1

AKTIVITASANTIOKSIDAN,KADARFENOLIK,DANFLAVONOIDTOTALTUMBUHANSURUHAN(PeperomiapellucidaL.Kunth)

ELSHAUKIEYANNA

DEPARTEMENBIOKIMIAFAKULTASMATEMATIKADANILMUPENGETAHUANALAMINSTITUTPERTANIANBOGORBOGOR2012

1

ABSTRAK

ELSHAUKIEYANNA.AktivitasAntioksidan,KadarFenolik,danFlavonoidTotalTumbuhanSuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth).DibimbingolehDr.Suryani,MScdanDr.AnnaPRoswiem,MS.

Suruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)merupakantumbuhansemakyangtersebarluasdiseluruhwilayahIndonesiadanmemilikikhasiatuntukmeredakannyerirematik,sebagaiantikanker,danantibakteri.Penelitianinibertujuanuntukmengujiaktivitasekstrakherbasuruhansebagaiantioksidanalamidanmengukurkadarfenolikdanflavonoidtotaldalamsuruhan.Sampelyangdigunakanberupaekstraketanol70%danekstrakairdariherbasuruhan.EkstrakdidapatdenganmetodemaserasidandilakukanujiantioksidandenganmetodeDPPHkemudiandilakukanujikandunganfenolikdanflavonoidtotalekstraksertadianalisiskorelasikeduasenyawainiterhadapaktivitasantioksidannya.Rendemenyangdihasilkanolehekstraketanol70%sebesar20.433.33%sedangkanrendemenekstrakairsebesar10.032.85%.KeduaekstrakmenunjukkanaktivitasantioksidandalampenangkapanradikalbebasDPPH.NilaiIC50ekstrakairsebesar256.6721.65ppmyangdiikutiolehekstraketanolsebesar297.7917.75ppm.Kandunganfenolikekstrakairsebesar755.7965.87mgTAE/gdanekstraketanolsebesar622.46179.43mgTAE/g.Kandunganflavonoidtotalekstraketanolsebesar4.0580.352mgQE/gdanekstrakairsebesar0.670.352mgQE/g.Kandungantotalfenolberkorelasilinierdenganaktivitasantioksidantetapiaktivitasantioksidantidakmemilikikorelasidenganflavonoid.

Katakunci:suruhan,antioksidan,flavonoid,fenolik2

ABSTRACT

ELSHAUKIEYANNA.AntioxidantActivity,Phenol,andFlavonoidContentofSuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth).UnderdirectionofDr.Suryani,MScandDr.AnnaPRoswiem,MS.

Suruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)isthebushhadwidespreadinIndonesiaandhasefficacyasarthritispainrelief,anticancer,andantibacterial.Theaimofthisstudywastestingtheactivityofsuruhansherbextractsasnaturalantioxidantsandmeasuredthetotalphenolicandflavonoidcontentinsuruhan.Thesampleusedintheformof70%ethanolextractandaqueousextractofthesuruhan.TheextractobtainedbymacerationmethodandtestedantioxidantswithDPPHmethodandthentestedthecontentoftotalphenolicandflavonoidextractsandanalyzedthecorrelationofthesecompoundstoantioxidantactivity.Theyieldof70%ethanolextractwas20.433.33%whereastheyieldofaqueousextractwas10.032.85%.BothofextracthasproducedtheantioxidantactivityoffreeradicalDPPHcapture.IC50valuesofaqueousextractof256.6721.65ppm,followedbyethanolextractof297.7917.75ppm.Totalphenoliccontentofaqueousextractwas755.7965.87mgTAE/gandethanolextractwas622.46179.43mgTAE/g.Totalflavonoidcontentofethanolextractwas4.0580.352mgQE/gandaqueousextractwas0.670.352mgQE/gextractforaqueous.Thephenolcontenthaveliniercorrelationwiththeirantioxidantactivitybuttheflavonoidcontentdidnthavecorrelationwithantioxidantactivity.

Keywords:suruhan,antioxidant,flavonoid,phenolic3

AKTIVITASANTIOKSIDAN,KADARFENOLIK,DANFLAVONOIDTOTALTUMBUHANSURUHAN(PeperomiapellucidaL.Kunth)

ELSHAUKIEYANNA

SkripsiSebagaisalahsatusyaratuntukmemperolehgelarSarjanaSainspadaDepartemenBiokimia

DEPARTEMENBIOKIMIAFAKULTASMATEMATIKADANILMUPENGETAHUANALAMINSTITUTPERTANIANBOGORBOGOR2012

1

JudulSkrips:AktivitasAntioksidan,KadarFenolik,danFlavonoidTumbuhanSuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)Nama:ElshaUkieyannaNIM:G84080053

DisetujuiKomisiPembimbing

Dr.Suryani,MScDr.AnnaPRoswiem,MSKetuaAnggota

Diketahui

Dr.Ir.IMadeArtikaM.App.ScKetuaDepartemenBiokimia

TanggalLulus:

1

PRAKATA

PujisyukurpenulisucapkankepadaAllahSWTdenganrahmatdankarunia-NyaskripsidenganjudulAktivitasAntioksidan,KadarFenolik,danFlavonoidTumbuhanSuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)dapatdiselesaikan.SkripsiinidisusunberdasarkanpenelitianyangdilaksanakandaribulanFebruari2012sampaiJuli2012diLaboratoriumPusatStudiBiofarmakaIPB.Ucapanterimakasihyangtakterhinggapenulissampaikankepadapihak-pihakyangtelahmembantupenyusunanskripsiini,khususnyakepadaDr.SuryanidanDr.AnnaPRoswiemyangtelahmembimbing,memberipengarahan,dandorongandalamrangkapenyelesaianlaporanpenelitianini.SelainitupenulismengucapkanterimakasihkepadaBapakWarasNurcholisyangtelahmemberikanpendapatdansarannyasertateman-temancivitasBiokimiaIPB,Nursofiana,DewiEriyanti,WulanWidianti,Khairunnisa,LeliDwinovita,Setyo,Maritrana,danFitrianiFauziah.Secarakhususpenulismenyampaikanterimakasihsedalam-dalamnyakepadakeluargatercinta,AyahandaMarzukidanIbundaYuliarsertaBelladanAndreyangtelahmemberikandorongandandoanya.Semogapenelitianinidapatbermanfaatuntukmenambahpengetahuandalamhalyangterkaitdenganpotensitumbuh-tumbuhansebagaiantioksidandanjugadapatdijadikanbahanrujukandalampenelitianselanjutnya.Terimakasih.

Bogor,15Juni2012

ElshaUkieyanna1

RIWAYATHIDUP

PenulisdilahirkandiPekanbarupadatanggal15September1990dariBapakMarzukiMahadandanIbuYuliar.Penulismerupakananakpertamadaritigabersaudara.PenulismenyelesaikanstudidiSMUNegeri3Pekanbarupadatahunajaran2008.PadatahunyangsamapenulisditerimadiInstitutPertanianBogor(IPB)padaProgramStudiBiokimiaFMIPAmelaluijalurUndanganSeleksiMasukIPB(USMI).SelamamengikutiperkuliahanpenulisaktifmenjadiBendaharaUmumIICommunityofResearchandEducationofBiochemistryStudent(CREBs)danstafDivisiHumanandresearchDevelopmentCommunityofResearchandEducationofBiochemistryStudent(CREBs).Penulisjugapernahmengikutibeberapaperlombaanolahragasepertibasketballdanbulutangkis.PenulisjugaaktifdalamorganisasibiketocampusBogordanKyokusinJawaBarat.Tahun2011penulismelaksanakanpraktiklapangandiPusatPengawasanMutuBarangEkspordanImporJakartadenganjudullaporanUjiBakteriSalmonellasp.padaBuahdanSayuranEksporImpor.Tahun2012penulismengikutiseminarInternasionaldiSingapuradengantemaAlternativeAviationFuelinAsiaandASEANAlgaeBiofuelInitiativeConference.PenulisjugamengikutiProgramKaryaMahasiswadenganjudulpenelitianInhibisiXantinoksidaseSecaraInVitroEkstrakSuruhandanlolosseleksiPekanIlmiahNasionaldiYogyakartatahun2012.4

DAFTARISIHalamanDAFTARGAMBAR....................................................................................viDAFTARTABEL........................................................................................viDAFTARLAMPIRAN.................................................................................viPENDAHULUAN........................................................................................1TINJAUANPUSTAKA...............................................................................1TumbuhanSuruhan..................................................................................1Ekstraksi..................................................................................................2FenolikdanFlavonoid.............................................................................3Antioksidan.............................................................................................4UjiAktivitasPenangkapRadikalBebas..................................................4BAHANDANMETODE.............................................................................5BahandanAlat.........................................................................................5MetodePenelitian....................................................................................5HASILDANPEMBAHASAN......................................................................6EkstrakSuruhan.......................................................................................6AktivitasAntioksidanSuruhan................................................................7KadarFenolikTotaldanFlavonoidTotal................................................9SIMPULANDANSARAN.........................................................................11DAFTARPUSTAKA...................................................................................11LAMPIRAN..................................................................................................145

DAFTARGAMBAR

Halaman

1Tumbuhansuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)............................22Kerangkadasarflavonoid......................................................................33ReaksiDPPHdenganantioksidan.........................................................44Rendemenekstrakairdanetanolherbasuruhan...................................65Kadarfenoliktotalekstraksuruhan......................................................96Kadarflavonoidtotalekstraksuruhan..................................................10

DAFTARTABEL

Halaman

1Nilai%inhibisidanIC50aktivitasantioksidanekstraksuruhan............72InhibisiekstrakairdanetanolherbasuruhanberdasarkananalisisDuncan...................................................................................................83Korelasiaktivitasantioksidandengankadarvfenolikatauflavonoidtotal........................................................................................................10

DAFTARLAMPIRAN

Halaman

1Diagramalirpenelitian..........................................................................152Ekstraksiairsuruhan..............................................................................163Ekstraksietanolsuruhan.......................................................................174UjiaktifitasantioksidandenganmetodeDPPH.....................................185Kadarairsuruhan,rendemenekstrak,dananalisisragamekstrak........196PerhitunganinhibisidanIC50ekstraksuruhan.......................................207AnalisisragampersentaseinhibisiekstrakdanujilanjutDuncan.........248Ujikadarfenoliktotalsuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)..........259Ujikadarflavonoidtotalsuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)......2810Korelasiflavonoidtotaldanantioksidansertakorelasifenoliktotaldanantioksidan......................................................................................31

PENDAHULUANMetabolismeyangterjadididalamtubuhmelibatkanprosesoksidasidanreduksi.Prosesoksidasidapatmenyebabkanterbentuknyasuatuoksidanatauradikalbebasyangberbahayabagitubuh(Halliweletal.1995).Oksidanmerupakanmolekulyangtidakstabilkarenamemilikielektronyangtidakberpasangansehinggamolekulinidapatmenyerangmakromolekulselsepertilipid,protein,atauDNA.Makromolekulyangterserangolehoksidandapatmengalamikondisioksidasiyangmenyebabkanterjadinyakerusakanprotein,DNA,penuaandini,kanker,seranganjantung,danpenyakitdegeneratiflainnya(Middletonetal.1998).Olehkarenaituoksidaniniperludihambatdengansenyawaantioksidan.Antioksidanmerupakansenyawakimiayangmenyumbangkanelektronyangdikandungnyakepadaradikalbebas(Suhartono2002).Secaraalamitubuhdapatmenghasilkansenyawaantioksidanyangterdiridariantioksidanenzimatikdannonenzimatik.Namun,senyawaantioksidaninitidakmampumenghambatoksidanyangterbentukakibatstressoksidatifsehinggadiperlukanantioksidanyangberasaldariluartubuh(eksogen)(Halliweletal.1995).Antioksidaneksogendapatdiperolehdalambentuksintetik(buatan)atausecaraalami.Antioksidanbuatansepertiasambenzoat,BHA(ButylatedHydroxyAnisol),BHT(ButylatedHydroxyToluene)atauTBHQ(TertierButylatedHydroxyQuinone)dapatmenimbulkanefeksampingpadakesehatantubuh.BHAdanBHTtelahditelitidapatmenimbulkantumorpadahewancobajikadigunakandalamjangkawaktuyanglamadanjugadapatmenimbulkankerusakanhatijikadikonsumsisecaraberlebihan(Andarwulanetal.1996).Efeksampingyangditimbulkanolehpenggunaanantioksidansintetikmendorongperkembanganpenelitianterhadapantioksidanalamiyanglebihamandanlebihmampudalammengurangiradikalbebasdalamtubuh.Antioksidanalamidapatdiperolehdaritumbuh-tumbuhanataubuah-buahan.Indonesiamerupakansalahsatunegarayangmemilikipopulasiflorayangluasdanpalingbanyakdidunia.Tumbuh-tumbuhanmengandungsenyawametabolitsekunderberupaflavonoiddanfenolikyangbergunasebagaipenangkapradikalbebas(Cosetal.

1

2001).Duenasetal.(2009)menyatakanbahwasenyawaksantonsertaturunanflavonoid(kuersetindankatekin)yangdihasilkanolehtumbuhanmemilikikemampuanmenghambatkerjaradikalbebas.Salahsatutumbuhanyangmengandungsenyawametabolitflavonoiddanfenolikadalahtumbuhansuruhan.SuruhanatauPeperomiapellucidaL.Kunthmerupakantumbuhansemakyangdapathiduppadadaerahtropisdanlembab.SuruhantersebarluasdisetiapdaerahdiIndonesia.Suruhandapatdikonsumsisebagailalapan.Secaraempiristumbuhaninitelahdigunakandalampengobatandemam,penyakitperut,ataupengobatanluarlainnya(Heyne1987).MenurutCao(2011),suruhanberkhasiatuntukmengatasinyeripadarematik,penyakitasamurat,sakitkepala,sakitperut,abses,bisul,jerawat,radangkulit,lukamemar,danlukabakarringan.Berdasarkanujifitokimiayangtelahdilakukandalambeberapastudimenunjukkanbahwatumbuhansuruhanmengandungsenyawaflavonoiddanpolifenol.Keduasenyawayangdikandungsuruhaninitelahdigunakandalamkemoterapiantikanker.Kankerdapatterjadiakibatadanyaradikalbebasyangmerusakselpadajaringantertentu(Gianelloetal.2009).AdanyapenelitianGianelloetal.(2009)tentangaktivitasantikankerdarisuruhandapatdidugasuruhanjugamampudalammenangkapradikalbebassehinggadapatdijadikansebagaisalahsatusumberantioksidanalami.Penelitianinibertujuanuntukmengetahuiaktivitasantioksidan,kandunganfenolikdanflavonoidekstrakairdanetanolsuruhan.Manfaatpenelitianinidiharapkandapatmenambahreferensitumbuhanyangmempunyaiaktivitasantioksidandansuruhandapatdigunakansebagaisalahsatuantioksidanalamibagitubuh.

TINJAUANPUSTAKATumbuhanSuruhanPeperomiapellucidaL.Kunthatauseringdikenaldengantumbuhansuruhanmerupakantumbuhangulmayangbiasanyatumbuhliarditempat-tempatyanglembabdanbergerombol.TumbuhansuruhanmerupakanfamiliPiperaceae(sukusirih-sirihan)dengangenusPeperomia.Tumbuhaninimudahdijumpaidikebun,

halamanrumah,tepijalan,dipinggiranselokan,danditempatlainyanglembabatauberair.Tumbuhaniniberbungasepanjangtahun.Tumbuhberumpunsecaraliarpadaiklimtropisdansubtropis.Tingginyasekitar10-20cm,dengandahanberbuku-bukuserupatumbuhansirihdanbungamajemukberbentukbuliryangterdapatpadapangkalatauketiakdaun.Batangdarisuruhaninitegakdanlunakdenganakaryangserabutdangkaldanberwarnaputih.Lebardaunsuruhaninisekitar0.5-2cmberbentukhatidanpanjangsekitar4cm(DjauhariyadanHernani2004).PeperomiapellucidaL.Kunthsecaralokaldikenalsebagaisuruhanseringdigunakansebagairamuandalampengobatantradisional.PeperomiapellucidasecaraluasdidistribusikandibanyaknegaraAmerikadanAsiaSelatan(Arrigoni-Blank2004).Tumbuhaninimemilikimanfaatdalampengobatansakitkepala,demam,eksim,sakitperut,dankejang-kejang(Ghani1998).MenurutlaporanManilamedicalsocietytahun2011(Cao2011),suruhandapatdigunakanuntukmeredakannyerirematik.Tumbuhaninidapatdigunakansebagaiantibakteri,antiinflamasi,dananalgesik.Isolasiarilpropanoiddarisuruhandigunakansebagaiantijamur,sedangkanpeperomindapatdigunakansebagaiantikanker.Meskipuntumbuhaninimemilikiaktivitasantibakteri,namunbelumdiketahuisenyawaaktifyangberperansebagaiantibakteritersebut(Cao2011).Sifatanalgesikdaritumbuhandidugaberhubungandenganefeknyapadasintesisprostaglandin.Halinimungkindisebabkanadanyapotensisebagaiantibiotik,sepertiyangditunjukkandalamtesterhadapStaphylococcusaureus,Bacillussubtilis,Pseudomonasaeruginosa,danEscherichiacoli.Ekstrakkloroformdaridaunkeringsuruhanmenunjukkanaktivitasantijamur

Gambar1Tumbuhansuruhan(PeperomiapellucidaL.Kunth)

2

terhadapTrichophytonmentagrophytessecarainvitro.Meskipuntumbuhaninidapatmenyebabkanasmadengangejalasepertihipersensitivitas,namunbelumadadataklinisyangdilaporkandarigejalatersebut(Azibaetal.2001).Tumbuhansuruhaninisudahlamadikenalolehmasyarakatluassebagaiobat,bahkantelahdiperdagangkandengannamadagangsuruhan.DiFilipinatumbuhaninidisebuttangon-tangonataupansit-pansitan,dantelahlamadimanfaatkansebagaiobat,antaralainuntukmembantumengatasigangguanartritis,bisul,bengkakbernanah,danmasalahpadaginjal.Secaraempirisherbasuruhanjugadapatmengatasisakitkepala,nyeriperut,danmembantumengatasitimbulnyajerawat.Suruhanumumnyadikonsumsidengancaradiseduh,tetapiadajugayangmengkonsumsinyasebagailalapansegar(Cao2011).Senyawakimiayangterdapatdalamsuruhandiantaranyaadalahalkaloid,flavonoid,tanin,saponin,polifenol,kalsiumoksalat,lemak,danminyakatsiri(DjauhariyadanHernani2004).EkstraksiPengambilanbahanaktifdarisuatutumbuhan,dapatdilakukandenganekstraksi.Dalamprosesekstraksiini,bahanaktifakanterlarutolehzatpenyariyangsesuaisifatkepolarannya.Metodeekstraksidipilihberdasarkanbeberapafaktorsepertisifatdaribahanmentahobat,dayapenyesuaiandengantiapmacammetodeekstraksi,dankepentingandalammemperolehekstrakyangsempurnaataumendekatisempurna(Ansel1989).Metode-metodeekstraksiyangseringdigunakandiantaranyaialahmetodemaserasi.Maserasimerupakancaraekstraksiyangpalingsederhana.Bahansimplisiayangdihaluskansesuaidengansyaratfarmakope(umumnyaterpotong-potongatauberupaserbukkasar)disatukandenganbahanpengekstraksi.Selanjutnyarendemantersebutdisimpanterlindungdaricahayalangsung(mencegahreaksiyangdikatalisiscahayaatauperubahanwarna)dandikocokkembali.Waktulamanyamaserasiberbeda-bedaantara4-10hari.Secarateoritispadasuatumaserasitidakmemungkinkanterjadinyaekstraksiabsolut.Semakinbesarperbandingancairanpengekstraksiterhadapsimplisia,akansemakinbanyakhasilyangdiperoleh(Voigt1994).

Maserasidigunakanuntukpenyariansimplisiayangmengandungzataktifyangmudahlarutdalamcairanpenyari,tidakmengandungzatyangmudahmengembangdalamcairanpenyari,tidakmengandungbenzoin,sitrat,danlain-lain.Maserasidilakukandenganmerendamserbuksimplisiadalamcairanpenyari.Cairanpenyariataupelarutyangdigunakandapatberupaair,etanol,air-etanol,ataupelarutlain.Pelarut-pelaruttersebutdapatbersifatpolarcontohnyaairdanadabersifatnonpolarataupelarutorganiksepertiaseton,etilasetat,etanol,danlainnya.Ketikasimplisiayangakandimaserasidirendamdalampelarutyangdipilih,makacairanpenyariakanmenembusdindingseldanmasukkedalamselyangbanyakmengandungzataktifdanzataktiftersebutakanlarutdalamcairanpenyarisehinggapenyariyangmasukkedalamselakanmengandungzataktif.Sementaraitu,penyariyangberadadiluarselbelummengandungzataktifsehinggamenimbulkanperbedaankonsentrasizataktifdidalamdandiluarselyangakanmenimbulkangayadifusi.Larutanyangterpekatakankeluaruntukmencapaikeseimbangankonsentrasiantarazataktifdidalamdandiluarsel.Proseskeseimbanganiniakanberhenti,setelahterjadikeseimbangankonsentrasiatautelahmencapaikondisijenuh.Dalamkondisiinizataktifdidalamdandiluarselakanmemilikikonsentrasiyangsama(Voigt1994).FenolikdanFlavonoidFenoladalahsenyawadengansatugugushidroksil(-OH)yangterikatpadacincinaromatik(FessendendanFessenden1986).Fenolikmerupakanmetabolitsekunderyangtersebardalamtumbuhan.Senyawafenolikdalamtumbuhandapatberupafenolsederhana,antraquinon,asamfenolat,kumarin,flavonoid,lignindantanin(Harborne1996).Senyawafenoliktelahdiketahuimemilikiberbagaiefekbiologissepertiaktivitasantioksidanmelaluimekanismesebagaipereduksi,penangkapradikalbebas,pengkhelatlogam,peredamterbentuknyaoksigensingletsertapendonorelektron(Karadenizetal.2005).Salahsatuantioksidanalamiyaituasamgalat(3,4,5-trihydroxybenzoicacid).Asamgalattermasukdalamsenyawafenolikdanmemilikiaktivitasantioksidanyangkuat(Leeetal.2003).Penentuankandungan

3

fenoliktotaldapatdilakukandenganmenggunakanpereaksiFolin-Ciocalteu(Leeetal.2003).Metodeiniberdasarkankekuatanmereduksidarigugushidroksilfenolik.SemuasenyawafenoliktermasukfenolsederhanadapatbereaksidenganreagenFolinCiocalteu,walaupunbukanpenangkapradikal(antiradikal)efektif(Huangetal.2005).Adanyaintiaromatispadasenyawafenolikdapatmereduksifosfomolibdatfosfotungstatmenjadimolibdenumyangberwarnabiru(SudjadidanRohman2004).KandunganfenoliktotaldalamtumbuhandinyatakandalamGAE(gallicacidequivalent)yaitujumlahkesetaraanmiligramasamgalatdalam1gramsampel(Leeetal.2003).Flavonoidtersebarluasdialam,terutamadalamtumbuhantingkattinggidanjaringanmuda.Sekitar510%metabolitsekundertumbuhanadalahflavonoid.Flavonoidmerupakangrupsenyawaalamidenganragamstrukturfenolatyangdapatditemukanpadabuah,sayuran,gandum,teh,dananggur(Middletonetal.1998).Flavonoidsebagaiderivatbenzo--pironmempunyaibanyakkegunaandisampingfungsinyayangutamasebagaibahantambahanuntukmeningkatkanresistensidanmenurunkanpermeabilitaskapilerdarah.Efeklainflavonoidsangatbanyakmacamnyaterhadapberbagaiorganismedanefekinidapatmenjelaskanalasantumbuhanyangmengandungflavonoiddapatdigunakandalampengobatan.Flavonoiddapatberfungsisebagaiantivirus,antialergi,antimikroorganisme,danantioksidanuntukmengendalikanradikalbebasyangdapatmenyebabkantumor(Middletonetal.1998).Flavonoidmempunyaikerangkadasaryangterdiriatas15atomkarbondengan2cincinbenzenaterikatpadasuaturantaipropanamembentuksusunanC6-C3-C6sepertiyangterlihatpadaGambar2.Susunantersebutdapatmenghasilkan3struktur,yaitu1,3-diarilpropana(flavonoid),1,2-diarilpropana(isoflavonoid),dan1,1-

Gambar2Kerangkadasarflavonoid(Achmad1985)

diarilpropana(neoflavonoid)(Markham1988).Kerangkadasarkarbonpadaflavonoidmerupakankombinasiantarajalursikhimatdanjalurasetat-malonatyangmerupakanduajalurutamabiosintesiscincinaromatik.CincinAdaristrukturflavonoidberasaldarijalurpoliketida(jalurasetat-malonat),yaitukondensasitigaunitasetatataumalonat,sedangkancincinBdantigaatomkarbondarirantaipropanberasaldarijalurfenilpropanoid(jalursikhimat)(Achmad1985).Flavonoidmerupakansenyawapereduksiyangbaik,menghambatbanyakreaksioksidasi,baiksecaraenzimatismaupunnonenzimatis.Flavonoidbertindaksebagaipenampungradikalhidroksidansuperoksidayangbaikdengandemikiandapatmelindungilipidmembranterhadapreaksiyangmerusak.Aktivitasantioksidannyadapatmenjelaskanalasanflavonoidtertentudapatmenjadikomponenaktiftumbuhanyangdigunakansecaratradisionaluntukmengobatigangguanfungsihati(Robinson1995).Flavonoiddikenalsebagaiantioksidandanmemberikandayatariksejumlahpenelitiuntukmenelitiflavonoidsebagaiobatyangberpotensimengobatipenyakityangdisebabkanolehradikalbebas(Cosetal.2001).KandunganflavonoidtotaldapatditentukansecaraspektrofometridenganreagenAlCl3dandinyatakandalamRE(rutinequivalent)(Karadenizetal.2005).PrinsippenetapanberdasarkangugusortodihidroksidangugushidroksiketonyangmembentukkompleksdenganreagenAlCl3sehinggamemberikanefekbatokromik(Harborne1996).AntioksidanAntioksidanadalahsenyawakimiayangdapatmenyumbangkansatuataulebihelektronkepadaradikalbebas,sehinggaradikalbebastersebutdapatdiredam.Antioksidandidefinisikansebagaisenyawayangdapatmenunda,memperlambat,danmencegahprosesoksidasilipid.Secarakhusus,antioksidanadalahzatyangdapatmenundaataumencegahterbentuknyareaksiradikalbebas(peroksida)dalamoksidasilipid(DalimarthadanSoedibyo1999).Berdasarkanmekanismenya,antioksidandapatdikelompokkanmenjadidua,yaituantioksidanprimerdanantioksidansekunder.Antioksidanprimermengikutimekanismepemutusanrantaireaksiradikaldenganmendonorkanatomhidrogensecara

4

cepatpadasuatulipidyangradikal,produkyangdihasilkanlebihstabildariprodukawal(VayadanAviram2001).Contohantioksidaniniadalahflavonoid,tokoferol,senyawathiol,yangdapatmemutusrantaireaksipropagasidenganmenyumbangelektronpadaperoksiradikaldalamasamlemak.Antioksidansekundermerupakanantioksidanyangdapatmenghilangkanpenginisiasioksigenmaupunnitrogenradikalataubereaksidengankomponenatauenzimyangmenginisiasireaksiradikalantaralaindenganmenghambatenzimpengoksidasidanmenginisiasienzimpereduksiataumereduksioksigentanpamembentukspesiesradikalyangreaktif.Contohantioksidansekunder:sulfit,vitaminC,betakaroten,asamurat,billirubin,danalbumin(VayadanAviram2001).Antioksidandapatdibedakanjugadarisumbernyayaituantioksidanendogenyangberasaldaridaamtubuhdanantioksidaneksogenyangberasaldaridietmakanan.UjiAktivitasPenangkapRadikalBebasRadikalbebasyangumumnyadigunakansebagaimodeldalampenelitianantioksidanatauperedamradikalbebasadalah1,1-difenil-2-pikrilhidrazil(DPPH)(Windonoetal.2001).MetodeDPPHmerupakanmetodeyangsederhana,cepat,danmudahuntukpenapisanaktivitaspenangkapradikalbeberapasenyawa,selainitumetodeiniterbuktiakurat,efektifdanpraktis(Prakashetal.2001).DPPHdigunakansebagaimodelradikalbebas.RadikalbebasDPPHakanditangkapolehsenyawaflavonoid(Gambar3).FlavonoidakandioksidasiolehradikalbebasDPPHmenghasilkanbentukradikalyanglebihstabil,yaituradikaldengankereaktifanrendah.Flavonoidmendonorkanradikalhidrogen(H)daricincinaromatiknyauntukmengurangiradikalbebasyangbersifattoksikmenghasilkanradikalflavonoid(FlO)yangterstabilkanresonansidanmembuatnyatidaktoksik(Amicetal.2003).

Gambar3ReaksiDPPHdenganantioksidan(Prakashetal.2001)

RadikalDPPHadalahsuatusenyawaorganikyangmengandungnitrogentidakstabildenganabsorbansikuatpadamax517nmdanberwarnaungugelap.Setelahbereaksidengansenyawaantioksidan,DPPHtersebutakantereduksidanwarnanyaakanberubahmenjadikuning.Perubahantersebutdapatdiukurdenganspektrofotometer,dandiplotkanterhadapkonsentrasi(Reynertson2007).Parameteryangumumdigunakanuntukmengetahuibesarnyaaktivitasantioksidanpadasuatuekstrakbahanadalahdenganmenentukannilaikonsentrasihambatan50%(inhibitionconcentration/IC50)bahanantioksidantersebut.PenurunanintensitaswarnayangterjadidisebabkanolehberkurangnyaikatanrangkapterkonjugasipadaDPPH.Halinidapatterjadiapabilaadanyapenangkapansatuelektronolehzatantioksidan,menyebabkantidakadanyakesempatanelektrontersebutuntukberesonansi.BAHANDANMETODEBahandanAlatBahan-bahanyangdigunakanadalahbatangdandaunsuruhan,akuades,etanol,kloroform,HClpekat,larutanDPPH1mM,kontrolpositifvitaminC,kontrolpositifasamtanat,pereaksiFollinCiocalteu50%,Na2CO35%,larutanheksametilentetramina(HMT)0.5%,aseton,10%AlCl3,asamasetatglasial,danetilasetat.Alat-alatyangdigunakanadalahneracaanalitik,penggilingan,batangpengaduk,tabungreaksi,sudep,gelaspiala,erlenmeyer,kertasaluminiumfoil,corong,pipetvolumetrik,pipetmikro,cawanporselin,oven,eksikator,vacuumevaporator,pingganporselin,penangasair,corongpisah,shaker,kapas,labuukur,biotek'sepochmicro-volumespectrophotometersystem,danspektofotometerUV-VISPerkinElmerLambda20.MetodePenelitianEkstraksiTumbuhanSuruhanPenelitianinidilakukandenganmenggunakanekstrakairdanekstraketanolcampuranbatangdandaunsuruhan.KeduaekstrakdilakukanujiantioksidandenganmetodeDPPHlaludiukurkandunganfenoliktotaldanflavonoiddarimasing-masingekstraktersebut.Persiapansampel.Kegiatandiawalidengansortasibasahyangbertujuan

5

memisahkankotoranataubahan-bahanasinglainnyadaribatangdandaunsuruhan.Kemudiandilakukanpencucianuntukmenghilangkantanahdanpengotorlainnyayangmasihmenempelpadabahanyangsudahdisortasibasah.Tahapberikutnyaadalahperajanganuntukmempermudahprosespengeringandanpenggilingan.Selanjutnya,sampeldikeringkandalamovenpadasuhu50OChinggakadarairkurangdari10%.Hasilpengeringandigilingsampaiberbentukserbuk.Penentuankadarair.MetodepenentuankadarairmengacupadametodeAOAC(1995).Prinsipanalisiskadarairialahuntukmengetahuikandungankadarairdalamsuatubahan.Cawanporselindikeringkandalamovenpadasuhu105OCselama30menit,lalucawandidinginkandidalameksikatorselama30menitdanditimbangbobotkosongnya.Sampelditimbangsekitar3gdandimasukkankecawanporselin.Sampelbesertacawannyadipanaskanpadasuhu105OCselama3jamdidalamoven.Setelahdidinginkandalameksikatorselama30menit,cawanbesertaisinyaditimbang.Penentuankadarairdilakukansebanyak3kaliulangan(triplo).Ekstraksiair.BerdasarkanBPOM(2004),ekstraksiairdilakukandengancaraperendamanserbukdengannisbahsampel:pelarutairsamadengan1:10selama6jamsambilsekali-sekalidiaduk,kemudiandidiamkanselama24jam.Maseratdipisahkandanprosesdiulangisebanyakduakalidenganjenisdanjumlahpelarutyangsama.Semuamaseratdikumpulkandandiuapkandenganvacuumevaporatorhinggadiperolehekstrakkering.Ektraksietanol.BerdasarkanBPOM(2004),ekstraksietanoldilakukandengancaraperendamanserbukdengannisbahsampelpelarut:etanol70%samadengan1:10menggunakanmetodemaserasiselama6jamsambilsekali-sekalidiaduk,kemudiandidiamkanselama24jam.Maseratdipisahkandanprosesdiulangisebanyakduakalidenganjenisdanjumlahpelarutyangsama.Semuamaseratdikumpulkandandiuapkandenganvacuumevaporatorhinggadiperolehekstrakkering.UjiAntioksidandenganMetodeDPPHPercobaanantioksidandilakukanberdasarkanmetodeBlois(2005)yangdimodifikasi.Ekstrakdilarutkandalametanoldandibuatdalamberbagaikonsentrasi(50,100,200,300,dan400

ppm).Masing-masingekstrakdimasukkankedalamtabungreaksidandilarutkandenganetanol.Kemudiansampeldimasukkankedalammicroplatedandilakukanpengencerandenganetanolberdasarkankonsentrasiyangdiukur.Kedalamtiapwellditambahkan100llarutanDPPH1mMdandiinkubasipadaruangangelapselama30menit,selanjutnyaserapannyadiukurpadapanjanggelombang517nmmenggunakanmicroplatereader.SebagaikontrolpositifdanpembandingdigunakanvitaminC(konsentrasi0.625,1.25,2.5,5,10,dan20ppm)UjiKandunganFenolikTotalPengukurankandunganfenoliktotaldilakukanberdasarkanmetodeAndarwulanetal.(1999)yangdimodifikasi.Pembuatanstandarasamtanatdilakukandenganmelarutkan5mgasamtanatkedalamaquadesmenggunakanlabutakar25ml.Kemudiandarilarutantersebut,dibuatstandardengankonsentrasi10,20,30,40,50,dan60ppm.Pengujiankandunganfenoliktotaldilakukandenganmelarutkan20mgekstrakairatauekstraketanoldenganaquadesdalamlabutakar25mldandihomogenisasidenganshaker.Kemudiandiambil0,5mLdarilarutantersebutdanditambahkandenganpereaksiFollinCiocalteu50%sebanyak1ml,dandidiamkan5menit.Setelahituditambahkan1mlNa2CO35%dandihomogenisasidalamgelapselama1jam.Lalunilaiabsorbansnyadiukurpadapanjanggelombang725nmmenggunakanalatspektrofotometerUV-VIS.UjiKandunganFlavonoidtotalBerdasarkanmetodeBPOM(2004),

6

etilasetatsampaivolumemencapai50mLkedalamlabuukur.Selanjutnya10mldaricampurantersebutdimasukkankedalamlabuukur25mldanditambahkandengan10%AlCl3sampaitandaterapadalabudandilarutkandenganasamasetatglasial.Campurandivorteksdandibacanilaiabsorbansnyapadapanjanggelombang370,8nmmenggunakanspektrofotometerUV-VIS.MetodeAnalisisMetodeanalisisstatistikyangdigunakanadalahpengujiananalisissidikragam(ANOVA)menggunakanprogramSPSS16.0.UjidilanjutkandenganujiDuncanjikadiperolehpengaruhnyataterhadapperlakuan.Pengujianinidilakukanuntukmengetahuiperbedaankapasitasantioksidanpadatiapekstrakdanjugamelihatpengaruhkandunganflavonoiddanfenolikpadaaktivitasantioksidantiapekstrak.Sedangkanuntukmelihathubungan-hubunganvariabelflavontotalataufenoliktotalterhadapantioksidandianalisisdenganmenggunakananalisisregresilinier.Korelasibernilai1jikaterdapathubunganlinieryangpositif,bernilai-1jikaterdapathubunganlinieryangnegatif.Semakindekatdengan-1atau+1,semakinkuatkorelasiantarakeduavariabeltersebut.HASILDANPEMBAHASANEkstrakSuruhanSuatusampelujibaikdigunakanjikamengandungkadarairkurangdari10%(Winarno2008).Kadarairyangdidapatdigunakanuntukmemperkirakanjumlah

%rendemen

penentuankandunganflavonoidtotaldiawalidenganpenimbanganekstraksebanyak200mgdandimasukkankedalamlabutakar.Kemudianditambah1mLlarutanheksametilentetramina(HMT)0.5%,20mLaseton,dan2mLlarutanHCl,kemudiancampurandihidrolisisdengancaradirefluksselama30menit.Campurandisaringmenggunakankapas,filtratdimasukkankedalamlabuukur100mL.Campuranfiltratditambahdenganasetonsampaivolume100mL.Filtratdiambilsebanyak20mLdandimasukkankedalamcorongpisah,kemudianditambah20mLairdan

25

20

15

10

5

0

20.433.33

10.032.85

airetanol70%

diekstraksisebanyaktigakalimasing-masingdengan15mLetilasetat.Fraksietilasetatdikumpulkandanditambahdengan

Gambar4Rendemenekstrakairdanetanolcampurandaundanbatangsuruhan

sampelyangdibutuhkansaatekstraksisehinggadidapatnilaikoreksirendemendariekstraktersebut(Harjadi1993).Kadarairyangdidapatuntuksimplisiaherbasuruhansebesar5.04%sehinggaberdasarkanhasiltersebutsimplisiadapatdigunakanuntukdilakukanekstraksisampel.Ekstraksiherbasuruhandalampenelitianinidilakukandenganmenggunakanpelarutairdanetanol70%.Ekstrakyangdidapatdalampenelitianiniberbentukserbukkeringdengannilaireratarendemendariekstrakairsebesar10.032.85%sedangkanekstraketanol70%memilikirendemenrata-ratasebesar20.433.33%.Hasilrendemeninimenunjukkanbahwakadarrendemenekstraketanollebihtinggidaripadaekstrakairsebabetanoldapatmelarutkansenyawapolardannonpolar.Padaanalisisragamrendementerhadapekstrakdihasilkannilaiyangberbedanyataantaraekstrakairdanekstraketanol(p