cheng, H. M., 2008.

Antioxidant Activities and Phenolics Content of Eight Species of Seaweeds

From North Borneo. Journal of Applied Phycology Vol 20:367

72

Patricia, M., Suhaila, M., Noordin, M. M., Kharidah, M.M., 2009. Nutrient Content

of Tropical Edible Seaweeds, Eucheuma cottonii, Caulerpa lentillifera and

Sargassum polycystum. Journal Of Applied Phycology Vol. 21: 75-80.

Patricia, M., Suhaila, M., Noordin, M. M., Kharidah, M.M., 2010. Comparison of

Cardiovascular Protective Effects of Tropical Seaweeds, Kappaphycus

alvarezii, Caulerpa lentillifera, and Sargassum polycystum, on High-

Cholesterol/High-Fat Diet in Rats. J Med Food (4): 792-800

Pieter, A.D., Mat. J. D., Ebo, D. de Munick., Jos, F.S., 1998. Cardiovascular

Phenotyping in Mice. Cardiovascular Reaserch 39: 34-49

Phillips, R. C. and E. G. Menez. 1988. Seagrass. Smith Sonian Institutions Press.

Washington D. C.

Qi, S. H., Zhang, S., Qian, P.Y., Wang, B.G., 2008. Antifeedant, Antibacterial, and

Antilarval Compunds From thr South China Sea Grass Enhalus acoroides.

Bot- Mar., 51. 441-447.

Raquel J., Gabriel, O.L., Celso, P., Claudriana, L., 2012. Evaluation of Biochemical,

Hematological, and Oxidative Parameters in Mice Exposed to The Herbicide

Glyphosate-Roundup. Interiscrip Toxicol Vol 5(3): 133-140

Reagasamy, R. R. K., Rajasekaran, A., Perumal, A. 2010. In Vitro Antioxidant of

Ethanol Extract from Enhalus acoroides (L.F.) Royle. Asian Pacific Journal

of Tropical Medicine 898-901

Reiss, K., Cheng, W., Ferber , A., 1996. Overxpression of Insulin-Like Growth

Factor-I in the Heart is Coupled with Myocyte Proliferation in Transgenic

Mice. Proc Natl Acad Sci USA 93: 8630-8635

Rice-evans, C.A., Miller, N.J., Panganga, G., 1996. Structure Antioxidant Activity

Relationship of Flavonoids and Phenolic Beverages (Coffe, Cocoa and Tea)

Preapred per Cup Serving. Journal of Agriculture and Food Chemistry (490):

3438-3442

Saref, A., Mehmet,k., Cevat, A., Mustafa, E., Aydin, A., Dursun, C. A., Mustafa, O.

2014. Protective Effect of Onion Extract on Cadmium-Induced oxidative

Stress, Histological Demage, an Apoptosis in Rat Heart. Biol Trace ElemRes

1599;297-303.

Shelly C. L., Jun-Li G., Hai-Ying H., John K., and N., 1993. Thiol-Disulfide Effects

on Hepatic Glutathione Transport Studies in Cultured Rat Hepatocytes and

Perfused Livers. J.Clin.Invest Vol 92

73

Stefan,B., Hans, J.R., Cristoph, B., Michel, T., Gerd, H., Laurence, T., Marek, S.,

Francois,C., Jurgen, M., Karl,J.L., 2003. Gluthation Peroxsidase-1 activity

and Cardiovascular events in Patients With Coronary Artery Disease. The

New England Journal of Medicine 349:17

Suckow, M.A., Weisbroth, S. H.,dan Fanklin, C. L., 2012. The Laboratory Rat 2nd

ed. Elsevier Academic Press. Burlington.

Sureda, A., Box, A., Terrados, J., Deudero, S., Pons, A. 2008. Antioxidant Response

of The Seagrass Posidonia oceanica When Epiphytized by The Invasive

Macroalgae Lophocladia lallemandii. Mar Environ Res 66: 369-63

Susantiningsih, T. 2014. Biokimia stress oksidatif dan prosedur laboratorium. Aura

Printing dan Publishing, Bandar Lampung.

Somala, L., 2016. Sifat Reproduksi Mencit (Mus musculus) Betina yang Diberi Pakan

Tambahan Kemangi (Ocimum basilicum) Kering. (Skripsi). Institut Pertanian

Bogor.

Stevee, G., Sandrine, L., Paulo_emilio, p., Gilles-Eric, S., Rene, R., 2015.

Cardiotoxic Electrophysiological Effects Of The Herbicide Roundup in Rat

and Rabbit Ventricular Myocardium in Vitro. Cardiovascular Toxicology

(15): 3224-335

T. Wresdiyati., M. Astawaman., V.D. Nurwati., 2008. Pengaruh Pemberian tepung

Buah Pare 9MAmordica charantia L.,) pada Sel beta dan SOD Pankreas Tikus

Diabetes Melitus. J BAhan Alam Ind 6: 193-200

Theodorus P. M., Akerboom, Manfred B, dan Helmut SiesS. 1981. The Relationship

of Biliary Glutathione Disulfide Efflux and Intracellular Glutathione

Disulfide Content in Perfused Rat Liver. THE JOURNAL OF BIOLOGICAL

CHEMISTRY 8: 4248-4252

Touyz, R. M., and Schiffrin , E. L. 1999. Ang II-Stimulated Superoxide Production is

Mediated Via Phospholipase D in Human Vascular Smooth Muscle

Cells.Hypertension. 34 (4 pt 2): 976-82.

Tsutsui H., Kinugawa, S., Matsushima, S., 2009. Mitochondrial Oxidative Stress and

Dysfunction in Myocardial Remodeling. Cardiovasc Res (3): 449-56

Universitas John Hopkins (JHU). 2016. Mouse Biology.

http://web.jhu.edu/animalcare/procedures/mouse.html. Diakses Pada 02

Januari 2019.

74

Valko, M., D. Leibfritz, J. Moncol, M.T. Cronin, M. Mazur, J. Telser. 2007. Free

Radical and Antioxidants in Normal Physiologycal Functions and Human

Disease. The InternationalJournal of Biochemistry and Cell Biology. 39: 44-

48

Wikana, J. 2011. Pemberian Kompleks Buah Berry Menurunkan Stress Oksidatif dan

Meningkatkan Pertahanan Oksidatif Pada Perokok Aktif. (Tesis). Universitas

Udayana. Denpasar.

Yan-Jun, X., Amarajit, S. A., Paramejit, S. T., Naranjan, S.D. 2008. The Potential

Helath Benefits of Taurine in Cardiovascular Disease. Axp Clin Cardiol Vol

12 (2); 57- 67.

Yoshiki, M., Tsuge, Y., Tsuruta, Y., Yoshimura, T., Kogenemaru, K., Sumi, T.,

Matsui, T., Matsumoto, K., 2009. Production of New Antioxidant Compound

from Mycrosporine Like Amino Acid. Food-Chem 113:1127:1132

Yuniarti, T., Noor, Y., dan Findi, W. P., 2017. Gambaran Histopatologi Ventrikel

Kiri Tikus yang Diberi Paparan Rokok Elektrik (Ends) dan Konvensiaonal.

Qanun Medika Vol (1)(2); 83-93.

Yuwono, S. S., Sulaksono., Yekti, R. P., 1994. Keadaan Nilai Normal Baku Mencit

CBR Swiss Derived Di Pusat Penelitian Penyakit Menular.

http://www.kalbefarma.com. Diakses Pada Tanggal 31 Desesmber 2018

Zeyu, Z., Dam, L., Bo Yi., Zhangping, L., Lei, T., Dong, Y., Ming, H. 2014. Taurin

Supplementation Reduces Oxidative Stress And Pretects The Liver In An

Iron-Overload Murine Model. Molecular Medical Reports 10: 2255-2262.

Zwaka, T. P., Hombach, V., Torzewski, J. C. 2001. Reactive Protein Mediated Low

Density Lipoprotein Uptake By Machrophages Implication for

Arherosklerosis. J Circulation (103); 1194-1197.